凝胶色谱法的原理和方法血红蛋白的提取和分离
专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离 - 知识梳理
的
，从而实现样品中各种分子的分离。
3、两种常用的电泳方法是
和
，
在测定蛋白质分子量时通常使用
。
电泳速率完全取决于
。
二实 验 操 作 蛋白质的提取和分离一般分为四步
：
↓
:
↓
：
↓
：
一基 础 知 识
（一）样品处理
1.红细胞的洗涤：洗涤红细胞的目的是
，采集的血样要及时
分离红细胞，分离时采用
离心（500r/min、离心2min），然
除去
；离心速度过高和时间过长会使
等一同沉淀，
达不到分离的效果。
2. 色谱柱填料的处理 商品凝胶使干燥的颗粒，使用前需直接放在洗脱液中膨胀。
为了加速膨胀，可以将加入洗脱液的湿凝胶用
加热，逐渐升温至接近
沸腾，通常只需1—2h。这种方法不但
，而且可以除去凝胶中可能带有
的
，排除胶粒内的
。
3. 凝胶色谱柱的装填 在色谱柱中装填凝胶的时候要尽量
【旁栏思考题】
【P70】你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？ 凝胶实际上是一些微小的多孔球体，小球体内部有许多贯穿的通道。相对分子质量较 大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间，通过的路程较短，移 动速度较快；相对分子质量较小的蛋白质分子比较容易进入凝胶内的通道，通过的路 程较长，移动速度较慢。因此，样品中相对分子质量较大的蛋白质先流出，相对分子 质量中等的分子后流出，相对分子质量最小的分子最后流出，从而使各种相对分子质 量不同的分子得以分离。如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内 ，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过， ，影响分离的效果。
血红蛋白的提取和分离
⾎红蛋⽩的提取和分离⾎红蛋⽩的提取与分离蛋⽩质的分离和提取的原理是什么？根据蛋⽩质各种特性的差异，如分⼦的形状和⼤⼩、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附的性质和对其他分⼦的亲和⼒等等，可以⽤来分离不同蛋⽩质。
【基础知识】㈠凝胶⾊谱法（分配⾊谱法）：1、概念：根据被分离蛋⽩质的，利⽤具有⽹状结构的凝胶的分⼦筛选作⽤，来分离蛋⽩质的有效⽅法。
2、原理：当不同的蛋⽩质通过凝胶时，相对的蛋⽩质容易进⼊凝胶内部的通道，路程，移动速度，⽽的蛋⽩质⽆法进⼊凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速，相对分⼦质量不同的蛋⽩质因此得以分离。
3、具体过程：A. 的蛋⽩质由于作⽤进⼊凝胶颗粒内部⽽被滞留；的蛋⽩质被排阻在凝胶颗粒外⾯，在了⾥之间迅速通过。
B.（1）混合物上柱；（2）洗脱开始，的蛋⽩质扩散进⼊凝胶颗粒内；的蛋⽩质被排阻于凝胶颗粒之外；（3）的蛋⽩质被滞留；的蛋⽩质被向下移动。
（4）不同的蛋⽩质分⼦完全分开；（5）的蛋⽩质⾏程较短，已从中洗脱出来，的蛋⽩质还在⾏进中。
㈡缓冲溶液：1、概念：在⼀定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH 发⽣明显变化的作⽤叫做缓冲作⽤，具有缓冲作⽤的溶液叫做缓冲溶液。
2、作⽤：能够抵制的对溶液的的影响，维持PH 基本不变。
3、缓冲溶液的配制通常由种缓冲剂溶解于⽔中配制⽽成。
调节缓冲剂的就可以制得使⽤的缓冲液㈢电泳：1、概念：指发⽣迁移的过程。
颗（2）（3）（4）（5） A2、原理：许多重要的⽣物⼤分⼦，如等都具有在下，这些基团会带上。
在电场的作⽤下，这些带电分⼦会向着与其移动。
电泳利⽤了待分离样品中各种分⼦以及分⼦本⾝、的不同使带电分⼦产⽣不同的，从⽽实现样品中各种分⼦的分离。
3、分类：电泳电泳。
测定（蛋⽩质相对分⼦质量）通常⽤⼗⼆烷基硫酸钠（SDS ）—聚丙稀酰胺凝胶电泳蛋⽩质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带静电荷的多少以及分⼦的⼤⼩等因素。
为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加⼊。
血红蛋白的提取与分离(上课用)
蒸馏水
(2)血红蛋白的释放（使用蒸馏水和甲苯）
磁力搅拌器
搅拌器转子
搅拌器正在工作
(3)、分离血红蛋白溶液：
将搅拌好混合液转移到离心管内， 以2000r/min的速度离心10 min ，试 管中的溶液分为4层:
3、高温灭菌和酒精灭菌分别对蛋白
质有何种影响，作用结果是什么被破 坏？ 变性、变性、空间结构
羊的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？
4.提问：用鸡的红细胞提取DNA，用猪、牛、
鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA， 便于进行DNA的提取；哺乳动物的成熟 的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋 白含量丰富，便于提取血红蛋白。
(4)透析(粗分离)：
利用透析袋透析
