SafraninO-staining番红固绿染色
番红O染色
番红O固绿染色液
货号M025
原理:
番红(也称作番红O或基本红2)是个用在组织学和细胞学的生物染色剂。
番红在一些染色的实验计划表中用作复染剂，将所有的细胞核染成红色。
这在革兰氏染色和内孢子染色都
试剂盒组成:
操作流程：
1. 石蜡切片脱蜡至水，自来水冲洗3min;
2. (取等量的A液B液混合，即为铁苏木素溶液。
现用现配，用多少配多少，用后丢弃。
混合后的染色液为紫黑色，染色能力强，并不易褪色。
但不易久存，24小时后失去染色能力。
)铁苏木精染色3min;自来水冲洗3min;
3. 盐酸酒精溶液分化3-5Sec；自来水冲洗3min。
4. 入固绿染色液中染色8min；
5. 在1％的醋酸中快速分化3Sec；
6. 速洗1min;
7. 入番红O染色液中染色3min（最多）
8. 95％酒精冲洗浮色；
9. 100%酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封固。
结果：
细胞核呈黑色，细胞浆、软骨下骨区呈绿色，粘蛋白、软骨及钙化软骨、肥大细胞颗粒呈橙色/红色。
染色注意事项:
1.标本固定尽可能用多聚甲醛固定.脱钙后一定要流水冲洗过夜后再脱水包埋.否则番红不
易着色.
2.如果染色不理想可以考虑在细胞核染色后用饱和苦味酸水溶液处理30min,水洗后再入
固绿染色液染色.
3.番红O固绿染色液分化很关键,步骤5、6时要快；步骤8速度要快，否则红色褪色。
常用染色液配方
实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。
将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。
将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。
番红O染色液(0.1%)
北京雷根生物技术有限公司
番红O染色液(0.1%)
简介：
番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，它常与固绿合用用于显示软骨，是基于阳离子染料粘多糖中阴离子集团的结合，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而呈绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织与骨组织区分开。
亦可用于植物标本、肥大细胞的染色等。
组成：
编号
DM0066 Storage
名称
Safranine O Stain(0.1%) 100ml RT 避光
使用说明书1分
操作步骤(仅供参考)：
1、按实验具体要求进行操作或参考Leagene改良番红O-固绿软骨染色液操作。
2、单独使用一般染1～2min。
染色结果：
软骨基质、细胞浆红色
注意事项：
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：
编号名称
DB0082改良番红O-固绿软骨染色液
DG0005糖原PAS染色液
DH0006苏木素伊红(HE)染色液
DJ0001普鲁士蓝染色液(核固红法)
DM0002姬姆萨染色液(1:9)
PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)
TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)。
改良番红O-固绿软骨染色液
改良番红O-固绿软骨染色液简介：软骨组织由软骨细胞和软骨基质组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。
软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。
改良番红O-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而呈绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织与骨组织区分开。
组成：编号名称DB00825×50mlDB00825×100mlStorage试剂(A) A1: Weigert A液25ml 50ml RT 避光A2: Weigert B液25ml 50ml RT试剂(B): 酸性乙醇分化液50ml 100ml RT试剂(C): 固绿染色液50ml 100ml RT 避光试剂(D): Safranin O stain 50ml 100ml RT 避光试剂(E): 乙酸溶液50ml 100ml RT使用说明书1份操作步骤(仅供参考)：1、标本的处理：10%福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。
2、常规脱蜡至水。
3、入新鲜配制的Weigert染液染色。
4、酸性乙醇分化液分化。
5、蒸馏水洗1min。
6、在固绿染色液内浸染，蒸馏水洗1min。
7、入Safranin O stain内浸染色，蒸馏水洗1min。
8、用乙酸溶液洗涤切片，以便去除残留的固绿，蒸馏水洗1min。
9、分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。
