疟原虫形态及镜检技术(欧阳榕)
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☻染液浓度高着色快而深,常偏碱,红细胞被染成蓝紫
色,不易于观察。 ☻染液浓度适中,红细胞呈淡红色,嗜酸性细胞的颗粒 呈鲜红色,淋巴细胞和疟原虫的胞浆呈蓝色或淡蓝色, 白细胞的核呈紫蓝色,疟原虫的核呈红色。
吉氏染色血片外观
偏酸 标准 偏碱
(五)冲洗
染色后不要将玻片上残余染液直接迅速倒掉,应 将玻片连同玻片上的染液一起平放入水中后,将玻片 向下倾斜后轻轻左右摆动漂洗。这样可以有效的避免 染色素颗粒沾污血膜。
(二)血片的制作
1、厚、薄血膜的形状与位置 一张玻片上同时制作厚薄血膜。 将玻片划分为六等分,第一、二格供记录姓名、编号或贴标
签之用。厚血膜位于第三格中央(直径约0.8~1cm),薄血
膜则从第四格前缘至第六格中部(长度约2.5cm)。如下图 所示。
2、采血
采血部位为无名指末端或耳垂,婴儿可从拇趾或足跟采血。消毒
2.5cm。薄血膜的厚度要以红细胞之间相互接触而不相互重
叠为佳(直观上指透过玻片能清晰看到报纸上的字)
(三)固定
薄血膜固定:待薄血膜晾干后,用玻璃棒沾取或用吸 管吸取少量甲醛平铺于薄血膜上,起固定薄血膜的作用。
☻注意不可固定厚血膜。
(四)染色
染色方法有吉氏染色法和瑞氏染色法两种,因吉氏染 色法染色效果稳定,保存时间长,一般采用吉氏染色法。 (1)快染:配置10%-20%左右浓度,染色时间短,一 般为15分钟左右。但染色效果不稳定。 (2)慢染:配置5%浓度,染色30分钟~40分钟,染 色效果稳定,可保存较长时间。(加水8ML加染液2ML混
☻成熟的裂殖体破裂,裂殖子逸出,一部
分被吞噬细胞吞噬,一部分再侵入正常红细
胞开始新一轮的红内期发育,经过数次裂体 增殖后,部分侵入红细胞的裂殖子不再进行 核分裂,而逐渐发育成雌雄配子体。
二、厚薄血膜中疟原虫的主要形态特征
薄血膜:疟原虫寄生于红细胞中,结构清晰,形态典型, 一般用于鉴别虫种。 厚血膜:红细胞被溶解,虫体皱缩,形态发生较大变化, 但只要掌握疟原虫的核,胞浆,疟色素三大基本 构造也是不难鉴别的,一般用于定性。
虫体较小,圆形,空泡不显著,
含空泡,疟色素细小,黄褐色,散
在分布。寄生的红细胞胀大,变浅。
疟色素细小结成团块,呈黑褐色。
寄生的红细胞正常或略缩小。
间日疟未成熟裂殖体
恶性疟未成熟裂殖体
较大,核2个以上,圆形或不规
较小,核2个以上,疟色素黑
则,空泡消失,疟色素黄褐色,
分布不均
褐色团块状
间日疟成熟裂殖体
疟色素 核 胞浆
2、分期:环状体、大滋养体、裂殖体、配子体
☻红外期裂殖子侵入红细胞内,初期似戒
指状,红色的核点,兰色环状的胞浆。
称 为环状体即小滋养体。
☻环状体发育长大,胞浆可伸出不规则
的伪足,以吞噬血红蛋白,此为大滋养
体。
☻大滋养体继续发育,其核与胞浆进行分裂,
形成裂殖体。原虫的不同裂殖体中裂殖子的 数目也不一样,成熟后裂殖子数一般间日疟 为12—24个,恶性疟为18—36个。
取血部位皮肤后,用左手拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖,以
一次性采血针迅速刺入采血部位,不宜过深或过浅,用右手中指轻轻 挤出1~2滴血,滴于玻片上以备涂制厚薄血膜。
