虾青素试验方法
天然虾青素分析方法的研究进展
天然虾青素分析方法的研究进展虾青素是一种特殊生理活性的物质，具有超强的抗氧化、抗衰老、抗癌、提高免疫力等作用。
近些年国内外在天然虾青素的分析方法上有了一定的进展，本文对薄层层析法、紫外光谱法，液相色谱法等分析方法进行了综述。
标签：虾青素；薄层分析；比光谱导数法；光镊拉曼光谱法；高效液相色谱法1前言虾青素是一种端基为酮基的类胡萝卜素色素，化学名称为3，3’-二羟基-4，4’-二酮基-β，β’-胡萝卜素，分子式为C40H52O4，又名虾黄素，虾黄质，龙虾壳色素，是一种非维生素A源类胡萝卜素。
虾青素不仅具有很强的抗氧化性、抗肿瘤及增强免疫的生理功能，而且拥有艳丽的红色及极强的色素沉积能力，国外已成功用于高档水产养殖[1]。
基于虾青素特殊的结构，分别在两端的环结构上存在手性中心，每个手性中心有两种构象，因此存在三种立体异构体，分别是左旋、右旋和消旋体[2]。
虾青素色泽为粉红色，具脂溶性，不溶于水，易溶于氯仿、丙酮、苯和二硫化碳等有机溶剂[3]。
动物实验表明，虾青素可以清除二氧化氮、硫化物、二硫化物，也可降低脂质过氧化作用，有效的抑制自由基引发的脂质过氧化。
另外，虾青素还具有很强的抑制肿瘤发生、增强免疫功能等生理作用[4]。
因而在食品添加剂、水产养殖、化妆品、保健品和医药工业方面有广阔的应用前景。
目前虾青素的主要来源是从水产品废弃物中提取、利用藻类和酵母生产[5]，因此研究快速、简便、准确的虾青素含量测定方法是十分必要的。
本文论述了薄层层析法、比光谱导数法、分光光度法、光镊拉曼光谱法、高效液相色谱法五种检测方法。
2虾青素的分析方法2.1薄层层析法薄层层析以其简单、廉价、快速、适用范围广的优点而成为天然藥物提取、分离过程中常用的检测、分析手段。
样品溶液用毛细管点在薄层板的一端，置密闭槽中，加入适宜溶剂为流动相。
由于毛细管原理，溶剂被吸上，沿板移动，并带动样品中各组分向前移动，这个过程称为展开。
由于各组分性质不同，移动距离不同，展开一定距离后，即得互相分离的组分斑点。
虾青素分析测定方法的研究
虾青素分析测定方法的研究【摘要】选择分光光度法及高效液相色谱法对测定虾青素的分析条件进行研究，从而得出最佳的测定条件。
用分光光度法和高效液相色谱法测定虾青素，标准曲线的回归方程的r2都超过了0.99。
用分光光度法测定虾青素，回收率范围为99.3-101%，相对标准偏差rsd值为0.78-1.3%；用液相色谱法测定虾青素，回收率范围为100-102% ，相对标准偏差rsd为0.62-1.4%。
这些值都在定量分析所要求的阈值范围内，可以用于定量分析。
【关键词】分光光度法；高效液相色谱法；虾青素abstract： choice two based on the spectrophotometry and high performance liquid chromatography (hplc) were developed for determination the astaxanthin. and the optimum conditions was investigated in detail. the total amount of astaxanthin was measured by spectrophotometry, the recoveries were in the range of 99.3-101%, and rsd were in the range of 0.78 %-1.3 %. also the astaxanthin was determined by hplc, and the recoveries were in the range of 100% -102%, rsd were in the range of 0.62%-1.4%. all these values were within the range of permissive threshold value on quantitative analysis, which showed that it’s feasible for measuring the content of astaxanthin by these two methods.key words: spectrophotometry；hplc；astaxanthin从动植物及菌类中提取虾青素目前还处于实验研究的基础阶段，要实现产业化生产虾青素，还必须对其提取工艺进行广泛深入的研究。
虾青素化学分析方法
虾青素化学分析方法富士化学测试方法：虾青素含量的高效液相色谱分析包括两个重要步骤：海藻粉中的虾青素的提取及之后的脱脂过程。
这两个过程都会影响色谱分析结果，而分光光度计法则只要求虾青素的提取过程完全彻底即可。
