圆二色谱仪使用

圆二色谱仪

使用手册

实验前请先阅读第一部分注意事项

2011年4月6日整编

河北大学理化中心

目录

一、注意事项

二、光源的选择

三、MOS 450波长的校正

四、电压的调节

五、MOS-450 圆二色光谱扫描操作规程

六、MOS 450-SFM 300动力学操作方法

一、注意事项

1、滴定及变温实验时，需要磁子搅拌。实验结束时首先拔掉搅拌电源。在样品池内无磁子的情况下搅拌器空转会烧毁控温元件。

2、光源(也就是氙灯或汞氙灯)不可频繁开关。举例而言，如果马上不用仪器，但半个小时后需要使用仪器，就不要为了节约光源寿命而将光源关闭。短时间内频繁开关光源反而会缩短光源寿命。

3、光电倍增管移动时(比如从圆二色模式换为荧光模式)，注意用软件将Hv（高压）关闭。

4、扫描速度在0.5-5s/nm。使用手册上写的扫描速度有误，特别注意不要低于0.5秒/nm,过快的扫描速度易造成calibration移位。

5、如需用到emission单色器，就是那个需要用光纤连接的单色器，扫描速度要大于1s/nm,连0.5s/nm都不能用。

6、PMT的HV不要超过1000V.

7、使用控温附件进行变温实验时，一定要将地上的那个水浴恒温槽打开，水槽温度设为20度以下即可。

8、TCU上设置为remote; Power supply设置为ARC.

9、仪器运行过程中，更换样品时，shutter最好关闭。

二、光源的选择

1、电源：

图1中的Lamp power supply处有Xe（红色）、Xe(Hg)（红色）、零线（黑色）三个插孔。

零线插头为黑色，直接插到黑色的零线插孔中。

火线插头为红色，在做圆二色、紫外、荧光的光谱扫描时插在Xe（红色）插孔中，在做快速动力学测量的时候插在Xe(Hg)插孔中。

2、光源选择：

图2中的Vertical setting部位下方的底座上有Xe、Xe(Hg)两个标示前后排列。手动松开中间的大圆头Screws(图2中)，可以拉出或推进Vertical setting。当Vertical setting的金属头通过前后移动到下方的哪个标示位置上，也就是那个标示所示的灯正对着光路，为测试用光源。做快速动力学测量的时候选Xe(Hg)，做圆二色、紫外、荧光的光谱扫描时选Xe，最后再旋紧中间的大圆头Screws。

注：Xe（Hg）灯中的Hg元素有一些很强的特征谱线，加强了Xe元素发光的强度，对于动力学测量要求一个波长的光源能量要强，才能测量较为精确的谱图。而对于光谱扫描，单独的Xe元素谱线较为平滑，光源对扫描的影响较小。

图1 图2

三、MOS 450波长的校正

仪器使用一段时间后需要对仪器进行波长校正，以保证测量的准确性，波长校正的操作步骤如下：

1、确认样品仓中没有任何样品和样品池。

2、根据光源选择的操作说明，将光源换为Xe（Hg）灯。

3、打开ALX-250、MM-450和PMS-450电源。

4、点击电脑中的BioKine软件图标，进入测量主界面。

5、在主界面选择Device菜单的Scanning spectrometer命令，进入光谱扫描界面。

点击按钮设置参数，在光谱测量模式里选择Fluorescence模式，

波长扫描范围200-750nm，进行光谱扫描，得出如图1所示谱图。此时检测器位置为与入射光成180度的位置，不用改为荧光的位置。

图1

6、谱图在546nm处应该出一个峰，比较546nm处的峰是否有偏差。如果超出

+/-1nm的范围，需要进行波长校正。

7、举例说明，如果在550nm处出峰，波长偏了4nm，那么就在图2所示主界面左

下栏的Ex处填入550nm，按回车键。

图2

8、点击图2主界面Install菜单的Spectrometer advanced settings命令，出现图3所

示的窗口，点击Excitation下方的Calibration按钮，进入波长校正界面，如图4。

图3

图4

在图4所示窗口里的Current wavelength处输入546，点击OK按钮，进行波长校正。

Xe 灯校准波长467nm；Xe(Hg)灯校准波长546nm。

操作完以上各步骤，波长校正完成。可进行正常的测量操作。

四、电压的调节

1.选择Xe灯，打开ALX-250稳定10分钟，将ALX-250的功率调整到150 W；

2.在打开ALX-250的同时，打开MM-450电源，机器预热10min；

3.确保空仓（样品池中无待测样品）。狭缝设置为2nm

4.点击电脑桌面上的图标，进入BioKine软件操作主界面。点击Install

的Device，出现图1 ，只选中MOS-450，点击OK。

图1

进入图2界面

，点击，

图2

输入E X值200nm，打开shutter，Hv on，Auto值为200左右。

五、MOS-450 圆二色光谱扫描操作规程

1、选择Xe灯，打开ALX-250稳定10分钟，将ALX-250的功率调整到150 W；

2、在打开ALX-250的同时，打开仪器电源，先开MM-450，再开PMS-450。机器

预热10min；

3、清洗好样品池，添加待测样品的空白溶液（如水或缓冲盐）到样品池中。

4、安装上样品池盖。

5、如果测量波长小于210nm，需要对仪器进行氮气吹扫处理。打开氮气，调整流

量计流速为1000L/h，通氮气几分钟。确认电源线插在氙灯的位置，并且氙灯已对准光路，具体操作见光源的选择操作说明。然后打开ALX-250光源开关，将氮气流量计流速设为400L/h，查看ALX-250面板显示，当氙灯能量达到150W，氙灯稳定。如果无需氮气吹扫，直接打开ALX-250电源，等待氙灯稳定后进行下一步操作。

6、点击电脑桌面上的图标，进入BioKine软件操作主界面。

7、点击图1主界面的Device/Scanning Spectrometer，进入光谱扫描界面，如图2。

图1 图2

7. 点击主界面上方的按钮，进行光谱测定参数的设定，如图3。

图3