取( 1 )ml的血红蛋白溶液装入 透析袋 （ ）中，将透析袋放入 盛有300ml的物质的量浓度为 20mmol/L（磷酸缓冲液 ）中， pH为（ ），透析12小 7.0 时.
目的是（ 除去样品中分子量较小的杂质 ） 或用于更换样品中的（ 缓冲液 ）。 说明：透析袋是一种半透膜，能使小 分子自由进出，而大分 子不能通过。
四川省南部中学
马彦平
2003年4月14日宣布人类基因组序列图完成 这标志着进入了后基因组和蛋白质组时代 人类基因组：指DNA分子所携带的全部遗传 信息
蛋白质组：生物个体表达的蛋白质分子的总和。 主要是对蛋白质功能的研究
本课题学习目标
1、主要概念：①凝胶色谱法 ②电泳法 ③缓冲溶液
④它们在血红蛋白的提取中分别起到什么作用。
底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的 凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液 体残留，蛋白质分离不彻底。 c.剪尼龙网小圆片覆盖在( 橡皮塞的凹面）上，用 （ 100目 ）的尼龙纱将橡皮塞（ 上部 ）包好， 插到玻璃管一端。 出口部位），连接 d、色谱柱下端用移液头部做（ 一细的（ 尼龙管 ）， 并用螺旋夹控制尼龙管的 （ 打开与关闭 ），另一端 放入收集（ 色谱流出液 ） 的收集器内
人教版高中生物选修1 5.3血红蛋白的提取和分离
（四）血红蛋白
水分
血浆蛋白
血
血浆 固体物质
无机盐 磷脂
液
白细胞 葡萄糖等
血细胞
血小板
两条a－肽链
红细胞 （最多）
血红 蛋白 两条β一肽链
（ 90％ ） 共四条肽链
二、实验操作 （一）样品处理及粗分离
1.洗涤红细胞
思考：洗涤的目的是什么？ 洗涤过程：
3g柠檬酸钠
吸出血浆 5倍体积生理盐水
血液 100mL
凝胶色谱法 凝胶电泳法
(一)凝胶色谱法
（1）原理 大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快； 小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢。 （2）材料
多孔性的多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。 （3）分离过程
混合物 洗 大分子流动快 收 集 收 集 上 柱 脱 小分子流动慢 大分子 小分子
洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质 分子的差速流动。
凝胶色谱法分离蛋白质的原理
（二）缓冲溶液 缓冲溶液－－洗脱剂 组成：
由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。 如H2CO3/NaHCO3，醋酸/醋酸钠，NaH2PO4/Na2HPO4等
配制：
调节缓冲剂的比例，可配制不同pH的缓冲液。
作用：
抵制外界酸碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。
在血红蛋白整个实验室中用的 缓冲液是磷酸缓冲液，目的是利用 缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证 血红蛋白的正常结构和功能，便于 观察（红色）和材料的科学研究 （活性）。
低速离心 2 min
血浆 红细胞 红细胞
搅拌10min
重复洗涤3次，直至上清液没有黄色
2.释放血红蛋白
阅读思考： 1. 释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入
高中生物选修一血红蛋白的提取和分离(2)
第5．3 血红蛋白的提取和分离【学习目标】凝胶色谱法的原理和方法样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填【基础知识预习】1．凝胶色谱法凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效方法。
凝胶实际上是一些由构成的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量较小的蛋白质进入凝胶内部的通道，路程，移动速度；而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度。
相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。
2．缓冲溶液缓冲溶液的作用是。
缓冲溶液通常由溶解于水中配制而成的。
生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，例如：血浆的pH是，要在实验条件下准确模拟生物体内的过程，必须保持体外的pH与体内的基本一致。
3．电泳电泳是指。
许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上。
在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。
电泳利用了待分离样品中各分子以及分子本身的、的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。
