疟原虫的镜检技术
镜疟原虫技术(1)
6
血片制作（取血方法）
• 采血部位以耳垂较为合适，也可在手指末端采血，婴 儿可从拇趾或足跟取血。先用75%酒精棉球消毒取血部 位，待酒精干后，用左手拇指和食指轻轻捻转耳垂边 缘或夹住被检者手指尖稍下方，右手持消毒针，迅速 刺入取血部位1-2mm，不宜过深或过浅。然后用左手大 拇指、食指和右手中指协同挤出血滴。
19
血片制作与染色的注意事项
• • • • 载玻片使用前一定要清洁，否则会影响血片制作和镜检结果。 厚血膜干燥时不要加热，否则会使疟原虫变形，影响镜检结果。 配制母液时过滤可除去杂质颗粒，有助于提高镜检质量。 固定薄血膜时，不要将甲醇接触到厚血膜，否则染色时厚血膜 将不能溶血。 • 冲洗染液时，水流要轻缓，不要冲掉厚血膜。
镜检疟原虫技术
2012.3
1
主要内容
• 血片制作与染色 • 疟原虫形态与鉴别 • 疟原虫镜检
2
血片制作与染色
• 血片制作 • 血片染色
3
血片制作（所需用具）
• • • • • 载玻片 75%的酒精棉球 采血针 记号笔 玻片盒
4
血片制作（血膜的制作）
• 用于检查疟原虫的血涂片有两种： 一种是将血液涂成薄膜状，称薄血膜； 一种是将血液涂成圆盘形，称厚血膜。 • 薄血膜上的血细胞要求平辅在玻片上面。
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血片制作和染色（质量判定标准）
好：厚薄血膜均好，或薄血膜好，厚血 膜中。 中：薄血膜中，厚血膜好或中。 差：薄血膜差，或厚薄血膜均差。
21
血片制作和染色(质量规范)
好 厚 血 膜 血 片 制 作 质 量 血量 位置 直径 外观 4.0-5.0mm3 玻片右1/3 0.8-1.0cm 圆形，厚膜均匀，边缘 整齐 中 略多或略少 稍偏右 0.7-0.8或1.0-1.2cm 圆形，稍不均，不整齐 差 过多或过少 偏右过多 <0.7或>1.2cm 厚薄不均匀影响着 色
疟原虫镜检技术操作规范
疟原虫镜检技术操作规范疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的重要手段和方法，具有严格的操作程序和技术要求，为了统一方法、规范程序、提高血检质量，特制定本操作规范。
一、血片制作（一）所需器材载玻片玻片3张（1张作载玻片，1张作推片，1张作采血后滴于玻片备血用）采血针采用一次性采血针。
玻片盒存放50或100片玻片的木质或塑料盒。
皮肤消毒液、棉签或酒精棉球75%的酒精、安尔碘、碘伏等皮肤表面消毒剂。
记号笔用于玻片上书写血检病人基本信息。
（二）操作步骤1、载玻片基本信息登记取1张载玻片，首先用目测法将载玻片从右（磨砂处为右）到左等分成6格，接着用记号笔在第1、2格即（磨砂处）写下血检病人基本信息：编号、姓名、制片日期结果（镜检结束后补写）。
载玻片上信息应与血检登记表中的项目对应。
如图12、采血采血部位为手指末端或耳垂，婴儿可从拇趾或足跟取血。
用消毒剂消毒取血部位皮肤后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1～2mm 深，约挤出1-2滴血，滴于玻片上（以备涂制厚薄血膜用）。
3、涂制血膜用推片的左下角刮取玻片上的血液4～5μl，涂于载玻片的第三格（靠近磨砂侧），由里向外一个方向旋转2～4圈，涂成直径为0.8～1.2cm的圆形厚血膜；再用该角沾取血液1～1.5μl血置于载玻片的中心点即（第四格前缘中点）；接着用干棉球或卫生纸擦净推片角上的血渍；最后用推片的下缘置载玻片的中心点（1～1.5μl血液处），当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25°～35°角，从右向左迅速推成舌状薄血膜，即（薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部）。
