血液涂片检查标准操作程序

SOP_09-1 血液涂片检查标准操作程序

一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。

二、适用范围：血液寄生虫检验。

三、操作人员：检验科授权工作人员。

四、操作步骤：

1 原理：血液制成细胞分布均匀的膜涂片或厚涂片经溶血后，运用复合染料染色，观察细胞

形态、结构、内容物等，以鉴别、判断血液中的异常细胞和寄生虫。

2 试剂：由台湾贝索公司提供。

2.1 瑞氏-姬姆萨复合染色液：

2.2 碱性亚甲兰染液：

2.3 煌焦油蓝生理盐水溶液：

3 方法：

3.1 红细胞检查：正常红细胞呈圆形，中央略凹陷，大小较为一致，直径为 6～9μm。

3.1.1 大小异常红细胞：各种贫血时，红细胞可出现大小不一，凡直径>10μm者称大红细；>15

μm者称巨红细胞，常见于巨幼细胞性贫血、肝脏疾病等；直径<6μm者称为小红细胞，多见于缺铁性贫血等疾病。

3.1.2 形态异常红细胞：

3.1.2.1 球形红细胞：红细胞直径通常<6μm，厚度增加，通常>2.6μm，因而红细胞呈小圆

球形，细胞中心区血红蛋白含量较正常红细胞多，常见于：遗传性球形细胞增多症；自身免疫性溶血性贫血；异常血红蛋白病(HbS及HbC病等)。

3.1.2.2 椭圆形红细胞：红细胞呈椭圆形，横径缩短，长径增大，有时可呈畸形。正常人血

液中也可见到，但最多不超过15%。增多见于：遗传性椭圆形细胞增多症，一般要高于25%～50%才有诊断价值；大细胞性贫血，可达25%；其他各类贫血都可有不同程度的增多。

3.1.2.3 靶形红细胞：比正常红细胞扁薄，中心有少许血红蛋白，部分可与周围的血红蛋白

连接，边缘部染色深，故呈靶状。主要见于：地中海贫血；严重缺铁性贫血；一些血红蛋白病(血红蛋白C、D、E、S病)；肝病、脾切除后及阻塞性黄疸等。

3.1.2.4 镰形红细胞：细胞狭长似镰刀，也可呈麦粒状或冬青叶样，主要见于遗传性镰形红

细胞增多症。

3.1.2.5 口形红细胞：红细胞淡染区呈裂口状狭孔。正常<4%。增高见于：口形细胞增多症；

急性乙醇中毒。

3.1.2.6 棘形红细胞：是一种带刺状的红细胞，刺呈针刺状或尖刺状，见于：棘细胞增多症(遗

传性血浆β-脂蛋白缺乏症)，可高达70%～80%；严重肝病或制片不当。

3.1.2.7 皱缩红细胞：红细胞表面有圆形棘刺样突起，可见于干燥太慢的血片，也可见于急

性铅中毒、尿毒症等病人的血片上。

3.1.2.8 锯齿细胞：也称刺毛细胞，形态和皱缩细胞相似。主要见于尿毒症、微血管病性溶

血性贫血、丙酮酸激酶缺乏症、阵发性睡眠性血红蛋白尿症等。

3.1.2.9 裂片细胞：指红细胞碎片，包括盔形红细胞等，多见于DIC、微血管病性溶血性贫血

和心原性溶血性贫血等红细胞破碎综合征。其他也见于化学中毒、肾功能不全、血栓性血小板减少性紫癜等。

3.1.3 染色异常：

3.1.3.1 着色过浅：红细胞中心淡染区扩大，多见于缺铁性、地中海贫血及其他血红蛋白病。

3.1.3.2 着色过深：中心淡染区不见，着色较深，见于先天性溶血性贫血及大细胞性贫血。

3.1.3.36 嗜多色性红细胞：红细胞染成灰蓝色、灰红色、淡灰色，较正常红细胞稍大。这是

一种尚未完全成熟的红细胞，多染性物质是核糖体，随着细胞的成熟而逐渐消失，主要见于增生性贫血。

3.1.4 结构异常：

3.1.

