饮用水大肠杆菌测试
5.水中大肠杆菌的检测（多管发酵法）
5.水中大肠杆菌的检测（多管发酵法）第一篇：5.水中大肠杆菌的检测(多管发酵法)水中大肠杆菌群书的监测（发酵法）一、试验目的：1.了解和学习水中大肠杆菌的测定原理和测定意义。
2.学习和掌握水中大肠杆菌的监测方法。
二、试验原理：水的微生物学的检验，特别是大肠杆菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。
国家饮用水的标准规定饮用水中大肠杆菌群书每升中不超过3个，细菌总数每毫升不超过100个。
水中大肠杆菌的检验方法，常用多管发酵发和滤膜法。
多管发酵发可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。
滤膜法仅用于自来水和深井水。
操作简洁快速，但不适用于杂质较多，易于阻塞滤孔的水样。
三、试验材料：1.培养基：乳糖蛋白胨培养基，伊红美蓝培养基2.器材：灭菌三角瓶、无菌平皿、无菌吸管、无菌试管等。
四、试验内容第一天：1.水样的采集自来水洗将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌，在开放水龙头取水流5ｍｈ，以灭菌山角瓶接水取样以备分析。
2.用发酵法检查大肠杆菌（1）生活饮用水的检验①初步发酵试验：在2个各装有50ｍｈ的3倍乳糖蛋白胨培养液的三角瓶中，以无菌操作各自加水样10ｍｈ。
摇匀后，37℃培养24ｈ第二天：②平板分离：经24ｈ培养后。
特产酸产气及只产酸的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板（EMD培养基上），37℃培养18～24ｈ。
大肠杆菌群在EMD平板上，菌落呈紫黑色，具有或略带或不带有金属光泽，或者呈淡紫红色，仅中心颜色较深，挑取符合上述特征的菌落进行涂片，革兰氏染色，镜检。
第三天：③复发酵试验：将革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌落的剩余部分接于单倍乳糖发酵管中，为防止遗漏，每管可接种来自同一初发酵管的平板上同一类型菌群1～3个，37℃培养24ｈ，如果产酸又产气者，即证实有大肠菌群存在。
第四天：④报告：根据证实有大肠菌群存在的复发酵管的阳性管，查附录1或2，报告每升水样品中大肠菌群数（MPN）五、思考题记录试验结果，并对所测样品作出评价。
水质大肠杆菌检测标准
水质大肠杆菌检测标准
根据国家标准《自来水卫生标准》（GB 5749-2006），以下是关于水质大肠杆菌检测的标准：
1. 生活饮用水中每升水样不得检出大肠杆菌。
矿泉水、天然矿泉水、纯净水、瓶装饮用水、桶装饮用水等也适用此标准。
2. 饮用水中若发生大肠杆菌超标，应采取相应措施，进行处理和消毒后方可使用。
3. 大肠杆菌是评价饮用水卫生指标的重要细菌指标之一，它的检测结果能够反映水样是否受到了粪便污染。
4. 大肠杆菌的检测方法通常采用培养方法，通过培养样品中的大肠杆菌并观察生长情况来判断水样是否存在细菌。
5. 大肠杆菌的检测应严格遵循操作规程，确保结果的准确性和可靠性。
除了以上国家标准，不同地区和国家可能有不同的水质大肠杆菌检测标准，具体的标准应根据当地的相关法规和标准来执行。
纯净水大肠杆菌检测方法
纯净水大肠杆菌检测方法纯净水是一种用于饮用和工业用途的水，在生产和配送过程中，可能会暴露于各种潜在的微生物污染源，其中包括大肠杆菌。
大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，它可以被用来作为环境卫生和水质卫生的指标微生物。
因此，检测纯净水中的大肠杆菌含量是必要的，以确保水质符合国家标准和消费者的安全需求。
纯净水大肠杆菌检测方法包括传统培养和分子生物学技术两种方法。
下面将详细介绍这两种方法的原理和应用。
1. 传统培养法传统培养法是一种基于培养大肠杆菌菌落的定量和质量检测方法。
该方法是最常用的水质检测方法之一，可以检测出细菌数量较低的水样品，并且相对简单易行，分析成本较低。
传统培养法的原理是将样品接种到肉汤或营养琼脂培养基中，然后在恰当的条件下孵育，使大肠杆菌繁殖形成典型的圆形、平坦、有光泽、直径约为2mm的蓝色或暗紫色菌落，最终通过计数菌落的数量来确定样品中大肠杆菌的含量。
该方法的优势在于其简单、直观、可重复，并且可以根据环境状况进行某些微生物特定测试。
但是，此测试方法需要培养菌落，所以需要较长时间，必须在8-24小时内进行读数，这可能会影响检测的准确性和效率，尤其是当仅检测少量样品时。
2. 分子生物学技术分子生物学技术是一种基于DNA分析的方法，可以检测到细胞和病毒等微生物的DNA序列。
作为一种新型的检测技术，分子生物学技术的优点在于其高灵敏度、快速性和精确性，它可以解决传统培养法缺点，提高检测灵敏度和准确性。
此外，分子生物学技术还有助于检测未能在传统培养法中检测到的微生物。
分子生物学技术主要包括聚合酶链式反应（PCR）、即时PCR、荧光定量PCR、基因芯片技术等，这些方法可以测量纯净水中微生物或微生物DNA的含量，从而确定大肠杆菌是存在于样品中，其数量的多寡、菌株的种类和亚型、具体DNA 分布等相关信息。
此外，为了提高检测的准确性，还可以使用核苷酸序列分析、基因测序等进一步验证检测结果。
总结在纯净水生产和配送前，进行大肠杆菌检测是必要的。
实验 水中细菌总数的测定 水中大肠杆菌的测定