如（图1）、（图2）疟原虫镜检涂制血膜方法示意图2薄血膜厚度应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳，（直观透过玻片能清晰看到报纸上的字）；厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个白细胞为宜。
二、固定（一）所需器材1、甲醇2、器具玻璃棒、吸管（二）操作步骤薄血膜固定薄血膜晾干后，用玻璃棒沾取或用吸管吸取少量甲醇平铺于薄血膜上，起固定薄血膜作用，（注意不能固定厚血膜）。
疟原虫镜检操作流程
疟原虫镜检操作流程疟原虫镜检操作可有趣啦，就像一场小小的探索之旅呢。
一、准备工作。
咱们先得把要用的东西都找齐喽。
那需要啥呢？显微镜肯定是必不可少的啦，就像战士上战场不能没有枪一样。
然后就是载玻片和盖玻片，这俩就像是舞台和舞台上的小屋顶，疟原虫就在这上面表演呢。
还有采血针、酒精棉球这些小物件，采血针用来取血，酒精棉球用来消毒，它们可都是小助手。
另外，染色剂也得准备好，这染色剂就像是给疟原虫化妆的东西，能让咱们把疟原虫看得更清楚。
二、采血。
采血这一步可得小心点儿。
找个舒服的地方让被采血的人坐好或者躺好，别让人家紧张，就像跟朋友聊天似的，说“放松哈，就一下下，不疼的”。
用酒精棉球在手指尖或者耳垂轻轻擦一擦，消消毒。
然后拿起采血针，就像拿一支小小的魔法棒，轻轻一扎，血就出来啦。
把这一滴血小心地滴在载玻片的一端，可别滴太多，也别滴到外面去了，一滴小小的、圆圆的血滴就像一颗红色的小珍珠在载玻片上呢。
三、涂片。
血滴在载玻片上了，咱们就要开始涂片啦。
拿另一个载玻片的一端，轻轻地斜着靠在有血滴的载玻片上，就像小滑梯一样。
然后慢慢地把这个载玻片往前推，让血滴在两个载玻片之间均匀地铺成薄薄的一层。
这一步可有点像画画的时候把颜料涂开，要涂得薄厚均匀才好呢。
如果涂得太厚了，疟原虫就会像躲猫猫一样藏在里面，咱们就不容易看到它啦；要是涂得太薄了，可能疟原虫都没几个在上面，也不好找。
四、固定和染色。
涂片弄好之后呢，要固定一下。
这就像是给疟原虫拍个照片定住它的样子。
可以用小火苗稍微烤一烤载玻片，不过得小心别烤糊了，要不然疟原虫就被烤成小焦炭啦。
固定好之后就到染色的时候了。
把染色剂小心地滴在涂片上，让染色剂把疟原虫包裹起来，就像给疟原虫穿上一件彩色的衣服。
等染色剂在涂片上待一会儿，就像让疟原虫在染缸里泡个澡，把自己染得美美的。
五、镜检。
终于到了最激动人心的镜检啦。
把载玻片放在显微镜的载物台上，就像把宝贝放在展示台上一样。
先从低倍镜开始看，慢慢地转动粗准焦螺旋，让镜头一点点靠近载玻片，就像在寻找宝藏一样。
疟原虫镜检技术技术和要求 (王波)
（五）血片的染色
吉氏染液 保存时间长， 保存时间长，染色时间长 瑞氏染液 保存时间短， 保存时间短，染色时间短 瑞吉氏
Hale Waihona Puke 六、镜检工作的一些要求1、疟原虫镜检工作中，凡是发热病人。疟疾、疑似疟疾、 疟原虫镜检工作中，凡是发热病人。疟疾、疑似疟疾、 及不明原因的发热病人均需进行疟原虫镜检。 及不明原因的发热病人均需进行疟原虫镜检。 2、做好镜检登记：凡是镜检疟原虫的均需如实登记，阴、 做好镜检登记：凡是镜检疟原虫的均需如实登记， 阳性片保存待复核。 阳性片保存待复核。 每一个月均要向所在的县区疾控中心上报一次镜检数。 3、每一个月均要向所在的县区疾控中心上报一次镜检数。 包括镜检人数、阳性、阴性数。 包括镜检人数、阳性、阴性数。 血片需要制作厚、薄血膜。 4、血片需要制作厚、薄血膜。 镜检结果需分型。（如果无法确定疟原虫类型， 。（如果无法确定疟原虫类型 5、镜检结果需分型。（如果无法确定疟原虫类型，可及时 联系所在辖区疾控中心，进行血片复核） 联系所在辖区疾控中心，进行血片复核） 一旦发现阳性病例，需留存血样。 6、一旦发现阳性病例，需留存血样。