10、二甲苯透明，光学树脂封固。
染色结果：软骨基质深红色软骨细胞核蓝色细胞浆、肌肉、胶原纤维及骨组织呈灰绿色注意事项：1、需要显示细胞核时，尽量采用铁苏木素染色，其着色力强色调浓，一般的苏木素着色力不强。
2、Weigert染液不可预先配制后放置，配制好后一般24h后失去染色力。
3、切片在Safranin O stain中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。
有效期：6个月有效。
实验室常用染色液和试剂配方
实验室常用染色液和试剂配方【很全】实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。
将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。
将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。
实验室常用染色液配方
实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。
将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。
将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。
番红固绿染色注意事项
番红固绿染色注意事项番红固绿染色是一种常见的织物染色方法，可以使纺织品呈现出鲜艳的色彩。
在进行番红固绿染色时，需要注意一些事项，以确保染色效果和染色品质。
下面将详细介绍番红固绿染色的注意事项。
番红固绿染色的前提是要选择适合染色的纺织品。
通常，天然纤维如棉、麻以及某些合成纤维如聚酯纤维和锦纶纤维等都适合进行番红固绿染色。
而丝绸等蛋白质纤维则较难进行番红固绿染色。
因此，在进行染色前，需要确认纺织品的材质，并选择合适的染料和染色工艺。
番红固绿染色的染料选择也很重要。
番红是一种常用的红色染料，而固绿则是一种常用的绿色染料。
在选择染料时，需要考虑染色效果和染色牢度。
染色效果包括颜色的鲜艳度和均匀度，而染色牢度则是指染色后颜色的稳定性。
通常，选择具有良好染色效果和染色牢度的染料可以获得更好的染色效果。
接下来，番红固绿染色的工艺流程也需要注意。
一般而言，染色前需要对纺织品进行预处理，包括浸泡、漂白等步骤，以去除纺织品表面的杂质和污垢。
然后，根据染料和纺织品的特性，确定染色工艺参数，如染料浓度、染料浴比、染色时间等。
在染色过程中，需要控制好温度和pH值，以确保染料的充分渗透和反应。
染色后，还需要进行洗涤和定型等后处理步骤，以固定染料并提高染色牢度。
番红固绿染色还需要注意环境保护和染色工艺的安全性。
在染色过程中，应尽量减少染料和助剂的使用量，以降低对环境的污染。
同时，染色工艺应符合相关的安全规定，如合理使用染料、助剂和化学药剂，佩戴好个人防护用品等，以保障操作人员的安全。
总结起来，番红固绿染色是一种常见的织物染色方法，通过选择适合染色的纺织品、合理选择染料和染色工艺、注意环境保护和安全性等方面的注意事项，可以获得良好的染色效果和染色品质。
希望本文对大家了解番红固绿染色的注意事项有所帮助。
番红固绿染色原理植物
番红固绿染色原理植物植物是地球上最为丰富和多样化的生物类群之一，它们在自然界中扮演着至关重要的角色。
而植物的颜色也是它们的独特之处之一。
有一种名为番红固绿的染色原理，正是让某些植物呈现出鲜艳的红色或绿色的关键。
番红固绿是一种植物染色原理，它是由于植物体内一种特殊的物质所致。
这种物质被称为番红固绿素，它是一种类似于叶绿素的色素。
番红固绿素在植物体内的存在，使得某些植物的叶子、花朵或果实呈现出鲜艳的红色或绿色。
番红固绿素的合成与植物的生长和发育密切相关。
它主要通过植物的叶绿体进行合成。
叶绿体是植物细胞中的一种细胞器，它负责光合作用的进行。
光合作用是植物利用光能将二氧化碳和水转化为有机物质的过程。
在光合作用中，叶绿体会吸收太阳光的能量，并利用这些能量合成番红固绿素。
番红固绿素的合成受到多种因素的调控。
其中，光照是最为重要的因素之一。
光照越强，植物体内的番红固绿素合成就越多，植物的颜色就越鲜艳。
而如果光照不足，植物体内的番红固绿素合成就会减少，植物的颜色也会变得较为暗淡。
除了光照外，温度、水分和养分等环境因素也会对番红固绿素的合成产生影响。
适宜的温度和充足的水分可以促进植物体内的光合作用，从而增加番红固绿素的合成。
而缺乏养分或过度施肥则会影响植物的生长和发育，进而影响番红固绿素的合成。
除了番红固绿素的合成，它在植物体内还有其他重要的功能。
番红固绿素可以吸收光能，并将其转化为化学能，供植物进行代谢活动所需。
此外，番红固绿素还可以参与光合作用中的电子传递过程，进一步促进光合作用的进行。
番红固绿染色原理植物主要包括一些常见的红色或绿色植物。
比如，红叶李、红枫、红叶石楠等红色植物，它们的叶子呈现出鲜艳的红色，给人一种美丽而浪漫的感觉。
而绿叶植物中，一些具有鲜绿叶色的植物也是番红固绿染色原理的体现，比如绿萝、绿竹、绿绒蒿等。
番红固绿染色原理植物是通过合成番红固绿素而呈现出鲜艳的红色或绿色的植物。
番红固绿素的合成受到光照、温度、水分和养分等环境因素的调控。
不同年龄大鼠胸椎椎体生长板的组织学观察及增殖能力测定