因为微藻体内的虾青素在化学结构上有两个羟基（3和3’位置上），因此其往往与脂肪酸结合形成酯类，故虾青素存在形式主要有三种：二酯、单酯和自由体，不同藻系三种形式的含量不同，一般二酯成分最高70-80%左右，单酯10%左右，而自由体仅占5%左右。
相比较二酯和单酯形式自由体的极性更强。
采用分光光度法测定了类胡萝卜素在474nm波长处的吸光度，并计算了类胡萝卜素的含量量中包含其他一些类胡萝卜素成分，如β-类胡萝卜素、角黄素和叶黄素等，因此不甚准确；而在hplc分析中，很难对酯化虾青素成分进行精确定量，因此常常采用酶水解的方法将二酯和单酯结构的虾青素水解为自由体，然后进行色谱分析。
一般化学脱脂反应如皂化反应不能用于虾青素脱脂，因为皂化反应条件易造成虾青素的氧化和降解，使得测量结果偏低。
在hplc分析中，若酶水解不完全，在色谱图中11min左右的反式结构的虾青素色谱峰会相对较小，且在保留时间约20-30min处会看到大量酯化成分的色谱峰，可作为判断样品是否完全水解的依据。
试剂和设备：试剂：0.05 mtris HCl缓冲液（pH7.0）；胆固醇酯酶；反式-bata-apo-8'-胡萝卜素虾青素；1%（v/v）磷酸；丙酮；正己烷，石油醚，甲醇；甲基异丁基谜；十水硫酸钠；无水硫酸钠。
设备：10ml离心管；30ml、100ml、200ml、500ml容量瓶；0.45微米注射器过滤器；水浴锅；分析天平；离心机；超声波破碎仪；分光光度计；hplc；色谱柱。
（具体试剂及设备型号见文献）实验步骤：2.0水解酶的配置：准确称量一定量的胆固醇酯酶，并将其溶解在50mmtris HCl（pH7.0）中，使最终酯酶浓度为4单位/毫升。
标准 虾青素 测定
虾青素的测定主要有分光光度法和高效液相色谱法两种方法。
分光光度法：这种方法主要是利用虾青素的最高吸收峰为478，因此在波长为478下进行比色即可测定虾青素的含量。
由于该种方法比较简单，可能存在的误差也较大，所以高效液相色谱法是检测虾青素的主流方法。
高效液相色谱法：这是一种分离效果好、灵敏度高、检测速度快的方法，是最为常见的虾青素检测方式。
例如，GB/T 31520-2015就规定了用液相色谱法检测红球藻中虾青素。
请注意，虾青素的测定方法具有一定的复杂性，需要专业的技术人员进行操作。
虾青素试验方法
虾青素试验方法警告----本产品对光敏感，在操作过程中应避光操作。
三氯化锑-三氯甲烷溶液有强腐蚀性，在操作过程中应注意避免与皮肤接触，如不慎接触到皮肤，应立即用清水冲洗。
本标准所用的试剂和水，除非另有说明，均指分析纯试剂和符合GB/T6682中规定的三级水。
4.1 试剂和溶液4.1.1 三氯甲烷。
4.1.2 无水乙醇。
4.1.3 BHT（2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚）。
4.1.4 三氯化锑-三氯甲烷溶液：称取1g三氯化锑用4ml三氯甲烷溶解即得（现配现用）。
4.2 仪器和设备4.2.1 紫外-可见分光光度计。
4.2.2 分析天平。
4.2.3 超声波清洗器。
4.2.4 恒温水浴装置。
4.2.5 离心机（离心试管体积大于20ml）。
4.2.6 氮气吹干装置。
4.2.7 孔径为0.84mm的分析筛。
4.2.8 孔径为0.425mm的分析筛。
4.3 鉴别4.3.1 取试样约10mg于试管中，加50℃-60℃热水1ml，于50℃-60℃热水浴中超声5min。
冷至室温后，加入三氯甲烷（4.1.1）10ml并振摇30s，静置分层后，取三氯甲烷层溶液3ml与三氯化锑-三氯甲烷溶液（4.1.4）1ml反应，溶液应立即显蓝紫色。
4.3.2 取含量测定项（4.4.1）下的待测液，以三氯甲烷为空白，使用1cm的比色皿，于分光光度计上扫描波长200nm-600nm之间的吸收光谱，其最大吸收波长应在波长 484nm-490nm之间，光谱图参见附录A。
4.4 含量4.4.1 测定待测液：称取试样0.15g（精确至0.0002g），置于250ml棕色容量瓶中，加入BHT（4.1.3）约10mg，加入蒸馏水10ml，在50℃-60℃热水浴中超声5min，流水冷却至室温，加入无水乙醇（4.1.2）100ml和三氯甲烷100ml，于室温水浴中超声5min，用三氯甲烷稀释至刻度摇匀。
取该溶液适量，置于具塞离心管中离心5min（转速为3000r/min），精密称取上层清液2ml于50ml棕色容量瓶中，将容量瓶置于约45℃的水浴中，用氮气流吹干，用三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，即为待测液，应立即测定（于20min内完成测定）。
虾壳中虾青素的提取实验报告