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（二）采血的部位
以耳垂采血为主。 以耳垂采血为主。 如使用抗凝静脉血， 如使用抗凝静脉血，制作的血片容易造成厚血膜 的脱落。 的脱落。
（三）采血的血量
厚血膜血量约为5立方毫米左右(即一小滴) 厚血膜血量约为5立方毫米左右(即一小滴)，涂成 边缘光滑之圆形，直径约0.8 1.0厘米左右 0.8— 厘米左右。 边缘光滑之圆形，直径约0.8—1.0厘米左右。 薄血膜血量只需0.5 1.0立方毫米左右 0.5立方毫米左右, 薄血膜血量只需0.5-1.0立方毫米左右,过多则血 膜过厚过大。薄膜宜涂成舌状长约2.5厘米， 2.5厘米 膜过厚过大。薄膜宜涂成舌状长约2.5厘米，宽约 厘米。 2厘米。
人体疟原虫镜检技术
薄血膜中成熟裂殖体形态特征
间日疟原虫裂殖体 大于正常红细胞；裂 殖子12~24个，通常 16~18个，排列不规则； 疟色素常集于一侧， 黄褐色
恶性疟
恶性疟
厚血膜恶性疟环状体
恶性疟
7个环状体散在于5个白细胞之间，每个虫体可见一个红色的核和蓝色断裂的或皱缩的原 浆
厚血膜恶性疟配子体
厚血膜恶性疟配子体
恶性疟
厚血膜中疟原虫的形态特征
厚血膜的优点是能够提高疟原虫的检出率，厚 血膜上原虫集中，检出率比薄血膜高出十几倍 甚至数十倍，尤其是在轻度感染的情况下。但 是，厚血膜的镜检亦受到很多因素的影响：厚 血膜层次多、背景深、透光差，虫体收缩，疟 原虫的形态结构远不如薄血膜上清晰典型；
镜检工作所需注意的事项
1、在镜检中显微镜的使用：油镜、目镜、视野需按顺序 逐个检查。 2、疟原虫镜检工作中，凡是发热病人。疟疾、疑似疟疾、 及不明原因的发热病人均需进行疟原虫镜检。 3、做好镜检登记：凡是镜检疟原虫的均需如实登记，阴、 阳性片保存待考核。 4、每一个月上报一次镜检数。包括镜检人数、阳性、阴 性。 5、如发现恶性疟以最快的通信方法，在24小时内报县、 市、省疾病预防控制机构，阳性血片留待上级复核。 6、对每例确诊疟疾病人，在进行抗疟治疗前须采集病人 静脉血5－10ml，并制作厚薄血片4张和滤纸血4份，以 送省进行分子生物学鉴定。
卵形疟原虫 Plasmodium ovale
环状体
Ring stage
疟原虫检验技术(4)
1.瑞氏染剂的配制 1.瑞氏染剂的配制
瑞氏染剂粉 甘油(中性) 甘油(中性) 甲醇(中性 甲醇 中性) 中性
0.2g
3ml 无中性的也可 无中性的也可) 3 (无中性的也可 97 ml
将瑞氏染粉放入乳钵中，加入甘油充分研磨， 将瑞氏染粉放入乳钵中，加入甘油充分研磨，然后 加入甲醇10 ，混合后倒入干燥、 加入甲醇 ml，混合后倒入干燥、清洁的棕色玻璃瓶 内，分次将甲醇倒入乳钵内，至乳钵内染剂洗净为止， 分次将甲醇倒入乳钵内，至乳钵内染剂洗净为止， 配制好的染液充分摇匀即可使用。 配制好的染液充分摇匀即可使用。
染色： ③染色：
• 快染：5：1(20%)，5滴水，1滴染液(原液)，染5分钟清水 快染： 20% 滴水， 滴染液(原液) 冲洗即成。 冲洗即成。 • 慢染：20：1(5%)，20滴水，1滴染液(原液)，染30分钟用 慢染：20： 20滴水 滴水， 滴染液(原液) 30分钟用 清水冲洗。 清水冲洗。 • 待片水干后镜检。 待片水干后镜检。
二、制片
1.薄血膜涂制 1.薄血膜涂制 2.厚血膜涂制 2.厚血膜涂制 • 薄血膜 厚血膜 标记处
1.薄血膜涂制： 薄血膜涂制：