实验2 水中大肠菌群数的测定一、目的要求1．了解大肠菌群数量在引用水中的重要性2．学习掌握多管发酵法和滤膜法测定大肠菌群数二、原理若水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染，然而肠道病原菌在水中容易死亡与变异，因此数量较少，要从中特别是自来水中分离出病原菌常较困难与费时，这样就要找到一个合适的指示菌，此指示菌要求是大量出现在粪便中的非病原菌，并且和水源病原菌相比是较易检出的。
若指示菌在水中不存在或数量很少，则大多数情况也保证没有病原菌。
最广泛应用的指示菌是大肠菌群，它的定义是：一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽胞的杆状细菌，并在乳糖培养基中，经37ºC、24～48h培养能产酸产气，根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。
我国规定每升自来水中大肠菌群不得检出；若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠菌群数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水，其大肠菌群数平均每升不得超过10000个。
检查大肠菌群的方法有多管发酵法与滤膜法两种。
多管发酵法使用历史较久，又称水的标准分析方法，为我国大多数卫生单位与水厂所采用；滤膜法是一种快速的替代方法，而且结果重复性好，又能测定大体积的水样，目前国内已有很多大城市的水厂采用此法。
三、实验仪器和材料1．锥形瓶（500 ml）、试管（18 mm×180 mm）、大试管（容积150 ml）、移液管1 ml 及10ml、培养皿（直径90 mm）、接种环、试管架1个。
2．革兰氏染色液一套：草酸铵结晶紫、革氏碘液、95％乙醇、蕃红染液3．显微镜4．自来水（或受粪便污染的河、湖水）400ml5．蛋白胨、乳糖、磷酸氢二钾、琼脂、无水亚硫酸钠、牛肉膏、氯化钠、1.6％溴甲酚紫乙醇溶液、5％碱性品红乙醇溶液、2％伊红水溶液、0.5％美蓝水溶液。
6．10％NaOH、10％HCl、精密pH试纸6.4～8.4。
大肠杆菌检测实验报告
大肠杆菌检测实验报告一、实验目的掌握大肠杆菌的检测方法，了解其在水质检验中的重要性。
二、实验原理1. 大肠杆菌大肠杆菌是一种常见的肠道杆菌，是一类嗜热性、厌氧性以及革兰阴性杆菌。
该菌种常常是肠道菌群的组成部分，同时也是水污染的重要指示菌之一。
（1）标准培养基法经过富营养培养基的生长，大肠杆菌会形成显性和隐性的群体。
这种检测方法适用于水质样本、地球样品以及饮用水。
（2）膜过滤法样品通过过滤器滤过后，将过滤后的膜放入培养基上培养。
这种方法既适合于生物质量较小的样品，也适用于分析浓度高的样品。
（3）MPN法通过使用3组不同浓度的小管，并观察哪个浓度的小管有生长曲线的所有格子都被满足，来计算菌落形成单位的浓度。
可以适用于样品浓度较低的环境。
三、实验操作1. 实验材料大肠杆菌标准菌株、优化阳性对照菌株、培养基、蒸馏水、实验器材、滤纸、吸管、离心机、洗涤液和细胞硬度试剂。
2. 实验步骤（1）制备纯菌液：将大肠杆菌基配合缓冲液跳接种到营养琼脂平板上，并在37℃的恒温培养箱中培养过夜。
将菌落划入脱色水中，通过洗涤和离心的方式，获得纯化的细胞菌悬液。
（2）制备样品：将需要检测的水样分别过滤，过滤膜使用巨孔滤纸。
滤膜被慢慢放在脱色水上U型板中间的孔里，然后浸泡（3）培养过程: 将U型板接入温度为37℃的有氧培养箱内，在24 - 48小时内观察细菌进行生长，并做出相应的计数和检测。
四、实验结果与分析按照实验操作规程进行样品处理和培养后，确认样品中是否存在大肠杆菌。
如果在实验中产生的试样中出现了大肠杆菌生长，且其生长优于阳性对照；或者在某些水样中不能检测出大肠杆菌，说明该水质品质不满足相关规范的要求。
五、实验结论本实验通过不同的大肠杆菌检测方法，较为全面地了解了大肠杆菌的检测方法及其在水质检验中的重要性。
在实验的基础上，我们有理由相信，通过科学准确的操作，人们可以更好地保证饮用水的健全和安全。
饮用水大肠杆菌检测
水中总大肠杆菌的测定1 原理总大肠杆菌群可用多管发酵法或滤膜法检测。
多管发酵法的原理是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖，产酸产气以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验，求得水样中的总大肠菌群数，实验结果以最可能数（most probable number），简称MPN表示。
2 仪器2.1 高压蒸汽灭菌器。
2.2 恒温培养箱，冰箱。
2.3 生物显微镜，载玻片。
2.4 酒精灯，镍铬丝接种棒。
2.5 培养皿(直径100mm)，试管(5×150mm)，小倒管，吸管(1，5，10ml)，烧杯(200，500，2000ml)，锥形瓶(500，1000ml)，采样瓶。
3 培养基及染色剂的制备3.1 乳糖蛋白胨培养液：将10g蛋白胨、3g牛肉浸膏、3g乳糖和5g氯化钠加热溶于1000mL蒸馏水中，调节pH为7.2－7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于试管（内有倒管）中，于121℃高压灭菌器中灭菌15min，贮存于冷暗处备用。
3.2 三倍浓缩蛋白胨溶液：按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法制备。
除蒸馏水外，各组分用量增加至三倍。
3.3 品红亚硫酸钠培养基3.3.1 贮备培养基的制备于2000mL烧杯中，先将20-30g琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解，然后加入3.5g磷酸氢二钾及10g蛋白胨，混匀，使其溶解，再用蒸馏水补充到1000mL调节溶液pH至7.2-7.4。
趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加10g乳糖，混匀，定量分装于250或500mL锥形瓶内，置于高压灭菌器中，在121℃灭菌15min，贮存与冷暗处备用。
3.3.2 平皿培养基的制备将上法制备的贮备培养基加热融化。
根据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按1：50比例吸取5%碱性品红乙醇溶液，置于灭菌空试管中；再按1：200比例称取无水亚硫酸钠，置于另一灭菌空试管内，加灭菌水少许使其溶解，再置于沸水浴中煮沸10min（灭菌）。
对生活饮用水细菌总数、总大肠菌群的检测
POPULAR SCIENCE大众科普近年来，上海建科检验微生物实验室参加了由中国国家认证认可监督管理委员会组织的、中国检验检疫科学研究院测试评价中心负责实施的饮用水中微生物的检测能力验证。
能力验证是指利用实验室间比对来确定实验室检测/校准能力的活动，它是确保实验室维持较高的校准和检测水平而对其能力进行考核、监督和确认的一种验证活动[1]。
为了提高生活饮用水细菌总数检测和总大肠菌群生化鉴别水平，并顺利通过国家组织的能力验证考核，上海建科检验微生物实验室从“人、机、料、法、环、测”几个方面，制定了一份全新的符合检测项目考核的实施方案，并最终顺利通过了能力验证考核。
本文就如何提高生活饮用水细菌总数检测和总大肠菌群生化鉴别水平，制定特殊方案，以及解决能力验证考核过程中遇到的难点。
1 细菌总数和总大肠菌群检测方案1.1 明确岗位职责（1）在检测项目考核前，对仪器设备做好调试，确保状态稳定。
（2）在检测项目考核过程中，时刻做好自身安全的防护，检查冲眼器和冲淋器能否使用，并在试验结束后做好试验场所消杀工作。
（3）检测人员必须仔细地填写数据和原始记录，确保出具的结果准确无误。
作者简介：吴丽萍，工程师，主要研究方向为环境工程检测。
对生活饮用水细菌总数、总大肠菌群的检测吴丽萍上海建科检验有限公司，上海 201108科技视界SCIENCE & TECHNOLOGY VISION样和上述稀释度的水样1 mL 分别注入灭菌平板内，且做平行样。
倾注约12～15 mL 营养琼脂，并立即旋摇平板，使水样和培养基充分混匀。
同时，做空白对照。
在36 ℃±1 ℃的培养箱中，培养48 h [3]。
检测计数时，可用眼睛直接观察，或用放大镜检查，以防遗漏。
选择适当 稀释倍数的平板，读取菌落数量，求出同稀释度的平均菌落数[4]。
表2 生活饮用水样品中细菌总数检测实验操作（3）总大肠菌群检测实验操作（多管发酵法）[5]在做总大肠菌群检测实验操作（表3）时，先用10 mL 无菌移液管吸取待测样品到双料乳糖蛋白胨，再用1 mL 无菌移液管吸取待测液到10 mL 单料乳糖蛋白胨。
EHS-M-W-002.0生活饮用水中大肠菌群检测细则(多管发酵法)W
1适用范围及标准1.1适用于生活饮用水、水源水、游泳池水中大肠菌群的测定。
1.2技术标准GB/T 5749-2006 《生活饮用水卫生标准》GB/T 5750.12-2006 《生活饮用水标准检验方法微生物指标》DB 31/890-2015《公共游泳场所卫生管理规范》2检测原理2.1 总大肠菌群指一群在37 ℃、24 h培养能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
2.2 耐热大肠菌群指一群在44.5 ℃仍能生长且发酵乳糖产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
2.3大肠埃希氏菌是指一群能生长发酵乳糖产酸、产气且在含有荧光底物的培养基上44.5 ℃培养24 h产生β-葡萄糖醛酸酶，分解荧光底物释放出荧光产物，使培养基在紫外光下产生特征性荧光的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
3仪器和设备3.1 高压蒸汽灭菌器3.2 冰箱：2 ℃—8 ℃3.3 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃3.4 天平3.5PH试纸3.6恒温水槽：44.5 ℃3.7生物安全柜3.8紫外光灯：6W、波长366nm3.9平皿：直径为9cm3.10试管3.11刻度吸管3.12小倒管3.13 金属接种环4培养基和试剂4.1乳糖蛋白胨培养基：称取乳糖蛋白胨于蒸馏水中加热溶解，充分混匀，分装到带有倒管的试管中(每管10 mL)，115 ℃高压灭菌20min。
（注：双料乳糖蛋白胨即蒸馏水不变，乳糖蛋白胨的成分量加双份。
）4.2伊红美兰琼脂平板：称取伊红美兰琼脂，加热溶解，倾注灭菌平皿，每皿约15ml。
冷凝后，倒置4℃冰箱保存，待用。
4.3革兰氏染色液（染色方法见试剂使用说明书）4.4EC培养基：称取EC培养基干粉，加热溶解，调PH为6.9±0.2，分装到带有倒管的试管中(每管10ml)，121 ℃高压灭菌20 min，备用。
4.510 %（m/m）硫代硫酸钠溶液：121 ℃高压灭菌20 min。
饮用水大肠杆菌测试
多管发酵法测大肠杆菌群一、实验目的1、学习测定水中大肠杆菌群数量的国标测试法（主要为多管发酵法）2、了解大肠杆菌群的数量在水中的重要性二、实验原理我国《生活饮用水卫生标准》GB5749-85中关于生活饮用水的细菌标准具体规定如下：1、细菌总数1ml水中不超过100个。
2、大肠杆菌数1L水中不超过3个。