虾青素（Astaxanthin），即3,3’-二羟基-4,4’-二酮基-β,β’-胡萝卜素，分子式为C40H52O4，相对分子质量为596，其结构式如下(其中R= CH3)。
呈鲜红色，在水生动物、鸟类羽毛及植物叶、花、果中广泛存在，具有极强的抗氧化、抗癌变、增强免疫作用的功能。
一虾青素的生理功能虾青素可淬灭单线态氧，清除自由基，阻止脂质过氧化，保护机体免受伤害, 预防癌症发生，还能促进人体免疫球蛋白的产生，具有更高的免疫调节活性。
研究表明，虾青素具有抗氧化活性的类胡萝卜素,虾青素的抗氧化性比β-胡萝卜素高约10倍，比维生素E高约500倍。
虾青素已被认为是“超级维生素E”。
体外细胞培养试验研究虾青素对鼠免疫活性细胞的繁殖及功能的影响，结果显示虾青素比裸藻酮和β-胡萝卜素具有更高的免疫调节活性。
最新研究表明，虾青素具有比β-胡萝卜素更强的抑制癌变的能力。
二虾青素的商业开发由于动物本身不能够合成虾青素，而且绝大部分动物也不能把其他类胡萝卜素转化成虾青素，因此必须从食物中摄取虾青素。
目前虾青素已经在美国被批准为食品添加剂，并且在三文鱼的养殖中得到了很好的应用。
现在市场上虾青素的售价很高，单价达2000-2500美元每公斤（虾青素含量3%），而虾青素软胶囊每瓶140元，每瓶虾青素总量为360mg。
在2000年，虾青素的市场容量估计就已经达到了每年2亿美元。
因此进一步研究虾青素对人体的作用，开发相关的保健品和保健化妆品，则可以扩大天然虾青素的应用范围和市场。
三虾青素的来源虾青素主要有两种生产方式，即化学合成和天然提取。
一）化学合成虾青素化学合成法要经过多步化学和生物催化反应才能完成，其化学合成的前体物质为（S-3-乙酸基-4-氧代-β-紫罗酮，它是不同的微生物对（R）萜烯醇醋酸盐不对称水解，经过萃取，反流分布及重结晶等技术处理而得到产物。
人工合成的虾青素大多为顺式结构，而生物体合成的虾青素大多为反式结构。
动物体对人工合成的虾青素吸收能力较弱，而且人工合成的虾青素的着色能力和生物效价远比天然虾青素低。
虾青素检测方法
虾青素检测方法虾青素分析方法1.仪器：Agilent 1100 旋转蒸发器超声波2.试剂：无水乙醇三氯甲烷正己烷（HPLC）丙酮（HPLC）3.检测方法：色谱柱：ZORBAX RX-SIL 4.6×250mm,5um流动相：正己烷：丙酮=86：14柱温：25℃检测波长：470nm（VWD）流速：1.2ml/min进样体积：20ul4.溶液配制供试品溶液：精密称取虾青素（微粒）样品100mg，置于250ml容量瓶中，加5ml水，50℃水温超声10min，使样品完全溶解。
冷却到室温，加100ml无水乙醇，用三氯甲烷定容。
取一定量的溶液离心，转速2500/min，5min。
移取上清液5ml于蒸馏烧瓶中，50℃旋转蒸发，残渣用4ml三氯甲烷溶解，移入50ml容量瓶中，并用正己烷定容。
此溶液为供试品溶液。
标准品溶液：精密称取虾青素对照品10.0mg，置于100ml容量瓶中，加10ml 三氯甲烷，冷水超声溶解，加正己烷稀释至刻度，摇匀。
移取此溶液5ml于50ml容量瓶中，加4ml三氯甲烷，用正己烷稀释至刻度，摇匀，此溶液为标准品溶液。
5.计算虾青素含量＝样品峰面积×标准品质量×250×10×标准品含量×100％÷标准品峰面积÷样品质量÷100÷1010%虾青素干粉的紫外检测方法1.样品液配制取待测样品100毫克干粉至250毫升棕色容量瓶中，加5毫升去离子水，在50摄氏度条件下超声溶解5min，冷却后，加100毫升无水乙醇摇匀，再用氯仿定容，过滤。
取5毫升上述溶液至50毫升容量瓶中，再用氯仿定容至刻度。
2.虾青素空白溶液用氯仿做空白。
在474nm处测最大吸收值。
3.结果计算C=A*2500/（1830*W）A为吸光系数W为样品重量虾青素晶体、油悬检测方法1.样品液配制取待测样品20毫克晶体（或油悬液60毫克）至100毫升棕色容量瓶中，加入10毫升氯仿溶解，加正己烷定容，摇匀，取1毫升上述溶液至100毫升容量瓶中，再用正己烷定容至刻度。
一种全反式虾青素含量测定方法
一种全反式虾青素含量测定方法
一种全反式虾青素含量测定方法是利用高效液相色谱-质谱（HPLC-MS/MS）技术进行测定的方法。
1. 检测前样品准备
首先，需要将新鲜的虾青素样品在离心管中进行离心，保留上清液。
将上清液转移至经过滤的2ml微离心管中，加入甲醇进行稀释。
然后进行涡旋混合，再进行离心，将上清液转移到色谱小瓶中，进行
进一步的测定。
2. 仪器设置
采用HPLC-MS/MS系统进行虾青素含量的测定，HPLC参数为：色
谱柱为Agilent Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱（2.1mm×50mm，