1.薄血膜涂制 1.薄血膜涂制 (1)先用75%酒精棉球将耳垂消毒 先用75%酒精棉球将耳垂消毒， (1)先用75%酒精棉球将耳垂消毒，待酒精干后用采 血针迅速刺入耳垂近下端边缘处。 血针迅速刺入耳垂近下端边缘处。 (2)用左手的拇指与食指以及右手的中指向相对的方 (2)用左手的拇指与食指以及右手的中指向相对的方 向将耳垂轻轻挤压出血。 向将耳垂轻轻挤压出血。 (3)取一张洁净的载玻片 将它的左1/3 取一张洁净的载玻片， 1/3的表面接触 (3)取一张洁净的载玻片，将它的左1/3的表面接触 耳垂上的血滴（不要将玻片接触耳垂上的皮肤）， 耳垂上的血滴（不要将玻片接触耳垂上的皮肤）， 使一小滴血在玻片上。血量1 1.5mm .1/4火柴头 使一小滴血在玻片上。血量1-1.5mm3 .1/4火柴头 大小。 大小。
疟原虫检测血涂片镜检法
疟原⾍检测⾎涂⽚镜检法ICS11.020C62WS 中华⼈民共和国卫⽣⾏业标准WS/T 569—2017疟原⾍检测⾎涂⽚镜检法Microscopic examination of blood films for malaria parasites2017-08-01发布2018-02-01实施前⾔本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。
本标准起草单位：海南省疾病预防控制中⼼、江苏省寄⽣⾍病防治研究所、中国疾病预防控制中⼼寄⽣⾍病预防控制所、云南省寄⽣⾍病防治所、海南省农垦总局医院。
本标准主要起草⼈：王善青、⾼琪、汤林华、杨恒林、郑彬、胡锡敏、王光泽、李⾬春、刘莹、欧阳范献。
疟原⾍检测⾎涂⽚镜检法1 范围本标准规定了⾎涂⽚镜检法检测疟原⾍的技术规范。
本标准适⽤于各级疾病预防控制机构和医疗机构对疟原⾍的显微镜检测。
2 术语和定义下列术语和定义适⽤于本⽂件。
2.1疟原⾍Plasmodium spp疟原⾍是⼀类单细胞、寄⽣性的真核动物，是疟疾（malaria）的病原体。
寄⽣于⼈体的疟原⾍主要有恶性疟原⾍（Plasmodium falciparum）、间⽇疟原⾍（Plasmodium vivax）、三⽇疟原⾍（Plasmodium malariae）和卵形疟原⾍（Plasmodium ovale）等。
2.2⾎涂⽚ blood films将⾎液涂制于载玻⽚上制成的涂⽚。
供显微镜疟原⾍检查⽤的⾎涂⽚包括厚⾎膜涂⽚和薄⾎膜涂⽚两种。
3 仪器和器材3.1 ⽣物显微镜（100×油浸物镜、5×或10×⽬镜）。
3.2 计数器。
3.3 载玻⽚（⽆划痕⽆油污的洁净载玻⽚）。
3.4 推⽚。
3.5 ⾎⽚染⾊架。
3.6 ⾎⽚⼲燥架。
3.7 玻⽚盒。
3.8 染⾊盘和染⾊缸。
4 试剂和材料4.1 吉⽒染⾊原液。
4.2 pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）。
4.3 甲醇（分析纯）。
4.4 ⾹柏油或专⽤浸油（折射率≥1.5）。
疟原虫的镜检技术-制片染色
利用特异性抗体对疟原虫进行染色， 提高疟原虫的染色效果和特异性。
人工智能在疟原虫镜检中的应用
图像识别与分类
利用人工智能技术对显微镜下的疟原虫图像进行自动识别、分类和计数，提高镜 检的准确性和效率。
数据挖掘与分析
通过人工智能技术对疟原虫镜检数据进行分析和挖掘，发现数据间的关联和规律 ，为疟疾防控提供科学依据。
固定涂片时要选用适当的 固定剂，避免涂片脱落。
染色时要选用适当的染色 剂，按照染色剂的要求进 行操作，确保染色效果良 好。
镜检时要仔细观察疟原虫 的结构特征，避免误诊和 漏诊。
冲洗时要彻底去除多余的 染料和杂质，避免干扰观 察。
03
疟原虫镜检制片染色技 术
疟原虫镜检制片染色技术的原理
原理概述
疟原虫镜检制片染色技术是一种 用于检测疟原虫的病理学方法。 通过制备血液涂片，并对其进行 染色，可以观察到疟原虫的存在
