疟原虫形态及镜检技术(欧阳榕)

☻染液浓度高着色快而深，常偏碱，红细胞被染成蓝紫
色，不易于观察。 ☻染液浓度适中，红细胞呈淡红色，嗜酸性细胞的颗粒 呈鲜红色，淋巴细胞和疟原虫的胞浆呈蓝色或淡蓝色， 白细胞的核呈紫蓝色，疟原虫的核呈红色。
吉氏染色血片外观
偏酸 标准 偏碱
（五）冲洗
染色后不要将玻片上残余染液直接迅速倒掉，应 将玻片连同玻片上的染液一起平放入水中后，将玻片 向下倾斜后轻轻左右摆动漂洗。这样可以有效的避免 染色素颗粒沾污血膜。
（二）血片的制作
1、厚、薄血膜的形状与位置 一张玻片上同时制作厚薄血膜。 将玻片划分为六等分，第一、二格供记录姓名、编号或贴标
签之用。厚血膜位于第三格中央（直径约0.8~1cm），薄血
膜则从第四格前缘至第六格中部（长度约2.5cm）。如下图 所示。
2、采血
采血部位为无名指末端或耳垂，婴儿可从拇趾或足跟采血。消毒
2.5cm。薄血膜的厚度要以红细胞之间相互接触而不相互重
叠为佳（直观上指透过玻片能清晰看到报纸上的字）
（三）固定
薄血膜固定：待薄血膜晾干后，用玻璃棒沾取或用吸 管吸取少量甲醛平铺于薄血膜上，起固定薄血膜的作用。
☻注意不可固定厚血膜。
（四）染色
染色方法有吉氏染色法和瑞氏染色法两种，因吉氏染 色法染色效果稳定，保存时间长，一般采用吉氏染色法。 （1）快染：配置10%-20%左右浓度，染色时间短，一 般为15分钟左右。但染色效果不稳定。 （2）慢染：配置5%浓度，染色30分钟~40分钟，染 色效果稳定，可保存较长时间。(加水8ML加染液2ML混
☻成熟的裂殖体破裂，裂殖子逸出，一部
分被吞噬细胞吞噬，一部分再侵入正常红细
胞开始新一轮的红内期发育，经过数次裂体 增殖后，部分侵入红细胞的裂殖子不再进行 核分裂，而逐渐发育成雌雄配子体。
二、厚薄血膜中疟原虫的主要形态特征
薄血膜：疟原虫寄生于红细胞中，结构清晰，形态典型， 一般用于鉴别虫种。 厚血膜：红细胞被溶解，虫体皱缩，形态发生较大变化， 但只要掌握疟原虫的核，胞浆，疟色素三大基本 构造也是不难鉴别的，一般用于定性。
虫体较小，圆形，空泡不显著，
含空泡，疟色素细小，黄褐色，散
在分布。寄生的红细胞胀大，变浅。
疟色素细小结成团块，呈黑褐色。
寄生的红细胞正常或略缩小。
间日疟未成熟裂殖体
恶性疟未成熟裂殖体
较大，核2个以上，圆形或不规
较小，核2个以上，疟色素黑
则，空泡消失，疟色素黄褐色，
分布不均
褐色团块状
间日疟成熟裂殖体
疟色素 核 胞浆
2、分期：环状体、大滋养体、裂殖体、配子体
☻红外期裂殖子侵入红细胞内，初期似戒
指状，红色的核点，兰色环状的胞浆。
称 为环状体即小滋养体。
☻环状体发育长大，胞浆可伸出不规则
的伪足，以吞噬血红蛋白，此为大滋养
体。
☻大滋养体继续发育，其核与胞浆进行分裂，
形成裂殖体。原虫的不同裂殖体中裂殖子的 数目也不一样，成熟后裂殖子数一般间日疟 为12—24个，恶性疟为18—36个。
取血部位皮肤后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖，以
一次性采血针迅速刺入采血部位，不宜过深或过浅，用右手中指轻轻 挤出1~2滴血，滴于玻片上以备涂制厚薄血膜。
3、涂制血膜
（1）厚血膜血量约4~5ul，用推片的左下角由里向外一个