4.1 嗜碱性点彩红细胞：

(1)．按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定3min。

(2)．用碱性亚甲基蓝染液染色1～2min，水洗待干。

(3)．用油镜计数1000个红细胞中嗜碱性点彩红细胞数，以百分率报告。

附注：

①用碱性亚甲基蓝液染色后，红细胞呈浅蓝绿色，嗜碱性点彩呈深蓝色。也可用瑞氏染

色，嗜碱性点彩呈蓝黑色。由于点彩红细胞分布不匀，必要时扩大计数红细胞数。

②参考值<0.01%(<1OO／106RBC)。增高：铅、汞、银、铋等金属中毒及硝基苯、苯胺等

中毒时显著增高；溶血性贫血、巨幼细胞性贫血、恶性贫血、恶性肿瘤等可增高。3.1.4.2 卡波环：成熟红细胞胞浆内有染成紫红色的细线状环，呈圆形或8字形，可能是残留

核膜所致，见于恶性贫血、溶血性贫血、铅中毒等。

3.1.

4.3 豪-周小体和核碎块：成熟红细胞中含有紫红色圆形小体，大小不等，数量不一，可

能是残留的核染色质微粒。见于增生性贫血、脾切除后、巨幼细胞性贫血、恶性贫血等。

3.1.

4.4 有核红细胞：溶血性贫血、急慢性白血病、红白血病、髓外造血及严重缺氧等常见。

3.1.5 网织红细胞百分数：

(1)．于小试管中滴加1滴煌焦油蓝生理盐水溶液或煌焦油蓝ACD溶液。

(2)．加入末梢血2滴于上述试管中，混匀。

(3)．静置15～20min后，取用1滴制成薄片。

(4)．油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数，以百分率或绝对值报告。

附注：

①活体染色时间不能过短，室温低时，放37℃温箱。

②最好制片2张，每张计数500个红细胞，避免分布不均引起的误差。涂片要薄而均匀，

不使红细胞重叠。

③为计数方便，可于目镜中放一个中间有孔之硬纸片，缩小视野，便于计数。

④因操作误差大，不宜用玻片直接染色法。

⑤参考值成人：O.005～O．015(O.5%～1.5%)；新生儿：O.03～O.06(3%～6%)

增加：表示骨髓造血功能旺盛，各型贫血均可增多，溶血性贫血增加尤为显著，恶性贫血或缺铁性贫血应用维生素B12或供铁质后显著增多，表示有疗效。

减少：再生障碍性贫血。

⑥网织红细胞绝对值计算：

网织红细胞绝对值=（网织红细胞% 红细胞/μl）/100

⑦仅用网织红细胞相对值或绝对值表达还不够确切。若贫血时骨髓生成红细胞增多，

大量尚未成熟红细胞释放入血，而这些网织红细胞在外周成熟时间需2天，而正常

生理情况下骨髓释放到外周的网织红细胞仅一天后其胞质中RNA即消失。为此Finch

提出在贫血时用网织红细胞生成指数(reticulocyte production index，RPI)报告，

它代表网织红细胞的生成相当于正常人的多少倍。

3.2 白细胞检查：

3.2.1 白细胞分类计数：

(1)．采血后推制厚薄适宜的血膜片，血膜应呈舌状，头、体、尾清晰可分。

(2)．推好的血膜在空气中晃动，以促使快干。天气寒冷或潮湿时，应置于37℃温箱中保温

促干，以免细胞变形缩小。

(3)．染色：瑞氏-姬姆萨染色法或快速染色法。

(4)．选择涂片的体尾交界处染色良好的区域，在油镜下计数100个白细胞，按其形态特征

进行分类计数，求出各类细胞所占比值(百分率)。

附注：

①要避免重复计数，玻片应由血膜边缘向中央依次上下呈曲线移动。

②白细胞总数超过20×109／L，应计数200个细胞。明显减少的血片，可检查多张血片。

③快速染色法无法确定的细胞，应该用瑞氏-姬姆萨染色复查，以免漏诊血液病。

④白细胞形态变化较大，应经常由高年资检验人员进行核实，以减少误差。

3.2.2 异常白细胞形态：外周血象中，除各类幼稚细胞外，常能见到细胞形态上的异常变化。

3.2.2.1 中性粒细胞：

(1)．核象变化：反映中性粒细胞的成熟程度。正常血象中有少量杆状核细胞出现，它与分