不同年龄大鼠胸椎椎体生长板的组织学观察及增殖能力测定李涛;陈建庭;朱青安;许子星;查丁胜;刘富强;巫松辉;吴骞;肖文德【摘要】Objective To compare the histological features of the thoracic vertebral body growth plates (VBGPs) of rats at different ages and assess their proliferative capability. Methods The thoracic VBGPs obtained from rats aged 1 day and 1, 4, 8, 16 and 28 weeks were identified using safranin O-fast green staining, and the height of the hypertrophic zone, proliferative zone, and resting zone were measured. The chondrocytes were isolated from these VBGPs with a modified trypsin-collagenase type Ⅱ digestion method for primary culture in vitro. The expressions of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) mRNA and protein was detected by real time-PCR and Western blotting, respectively. Results The 1-day- and 1-week-old rats showed significantly greater hypertrophic zone and proliferative zone in the VBGPs than older rats (P<0.01); the proliferative zone was significantly greater in rats aged 4 weeks than in those aged 28 weeks (P＜0.05). The resting zone was obviously greater in rats aged 1 day and 1 week than in older rats (P＜0.05), and also greater in rats aged 4 weeks than in those aged 16 and 28 weeks (P<0.05). Obvious ossification in the resting zone occurred at 16 weeks, and most of the resting zone became ossified at 28 weeks. The expression of PCNA decreased at both the mRNA and protein levels as the rats grew. Conclusion The 3 zones of VBGPs are greater in rats aged 1 day and 1 week than in older ones. Ossification in the resting zone begins at 16 weeks, and till 28 weeks, mostof the resting zone is ossified. The proliferation ability of VBGP chondrocytes decreases with the increase of age of the rats.%目的比较不同年龄大鼠胸椎椎体生长板的组织学差异并对不同年龄大鼠椎体生长板软骨细胞的增殖能力进行测定.方法采用番红O-固绿染色法对1 d及1、4、8、16、28周龄大鼠胸椎椎体生长板进行染色鉴定,测定生长板软骨肥大区、增殖区、静止区的高度.采用改良的胰酶和Ⅱ型胶原酶序贯消化法对以上年龄阶段大鼠胸椎椎体生长板软骨细胞进行原代培养.采用实时定量PCR检测不同年龄大鼠胸椎椎体生长板体外培养软骨细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的基因表达水平,采用Western blot法测定不同年龄大鼠胸椎椎体生长板体外培养软骨细胞PCNA蛋白的表达.结果 1 d及1周大鼠肥大区和增殖区明显高于其他年龄组(P＜0.01);4周大鼠增殖区高于28周大鼠(P ＜0.05);1 d及1周大鼠静止区高于其他年龄组(P＜0.05),4周大鼠静止区高于16周、28周大鼠(P＜0.05).16周大鼠椎体生长板静止区内开始出现骨化现象,28周龄大鼠椎体生长板静止区大部分出现骨化现象.PCNA在基因和蛋白水平的表达随年龄增加而降低.结论 1 d及1周大鼠椎体生长板各区的高度明显高于年龄较大的大鼠.16周大鼠椎体生长板静止区内开始有骨长入,28周龄大鼠椎体生长板静止区大部分出现骨化现象.随年龄增加椎体生长板软骨细胞的增殖能力逐渐下降.