1.8μm），流动相为乙腈和0.1%乙酸水溶液（V/V=8∶92），流速为
0.4 mL/min，柱温为40℃；MS/MS参数为：电喷雾离子化（ESI）正离
子模式，离子传输电压为1500 V，锥形电势为20 V，源温度为400℃，电离二次质量过滤器轻/重离子转换时间为50/950 ps，扫描模式为多
反应监测（MRM）模式。
3. 测定
将样品注射进入HPLC-MS/MS系统，进行检测和分析。
根据HPLC-MS/MS数据处理软件的分析结果得到各样品中虾青素的含量，并进行结果分析。
4. 结果分析
通过该全反式虾青素含量测定方法，可以得到准确、可靠的含量值。
同时，该方法还能检测出一些与虾青素相关的化合物，为后续药
物研究提供了更多的信息。
综上所述，该全反式虾青素含量测定方法具有测定精度高、灵敏
度高、可重复性好、同时还具备检测一些与虾青素相关的化合物的优点，可为虾青素的研究开发提供更多的技术支持。
实验二 法夫酵母细胞中虾青素的提取及含量的测定
实验二、法夫酵母细胞中虾青素的提取及含量的测定一、实验目的与要求1．学习细胞破碎的原理与方法；2．学习与掌握有机溶剂萃取的原理与方法。
二、实验材料与试剂1．供试菌株法夫酵母菌液。
2．实验材料50mL塑料离心管，Φ5mm玻璃珠，离心管架。
3．实验仪器振荡器，水浴锅，离心机，分光光度计。
4．类胡萝卜素总量的分析方法酵母细胞经过破壁后得到的细胞碎片用丙酮提取，测定其OD475（A）。
并转化成色素含量。
计算公式如下：发酵液总类胡萝卜素质量浓度(μg/mL)=(A*V)/(E*V0 )细胞总类胡萝卜素含量(μg/gCDW)=(A*V)/(E*G)式中： A —吸光度读数；V —萃取液体积数，mL；E —消光系数，0. 16；V o—吸取的酵母定容液的体积，mL；G —发酵液的细胞干重（CDW），g。
5．菌体生物量的测定方法：吸取4mL的发酵液，3000rpm离心10min，等量蒸馏水洗涤一次，80℃烘干至恒重。
6．HPLC测定虾青素的含量准确称取经冷冻干燥的25mg法夫酵母细胞，加入56℃二甲亚砜（DMSO）6mL振荡10min，加6mL丙酮振荡2min，加入6mL 20%NaCl溶液，然后加入18mL混合萃取溶剂正己烷/乙醚(1: 1)振荡1min后，5000rpm离心5min，旋转蒸发浓缩上层红色液体至溶剂消失后，先用少量氯仿溶解颗粒物，移至25mL的容量瓶中并用流动相定容。
精密称取5mg 虾青素（Sigma公司）标准品，少量氯仿溶解后用流动相制成0. 02 mg/mL的标准溶液进行进样。
按外标法计算。
色谱条件：色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18：5μm，4.6×250mm；流动相：甲醇:乙腈= 9:1；流速0.8mL/min；检测波长475nm；柱温为室温，进样量为20μL。
三、实验内容1．自溶法：准确吸取4mL菌液，3000r/min离心3min后弃上清，水洗一次，沉淀加入4%的NaCl 4mL，作为质壁分离剂，水浴控制温度为55℃，自溶1h后，3000rpm离心3min，即得破壁的酵母细胞，再加入8mL丙酮萃取色素，振荡2min，3000rpm离心3min，上清以丙酮作空白测OD475。
一种快速测定虾青素含量的方法
一种快速测定虾青素含量的方法
周凡;屈云;谭家声;张亚娟
【期刊名称】《云南化工》
【年(卷),期】2024(51)3
【摘要】建立一种用分光光度法快速测定雨生红球藻粉和含雨生红球藻粉的复配产品中虾青素含量的方法。
利用单因素实验,对雨生红球藻粉中虾青素的提取试剂进行了选择,确定最佳提取试剂为二甲基亚砜。
结果表明,吸光度值与虾青素质量浓度在0.2~0.8μg/mL范围内有良好线性关系,R~2=0.9997。
与GB/T 31520-2015比较,测定方法的误差为0.02%~0.09%,测定含雨生红球藻粉的复配产品中虾青素含量的误差为0.003%~0.011%;平均加标回收率分别为98.7%、98.3%。
所建立的方法可以快速、准确测定雨生红球藻粉和含雨生红球藻粉的复配产品中虾青素的含量。
【总页数】3页(P91-93)
【作者】周凡;屈云;谭家声;张亚娟
【作者单位】湖北省兴发磷化工研究院有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】O657.3
【相关文献】
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解-正相高效液相色谱法研究5.可见/近红外快照式多光谱成像快速测定雨生红球藻虾青素含量
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反相高效液相色谱法检测虾青素_陈晋明