3、涂制血膜
(1)厚血膜血量约4~5ul,用推片的左下角由里向外一个
方向旋转几圈,涂成边缘光滑之圆形,直径约0.8~1cm左右。
厚血膜的厚度以一个油镜视野可以看到5~10个白细胞为佳。 (2)薄血膜血量约1~1.5ul,用推片的下缘置载玻片的中 央处,当血液在推片和载玻片之间向两侧扩展至2cm宽时, 使两玻片保持25°~35°角,从右向左迅速推成舌状,长约
பைடு நூலகம்
恶性疟成熟裂殖体
大于正常红细胞,裂殖子 12~24个,排列不规则,疟 色素黄褐色,常集于一侧。
小于正常红细胞,裂殖子 8~32个,排列不规则,疟 色素黑褐色呈团块状。
间日疟雌(大)配子体
间日疟雄(小)配子体
☻如何区分间日疟雌雄配子体:
雌:核较小,致密,常偏一侧,胞浆深蓝
雄:核较大,疏松,常位中央,胞浆浅蓝
三、薄血膜中间日疟和恶性疟各期
疟原虫形态鉴别
间日疟环状体
恶性疟环状体
虫体约占红细胞1/3,环较粗;
虫体约为红细胞的1/6,环纤细; 核1-2个,一个红细胞内寄生两个
核1个,较少见2个核及一个红
细胞内寄生2个环状体。
环状体较为常见,虫体常趋边。
间日疟大滋养体
恶性疟大滋养体
虫体不规则,较大,阿米巴样,常
(六)镜检
1、血膜上滴加镜油,查找疟原虫目镜用5x或10x,物镜 须用油镜(100x)。 2、观察血膜的方法:镜检时从血膜的一端开始 ,自上
而下,自左而右,逐个视野顺序查看。镜检疟原虫一般是查
厚血膜,薄血膜作为疟原虫的分类定种。 3、结果报告:分阳性和阴性。阳性者至少要查见一个 典型疟原虫(需鉴别虫种)方可确定;以查完整个厚血膜
(一)厚血膜中环状体形态
间日疟原虫环较大,胞浆较厚,
常呈“!”或“;”状
恶性疟原虫环纤细,常呈 “:”、 飞鸟状、“v”状和断环状等
(二)厚血膜中滋养体、裂殖体及配子体形态
厚血膜中间日疟大滋养体胞浆可皱缩断裂成几个块状,大
小不一,核位于胞浆之中或外边,疟色素分布不均,有些仅见
胞浆和疟色素而核看不清。 厚血膜中间日疟裂殖体、配子体以及恶性疟配子体除虫体 略缩小而着色较深外,形态与薄血膜中相似。 由于恶性疟的滋养体和裂殖体是在内脏毛细血管中发育, 故在外周血涂片中较难见到。
核:较大且致密,周围有不染色带
胞质:边缘清楚,不含空泡 疟色素:颗粒多且粗,均与分布
四、厚血膜中间日疟和恶性疟各期疟原虫形态鉴别 厚血膜由于用血量多,涂布面积小,红细胞重叠且
干燥慢,致使虫体皱缩,空泡消失,胞浆变形,各期疟 原虫的体积都有所缩小,其中环状体和大滋养体的形态 会产生较大变化,难于辨认,而裂殖体和配子体形态与 薄血膜中相比无明显变化。
水溶血晾干后再进行染色。
(3)染液稀释后使用时间:吉氏染液的主要成分是
美蓝、伊红和由美蓝氧化产生的天青,这三者能在酒
精溶液中溶解,但再水溶液中伊红遇到美蓝和天青会
产生沉淀。因此,稀释液要现染现配,且在半小时内 染色力最强。 (4)染色时间:染色时间应根据染液的质量、新旧、 稀释浓度和气温而适当增减。
(4)染液的稀释浓度: ☻染液浓度过低着色慢而浅,常偏酸,红细胞和疟原虫 的核染成鲜红色,淋巴细胞及疟原虫的胞浆着色较差。
合)
影响染色效果的因素
血片染色好坏除了与玻片的清洁度、血片制作质量和
染色技术等有关外,还受以下因素影响:
(1)染剂、溶剂的质量:染料、甲醇和甘油必须用分 析纯,且在配置时使用的器具要干净且无水分。 (2)染液的新旧: 染液存放时间越久,染色力越强。 新配置的染液因色素尚未充分溶解,染色力较弱,因 此,通常在染液配置1~2周后才开始使用,盛装染液 的瓶子要加塞盖密,以防吸潮而影响染液质量。
恶性疟雌(大)配子体
恶性疟雄(小)配子体
☻如何区分间日疟雌雄配子体:
雌:两端尖,核小,致密,深红,胞浆深蓝
雄:两端圆,核大,疏松,浅红,胞浆浅蓝
间日疟晚期大滋养体与雌配子体的区别
大滋养体 大小:不超过被寄生红细胞的3/4 核:较小,不规则 胞质:边缘不规则,多有空泡 疟色素:颗粒少且细,分布不均匀 雌配子体 大小:几乎充满被寄生的红细胞
疟原虫形态及镜检技术
福建疾病预防控制中心寄生虫科 欧阳榕
一、疟原虫形态及分期
1、疟原虫构造三要素:核、胞浆、疟色素 核:正常情况下核呈鲜红色,呈圆形或不规则的颗粒状
胞浆:被染成浅蓝色或深蓝色,随着虫体发育,胞浆逐渐增多
疟色素:由未被利用的血红蛋白分解成正铁血红素颗粒蓄积在原 浆内, 颜色和颗粒的形状,因疟原虫种类而异。
或至少检查200个视野未见疟原虫者判为阴性。
(七)血片制作注意事项
1、制片时,手指勿接触玻片表面,以免油污使玻
片表面产生空白区或使厚血膜脱落;作为推片的玻片边
缘一定要平滑,这样推出的血膜才能均匀一致。
2、血片放置待干时不可倾斜,否则会导致厚血膜 中血细胞沉在一边,导致厚血膜厚薄不均,厚处不易 溶血和着色而影响检查结果。
厚血膜中间日疟原虫
厚血膜中恶性疟原虫环状体、配子体
五、疟原虫与其它物体的鉴别
(一)白细胞残骸
白细胞破裂后散出的颗粒,易被误认为是环状体的核,但看不 到胞浆;白细胞残骸常为蓝色,与疟原虫胞浆相似,有时与其它红
点和血小板巧合在一起,常被误认为是疟原虫。鉴别时如果形同大
滋养体,可根据有无疟色素来鉴别;如果形同环状体,可根据虫体 大小,折光是否均匀、核与胞浆是否在同一平面上,其它视野内有 无疟原虫等仔细分析判断。
(二)灰尘和染色液的色素沉着
灰尘和染色液的色素沉着在血膜的表面上时,往往会被误 认为是疟色素,可根据其颗粒的形状、大小、色泽以及有无核
和胞浆等结构来鉴别,也可转动显微镜,看其是否在同一水平
面上。
(三)细菌
细菌尤其是球菌在厚血膜中常被染成红色小点,与疟原虫的核 相似,最易混淆。球菌形体较大,边缘光滑,且与红细胞不在同一
3、制成的血膜需完全干燥后,方可进行固定和染色, 否则薄血膜中的红细胞边缘皱缩,厚血膜也容易脱落。 4、吸取吉氏原液时不要晃动瓶子,以免底部沉淀 物泛起影响染色效果;吉氏原液不可进水,以避免原液
中的成分互相化合而产生沉淀从而失去染色力,吉氏稀
释液要现染现配,在半小时内染色力最强。 5、不能即时染色的血膜,可先用甲醛固定薄血膜 后,放入玻片盒中保存,待染色时,应先将厚血膜用清
平面上。
(四)水中原虫
水中原虫有时也可看到核、胞浆和空泡,与间日疟大滋养体相 似,但无疟色素,且空泡多如网眼。
六、镜检技术
(一)镜检的重要性
疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的 重要手段和方法,虽然现在分子生物学、血清学技术迅 猛发展,但是确诊疟疾的“金标准”仍然是病原学诊断 显微镜检查疟原虫。