疟原虫镜检技术的应用场景
在疟疾流行地区，疟原虫镜检技 术常用于对疑似疟疾患者进行快
速诊断，以指导治疗和防控。
在实验室研究中，疟原虫镜检技 术可用于研究疟原虫的生物学特 性、药物敏感性以及疫苗开发等
方面。
在公共卫生领域，该技术也可用 于监测和评估疟疾的流行趋势和
传播风险。
02
制片染色技术
制片染色技术的原理
疟原虫的镜检技术-制 片染色
目 录
• 疟原虫镜检技术简介 • 制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术的发展趋势
01
疟原虫镜检技术简介
疟原虫镜检技术的定义
01
疟原虫镜检技术是指通过显微镜 观察疟原虫在人体内的形态、结 构和生长过程，从而对疟疾进行 诊断和研究的实验技术。
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丰城市疾病预防控制中心
检验科：黄曾
2014-7-15
疟疾的实验室诊断
1.病原学诊断：显微镜血涂片检查结果阳性；这种镜检确 诊最可靠。 2. 免疫学诊断：（ 1）循环抗原的检测 （ 2 ）循环抗体的 检测 3.分子生物学技术：PCR和DNA探针已应用与疟疾的诊断。 分子生物学、血清学技术发展迅猛，但是确诊疟疾 的“金标准” 仍然是病原学诊断显微镜检查疟原虫。
恶性疟成熟裂殖体
• 裂殖子8～32个，通常8～18个， 排列不规则 • 疟色素集中成团块状 • 虫体占红细胞体积的2/3至3/4
薄血膜间日疟雌（大）配子体形态
形状大小：圆形或椭圆形， 较大。 胞浆：深蓝色。 核：一个，较小，深红色， 常偏于一边，核周可见 明显不染色带。 疟色素：黄褐色，均匀散 在，数目较多。
标准的疟疾厚薄血膜位置
各种不同的疟疾血片涂制法：来自标准血片（1人）门诊发热病人血片（1人）
居民普查血片（2人）
血膜的制作
血膜编号 血膜制成后，立即在玻片面上写 上受检者的号码，以防差错；待薄 血膜干后再用铅笔于薄血膜中写上 血片种类的代号和受检者的个人编 号，依次顺序插入标本盒内。
染液的种类
染液种类：疟原虫的染色，目前临床 上应用最广泛的是瑞氏（Wright stain） 和吉氏染液（Giemsa stain）。这些染液 中的主要染剂都包含美蓝、伊红和由美蓝 氧化所成的天青，所以称多色性染剂。
★ 快速诊断试纸条可与镜检 疟原虫相互补充。
疟原虫抗原检测
• （一）原理
• 快速检测试剂是通过在硝酸纤维素膜（NC）试纸条上产 生可见的条带来检测抗原的一种“免疫-层析”试剂。染 色标记抗体与疟原虫抗原结合，复合物由试剂条检测线上 的抗体捕获后，形成一条可见的条带（检测线）。 • 检测的第一步是将溶血剂与血液混合，破坏血红细胞释放 疟原虫蛋白，便于与标记抗体靶蛋白结合；然后将血液与 标记抗体的混合液置于硝酸纤维试纸条上，并通过毛细管 作用和缓冲液/清洗剂推力，使混合液在试纸条上移动并 通过检测线与对照线。
注意事项： 1.高纯度试剂。 2. 所用器皿绝对无水（伊红在水溶液 内遇到美蓝或天青即可互相化合而产 生沉淀，从而失去染色力）。 3. 边加边磨，充分研磨；整个染色液 配制时间不能少于5个小时。
姬氏染液的染色方法
先用甲醇或无水酒精固定薄血膜,再用清水对厚血膜溶脱 血红蛋白，然后再进行染色。 注意：吸取母液时，不要晃动瓶子,以免沉淀物泛起影响染色 效果. 成批血片染色：将已用甲醇固定薄血膜的血片插入染色缸， 倒入3%吉氏染液稀释液（3毫升吉氏原液加缓冲液或净水97 毫升，混匀）浸没血片，同时对厚薄血膜染色30min（根据当 地实际情况，酌情增减染色时间和浓度），然后用清水轻轻将 染液漂洗干净，将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上晾干， 包装，镜检。 单张血片染色：将处理好的血膜，加姬氏母液1-2滴，加 中性蒸馏水15-30滴，染色30分钟左右，然后用清水轻轻将片 上的染液冲洗干净，晾干镜检。 较理想的染色结果是红细胞为淡红或淡紫红色，疟原虫 的胞质呈蓝色，核为紫红色，疟色素为棕褐色。