反相高效液相色谱法检测虾青素*陈晋明1,2 王世平1 陈 敏1(1.中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083; 2.山西农业大学食品科学与工程学院,太谷 030801) 摘要 建立了一种快速检测虾青素的高效液相色谱法。
色谱柱为D ik m a D i amonsil T M-C18(250mm×4.6mm .i d.,5μm),柱温为25℃,甲醇为流动相,检测波长为478n m。
虾青素的质量浓度在1～10μg/mL内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数为0.9997,该方法测定结果的相对标准偏差为0.38%(n=6),回收率为99.7%。
关键词 虾青素 高效液相色谱 雨生红球藻 侧金盏花 虾青素(A staxan t h i n,3,3′-二羟基-4,4′-二酮基-β,β′-胡萝卜素),又名虾黄质、龙虾壳色素,是海洋生物体内主要的类胡萝卜素之一[1～2]。
近年来大量的研究表明,虾青素具有许多重要的生物学功能,可作为维生素A原,其抗氧化性强于β-胡萝卜素和维生素E,虾青素能清除体内由紫外线照射产生的自由基、抑制多不饱和脂肪酸的氧化、调节免疫功能、改善视力、加速色素形成以及抗肿瘤等[3]。
同时,虾青素具有特殊的鲜艳粉红色,可用于食品、化妆品的着色以及作为水产养殖的饲料添加剂。
目前,虾青素的生产已形成一定规模,其销售额达数亿美元,市场前景十分广阔[4]。
因此对虾青素的分析检测引起了人们的重视,国内外已有文献报道虾青素的分析检测方法[5～7],但这些方法多数分析时间较长或分析过程较复杂。
笔者采用反相高效液相色谱法对雨生红球藻粉及侧金盏花粉中的虾青素进行了快速的定性、定量分析,分析灵敏度高,结果可靠,为虾青素的综合利用提供了科学依据。
1 实验部分1.1 主要仪器与试剂 高效液相色谱仪:LC-10ATVP型,日本岛津公司; 紫外-可见分光光度检测器:SPD-10AVP型,日本岛津公司; 双光束紫外可见光光度计:TU-1901型,北京普析通用仪器有限公司; 水浴恒温振荡器:PHZ-82型,常州国华电器公司; 高速冷冻离心机:TGL-16G-A,上海安亭科学仪器厂; 虾青素标准品:美国Sig m a公司; 甲醇:色谱纯; 甲醇、二氯甲烷:分析纯; 雨生红球藻粉样品:市售; 侧金盏花:某农科院; 虾青素标准储备液:0.1m g/m L。
虾青素实验
虾青素逆转衰老效果明显虾青素存在于海洋里的红藻里。
三文鱼、虾、螃蟹等海洋生物食用后，体内含有虾青素成分，煮熟后变成红色的色素是由虾青素氧化后的虾红素。
虾红素对人类无价值，只有未煮熟前的虾青素才有意想不到的价值。
逆转衰老，眼见为实：一、大米实验1、取几粒白色剔透的大米，滴入数滴强氧化剂碘伏。
大米迅速被氧化变黑。
用清水将大米淘一淘，大米依然是黑色的。
2、将高纯度的虾青素放入盛大米的杯子，在搅拌的过程中，观察大米瞬间被洗白。
被氧化的大米被还原，重新变白，恢复如初。
3、此时再加入碘伏，大米没有变黑，一直保持好大米的原色原质。
实验结论：1、被氧化大米相当于已受损的人体器官。
虾青素强力逆转氧化，大米变白了，人体器官恢复正常。
2、再次氧化时，虾青素已经形成保护膜，人体器官有了免疫，再不会旧病复发。
二、苹果实验1. 把一个苹果用刀切成两边，分别放入两个玻璃容器里，分别放入同等份量的水，刚好覆盖住苹果。
2. 取一粒虾青素，用刀切开，滴入其中的一个盛有一边苹果的水中，搅拌均匀。
3. 等待一至两小时，然后观看两边的苹果：有虾青素的苹果，跟刚切开时的颜色一样，没有任何变化；没有虾青素的苹果，变成棕色，变坏了。
如果你等更久一些时间，这两边的苹果的差异更大，氧化破坏和抗氧化的保护就在你眼前正在发生着。
没有受保护一边的苹果，受到氧化得非常快；有虾青素受保护一边的苹果受氧化得非常慢，或没有受到氧化，因为抗氧化剂虾青素的存在。
延长生命，科学为证：三、线虫实验，太令人震撼约翰斯坦波教授在加州罗克实验室，那里是世界抗衰老研究的权威中心。
2011年他们完成了著名的线虫实验。
这种线虫为单细胞生物体，它的寿命只有20天。
因此常用它作为衡量科研成果延缓衰老、延长寿命的“试验品”。
约翰斯坦波教授及其弟子连续喂食虾青素，最后线虫竟然活到了36—42天！这太不可思议了，这相当于生命平均延长了100%！这个结果对于人类的意义太令人震撼了。
穏定性虾青素对人类的意想不到的益处是由于它的强大的抗氧化能力，这个内在的因素使制造业者和消费者造成一个问题。
提取虾青素的方法
提取虾青素的方法
提取虾青素的常用方法主要有以下几种：