【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2011(031)002【总页数】5页(P353-356,364)【关键词】生长板;脊柱;软骨细胞;增殖细胞核抗原【作者】李涛;陈建庭;朱青安;许子星;查丁胜;刘富强;巫松辉;吴骞;肖文德【作者单位】南方医科大学南方医院脊柱骨病科,广东,广州,510515;南方医科大学南方医院脊柱骨病科,广东,广州,510515;南方医科大学南方医院脊柱骨病科,广东,广州,510515;南方医科大学南方医院脊柱骨病科,广东,广州,510515;南方医科大学南方医院脊柱骨病科,广东,广州,510515;南方医科大学南方医院脊柱骨病科,广东,广州,510515;南方医科大学南方医院脊柱骨病科,广东,广州,510515;南方医科大学南方医院脊柱骨病科,广东,广州,510515;南方医科大学南方医院脊柱骨病科,广东,广州,510515【正文语种】中文【中图分类】R336脊柱椎体生长板是生长发育期特有的结构，对脊柱的纵向生长和发育成熟起到重要作用。
软骨细胞特殊染色技术的比较与应用
软骨细胞特殊染色技术的比较与应用于斐;曾晖;于红燕;雷鸣;袁昊;肖德明【摘要】Objective To compare the advantages and values of several special staining methods of chondrocytes . Methods Twelve 7-day old healthy C57BL/6J mice were killed to obtain the cartilage tissue of the knee joint in order to isolate the chondrycytes .Type II collagen was used to assess the chondrocytes .Then the chondrocyte climbing slices were prepared.The materials were fixed, and HE staining, Safranin O-fast green staining, SA-β-gal staining and immunohistochemical staining of Type II collagen were performed and compared .Results HE staining showed clear morphology of the chondrocytes .The cell nuclei were stained blue and the cytoplasm was pink .Safranin O-fast green staining showed that the nuclei were pink and the cytoplasm green .SA-β-gal staining showed that the aging cells were green while the young cells werecolorless .Immunohistochemical staining of type II collagen showed the distribution of type II collagen and they were stained brown while the cell nuclei were blue .Conclusions HE staining and safranin O-fast green staining can provide more information than the other staining techniques .SA-β-gal staining is useful in the analysis of aging chondrocytes .Immunohistochemical of type II collagen can be used to study type II collagen .%目的：探讨多种特殊染色技术在软骨细胞中的染色规律及其应用价值。
常用染色液的配方
一、常用染色液的配制⒈碘-碘化钾I2-KI溶液能将淀粉染成蓝紫色,蛋白质染成黄色,也是植物组织化学测定的重要试剂;配方：碘化钾2g ；蒸馏水300ml ；碘1g先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,待全溶解后再加碘,振荡溶解后稀释至300mL,保存在棕色玻璃瓶内;用时可将其稀释2-10倍,这样染色不致过深,效果更佳;⒉苏丹ⅢsudanⅢ或Ⅳ能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色,是著名的脂肪染色剂;配方：1苏丹III或苏丹Ⅳ干粉；95％酒精10ml ；过滤后再加入10ml甘油2先将苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中,再加入70%酒精50ml;3苏丹III 70%乙醇的饱和溶液;⒊1％醋酸洋红aceto carmine 