血片制作与染色注意事项
●使用前载玻片一定要清洁，否则会影响 血片制作和镜检结果。 ●厚血膜干燥时勿加热，加热会使原虫变 形，影响镜检结果。 ●配置母液时过滤可除去杂质颗粒，有助 于提高镜检质量。
● 固定薄血膜时勿将甲醇触碰到厚血膜。 ● 冲洗染液时，水流轻缓，勿冲走厚血膜。
血片的镜检
1.在学习镜检疟原虫之前，必须先对正常厚薄血膜中各 种血细胞的形态、内部结构和染色性质加以识别。 2.镜检疟原虫，首先学看薄血膜，在基本上掌握薄血膜 中疟原虫形态后，再学习镜检厚血膜。 3.镜检疟原虫一般只查厚血膜，薄血膜仅作为原虫分类 时参考和血片编号之用。 4.镜检疟原虫须用油镜头配合5X低倍目镜镜检，当发现 疑难问题时再调换10X目镜进行观察。 5.检查时应从厚血膜的上缘开始，使血膜从上而下，自 左至右（或由右至左），一行接一行，一个视野稍叠 一个视野顺序地查完整个血膜。 一般情况下，厚血膜四周（稍薄些）疟原虫数量较 多，且形态较清楚，镜检时不要忽略。每张厚血膜检 查时间最少不低于20分钟。
薄血膜中常见的血液成分
嗜酸性粒细胞
中 性 粒 细 胞
红细胞 血小板 单核细胞
淋巴细胞
薄血膜疟原虫形态
间日疟 环状体 感染的红细胞：胀大 不明显，基本正常。 虫体大小：较大，约 为红细胞直径1/3。 胞浆：环状，浅蓝色。 核：红色，一个，偶 有二个。 疟色素：无。
约占寄生红细胞的1/3，很少见到一个红细胞 寄生2个环状体和一个环状体有2个核。
标签
标本片
发热病人血片
薄血膜的制作
• 薄血膜 用推片一端边缘的中点从取血部分①取约 1～1.5微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血 滴与平置的载玻片接触，并形成25～350夹角，待血 液向两侧扩展约② 2cm～2.5cm宽时，均匀而迅速 地从右向左推成舌状薄血膜（约2.5cm长）。推制时 速度要均匀，血滴大小、推片与载玻片之间夹角大 小及展开血膜的速度快慢等常影响血膜的厚薄。制 成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞，细胞之 间互相接触而不相互重叠。③薄血膜外观：舌状厚 薄均匀，无划痕，④位于玻片1/2～1/3处【左半部 分（或第4—6份）】 。
间日疟成熟裂殖 体
红细胞：胀大，褪色，可见 薛氏小点。 大小：个体较大。 胞浆和核：裂殖子12~24个， 通常为16~18个，排列不规 则，核红色，胞浆浅蓝色。 疟色素：黄褐色，常集于疟 原虫的一边。
间日疟裂殖体
恶性疟成熟裂殖体
红细胞：大小正常，颜色 较深，可见茂氏小点。 大小：虫体较小。 胞浆和核：裂殖子8~32 个，通常为8~18个， 排列不规则，核红色， 胞浆蓝色。 色素：黑褐色，集中于中 央或一侧。
我们主要用吉氏染液，它具有方便，染色效 果稳定，便于长期保存的优点。瑞氏染色，染色 时间短，但染色效果不如吉氏稳定，主要在门诊 量大的门诊实验室使用。
染液的种类及染色原理
注意：蛋白质和氨基酸都是两性电解质，要求染液 的pH值7.0-7.2较好。
染液偏酸时，所带的正电荷增加，易于伊红结合，使 红细胞和疟原虫的核染成鲜红色，而淋巴细胞和原虫的胞 浆着色较差；反之，当染液偏碱时，红细胞和嗜伊红白细 胞的颗粒等被染成紫蓝色，不易观察。
恶性疟原虫--环状体
环纤细,约为RBC直径的1/6，RBC不胀大 核1个，但2个常见，红细胞常含2个以上原虫