1. 有机溶剂提取法：将虾青素含量较高的虾类样品破碎，加入适量有机溶剂（如乙醇、甲醇等），进行浸提，再用旋转蒸发仪蒸发有机溶剂，最后用乙醚等有机溶剂将虾青素从样品中分离提取。
2. 超声波辅助提取法：将虾青素含量较高的虾类样品与适量的溶剂（如乙醇、甲醇等）置于超声波浴中，利用超声波的机械与热效应促进虾青素的溶出，然后通过离心等操作将提取液中的虾青素分离、浓缩。
3. 高效液相色谱法（HPLC）：将虾类样品搅碎并与有机溶剂混合，进行超声波提取或浸提，再进行离心分离，利用高效液相色谱仪进行分离和定量分析。
4. 气相色谱法（GC）：将虾青素含量较高的虾类样品进行超声波或溶剂浸提，分离提取液中的虾青素，再通过气相色谱仪进行分析。
5. 固相微萃取法（SPME）：将虾类样品与湿拭布或有机涂层纤维接触一段时间，再将纤维放入烘干管或连接气相色谱仪进行脱附分析。
需要注意的是，提取虾青素的方法选择应根据具体实验目的和条件进行合理选择，并结合检测分析技术进行应用。
分光光度法测定虾青素
性好 ， 且 简便 、 快速 ， 可以作为企业 大批 量生产 中虾 青素的测 定方法。
关 键 词 ：虾 青 素 ： 分光光度法 ； 化 学合 成
文 章 编 号 ：１ ０ ０ ６ － ４ １ ８ ４ （ ２ ０ １ ５ ） ９ — ０ ０ ５ １ － ０ ４
０ 概 述
虾 青 素 是 一 种 广 泛 存 在 于 生 物 体 的 非 维 生
２ ０ １ ５ 年 第４ ６ 卷 第９ 期
渐 ； 他 工
一 ５ １ 一
分光光度法测定虾青素
张 泳 ， 厉 妙 沙 ，吴 嘉 圣
（ 上虞新 和成生物化工有 限公 司 ， 浙江 上虞 ３ １ ２ ３ ６ ９ ）
摘 要 ： 建立一种快速测定化 学合成虾青 素含 量的分光 光度 分析 方法。 采 用经氢醌处理 的
虾 青 素是 由 四个 异戊 二烯 单 位 以共 轭双 键
形式链 接 ． 两 端 又有 两 个 异 戊 二 烯 单 位 组 成 六 节 环结 构的化合 物 ． 虾 青 素 分 子 结 构 中 的这 种 共 轭 双 键 体 系及 离 域 化 的 １ Ｔ 电子 ， 在 可 见 光 区 表 现 出
三 氯 甲烷 做 为提 取 溶 液 ， 在４ ８ ９ ｌ ｌ ｍ波 长下测定吸光度 ， 该 分 光 光 度 法 的 标 准 曲 线 回 归 系数 是
０ ． ９ ９ ９ ９ ， 相 对标准偏差为 ０ ． ３ ６ ％， 加 标 回收 率 为 ９ ９ ． ８ ％～ １ ０ ２ ． ５ ％， 表 明 该 分 析 方 法 准确 性 高 、 重 复
２ ０ １ ５ 年 第４ ６ 卷 第９ 期
表 １ 精 密度 试 验 结 果
渐｝ 化 工
袁 ２ 回 收 率 测 定 结 果
虾青素检测
虾青素检测
虾青素（Astaxanthin），又称为虾黄素、虾黄质，是一种存在于河螯虾外壳、牡蛎和鲑鱼中的红色类胡萝卜素。
在体内可与蛋白质结合而呈青、蓝色，具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、预防心脑血管疾病等作用。
虾青素及其分子结构式
迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)技术，使用Agilent或Waters高效液相色谱仪对样品进行分离，蒸发光散射检测器(ELSD)或DAD检测器对样品进行鉴定，可检测各类样品中虾青素含量变化。
此外，我们还提供其他多种色素检测服务，以满足您的不同需求。
送样要求及检测周期
HPLC测定虾青素样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周
项目报告
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关质谱参数（中英文）
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 虾青素含量信息
相关服务
色素检测。
虾青素实验方法
虾青素实验方法1.3实验方法1.3.1生物量的测定主要采用干重法，首先可以将空管置于烘箱中烘干至恒重，记得做标记(必须使用马克笔)，并且记录下空管的重量m，然后取5mL的发酵液于离心管中，0 3500r/min，离心5min，沉淀水洗两次，完后置于烘箱中烘干至恒重，并且称重m。
计算方法如下:生物量(g/L)= (m-m)×1000/v 01式中，m—空管重量(g);m —管与菌体总重量(g);v—发酵液体积0 1 (mL)。