3、若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠杆菌群数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水，大肠杆菌群数平均每升不得超过10000个。
多管发酵法是以最可能数（most probable number）简称MPN 来表示试验结果的。
实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。
如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。
不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度。
因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。
三、适用范围：大肠菌群系指一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
通常用此法作为粪便污染指标来评价食品以及饮用水的卫生质量。
四、检验程序：→→→→→→五、操作方法：5.1 以无菌操作，将检样10ml被测液放于含有90ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。
5.2 用1ml 灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均（均液的PH值应在6.5～７.5之间，必要时分别用1mol/L 匀，做成1：100的稀释液。
氢氧化钠（NaoH）或(1mol/L)盐酸（HCL）调节。
水中大肠菌群的检测
水中大肠菌群的检测一、实验目的1、了解大肠菌群数量与水质状况的关系。
2、了解饮用水和水源水大肠菌群的原理和意义。
3、掌握大肠菌群对人体健康的影响以及作为水体评价的指标和对象。
4、学习检测水中大肠菌群的方法。
二、实验原理1、大肠菌群大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，周身鞭毛，能运动，无芽孢。
主要生活在大肠内。
在肠道中大量繁殖，几占粪便干重的1/3。
大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。
所以在平常外界环境中不能正常存活很长。
在环境卫生不良的情况下，常随粪便散布在周围环境中。
若在水和食品中检出此菌，可认为是被粪便污染的指标，从而可能有肠道病原菌的存在。
因此，大肠菌群数（或大肠菌值）常作为饮水和食物（或药物）的卫生学标准。
（国家规定，每升饮用水中大肠杆菌数不应超过3个）2、初发酵试验发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置杜氏小套管。
乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。
为便于观察细菌的产酸情况，培养基内加有溴甲酚紫作为PH指示剂，细菌产酸后，培养基即由原来的紫色变为黄色。
溴甲酚紫还有抑制其他细菌如芽孢菌生长的作用。
水样接种于发酵管内，37℃下培养：（1）24h内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠杆菌，疑为阳性结果；（2）在量少的情况下，也可能延迟48h后才产酸产气，此时应视为可疑结果。
以上两种结果均需继续做下面两部分实验，才能确定是否是大肠菌群。
（3）48h后仍不产气的为阴性结果。
3、MPN - 概述最大或然数(most probable number，MPN)计数又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。
其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。
本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等。
水质大肠杆菌检测方法
水质大肠杆菌检测方法水质大肠杆菌是一种常见的水污染指标微生物，其存在表明水体可能受到了粪便或污水的污染。
因此，对于饮用水、游泳水、工业用水等不同用途的水体，检测水质中大肠杆菌的含量具有重要意义。
本文将介绍几种常用的水质大肠杆菌检测方法，以供参考。
一、培养基法。
培养基法是一种常见的大肠杆菌检测方法，其基本原理是将水样在含有大肠杆菌生长所需营养物质的培养基上培养，然后观察培养基上是否有大肠杆菌的生长。
这种方法操作简单，成本较低，但需要一定的培养时间，通常需要24-48小时才能得到结果。
此外，培养基法对于大肠杆菌的特异性较差，可能会同时检测出其他肠道菌群。
二、膜过滤法。
膜过滤法是一种常用的水质微生物检测方法，其原理是将水样通过微孔膜过滤，然后将膜放置在含有营养物质的培养基上进行培养。
通过计数膜上的大肠杆菌落，可以得到水样中大肠杆菌的数量。
这种方法操作简便，结果准确，而且可以检测到低浓度的大肠杆菌。
但是，膜过滤法需要一定的实验室设备和技术支持。
三、分子生物学方法。
随着分子生物学技术的发展，PCR（聚合酶链式反应）和实时荧光定量PCR等分子生物学方法也被应用于水质大肠杆菌检测中。
这些方法具有高度的特异性和灵敏度，可以快速准确地检测出水样中的大肠杆菌。
此外，分子生物学方法还可以对大肠杆菌进行分子鉴定和基因分析，为进一步研究提供了有力的支持。
然而，分子生物学方法需要相对复杂的实验操作和昂贵的设备，对操作人员的技术要求也较高。
综上所述，针对水质大肠杆菌的检测，可以根据实际情况选择合适的方法。