方向旋转几圈，涂成边缘光滑之圆形，直径约0.8~1cm左右。
厚血膜的厚度以一个油镜视野可以看到5~10个白细胞为佳。 （2）薄血膜血量约1~1.5ul，用推片的下缘置载玻片的中 央处，当血液在推片和载玻片之间向两侧扩展至2cm宽时， 使两玻片保持25°~35°角，从右向左迅速推成舌状，长约
பைடு நூலகம்
恶性疟成熟裂殖体
大于正常红细胞，裂殖子 12~24个，排列不规则，疟 色素黄褐色，常集于一侧。
小于正常红细胞，裂殖子 8~32个，排列不规则，疟 色素黑褐色呈团块状。
间日疟雌（大）配子体
间日疟雄（小）配子体
☻如何区分间日疟雌雄配子体：
雌：核较小，致密，常偏一侧，胞浆深蓝
雄：核较大，疏松，常位中央，胞浆浅蓝
三、薄血膜中间日疟和恶性疟各期
疟原虫形态鉴别
间日疟环状体
恶性疟环状体
虫体约占红细胞1/3，环较粗；
虫体约为红细胞的1/6，环纤细； 核1-2个，一个红细胞内寄生两个
核1个，较少见2个核及一个红
细胞内寄生2个环状体。
环状体较为常见，虫体常趋边。
间日疟大滋养体
恶性疟大滋养体
虫体不规则，较大，阿米巴样，常
（六）镜检
1、血膜上滴加镜油，查找疟原虫目镜用5x或10x，物镜 须用油镜（100x）。 2、观察血膜的方法：镜检时从血膜的一端开始 ，自上
而下，自左而右，逐个视野顺序查看。镜检疟原虫一般是查
厚血膜，薄血膜作为疟原虫的分类定种。 3、结果报告：分阳性和阴性。阳性者至少要查见一个 典型疟原虫（需鉴别虫种）方可确定；以查完整个厚血膜
（一）厚血膜中环状体形态
间日疟原虫环较大，胞浆较厚，
常呈“！”或“；”状
恶性疟原虫环纤细，常呈 “：”、 飞鸟状、“v”状和断环状等
（二）厚血膜中滋养体、裂殖体及配子体形态
厚血膜中间日疟大滋养体胞浆可皱缩断裂成几个块状，大
小不一，核位于胞浆之中或外边，疟色素分布不均，有些仅见
胞浆和疟色素而核看不清。 厚血膜中间日疟裂殖体、配子体以及恶性疟配子体除虫体 略缩小而着色较深外，形态与薄血膜中相似。 由于恶性疟的滋养体和裂殖体是在内脏毛细血管中发育， 故在外周血涂片中较难见到。
核：较大且致密，周围有不染色带
胞质：边缘清楚，不含空泡 疟色素：颗粒多且粗，均与分布
四、厚血膜中间日疟和恶性疟各期疟原虫形态鉴别 厚血膜由于用血量多，涂布面积小，红细胞重叠且
干燥慢，致使虫体皱缩，空泡消失，胞浆变形，各期疟 原虫的体积都有所缩小，其中环状体和大滋养体的形态 会产生较大变化，难于辨认，而裂殖体和配子体形态与 薄血膜中相比无明显变化。
水溶血晾干后再进行染色。
（3）染液稀释后使用时间：吉氏染液的主要成分是
美蓝、伊红和由美蓝氧化产生的天青，这三者能在酒
精溶液中溶解，但再水溶液中伊红遇到美蓝和天青会
产生沉淀。因此，稀释液要现染现配，且在半小时内 染色力最强。 （4）染色时间：染色时间应根据染液的质量、新旧、 稀释浓度和气温而适当增减。
（4）染液的稀释浓度： ☻染液浓度过低着色慢而浅，常偏酸，红细胞和疟原虫 的核染成鲜红色，淋巴细胞及疟原虫的胞浆着色较差。
合)
影响染色效果的因素
血片染色好坏除了与玻片的清洁度、血片制作质量和
染色技术等有关外，还受以下因素影响：