1.3.2虾青素总含量的测定取适量发酵液(一般高产1mL低产5mL)于做好标记的空管中，3500r/min，离心5min，沉淀水洗一次，去上清后将沉淀在50?水浴中预热5分钟左右，将预热至75度的DMSO(二甲基亚砜)取2mL于离心管中，剧烈震荡至菌体完全消失，于离心管中加入5mL左右的乙醇，3500r/min，离心5min，上清液定容至10mL，在可见分光光度计下(必须提前预热20min)，于474nm测量其吸光值(空白采用二甲基亚砜:乙醇=1:4)1.3.3发酵液残糖的测定葡萄糖标准曲线的制作:配制2g/L的葡萄糖标准液，精确称取1*198.17/180=1.1009g的葡萄糖定容至500mL。
不同葡萄糖浓度的标准溶液的制作:做大约11个点，分别为0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6，1.8，2g/L0g/L标准液的配制:取1mL蒸馏水0.2g/L标准液的配制:0.1mL 2g/L的葡萄糖夜+0.9mL的蒸馏水 0.4g/L标准液的配制:0.2mL 2g/L的葡萄糖夜+0.8mL的蒸馏水 0.6g/L标准液的配制:0.3mL2g/L的葡萄糖夜+0.7mL的蒸馏水 0.8g/L标准液的配制:0.4mL 2g/L的葡萄糖夜+0.6mL的蒸馏水 1.0g/L标准液的配制:0.5mL 2g/L的葡萄糖夜+0.5mL的蒸馏水1.2g/L标准液的配制:0.6mL 2g/L的葡萄糖夜+0.4mL的蒸馏水 1.4g/L标准液的配制:0.7mL 2g/L的葡萄糖夜+0.3mL的蒸馏水 1.6g/L标准液的配制:0.8mL 2g/L的葡萄糖夜+0.2mL的蒸馏水1.8g/L标准液的配制:0.9mL 2g/L的葡萄糖夜+0.1mL的蒸馏水2.0g/L标准液的配制:1.0mL 2g/L的葡萄糖夜取各标准液和样品液1mL(经过适当的倍数稀释，使样品液浓度在标准曲线上)加入3mL的DNS，100度水浴加热15min，时间到后取出来立即用自来水冷却，之后定容至25mL，于520nm下测定吸光值。
玉米虾青素含量测定elisa
玉米虾青素含量测定elisa玉米虾青素含量测定ELISA的重要性与应用1. 引言玉米虾青素是一种重要的天然色素，常用于食品、饲料、保健品和化妆品等行业。
正确测定玉米虾青素的含量对于产品质量控制、营养评价和市场竞争具有至关重要的意义。
本文将探讨玉米虾青素含量测定中常用的ELISA技术，并分析其优势和应用前景。
2. ELISA技术概述酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种基于抗原与特异性抗体结合反应的免疫分析技术。
其原理是将待测的物质（如玉米虾青素）与特异性抗体结合，通过酶标记的二抗与抗体结合，从而实现半定量或定量测定目标物质的含量。
3. ELISA测定玉米虾青素的步骤3.1 样品处理和提取：将玉米虾进行初步处理，如研磨、超声提取等，以获得稳定的玉米虾青素提取液。
3.2 抗原修饰：将玉米虾青素提取液进行抗原修饰，使其能够与特异性抗体结合。
3.3 抗体固定：将特异性抗体与固相材料（如酶标板）结合，形成抗原抗体复合物。
3.4 样品孵育：将经修饰的玉米虾青素标本加入抗体固相复合物，使其与抗原抗体发生特异性反应。
3.5 酶标记二抗孵育：加入酶标记的二抗，与复合物结合形成二抗抗原抗体酶标记复合物。
3.6 显色反应：加入显色底物，使酶标记产生可定量的颜色反应。
3.7 读取光密度：使用酶标仪读取反应产物的光密度，与已知浓度样品进行比较，计算出待测样品中的玉米虾青素含量。
4. ELISA技术的优势4.1 高选择性：ELISA技术基于抗原与抗体的特异性结合，能够准确识别目标物质，避免与其他相关物质的干扰。
4.2 高灵敏度：ELISA技术采用酶标记，酶与底物反应生成可定量的颜色产物，通过光密度读取进行定量分析。
4.3 高通量：ELISA技术可以同时处理多个样品，提高测定效率。
4.4 简便易用：ELISA技术操作简单、结果稳定，无需复杂的设备和技术要求。
高效液相色谱法分析检测虾青素
1. 1 仪 器 日本岛津 L C210AS 系列 ( SCL210A 控制
器 ,L C210AS 双 泵 , CTO210A 柱 温 箱 , SPD2 10A 紫 外 检 测 仪 , C2R6A 数 据 处 理 仪 等) 。 色 谱 柱 : 日 本 岛 津 Shim2pack CL C2ODS , 5μm , <6 mm ×150 mm 。色谱条件 :流动相为 V (甲醇) ∶V (乙腈) ∶V (四氢呋喃) = 80∶5∶ 15 ,经 Al ( OH) 3 脱水 , 0145μm 微孔滤膜过 滤 、超声波脱气 ;流量为 1 mL/ min ;进样量为 10μL ;柱温为室温 ;检测波长 474 nm 。 1. 2 试 剂
(浙江工业大学生物工程系 , 杭州 , 310032)
摘 要 采用 HPLC 反相色谱法 ,通过外标法定量测定了红法夫酵母和虾壳提取物中的虾青 素含量 ,计算公式为 : A = 29 639 C + 7 060 。该方法的回收率为 9810 %～10018 %。 关键词 虾青素 红法夫酵母 虾壳 高效液相色谱