培养基法操作简单，成本低，适合于一般的水质监测；膜过滤法准确性高，可以检测低浓度的大肠杆菌；而分子生物学方法则具有高度的特异性和灵敏度，适合于对水质中微生物的深入研究。
在实际应用中，可以根据需求和条件选择合适的检测方法，以保障水质安全和生态环境的健康。
水检测底物酶法测生活饮用水大肠菌群
水检测底物酶法测生活饮用水大肠菌群摘要：由于传统方法在检测水中大肠菌群和大肠埃希氏菌需要48小时左右,且操作过程复杂,难以掌握。
现介绍一种快速简便的检测方法，根据生活饮用水国家卫生标准（gb/t5750-2021）中推荐的固定底物技术酶底物法可购买到市售化产品idexx公司的colilert试剂[1]。
用于检测100ml水样，只需手工操作2分钟，即可在24小时内同时定量检测出大肠菌群和大肠埃希氏菌。
此方法大大的减少了工作量，避免了使用多管法的逐级稀释带来的操作误差；也避免了使用滤膜法时肉眼读数的人为误差，所以其假阳性率和假阴性率都比传统方法低。
由于24小时内就得到结果，可以很好的用于突发事件应急。
关键词：大肠菌群大肠埃希氏菌固定底物技术酶底物法colilert试剂目前我国对生活饮用水、水源水、地表水等展开卫生学评价，检测的指标为大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群（耐磨大肠菌群），以这些指标做为粪便污染的指示菌。
使用的标准检测方法为曝气法和多管及发酵法。
但这两种方法检测时间相对较长，须要48—72小时，须要检验试验，试验步骤较为繁杂，所以无法对水的卫生学状况作出快速评价。
因此，使用快速方便快捷的检测方法十分必要。
紧固地物技术酶底物法可以较好的填补传统方法的严重不足。
2.原理[1]：紧固底物技术酶底物法（definedsubstratetechnology）使用大肠菌群细菌能够产生β-半乳糖苷酶（β-d-galactosidase）水解onpg（ortho-nitrophenyl-β-d-galactopyranoside）并使培养液呈圆形黄色，以及大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）水解mug（4-methyl-umbelliferyl-β-d-glucuronide）使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理，来判断水样中是否含有大肠菌群及大肠埃希氏菌。
固定底物技术酶底物法可以选用国标中推荐粉状培养基（idexx公司的coiliert试剂）来进行简便的操作；无需确认试验；固定底物技术酶底物法检测时间短，只需24小时即可同时定量出水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌的mpn值。
大肠杆菌检测国家标准
大肠杆菌检测国家标准大肠杆菌是一种常见的细菌，它存在于人体和动物的肠道中，同时也可能存在于水和食物中。
由于大肠杆菌可能引起食物中毒和其他健康问题，因此对其进行检测是非常重要的。
为了确保食品和饮用水的安全，许多国家都制定了大肠杆菌的检测国家标准。
大肠杆菌检测国家标准是指针对食品、饮用水和环境中大肠杆菌的检测方法和标准的规定。
这些标准旨在保护公众健康，确保食品和饮用水的安全，防止疾病的传播。
在许多国家，大肠杆菌检测国家标准是由政府部门或专业机构制定和执行的。
大肠杆菌检测国家标准通常包括以下内容，取样方法、检测方法、检测限、结果判定标准等。
取样方法是指在何种情况下以及如何采集样品进行检测。
检测方法是指使用何种技术和设备进行大肠杆菌的检测。
检测限是指能够检测到的最小大肠杆菌数量，通常以CFU/g或CFU/mL为单位。
结果判定标准是指根据检测结果如何判断样品是否合格或不合格。
大肠杆菌检测国家标准的制定是基于科学研究和实践经验的，旨在保障公众健康和食品安全。
这些标准的制定和执行需要专业的技术和设备，以确保检测结果的准确性和可靠性。
同时，监督和执行这些标准的机构也需要具备权威性和公信力，以保障标准的执行效果。
在实际生产和生活中，严格执行大肠杆菌检测国家标准是非常重要的。
只有通过科学的检测方法和严格的标准，才能及时发现和防止食品和饮用水中的大肠杆菌污染，保障公众健康。
因此，食品生产企业、餐饮服务机构和水厂等单位都应严格遵守相关的检测标准，加强对大肠杆菌的监测和控制。
总之，大肠杆菌检测国家标准是保障公众健康和食品安全的重要举措。
通过科学的检测方法和严格的标准，可以有效预防大肠杆菌污染引起的食物中毒和其他健康问题。
因此，各国在制定和执行这些标准时应高度重视，确保其科学性和有效性，以保障公众健康和安全。
娃哈哈饮用水中的细菌菌落的测定实验方案
娃哈哈饮用水中的细菌菌落的测定实验方案一、实验目的1.堂握水样的采取方法，检测水和饮料中细菌。
2.掌握多管发酵法测定大肠杆菌群。
3.学习和掌握细菌南落总数及大肠杆菌群数量与水质标准的关系。
二、实验原理1.细菌总数是指1m液体样本在牛肉干蛋自陈培养基中经37、24h 培养所生长的菌落数，用每毫升菌数形成单位（CFU/mL）表示。
水中细菌总数可说明被有机物污染的程度，细菌数越多，有机物质含量越大。
本实验运用平板南落计数技术测定水及汽水中细菌总数。
2.我国城市供水卫生标准规定每1mL自来水样细菌总数37C培养24h不得超过80个，每100m水样中不得检测出大肠杆菌群。
瓶装汽水每1mL细菌总数不得超过100个，每100mL中大肠杆菌群不超过6个2.3大肠杆菌群数的测定用乳糖多管发酵法。
大肠杆菌能在37C、培养24h发酵乳糖产酸产气的生理特点，将水和饮料样本根据含菌量不等程度做稀释后接种到含不等浓度的乳糖蛋自陈发酵液中。
液质清洁度高则含菌量少，可不经稀释，接种量较大：液质差则应进行不等程度稀释后再接种。