酸性染料,适用于压碎涂抹制片,能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色;配方：洋红1g ；45％醋酸100ml煮沸2h左右,并随时注意补充加入蒸馏水到原含量,然后冷却过滤,加入4％铁明矾溶液1～2滴不能多加,否则会发生沉淀,放入棕色瓶中备用;⒋改良苯芬品红染色液Carbol fuchsine 核染色剂;配制步骤：先配成三种原液,再配成染色液;原液A：3g碱性品红溶于100ml 70％酒精中;原液B：取原液A10ml加入到90ml 5％石炭酸水溶液中;原液C：取原液B 55ml,加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林38％的甲醛;原液A和原液C可长期保存,原液B限两周内使用染色液：取C液10～20ml,加45％冰醋酸80～90ml,再加山梨醇1~,配成10％～20％浓度的石炭酸品红液,放置两周后使用,效果显著若立即用,则着色能力差;适用范围：适用于植物组织压片法和涂片法,染色体着色深,保存性好,使用2～3年不变质;山梨醇为助渗剂,兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色,但效果较差;⒌中性红neutral red溶液用于染细胞中的液泡,可鉴定细胞死活;配方：中性红；蒸馏水100ml使用时再稀释10倍左右;⒍曙红Y伊红,eosin Y酒精溶液常与苏木精对染,能使细胞质染成浅红色,起衬染作用;配方：曙红；95％酒清100ml也常用于95％酒精脱水时,加入少量曙红溶液,其目的是在包埋、切片、展片、镜检时便于识别材料;⒎钌红ruthenium red染液钌红是细胞胞间层专性染料,其配后不易保存,应现用现配;配方：钌红5～10mg ；蒸馏水25-50ml⒏龙胆紫gentian violet 为酸性染料,适用于细菌涂抹制片;配方：龙胆紫~1 g ；蒸馏水100ml⒐苯胺兰aniline blue溶液为酸性染料,对纤维素细胞壁、非染色质的结构、鞭毛等,尤其是染丝状藻类效果好;还多用于与真曙红作双重染色,对于高等植物多用于与番红作双重染色; 配方：苯胺兰1 g ；35％或95％酒精100ml⒑间苯三酚phloroglucin溶液用于测定木质素;配方：间苯三酚5g ；95％酒精100ml注：此溶液呈黄褐色即失效;⒒橘红Gorange G酒精溶液为酸性染料,染细胞质,常作二重或三重染色用;配方：橘红G 1g ；95％酒精100ml⒓番红safranin O为碱性染料,适用于染木化、角化、栓化的细胞壁,对细胞核中染色质、染色体和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色;并能与固绿、苯胺兰等作双重染色,与橘红G、结晶紫作三重染色;配方：1番红水溶液番红或1 g ；蒸馏水100ml2番红酒精溶液番红或1 g ；50％或95％酒精100ml3苯胺番红酒精染色液甲液番红5 g +95％酒精50ml乙液苯胺油20ml +蒸馏水450ml将甲、乙二溶液混合后充分摇均匀,过滤后使用;⒔固绿fast green又称快绿溶液;为酸性染料,能将细胞质,纤维素细胞壁染成鲜艳绿色,着色很快,故要很好的掌握着色时间;配方：1固绿酒精液固绿g ；95％酒精100ml2苯胺固绿酒精液固绿1 g ；无水酒精100ml ；苯胺油4ml配后充分摇匀,过滤后使用;现配现用效果好;⒕苏木精hematoxylin染液苏木精是植物组织制片中应用最广的染料,是苏木科植物苏木的心材提取出来的;它是很强的细胞核染料,而且可以分化出不同颜色;配方很多,现举海登汉氏Heidenhain's苏木精染色液,又称铁矾苏木精染色液;配方：甲液媒染剂：硫酸铁铵铁明矾2-4g ；蒸馏水100ml必须保持新鲜,最好临用之前配制乙液染色剂：苏木精；95％酒精10ml；蒸馏水90ml配制步骤：1将苏木精溶于酒精中,瓶口用双层纱布包扎,使其充分氧化通常在室内放置两个月后方可使用;2加入蒸馏水,塞紧瓶口,置冰箱中可长期保存;切片需先经甲液媒染,并充分水洗后才能以乙液染色,染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度;铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂,但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合;⒖亚甲基蓝染液常用于细菌、活体细胞等的染色;取亚甲基蓝,溶于100ml蒸馏水中即成;⒗詹纳斯绿BJanus green B染液将绿溶于100ml蒸馏水,配成饱和水溶液;用时需稀释;稀释的倍数应视材料不同而异;⒘硫堇染液取克硫堇也称劳氏青莲或劳氏紫粉末,溶于100ml蒸馏水中,即可使用;使用此液时,需要用微碱性自来水封片或用1%NaHCO3水溶液封片,能成多色反应;18.黑色素液水溶性黑素10g,蒸馏水100mL,甲醛福尔马林;可用作荚膜的背景染色;19.墨汁染色液国产绘图墨汁40mL,甘油2mL,液体石炭酸2mL;先将墨汁用多层纱布过滤,加甘油混匀后,水浴加热,再加石炭酸搅匀,冷却后备用;用作荚膜的背景染色;20.吕氏Loeffier美蓝染色液A液：美蓝methylene blue,又名甲烯蓝,95%乙醇30mL;B液：;混合A液和B液即成,用于细菌单染色,可长期保存;根据需要可配制成稀释美蓝液,按1∶10或1∶100稀释均可;21.