两种常用的电泳方法是和，在测定蛋白质分子量时通常使用。
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于以及等因素。
4．蛋白质的提取和分离蛋白质的提取和分离一般分为四步：、、和。
【教学过程】【课题背景】：新华网首尔１２月２９日电（记者干玉兰）韩国浦项工业大学科学家２９日宣布，他们已查明可抑制艾滋病病毒感染的“ＴＲＩＭ５”蛋白质核心部分的结构。
浦项工业大学生物科学系教授吴秉夏等人，当天公开了“ＴＲＩＭ５”蛋白质内核心部分“Ｂ３０．２／ＳＰＲＹ”的三维分子结构，并称已弄清楚这一结构的正确位置及它与其他结构之间的相互作用。
研究成果发表在最新一期《分子细胞》杂志上。
2００４年英国《自然》杂志曾刊登论文说，“ＴＲＩＭ５”蛋白质可有效抑制艾滋病病毒的感染。
此后，世界各地的很多科学家开始研究“ＴＲＩＭ５”蛋白质的结构，但到目前为止尚未有人宣称取得突破性进展。
血红蛋白的提取和分离
血红蛋白的提取和分离1．蛋白质的分离方法(1)原理：蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等，可以用来分离不同种类的蛋白质。
(2)分离方法：①凝胶色谱法也称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。
②电泳法：电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。
常用的电泳方法有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
2．实例——血红蛋白的提取和分离(1)样品处理与粗分离(2)纯化与纯度鉴定血红蛋白提取与分离中历次“除杂质”或“分离”的原理(1)凝胶色谱法：相对分子质量较大的分子先流出，分子质量较小的后流出，依此可对血红蛋白进行分离和纯化。
(2)透析法：利用透析袋只允许小分子透出的原理，去除小分子杂质，透析可实现对血红蛋白的“粗分离”。
(3)电泳法：利用分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状不同，使带电分子产生不同的迁移速率，从而实现样品中各种分子的分离。
即不清楚血红蛋白释放时蒸馏水和甲苯的作用红细胞中依次加入蒸馏水和甲苯的作用：加入蒸馏水的目的是使红细胞吸水涨破；甲苯溶解细胞膜，从而使血红蛋白释放出来。
【练一练】血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2和部分CO2的运输。
请根据血红蛋白的提取和分离过程回答以下问题：(1)将上述实验流程补充完整：A为____________，B为_____________。
(2)洗涤红细胞的目的是去除____________；红细胞洗涤干净的标志是__________________。
释放血红蛋白的过程中起作用的试剂是__________________。
(3)在B过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是_____________________________________________。
在蛋白质分离过程中，如果红色区带___________________________，说明色谱柱制作成功。
【凝胶色谱法的原理和方法】血红蛋白的提取和分离
【课题】：课题6 血红蛋白的提取和分离【备课人】：【备课时间】：【上课时间】：【课型】：复习【课时数】：1课时【复习目标】本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。
【复习重点与难点】复习重点：凝胶色谱法的原理和方法。
复习难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。
【知识回顾】：一、实验原理蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。
1．凝胶色谱法（分配色谱法）：（1）原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。
（2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。
（3）分离过程：混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子＊洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。
（4）作用：分离蛋白质，测定生物大分子分子量，蛋白质的脱盐等。
2．缓冲溶液（1）原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3，HC－NaC，NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。
（2）缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。
3．凝胶电泳法：（1）原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。
（2）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。
