(整理)凝聚胺介质交叉配血试验操作规程

凝聚胺介质交叉配血试验操作规程(SOP文件)

1目的

作为介质辅助用于完全抗体及不完全抗体的临床筛选检测及辅助用于临床交叉配血实验。

2检验原理

红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕，而形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。

凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM)，降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。

其后，加入凝聚胺（Polybrene)溶液，它是一种高价阳离子多聚物、肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝聚。最后，加入悬浮液（Resuspending),Resuspending具有中和凝聚胺（Polybrene)阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝聚散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。

3储存条件及有效期

未开封试剂应贮存于2℃~25℃、相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体的室内；已开封试剂应贮存于相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体和通风良好的室温环境，试剂用后应及时拧紧瓶盖保存；未开封试剂的有效期为二年，在有效期内的已开封试剂应在开封后的6个月内使用完。

4样本要求

4.1新鲜血清，含EDTA抗凝血浆、3%~5%的红细胞悬液。

4.2不能使用溶血标本及含枸橼酸钠、肝素抗凝血浆标本。5检验方法

辅助交叉配血试验

5.1取试管二支，标主次侧，主侧管加病人血清（血浆）2滴，加供血者3%~5%红细胞悬液（洗涤或不洗涤均可）1滴，次侧管反之。

5.2各加LIM0.65ml,混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀。

5.3用离心机3400转/min(相当于1000g离心力）离心10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。

5.4轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须要重做。

5.5最后加入Resuspending 2滴，轻轻摇动试管混合并同时观察结果。如果在60秒内凝集散开，代表是由Polybrene 引起的非特异性聚集，配血结果相合；如凝集不散开，则为

红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。

6注意事项

6.1可以用含EDTA之血浆代替血清使用。

6.2若病人血清（血浆）含肝素，如洗肾患者，须多加4~6滴Polybrene溶液以中和肝素。

6.3本试剂盒的操作方法也适用于抗体鉴定。

6.4若试剂使用前为低温贮存，请回复室温再行操作。

6.5加做辅助性抗人球蛋白试验，目的是增加检测抗-K的敏感性。

6.6在冬天室温极低的情况下，操作交叉配血试验，某些病人血清中可能含有冷凝集素等因素，而导致假阳性的结果出现。若有此怀疑，建议在最后滴入Resuspending时，将试管立即置入37℃水浴中，轻轻摇动试管混合，并在60秒内观察结果。

6.7红细胞抗原检测步骤同抗体筛检试验，其检测标准血清用已知标准血清。

6.8用户可使用IgG抗D抗体（效价≥64）与RhD阳性红细胞反应做阳性对照实验，测试本试剂的有效性。

ABO血型定型操作规程（SOP文件）

1目的

用于鉴定人ABO血型

2检验原理

本品系用产生抗A或抗B血型抗体的杂交瘤细胞培养上清液（或在上清液中加入少量同型腹水）配制而成，采用凝集试验原理，专供鉴定人ABO血型用。

3样本要求

本试剂适用于全血或10％、5％红细胞悬液。

4检验方法

平板法（玻片法）：本品与受检者全血或10％红细胞生理氯化钠悬液按1:1搅匀，不必再稀释，按照有无凝集判定结果

5结果判断

血型抗A试剂抗B试剂

A + -

B - +

O - -

AB + +

注：“+”有凝集反应，“-”无凝集反应

6检验结果的解释

将已知的抗A、抗B血型定型试剂与受检者的红细胞混合时，与抗A血型定型试剂发生凝集者即为A型血型，与抗B 血型定型试剂发生凝集者即为B型血型，与抗A、抗B血型定型试剂均发生凝集者即为AB型血型，与抗A、抗B血型定型试剂均不发生凝集者即为O型血型。

7注意事项

7.1对含有较多自身冷凝集的受检者，在鉴定血型时往往被误认为AB血型，遇到此种情况，需用37°生理氯化钠溶液洗涤受检者细胞2-3次，以去除吸附在红细胞上的凝集素，然后再鉴定血型。

7.2在做配型试验时，如发现有不配合现象，则取受检者血清，用已知A血型或B血型细胞进行反定型试验，以核实原鉴定的血型是否正确。

7.3用立即试管法不能测出亚型（如Ax），需延长作用时间。

7.4本品如出现浑浊或变色则不能使用，若开瓶使用时间较长后，最好用已知ABO血型红细胞检查结果是否与已知血型相符，以防制品污染，变质失效，而造成鉴定错误。

7.5在有效期内使用。

ABO血型反定型操作规程(SOP文件）

1目的

用于ABO血型的反定型检测，该产品不用于血源筛查。2检验原理

本品系采用三人份同型混合的A1型、B型和O型合格人红细胞经洗涤后悬浮于红细胞保存液中配制而成。采用凝集试验原理，用已知的A1，B，O型红细胞测定被检者血清/血浆中有无相应的抗A或抗B抗体（反定型试验），结合正定型结果判定ABO血型。

3检验方法

试管法

3.1取被检者血清/血浆各50ul分别加入3支标记好的试管中；

3.2分别各加50ulA1、B、O试剂红细胞；

3.3摇动试管，混匀。于900g离心15s，或室温静止1h;

3.4首先检查是否溶血，（溶血可能是阳性结果，或是细菌污染。）轻轻摇动悬浮红细胞。

3.5观察凝集情况，并立即记录结果。必要时可借助显微镜观测。

4检验结果的解释

ABO血型正反定型反应格局表