革兰氏染色液1结晶紫cristal violet液：结晶紫乙醇饱和液结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中20mL,1%草酸铵水溶液80mL;将两液混匀置24h后过滤即成;此液不易保存,如有沉淀出现,需重新配制;2芦戈Lugol氏碘液：碘1g,KI 2g,蒸馏水300mL;先将KI溶于少量蒸馏水中,然后加入碘使之完全溶解,再加蒸馏水至300mL,即成;配成后贮于棕色瓶内备用,如变为浅黄色能使用;395%乙醇：用于脱色,脱色后可选用以下4或5的其中一项复染即可;4稀释石炭酸复红溶液：碱性复红乙醇饱液碱性复红1g,95%乙醇10mL,5%石炭酸90mL10mL,加蒸馏水90mL;5番红溶液：番红Osafranine O,又称沙黄O,95%乙醇100mL,溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中,用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可;以上染色液配合使用,可区分出革兰氏染色阳性G+ 或阴性G- 细菌,前者蓝紫色,后者淡红色;22.齐氏Ziehl石炭酸复红液：碱性复红溶于95%乙醇10mL中为A液；溶液100mL为B液;混合A、B液即成;23.姬姆萨Giemsa染液1贮存液：称取姬姆萨粉,甘油33mL,甲醇33mL;先将姬姆萨粉研细,再逐滴加入甘油,继续研磨,最后加入甲醇,在56℃放置1-24h后即可使用;2应用液临用时配制：取1mL贮存液加磷酸缓冲液即成;也可以贮存液∶甲醇=1∶4的比例配制成染色液;24. 1%瑞氏Wright's染色液称取瑞氏染色粉6g,放研钵内磨细,不断滴加甲醇共600mL并继续研磨使溶解;经过滤后染液须贮存一年以上才可使用,保存时间愈久,则染色色泽愈佳;二、常用试剂的配制一显微镜镜头清洁剂将乙醚和乙醇按7∶3混合,装入滴瓶备用;用于擦拭显微镜镜头上油迹和污垢等注意瓶口必须塞紧,以免挥发;二固定液1.福尔马林-乙酸-酒精固定液FAA,又称万能固定剂福尔马林38％甲醛5ml＋冰乙酸5ml＋70％酒精90 ml,可用于固定植物的一般组织,但不适用于单细胞及丝状藻类;幼嫩材料用50％酒精代替70％酒精,可防止材料收缩；还可加入5ml 甘油丙三醇以防蒸发和材料变硬;FAA 可兼作保存剂;2.福尔马林-丙酸-酒精固定液FPA福尔马林5ml＋丙酸5ml＋70％酒精90ml,用于固定一般的植物材料,通常固定24h,效果比FAA 好,并可长期保存;3.福尔马林-丙酸-氯仿固定液卡诺固定液配方一：无水酒精3份＋冰乙酸1份;配方二：无水酒精6份＋冰乙酸1份＋氯仿3份;是研究植物细胞分裂和染色的优良固定液,材料固定后,用95％和85％的酒精浸洗,清洗2-3次,也可转入70％酒精中保存备用;4.甘油-酒精软化剂甘油1份＋50％或70％酒精1份,适用于木材的软化,将木质化根、茎等材料排除空气后浸入软化液中,时间至少一周或更长一些,也可将材料保存于其中备用;5. 铬酸-乙酸固定液根据固定对象的不同,可分强、中、弱3种不同的配方：弱液配方：10％铬酸ml＋10％乙酸ml＋蒸馏水;中液配方：10％铬酸7 ml+10％乙酸10 ml＋蒸馏水83 ml;强液配方：10％铬酸10 ml+10％乙酸30 ml＋蒸馏水60 m1;弱液用于固定较柔嫩的材料,例如藻类、真菌类、苔药植物和蕨类的原叶体等,固定时间较短,一般为数小时,最长可固定12-24 h,但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟到1h;中液用作固定根尖、茎尖、小的子房和胚珠等,固定时间12-24 h或更长;强液适用于木质的根、茎和坚韧的叶子、成熟的子房等;为了易于渗透,可在中液和强液中另加入2％的麦芽糖或尿素;固定时间12-24 h或更长;三离析液1. 铬酸-硝酸离析液铬酸为三氧化铬的水溶液：1 10 ml铬酸；2 10 ml浓硝酸;将上述两液等量混合均匀后再使用;适于对导管、管胞、纤维等木质化的组织进行解离时使用;2. 盐酸-酒精固定离析液将浓盐酸、95％酒精等量混合备用,一般用于离析根尖细胞;四解离液常用于根尖等细胞的涂片,它能使细胞壁中层果胶质溶解,而使细胞分开;1．盐酸酒精配方:95%酒精1份,浓盐酸1份;二者混合即成;2．盐酸溶液11 mol／L盐酸配方：浓盐酸比重用蒸馏水定容1 000ml2／L盐酸配方：浓盐酸比重用蒸馏水定容1 000m1盐酸水解时间对染色效果影响很大,水解时间短,易着色但较难压片；水解时间长,染色慢而色淡；超过20min或水解温度过高,往往染色极淡,或染不上色;各种材料最合适的时间有差别,一般来说,大染色体材料水解时间可较长,小染色体材料宜短;改用／L盐酸于60℃恒温下水解10～15min,对各种类型材料都能获得细胞分离和染色合适的较好效果;五预处理液用于根尖压片的前处理,能使细胞有丝分裂染色体缩短;1．8-羟基奎林水溶液称取8-羟基奎林溶于1 000ml蒸馏水中;2．对二氯代苯饱和水溶液将对二氯代苯加入蒸馏水中搅拌至不再溶解为止,即成饱和水溶液;六各级酒精的配制由于无水乙醇价格较高,故常用95％的酒精配制;配制方法很简便,用95％的酒精加上一定量的蒸馏水即可;可按下列公式推算：原酒精浓度值95％－最终酒精浓度值×100＝所需加水量最终酒精浓度95％酒精用量蒸馏水量85％85ml 10ml70％70ml 25ml50％50ml 45ml30％30ml 65ml七其他试剂1. 