（3）分离过程：在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。
二、实验步骤1．样品处理①红细胞的洗涤洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，采集的血样要及时采用低速短时间离心分离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆，将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯，再加入五倍体积的生理盐水，缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。
高一生物血红蛋白的提取和分离介绍
高一生物血红蛋白的提取和分离介绍高一主要学习的内容是细胞，学生需要知道和掌握这些的知识，下面是店铺给大家带来的有关于血红蛋白的提取和分离知识点的介绍，希望能够帮助到大家。
高一生物血红蛋白的提取和分离知识点该知识点包括凝胶色谱法、缓冲溶液、电泳、实验操作及操作提示等几个要点知识。
1. 凝胶色谱法：也称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。
凝胶实际上是一些由多糖类化合物构成的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量较小的蛋白质比较容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢;而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。
相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。
2. 缓冲溶液：缓冲溶液的作用是能够抵制外界的酸和碱对溶液pH 的影响，维持pH基本不变。
缓冲溶液通常由1-2种缓冲溶剂溶解于水中配制而成的。
生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，例如：血浆的pH是7.35～7.45，要在实验条件下准确模拟生物体内的过程，必须保持体外的pH与体内的基本一致。
3.电泳：电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。
许多重要的生物大分子，如蛋白质、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。
在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。
电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。
两种常用的电泳方法是琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳，在测定蛋白质分子量时通常使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速率取决于蛋白质所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。
4. 实验操作及操作提示：蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定。
血红蛋白的提取和分离
本课题学习要点和难点
体验从复杂体系中提取生物大分子旳基本过 程和措施，并了解色谱法、电泳法等分离生 物大分子旳基本原理。
3、课题要点：凝胶色谱法旳原理和措施 4、课题难点：
①样品旳预处理 ②色谱柱填料旳处理和色谱柱旳装填。
2023年4月14日宣告人类基因组序列图完毕，这标志着进入了后基因组和蛋 白质组时代
2、你装填旳凝胶色谱柱是否有气泡产生？你旳色谱 柱装填得成功吗？你是怎样判断旳？
因为凝胶是一种半透明旳介质，所以能够在凝胶柱旁放一支与 凝胶柱垂直旳日光灯，检验凝胶是否装填得均匀。另外，还能够 加入大分子旳有色物质，例如蓝色葡聚糖—2023或红色葡聚糖， 观察色带移动旳情况。假如色带均匀、狭窄、平整，阐明凝胶色 谱柱旳性能良好。假如色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体 以消除气泡，消除不了时要重新装柱。
血红蛋白的提取和分 离
本课题学习目的
体验从复杂体系中提取生物大分子旳基本过 程和措施，并了解色谱法、电泳法等分离生 物大分子旳基本原理。
1、主要概念：①凝胶色谱法 ②电泳法 ③缓冲溶液 ④ 它们在血红蛋白旳提取中分别起到什么作用。
2. 主要原理：
①凝胶色谱法分离蛋白质旳原理
②电泳法分离样品旳原理
③缓冲溶液旳构成和作用机理
④洗脱：小心加入pH=7.0 旳20mmol/l旳磷酸缓冲液到合 适高度，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。
⑤搜集：待红色旳蛋白质接近色谱柱底端时，用试管搜集流 出液，每5ml搜集一试管，连续搜集。（在分离过程中，假如 红色区带均匀一致旳移动，阐明色谱柱制作成功）
⑥注意：正确旳加样操作：1、不要触及并破坏凝胶面。2、 贴壁加样。3、使吸管管口沿管壁围绕移动。