接种>1mL以上用3倍乳糖发酵液，<=lmL用单倍乳糖发酵液。
接种后在37C培养24h后观察并根据样品接种量和发酵结果用统计学方法制成不同表格，从表中查出数字即可确定所测液体中大肠杆南群的含量，以最可能数表示。
三、实验仪器及试剂1.仪器及其他用品试管（44）、培养皿（29）、250mL三角烧瓶（8）、500mL三角烧瓶（2）、500mL烧杯（5）、500mL带玻璃塞的空瓶（2）、德汉室小管44）、10mL移液管（2）、5mL移液管（2）、1ml，移液管（2）、试剂瓶（1）、钢杯（1）、玻璃涂棒、玻璃棒、接利环、吸管、移液枪、报纸、酒精灯、石棉网、三脚架、试管架、电热炉、微波炉培养箱、高压蒸汽灭菌锅、显微镜、载玻片、擦镜纸、电子天平、pH试纸、吸水纸、载玻片夹子。
2.试剂蒸馏水、实验室自来水、旺旺超市250mL瓶装雪碧、革兰氏染色液、无菌生理盐水，无菌水，草酸铵结晶紫染液，卢戈氏碘液，95%乙醇，番红复染液3.培养基（1）牛肉膏蛋白陈培养基：牛肉膏0.3e、蛋白陈1.Og、NaCl 0.5g水100mL、琼脂2.0g，pH7.2、121C灭菌20min、（2）单倍乳糖蛋白陈培养基：蛋白陈 2.0g、牛肉膏0.6g、乳糖1.0g、NaC]1.0g、1.6%澳甲酚紫乙醇液0.2mL、蒸馏水200mL；（3）三倍浓缩乳糖蛋白陈培养基：蛋白陈4.0g、牛肉膏1.2g、乳糖6.0g-NaCl 2.0g、1.6%澳甲酚紫乙醇液0.4mL、蒸馏水400mL：将蛋白陈、牛肉膏、乳糖及NaCl加热溶解于蒸馏水中，调pH7.3左右，加1.6%澳甲酚紫乙醇液，充分混匀，分装于有德汉氏小管的试管（发酵管）中。
大肠杆菌的检测方法国标
大肠杆菌的检测方法国标
大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，可用于评价食品和水的卫生质量。
因此，大肠杆菌的检测方法在食品、水处理等领域被广泛采用。
本文将介绍国际上常见的大肠杆菌检测方法国标。
一、 ISO 9308-1：水质–检测和计数大肠杆菌–第1部分：膜过滤法
该标准适用于检测与供水、游泳池、浴缸等有关的水样中的大肠杆菌。
该标准使用膜过滤技术，将水样过滤通过0.45微米的滤膜上的杆菌层，然后将滤膜培养在培养基上，检测和计数大肠杆菌的数量。
该标准具有简便、快捷、准确等特点。
二、ISO 21150：食品和饲料–检测和计数大肠杆菌和厌氧菌–气相培养法
该标准适用于肉、肠衣、豆腐等食品样品，通过瓶内培养的方法检测大肠杆菌的数量。
该标准使用培养基使大肠杆菌产生二氧化碳，然后采用气相色谱技术检测二氧化碳的量，以计算大肠杆菌的数量。
该标准的优点是能在单一瓶中同时检测大肠杆菌和厌氧菌的数量。
三、ISO 9308-2：水质–检测和计数大肠杆菌和沙门氏菌–第2部分：多管发酵管技术
该标准适用于检测污染水样和废水样品中的大肠杆菌和沙门氏菌。
该标准使用多管发酵管技术，将水样转移到多个管子中，这些管子中的培养基不断地搅拌，检测管子中产生的气体，以检测大肠杆菌和沙门氏菌的数量。
该标准较为耗时，但能同时检测两种菌群。
以上三种标准是国际上常见的用于大肠杆菌检测的方法。
在具体应用中可以选择适宜的方法，选择合适的培养基，并按照标准操作规范执行测试，以得到准确可靠的检测结果。
5750.1-2023生活饮用水标准检验方法
5750.1-2023生活饮用水标准检验方法
根据5750.1-2023生活饮用水标准，以下是常见的饮用水检验
方法：
1. 总大肠菌群检验：采用MPN法检验，即多管摇底法或多管
浑浊法。
2. 大肠菌群（致病性大肠杆菌）检验：采用培养法或PCR法。
3. 残留氯检验：采用溴酸苯胺法、二氯苯胺法或DPD法。
4. pH值检验：采用玻璃电极法、电极法或试纸法。
5. 悬浮物和沉淀物检验：采用过滤法和称量法。
6. 溶解氧检验：采用溶解氧电极法或青蛙法。
7. 氨氮检验：采用Nessler法、萘酚法或蒸馏-滴定法。
8. 总硬度测定：采用EDTA滴定法。
9. 重金属检验：采用原子吸收光谱法、电感耦合等离子体发射光谱法或电感耦合等离子体质谱法。
10. 有机污染物检验：采用气相色谱法、高效液相色谱法或质
谱法。
注意：以上仅是常见的饮用水检验方法，具体的检验项目和方
法也会根据需要和要求而有所不同。
因此，在具体的实验室操作中应根据标准的要求和方法操作。
饮用水大肠杆菌标准
饮用水大肠杆菌标准
饮用水是人类日常生活中必不可少的一部分，而保证饮用水的安全卫生对人们
的健康至关重要。
大肠杆菌是一种常见的致病菌，如果存在于饮用水中，就会对人体健康造成严重危害。
因此，制定和执行严格的饮用水大肠杆菌标准显得尤为重要。
首先，饮用水中的大肠杆菌标准应该严格执行。
大肠杆菌是一种肠道细菌，其
存在于水中可能是因为水源受到了粪便污染。
因此，大肠杆菌的存在往往意味着水质的不合格。
根据世界卫生组织的标准，饮用水中大肠杆菌的标准应该是每100毫升水中不得检出大肠杆菌。
这个标准是为了确保饮用水的安全卫生，避免因饮用受污染的水而导致疾病的传播。
其次，监测和检测饮用水中的大肠杆菌也是至关重要的。
只有通过科学的监测
和检测手段，才能及时发现饮用水中是否存在大肠杆菌污染。
因此，建立健全的监测体系，加强对饮用水质量的监控，对于保障饮用水安全至关重要。
同时，对于发现大肠杆菌超标的水源，应该采取及时有效的措施，确保饮用水的安全。
此外，加强对饮用水源的保护也是预防大肠杆菌污染的重要举措。
保护饮用水源，避免其受到污染，是保障饮用水安全的基础。
政府部门应该加强对饮用水源的管理和保护，确保饮用水源的纯净和安全。
综上所述，饮用水大肠杆菌标准的制定和执行对于保障饮用水的安全卫生至关