生理盐水取NaCl 溶于100mL蒸馏水中;用于两栖类动物;2. 1%硝酸银溶液称取1克硝酸银,溶于100毫升蒸馏水中即可;3.碘酒取碘2g和KI ,先加入少量的75%乙醇搅拌,待溶解后再用75%乙醇稀释至100mL4. 树胶封固剂将固体的加拿大树胶块,溶解于二甲苯或正丁醇中,浓度要适当注意绝对不能混入水或酒精,是玻片标本好的封固剂;也可用人工合成的中性树胶代替;5. 明胶粘贴剂明胶1-2 g＋石碳酸苯酚2g＋蒸馏水100ml＋甘油15ml;配法：先将蒸馏水加温至30-40℃,慢慢加入明胶,待全部溶解后,再加入2g苯酚和15ml甘油,搅拌至全溶为止,然后用纱布过滤,滤液贮于瓶中备用;6.标本消毒剂用于腊叶标本消毒,常用％~1%升汞酒精溶液95％酒精1 000ml+4 g升汞,浸泡标本～2min;升汞有剧毒,不要弄到手上,消毒后注意洗手;。
非蛋白氮的定量检验
非蛋白氮的定量检验在非蛋白氮定量的检测方法中，比较常用的方法是硫酸铜沉淀法和氨基酸测定法。
除此之外，本文根据非蛋白氮的组成结构的不同，采用水解蒸馏法对样品中的非蛋白氮进行检验。
一、硫酸铜沉淀法根据非蛋白氮的化学性质来看，大部分溶于水，一部分在常温下不溶水，但在沸水中溶解。
根据此种性质，可以先将样品煮沸，用硫酸铜将样品中的蛋白质沉淀下来，由于非蛋白氮已经溶于水，故可用过滤方法将其与样品中的蛋白质分离。
在过滤时，水的温度一定不能太低，否则象双缩脲一类的物质会因为不溶于常温水而不能被过滤掉。
用此种方法测定出的蛋白质含量称为样品的真蛋白质。
但实际上，此种方法有很大的局限性。
如果非蛋白氮不溶于沸水，或者将一般的非蛋白氮微囊化，此种方法测出的结果会与样品中的实际真蛋白有很大的差异。
二、氨基酸测定法为了真正能够判定样品中是否掺有非蛋白氮，需测定样品中的氨基酸含量。
无论采用经典的氨基酸自动分析仪分析（柱后衍生），还是采用比较快捷的HPLC分析（往前衍生），将所测定的氨基酸总量相加得到一个总氨基酸数值，然后将此数值乘以6.25为M，和用凯氏定氮法测定的粗蛋白质N相比较，M至少为N的85％（M可能略大于N）。
如果低于此数值，则可以判定该样品中掺有非蛋白氮。
三、水解蒸馏法1、原理：非蛋白氮主要包括五类：尿素及其衍生物类、氨态氮类、铵类、肽类及其衍生物、动物粪便及其它废弃物类。
如果在原料中掺有氨态氮类、铵类和粪便比较容易判断（可采用硫酸铜沉淀法加镜检），一般很少将肽类及其衍生物掺入其中，剩下比较难鉴别的就是尿素及其衍生物。
尿素和尿素衍生物经过强酸或强碱水解为氨盐或氨和其它的物质，在强碱的条件下可以蒸馏出氨气，原料中的蛋白质经过水解成氨基酸盐，氨基酸盐在强碱条件下稳定，从而可将非蛋白氮和真蛋白氮进行分离。
2、仪器和设备：酒精喷灯，试管和其它常用的仪器。
3、试剂与溶液：6mol/l 的盐酸溶液和其它常用的试剂。
4、测定方法：本文只列出用酸水解的方法。
实验染色方法
一．番红—苯胺蓝（或固绿）二重染色法《福建农林大学生物学实验教学中心生物学实验讲义》(十) 脱蜡和染色将已干的玻片标本，插人盛有二甲苯的染色缸中，先脱蜡10～15 分钟，然后进行染色。
高等植物的根、茎、叶组织切片，常用番红—固绿二重染色法。
染色结果是木质化的细胞壁和细胞核被染成红色，薄而具有纤维素的细胞壁及细胞质被染成绿色。
1．染色液的配方：番红：番红(safranino) 1g 70％酒精100ml固绿：固绿(pastgreen) 1g 95％酒精100ml2．二重染色步骤：经脱蜡的玻片标本→1／2 二甲苯+1／2 纯酒精(3～5min)→纯酒精(3～5min)→95％酒精(3～5min)→85％酒精(3～5min)→70％酒精(3～5min)→番红(2～24h)→85％酒精(约0.5～1min)→95％酒精(约0.5～1min)→固绿(约0.5～1 min)→无水酒精(约1min)→1／2 无水酒精+l／2二甲苯(约2min)→二甲苯(约3min)→二甲苯(约5～30min)。
固绿着色很快，当玻片材料刚刚全面转绿，立即停止染色，并迅速通过纯酒精冲洗分色，最后进人二甲苯中。
二、PAS染色方法《PAS染色方法及应用》付银锋 20081 材料与方法1．1 实验材料新鲜小白鼠肝脏、肾脏标本各30例1．2 主要试剂1．2．1 AAF固定液又称酒精醋酸福尔马林混合固定液，其配方：无水乙醇80 mL，冰醋酸5 mL、甲醛10 mL。
1．2．2 Carnoy固定液氯仿300 mL，冰醋酸100mL，95％酒精600 mL。
1．2．3 过碘酸溶液 0．5 g过碘酸(HIO )溶于100mL蒸馏水或者70％酒精溶液中，或者按如下配方配制：过碘酸0．8 g，95％乙醇70 mL，醋酸钠0．27 g，水20 mL。
待溶解后置于4~C冰箱避光保存。
1．2．4 无色品红液(Sehif氏液) 在三角烧内加入蒸馏水500 mL，煮沸后，在保持微沸的情况下，加入碱性品红2．5 g，并不断摇动约5 min(勿使之沸腾)，使碱性品红彻底溶解(溶解液为深红色)。
大鼠膝关节软骨不同染色方法的差异