装配好旳凝胶柱
血红蛋白的提取和分离
血红蛋白的提取和分离学生班级学习目标：1.理解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。
2.了解缓冲液的组成及其作用。
重点：凝胶色谱法的原理和方法。
难点：电泳法分离大分子的原理。
教学方法：启发式教学教学工具：多媒体课件教学课时：1课时教学过程基础知识蛋白质分离和提取的原理：根据蛋白质各种特性的差异，如分子的、所带电荷的___________、、吸附性质和对其他分子的亲和力等等来分离不同种类的蛋白质。
（一）凝胶色谱法1.概念：也称，是根据被分离的蛋白质，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离蛋白质的有效方法。
2.大多数凝胶是由化合物（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体。
3.原理：4.具体过程：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程，移动速度，而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度，相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
（二）缓冲溶液1.概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液pH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。
2.作用：能够抵制对溶液的pH的影响，维持pH 。
3.缓冲溶液的配制：通常由（）种缓冲剂溶解于水中配制而成。
调节缓冲剂的（）就可以制得（）使用的缓冲液。
4.在整个实验过程中使用的缓冲液是什么？它的目的是什么？思考：说出人体血液中缓冲液？（三）电泳1.概念：带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。
2.原理：电泳利用了待分离样品中各种分子带电的差异以及分子本身的，形状的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。
3.分类：。
（1）琼脂糖凝胶电泳：在电场的作用下，（2）聚丙稀酰胺凝胶电泳：是由和交联剂N,N，亚甲基双丙烯酰胺在的作用下聚合交联成的具有的凝胶。
（3）蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带以及__________等。
（4）为了对迁移率的影响可以在凝胶中加入。
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凝胶色谱法的原理和方法血红蛋白的提取和分离
凝胶色谱法是一种常用的分离和纯化生物大分子的方法，例如蛋白质、多肽和核酸等。
色谱是将混合物中的目标分子按照其不同的性质在固定相
与流动相之间的相互作用上进行分离的方法。
凝胶色谱法又叫柱色谱法，
它是利用固定相为凝胶的柱状体进行分离的。
1.分子筛层析：
分子筛层析是一种以分子的尺寸为基础进行分离的方法。
这种方法利
用孔径具有限制性能的固定相，将溶液中的分子按照其分子量大小进行分离。
分子筛层析对于相对分子量较小的分子的分离效果较高。
2.凝胶亲和层析：
凝胶亲和层析是以分子之间的亲和性或特异性相互作用为基础进行分
离的方法。
固定相表面上特异性结合一定类型的分子，从而实现目标分子
的选择性吸附和分离。
凝胶亲和层析可以根据不同的结合模式进一步分类，例如亲和吸附、离子交换和金属络合等。
血红蛋白的提取和分离：
血红蛋白是存在于红细胞中的一种蛋白质，其具有生物学功能，例如
运输氧气和二氧化碳。
提取和分离血红蛋白可以用于研究血红蛋白的结构、功能和生理活性等。
血红蛋白的提取过程：
1.血样准备：采集一定量的血液样本，一般采用静脉血样。
将血液收
集到抗凝剂中，如EDTA管或肝素管，以防止凝血。
2.血细胞分离：离心血液样本，使红细胞和血浆分离。
血浆通常是上
清液，可以留取备用。
3.溶解红细胞：将红细胞沉淀用一种溶解剂加以溶解，如生理盐水或
磷酸盐缓冲液。
4.血红蛋白的提取：将溶解后的红细胞溶液进行离心，以去除不溶性
物质。
离心后的上清液中含有血红蛋白。
血红蛋白的分离过程：
1.凝胶色谱柱的准备：准备凝胶色谱柱，如分子筛柱或亲和层析柱，
根据需要选择合适的柱子。
预先处理柱子，使其达到平衡状态。
2.样品加载：将提取得到的血红蛋白样品加载到凝胶色谱柱上。
样品
与固定相之间进行相互作用，目标分子被吸附到柱子上。
3.洗脱：通过改变流动相的性质或条件，洗脱血红蛋白。
这可以通过
调整溶剂的浓度、温度或pH值等方式实现。
4.分馏：通过洗脱的过程，将血红蛋白从其他杂质物质中分离出来。
不同的血红蛋白分子可能具有不同的洗脱速率，从而得到纯化的血红蛋白。
总结：
凝胶色谱法是一种分离和纯化生物大分子的常用方法。
血红蛋白的提
取和分离可以通过凝胶色谱法来实现。
血红蛋白提取过程包括血样准备、
血细胞分离、溶解红细胞和血红蛋白提取。
而血红蛋白的分离过程则通过
凝胶色谱柱的准备、样品加载、洗脱和分馏等步骤来实现。
这种方法可以
应用于研究血红蛋白的结构和功能等方面。