重要。
严格执行标准、加强监测和检测、加强对饮用水源的保护，这些举措都是确保饮用水安全的重要环节。
只有通过不懈的努力，才能保障人们的饮用水安全，保障人们的健康。
饮用水中大肠杆菌标准
饮用水中大肠杆菌标准1. 检测方法大肠杆菌的检测采用国家标准方法（GB 5750.10-2006）。
检测大肠杆菌的仪器和试剂包括显微镜、培养基、加热设备、无菌采样器等。
检测步骤包括采样、培养、显微镜观察和计数等。
2. 卫生指标饮用水中的大肠杆菌数量是反映水质卫生状况的重要指标。
根据国家标准（GB 5749-2006），生活饮用水中的大肠杆菌数量应不超过100 CFU/mL。
如超过此标准，表明水质存在污染，需要采取相应措施。
3. 水质标准根据国家相关法规和标准，饮用水水质应满足以下要求：（1）水质清澈，无异臭、异味；（2）水中不含病原体，如大肠杆菌、病毒等；（3）水中营养物质含量符合要求；（4）水质稳定，不易受外界污染。
4. 水处理过程为了保证饮用水的水质，需要进行水处理。
水处理过程包括沉淀、过滤、消毒等步骤。
沉淀过程去除水中的悬浮物和沉淀物；过滤过程去除更小的颗粒物和微生物；消毒过程杀死病原体，保证出水水质符合标准。
5. 监测计划为了保证饮用水的水质，需要制定监测计划。
监测计划包括采样点、采样频率、采样方法、检测方法等内容。
采样点应覆盖整个供水区域，采样频率应根据季节和污染情况进行调整。
检测结果应及时向公众公开，同时存档备查。
6. 违规处罚对于违反饮用水大肠杆菌标准的单位或个人，应进行相应的违规处罚。
违规处罚的方式包括罚款、责令停产整改、吊销证照等。
同时，应加强对违规行为的监督和管理，确保处罚的有效执行。
7. 信息公开政府和相关部门应定期公开饮用水水质信息，包括大肠杆菌数量等指标，以便公众了解水质状况。
信息公开应通过官方网站、媒体等多渠道进行传播，确保公众能够及时获取相关信息。
信息公开不仅可以保障公众的知情权，还可以促进社会的监督和共同参与，提高饮用水水质。
8. 科学研究为了更好地保障饮用水水质，需要对大肠杆菌标准和监测技术进行持续的深入研究。
科学研究可以包括新型检测方法的研究、水质标准的研究、水处理工艺的研究等。
饮用水大肠杆菌检测方法
1、饮用水中大肠杆菌快速检测方法，其特征在于包括以下步骤：(1)水样中微生物的收集及其DNA的提取：采用灭菌后的滤膜或滤器过滤水样，在装有无菌水的EP管中，洗涤滤膜，离心，弃上清液，备用；(2)水样中微生物DNA的提取：A、向EP管中加入TE缓冲液，使之重悬；B、加入SDS和蛋白酶K，混匀，温育45min～1h；C、加入氯仿/异戊醇，混匀，离心，将上清液转入一个新EP管中；D、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇，混匀，离心，将上清液转入一个新EP管中；E、加入异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，离心；F、弃上清，沉淀物用乙醇洗涤，晾干；G、将沉淀重溶于TE缓冲液，摇匀；H、用紫外分光光度计测定提取的基因组DNA模板的0D 值，计算其DNA浓度，计算方法为：DNA浓度(μg/μL)＝OD值260nm×样品稀释倍数×50/1000 I、将基因组DNA模板做好标记，贮存，备用；(3)PCR扩增；反应引物：上游引物：5’-tgttcagtggcaagagtt-3’下游引物：5’-taatcgatatacccgctc-3’50μL反应体系：10×PCR缓冲液5μL Tag酶2U/μL1μL MgCl2(25mM)5μL dNTP(2.5MM)5μL ddH2029μL 上游引物10μM2μL 上游引物10μM2μL 模板DNA1.5μg/μL1μL (4)产物观察：A、凝胶的准备：先配置琼脂糖溶液，加热，使其充分溶解，再加入溴化乙锭溶液；B、配置TAE电泳液；C、倒胶：将配置好的琼脂糖溶液倒入胶板中，待其凝固后，放入电泳槽中；D、电泳：将扩增好的PCR产物与缓冲液按比例混合，加入到凝胶加样孔中，同时加入DNA分子量标准，接通电源，设定电压和电流，开始电泳。
E、观察；将扩增产物在紫外光下观察，拍摄图片。
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多管发酵法测大肠杆菌群
一、实验目的
1、学习测定水中大肠杆菌群数量的国标测试法（主要为多管发酵法）
2、了解大肠杆菌群的数量在水中的重要性
二、实验原理
我国《生活饮用水卫生标准》GB5749-85中关于生活饮用水的细菌标准具体规定如下：
1、细菌总数1ml水中不超过100个。
2、大肠杆菌数1L水中不超过3个。
3、若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠杆菌群数平均每升不得超过1000
个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水，大肠杆菌群数平均每升不得超过10000个。
多管发酵法是以最可能数（most probable number）简称MPN 来表示试验结果的。
实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。
如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。
不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度。
因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。
三、适用范围：