（1）染剂、溶剂的质量：染料、甲醇和甘油必须用分 析纯，且在配置时使用的器具要干净且无水分。 （2）染液的新旧： 染液存放时间越久，染色力越强。 新配置的染液因色素尚未充分溶解，染色力较弱，因 此，通常在染液配置1~2周后才开始使用，盛装染液 的瓶子要加塞盖密，以防吸潮而影响染液质量。
恶性疟雌（大）配子体
恶性疟雄（小）配子体
☻如何区分间日疟雌雄配子体：
雌：两端尖，核小，致密，深红，胞浆深蓝
雄：两端圆，核大，疏松，浅红，胞浆浅蓝
间日疟晚期大滋养体与雌配子体的区别
大滋养体 大小：不超过被寄生红细胞的3/4 核：较小，不规则 胞质：边缘不规则，多有空泡 疟色素：颗粒少且细，分布不均匀 雌配子体 大小：几乎充满被寄生的红细胞
疟原虫形态及镜检技术
福建疾病预防控制中心寄生虫科 欧阳榕
一、疟原虫形态及分期
1、疟原虫构造三要素：核、胞浆、疟色素 核：正常情况下核呈鲜红色，呈圆形或不规则的颗粒状
胞浆：被染成浅蓝色或深蓝色，随着虫体发育，胞浆逐渐增多
疟色素：由未被利用的血红蛋白分解成正铁血红素颗粒蓄积在原 浆内， 颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。
或至少检查200个视野未见疟原虫者判为阴性。
（七）血片制作注意事项
1、制片时，手指勿接触玻片表面，以免油污使玻
片表面产生空白区或使厚血膜脱落；作为推片的玻片边
缘一定要平滑，这样推出的血膜才能均匀一致。
2、血片放置待干时不可倾斜，否则会导致厚血膜 中血细胞沉在一边，导致厚血膜厚薄不均，厚处不易 溶血和着色而影响检查结果。
厚血膜中间日疟原虫
厚血膜中恶性疟原虫环状体、配子体
五、疟原虫与其它物体的鉴别
（一）白细胞残骸
白细胞破裂后散出的颗粒，易被误认为是环状体的核，但看不 到胞浆；白细胞残骸常为蓝色，与疟原虫胞浆相似，有时与其它红
点和血小板巧合在一起，常被误认为是疟原虫。鉴别时如果形同大
滋养体，可根据有无疟色素来鉴别；如果形同环状体，可根据虫体 大小，折光是否均匀、核与胞浆是否在同一平面上，其它视野内有 无疟原虫等仔细分析判断。
(二）灰尘和染色液的色素沉着
灰尘和染色液的色素沉着在血膜的表面上时，往往会被误 认为是疟色素，可根据其颗粒的形状、大小、色泽以及有无核
和胞浆等结构来鉴别，也可转动显微镜，看其是否在同一水平
面上。
（三）细菌
细菌尤其是球菌在厚血膜中常被染成红色小点，与疟原虫的核 相似，最易混淆。球菌形体较大，边缘光滑，且与红细胞不在同一
3、制成的血膜需完全干燥后，方可进行固定和染色， 否则薄血膜中的红细胞边缘皱缩，厚血膜也容易脱落。 4、吸取吉氏原液时不要晃动瓶子，以免底部沉淀 物泛起影响染色效果；吉氏原液不可进水，以避免原液
中的成分互相化合而产生沉淀从而失去染色力，吉氏稀
释液要现染现配，在半小时内染色力最强。 5、不能即时染色的血膜，可先用甲醛固定薄血膜 后，放入玻片盒中保存，待染色时，应先将厚血膜用清
平面上。
（四）水中原虫
水中原虫有时也可看到核、胞浆和空泡，与间日疟大滋养体相 似，但无疟色素，且空泡多如网眼。
六、镜检技术
（一）镜检的重要性
疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的 重要手段和方法，虽然现在分子生物学、血清学技术迅 猛发展，但是确诊疟疾的“金标准”仍然是病原学诊断 显微镜检查疟原虫。