取一定量经酸化处理的虾壳 ,加入等体 积的 CCl4 萃取 ,CCl4 相用旋转真空蒸发器去 除 CCl4 ,浓缩物用无水吡啶溶解 ,再加入一 定量水 ,静置过夜 ,得到紫红色针状晶体 ,取 一定量用 CCl4 溶解 ,待测 。 114 虾青素标准溶液的配制
称取一定量虾青素标准品 ,用甲醇配制 质量浓度分别为 110 、210 、510 、1010 、2010 μg/ mL 标准工作液 。
虾青素 (美国 Sigma 公司) ,己烷 (AR) , 醋 酸 乙 酯 ( AR ) , 甲 醇 ( HPL C 级 ) , 乙 腈
( HPL C 级) ,四氢呋喃 (AR) ,其他均为国产 分析纯试剂 。 1. 3 样品制备 11311 红发夫酵母中虾青素的提取
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虾青素试验方法
警告----本产品对光敏感，在操作过程中应避光操作。
三氯化锑-三氯甲烷溶液有强腐蚀性，在操作过程中应注意避免与皮肤接触，如不慎接触到皮肤，应立即用清水冲洗。
本标准所用的试剂和水，除非另有说明，均指分析纯试剂和符合GB/T6682中规定的三级水。
4.1 试剂和溶液
4.1.1 三氯甲烷。
4.1.2 无水乙醇。
4.1.3 BHT（2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚）。
4.1.4 三氯化锑-三氯甲烷溶液：称取1g三氯化锑用4ml三氯甲烷溶解即得（现配现用）。
4.2 仪器和设备
4.2.1 紫外-可见分光光度计。
4.2.2 分析天平。
4.2.3 超声波清洗器。
4.2.4 恒温水浴装置。
4.2.5 离心机（离心试管体积大于20ml）。
4.2.6 氮气吹干装置。
4.2.7 孔径为0.84mm的分析筛。
4.2.8 孔径为0.425mm的分析筛。
4.3 鉴别
4.3.1 取试样约10mg于试管中，加50℃-60℃热水1ml，于50℃-60℃热水浴中超声5min。
冷至室温后，加入三氯甲烷（4.1.1）10ml并振摇30s，静置分层后，取三氯甲烷层溶液3ml与三氯化锑-三氯甲烷溶液（4.1.4）1ml反应，溶液应立即显蓝紫色。
4.3.2 取含量测定项（4.4.1）下的待测液，以三氯甲烷为空白，使用1cm的比色皿，于分光光度计上扫描波长200nm-600nm之间的吸收光谱，其最大吸收波长应在波长 484nm-490nm之间，光谱图参见附录A。
4.4 含量
4.4.1 测定
待测液：称取试样0.15g（精确至0.0002g），置于250ml棕色容量瓶中，加入BHT（4.1.3）约10mg，加入蒸馏水10ml，在50℃-60℃热水浴中超声5min，流水冷却至室温，加入无水乙醇（4.1.2）100ml和三氯甲烷100ml，于室温水浴中超声5min，用三氯甲烷稀释至刻度摇匀。
取该溶液适量，置于具塞离心管中离心5min（转速为3000r/min），精密称取上层清液2ml于50ml棕色容量瓶中，将容量瓶置于约45℃的水浴中，用氮气流吹干，用三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，即为待测液，应立即测定（于20min内完成测定）。
以三氯甲烷为空白，使用1cm的比色皿，在分光光度计上测定待测液在487nm 附近最大吸收波长处的吸光度。
4.4.2 计算
试样中虾青素的含量X
以质量分数（%）表示，按式（1）计算：
1
×6250
A
max
X
=────── (1)
1
m
×1830
1
式中：
A
─待测液在487nm附近最大吸收处的吸光度；
max
6250─试样稀释的总体积，单位为毫升（ml）；
─称取试样的质量，单位为克（g）；
m
1
1830─试样中虾青素的标准百分消光系数（E1%
）；
1cm
4.4.3 允许差
取两次测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果相对偏差应不大于3%。
4.5 粒度
4.5.1 试验
称取试样50g，倾入分析筛中，振摇5min，取筛下物称量。
4.5.2 计算和结果的表示
以筛下物占试样的质量分数（%）表示，按式（2）计算：
粒度X
2
M
2
X
=────×100 (2)
2
M
3
式中：
─筛下物的试样质量，单位为克（g）；
M
2
─称取试样的质量，单位为克（g）。
M
1
4.6干燥失重
干燥失重按GB/T 6435规定的方法测定。
4.7重金属
按GB/T 5009.74规定的方法测定。
4.8 总砷
按GB/T 13079规定的方法测定。