薄血膜间日疟大滋养体形态
感染的红细胞：胀大褪色， 出现形状大小相等、分 布均匀、数目较多、鲜 红色的薛氏小点。 虫体大小：较大。 胞浆：不规则，浅蓝色， 出现阿米巴伪足，有空 泡。 核： 红色，一个。 疟色素：有，细小杆状， 黄褐色，分布不均匀。
姬氏染液母液配置方法
取姬氏粉 0.5 克置于研钵中，加 25ml 甘油充分研磨，倒入 60 或 100ml带有玻塞的有色玻瓶中。在研钵中加少量甲醇，洗去甘油浓液混 入瓶内，至25ml甲醇洗净钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分摇匀， 置于55—60℃水浴中或温箱内24h或室温内3—5天，多加摇动，即成原 液。姬氏染液是目前较优良的血膜染剂，即使在炎热天气中，亦可经 久不变。 材料： 1、姬氏粉0.5克 2、甘油25ml 3、甲醇25ml
熟练工作者的推片姿势
厚血膜的制作
• 厚血膜 用推片的左下角，从取血部位刮取①约 4～5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴 与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋 转，转2～4圈，涂成②直径0.8～1cm大小圆形 厚血膜(厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到 5～10个自细胞为宜)，③厚血膜的位置，位于 玻片右1/3处[中央偏右（或6等份中的与贴标签 的1、2份相邻的第3份中部）] 。④厚血膜外观： 圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱落，过薄 达不到检出率的要求，以油镜视野5-10个WBC 为宜。
薄血膜疟原虫形态
间日疟 环状体 感染的红细胞：胀大 不明显，基本正常。 虫体大小：较大，约 为红细胞直径1/3。 胞浆：环状，浅蓝色。 核：红色，一个，偶 有二个。 疟色素：无。
薄血膜疟原虫形态
恶性疟环状体
感染的红细胞：大小正常,颜 色较深。 虫体大小：较小，约为红细 胞直径1/5-1/6。 胞浆：蓝色，环状纤细,有时 位于红细胞的边缘。常见 多个原虫同寄生于一红细 胞的现象。 核：红色一个,常有二个。 疟色素：无。
血膜的制作（取血操作）
在采集标本、制作血片前，首先要核 对患者的姓名、年龄和住址。 • 采血部位和方法：采血部位一般人为耳 垂，指头；一人一针，常规消毒、采血。
取血部位和血量
采血部位和取血方法：
耳垂或无名指（婴幼儿母 趾或足跟），通常在耳垂 取血，先用75%酒精棉球消 毒取血部位，待酒精干后， 用左手拇指和食指紧捏耳 垂上方或无名指指尖，右 手持消毒针迅速刺入皮肤， 不宜过深或过浅。然后用 右手中指轻轻挤压出血。 厚血膜血量约一粒大米 （即火柴头）大小。
间 日 疟 大 滋 养 体
虫体不规则，较大； 阿米巴样空泡明显； 疟色素细小，黄褐色。
间日疟大滋养体
恶性疟大滋养体
受感染红细胞：大小正常， 颜色较深，可出现较粗、 大小不一、分布不匀、 数目较少红色茂氏小点。 虫体大小：较小。 胞浆：蓝色，圆形，坚实， 体积小。 核：一个，红色。 疟色素：较细的黑褐色颗 粒，常集成块。
恶性疟大滋养体
间日疟未成熟裂殖体
红细胞：胀大，褪色， 可有薛氏小点。 胞浆：较不规则，空泡 小或消失，浅蓝色。 核： 红色，分裂为二个 以上。 色素：黄褐色，分布不 均匀。
薄血膜疟原虫形态
间 日 疟 未 成 熟 裂 殖 体
恶性疟未成熟裂殖体
红细胞：大小正常，颜色较 深，可有茂氏小点。 大小： 较小。 胞浆：规则，圆形或卵圆形， 蓝色。 核：分裂为二个以上，红色。 色素：黄褐色颗粒，常集成 黑褐色团块。