大鼠膝关节软骨不同染色方法的差异高改霞;卫小春;李凯;卫建平【摘要】背景:国内外学者对关节软骨对软骨进行了大量研究,需要用不同的染色方法对研究结果进行分析,但将多种染色方法同时应用于软骨研究及探讨染色机制的较少.目的:探讨不同染色方法对大鼠膝关节软骨染色的优缺点.方法:取正常大鼠膝关节软骨,行苏木精-伊红、番红O、阿尔辛蓝、甲苯胺蓝、番红-阿尔辛蓝、番红-固绿染色,观察软骨结构. 结果与结论:苏木精-伊红、番红O、甲苯胺蓝染色均可观察到潮线,分别为蓝色、红色和蓝色,番红O和甲苯胺蓝染色强度朝潮线方向增强,番红O染色对潮线的观察优于其他染色方法.苏木精-伊红染色关节软骨4层结构清晰,软骨细胞呈柱状排列,基质呈均匀呈嗜碱性染色.番红O染色显示4层结构层次清楚,基质深层染色最红.阿尔辛蓝染色显示,pH 1.0时软骨细胞周边部分被阿尔辛蓝强烈染色,pH 2.5时阿尔辛蓝染色较深.甲苯胺蓝染色显示组织结构层欠清,胞核染色清晰,胞浆几乎不着色,基质呈淡蓝紫色.番红-阿尔辛蓝染色显示软骨表面及基质呈不均一的红色,深层颜色较深,软骨细胞周围蓝染;番红-固绿染色显示软骨基质呈均匀的红色,软骨下骨呈绿色,软骨组织与骨组织分对比鲜明.提示上述各种方法均可观察到软骨的四层结构,但以番红O染色显示软骨各层和潮线结构最佳;苏木精-伊红染色观察软骨细胞形态变化较其他方法清楚.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2010(014)024【总页数】5页(P4385-4389)【关键词】关节软骨;染色方法;优缺点;大鼠;膝关节;软骨组织工程【作者】高改霞;卫小春;李凯;卫建平【作者单位】山西医科大学第二医院病理科,山西省太原市,030001;山西医科大学第二医院骨科,山西省太原市,030001;山西医科大学第二医院骨科,山西省太原市,030001;山西医科大学第二医院病理科,山西省太原市,030001【正文语种】中文【中图分类】R3180 引言关节软骨位于活动关节的表面，是一种高度特异的连接组织，仅有少量的细胞分布[1]。
番红染色原理
番红染色原理
番红染色原理是一种化学染色技术，常用于组织学研究中对细胞核的染色。
该原理是基于番红（Safranin）这种染料与细胞
核内的DNA结合形成染色颗粒的特性。
番红是一种碱性染料，它呈红色结晶状，并且具有亲核性。
在细胞学研究中，番红通常与其他抗体或染料配合使用，以显示细胞核的位置和形态。
番红染色的原理是利用番红与DNA的
亲合作用，使细胞核内的DNA与番红结合成深红色染色颗粒。
番红染色的步骤通常包括固定、脱脂、染色和封片等操作。
首先，需要对细胞样本进行固定处理，以保持细胞的形态和结构不变。
然后，对细胞进行脱脂处理，去除细胞内的脂质和蛋白质等杂质，以提高染色效果。
接下来，将准备好的番红染料溶液加入细胞样本中，使番红与细胞核内的DNA结合形成染色
颗粒。
最后，将染色后的细胞样本制作成封片，以防止染色颗粒脱落或损坏。
使用番红染色技术可以清晰地显示细胞核的形态和位置，有助于研究细胞的结构和功能。
在组织学研究中，番红染色可以用于染色切片样本，观察组织中各种细胞核的形态、分布和数量，从而提供关于组织结构和功能的信息。
总之，番红染色原理是基于番红与DNA的亲合作用，通过染
色颗粒的形成清晰显示细胞核的染色技术。
OPG基因与小鼠腰椎间盘退变关系研究论文
OPG基因与小鼠腰椎间盘退变的关系研究【摘要】目的：比较骨保护素（opg）基因敲除（opg-/-）小鼠与正常（wt）小鼠腰椎间盘退变的关系。
方法：分别取出生后4w、8w、12w的opg-/-小鼠及正常对照组小鼠的l4/5椎间盘，运用番红o-固绿染色法观察l4/5椎间盘形态学变化，测量椎间盘及软骨终板高度。
应用免疫组化染色观察椎间盘聚集蛋白聚糖（aggrecan）基因表达量的变化。
结果：1.小鼠腰椎椎间盘番红o-固绿染色结果：opg-/-小鼠的椎间盘软骨终板在第8w及第12w 时可观察到退化改变：软骨终板排列不规则，并有骨髓腔组织进入软骨终板及外层纤维环。
2.免疫组化染色结果显示：各年龄点opg-/-组小鼠椎间盘aggrecan的蛋白表达均低于同龄wt 组小鼠。
3. opg-/-小鼠软骨终板及椎间盘高度在4周时较正常对照组无明显变化，随着年龄的增长，第8周时较对照组降低，第12周时高度下降最明显（p 1 材料和方法1.1 实验材料：实验动物：本研究所用实验动物为opg基因敲除纯合子小鼠（opg knock-out type mouse， opg-/-）及野生型c57/bl（wild type mouse， wt）小鼠，实验动物均由上海南方模式生物科技发展有限公司培育。
实验分组方法：将24只opg-/-小鼠，按饲养终点随机分为4w、8w、12w组，每组8只，24只同龄的c57/bl小鼠也采用相同的分组方法作为正常对照。
实验动物饲养于上海交通大学医学院新华医院实验动物中心清洁级动物室（室温控制于（23 ±1）℃，湿度56， 12 h间隔照明，定期紫外线消毒与通风）。
设备与试剂：奥林巴斯bx51显微图像分析系统（olympus bx51 dp72； japan）。
一抗（鼠抗多克隆） abbiotec1.2 实验方法：将每个观察终点的opg-/-小鼠及对照组wt小鼠在相同条件下同时处死，在严格无菌条件下分离l4-5段腰椎，去除腰椎周围多余的软组织后，立即泡入4%多聚甲醛，置于4℃环境中固定24小时，流水冲洗后转入脱钙液处理，完成脱钙后流水冲洗，再转入75%酒精固定，作为组织学评价及免疫组化染色标本的标本。