大肠菌群系指一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
通常用此法作为粪便污染指标来评价食品以及饮用水的卫生质量。
四、检验程序：
→
→→
→→
→
五、操作方法：
5.1 以无菌操作，将检样10ml被测液放于含有90ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭
菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。
5.2 用1ml 灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml 灭菌生理盐水
或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均
（均液的PH值应在6.5～７.5之间，必要时分别用1mol/L 匀，做成1：100的稀释液。
氢氧化钠（NaoH）或(1mol/L)盐酸（HCL）调节。
5.3 另取1ml 灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，
即换用1支1ml灭菌吸管。
5.4 根据食品卫生标准要求或对检污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接
种3管。
5.5初发酵（扩大）（推测试验）：将待检样品接种于月桂基硫盐胰蛋白胨发酵管内，接
种量在1ml，每一稀释度接种3管，置36±1℃文箱内培养24±2h，观察倒管内是
否有气泡产生，如未产气则继续培养至48h±2h.记录在24h和48h内产气的LST
肉汤管数。
未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。
2、平皿分离（分离）（证实试验）
（1）水中除大肠菌群外，尚有其它细菌可能引起糖类发酵，因此需要进一步证实。
（2）将初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美兰培养基，37 ºC培养24 h，根据菌落特征（带核心的、有金属光泽的深紫色菌落），挑取可能为大肠菌群的菌落制片，经革兰氏染色，进一步证实是否为大肠菌群。
5.6 复发酵试验(完成实验
用按种环从所有48h±2h内发酵产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于
BGLB肉汤管中，36±1℃培养48h±2h，观察产气情况。
产气者，计为大肠菌群阳
性管。
5.7 报告：根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表（见GB/T4789.3附表B），
报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。
五、保证措施
（1）要保证水样在采集、运输、保存过程中不受污染。
（2）实验过程中所用的玻璃仪器均要灭菌。
（3）带菌培养基应在灭菌后再弃去，其他均遵守实验室安全制度。
（4）检验开始前要充分摇匀混合水样，这样可以确保细菌在水样中均匀分布，以保证自来水大肠杆菌数量的准确性，这对检验结果的真实性是十分重要的。
六、实验流程图
一、为什么不可以直接测试饮用水中大肠杆菌的数目？
直接测试由于数量较少，无法准确测量，会造成测量结果误差偏大，培养之后，我们可以根据培养时间和菌群数量来计算初始的菌种数量，这样可以得到更准确的检测结果。
二、检测大肠杆菌有三种方法，为什么要选用多管发酵法？ 多管发酵法 滤膜法 酶底物法 时间 24-72h 24-48h 24-28h 验证试验 需要 需要 不需要 步骤 较繁 较简便
简便 特殊设备
显微镜
显微镜、过滤设备
压膜机
各3支
3x
1x
1x
1x
1支
10ml x 100 1ml x 100
1ml x 10-1
1ml x 10-2
三、扩大培养时为什么要选择LST（月桂基硫酸盐胰蛋白胨培养基）而不选择一直以来应用的乳糖蛋白胨培养基？
LST比后者要灵敏得多，比胆盐稳定性好，抑制G阳性菌生长，易观察结果，对损伤菌有修复作用，检出率提高，乳糖发酵培养基基本上不具备修复已损伤的细胞的作用,而月桂基硫酸盐胰蛋白胨则可以,因此,后者较前者检出的概率也会大很多.
四、革兰氏染色的原理？
革兰氏染色的机理主要是利用两类细菌的细胞壁成分和结构的不同。
革兰氏阴性菌的细胞壁中含有较多的类脂质，而肽聚糖的含量较少。
当用酒精或丙酮酸脱色时，类脂质被溶解，增加了细胞壁的通透性，使初染后的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细胞被脱色，经复染后，又染上复染液的颜色。
而革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖的含量多而且交联度大，类脂质含量少，经乙醇或丙酮洗脱后，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，因此细胞仍保留初染时的颜色。
五、检测大肠杆菌时为什么会出现假阳性？
因为能产酸产气的不仅仅只有大肠菌群，例如沙门菌的部分也产酸产气。
六、培养基的存放问题？
在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于30℃的暗处，存放时应避免阳光直接照射，并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。
当培养液颜色变化，或体积变化明显时废弃不用。