植物制片的染色及显微化学鉴定方法
中药显微鉴定
3 粉末特殊处理制片方法
含多量淀粉的药材粉末 大量淀粉粒的存在会 影响观察、描绘及摄影等效果。取一部分粉末于 试管中加水煮沸，使淀粉粒糊化而溶解，放置或 用离心机使所需细胞、组织下沉管底，用长吸管 将沉淀物吸出供制片观察。
含多量油类的药材粉末 进行脱脂以除去大部 分油脂，取少许粉末于小烧杯中，加氯仿少许搅 拌浸渍，过滤，在滤纸上再加少许氯仿洗涤粉末 即可。也可直接将粉末水洗，用柔软的毛刷轻轻的刷洗表面。 杀生 固定 保存 将需要制片材料迅速杀死，使组织保持原生活 状态，一般以渗透力较强的的药剂作杀生剂较好。 固定液 ⑴ FAA固定液 38%甲醛：冰醋酸：70%乙醇 5：5:95
用于根、茎、叶、花药、子房的固定，固定时间24h ⑵ FPA固定液 38%甲醛：丙酸：70%乙醇 5：5:95 ⑶卡诺氏固定液 乙醇：冰醋酸 3:1
冷冻切片
仪器：冷冻切片机 包埋材料：水、胶水 切片温度：-20℃ 优点：节省时间、方便快捷。
注意事项：
包埋时，不能有气泡，否则会有空洞。
一定要将材料放直立胶水的中央，使材料完全被 胶水包裹。并且外围胶水的厚度要大于等于材料 的半径，有利于粘片。
不宜将材料和胶水冻的太硬，否则在切片过程中 会造成中间材料的破损。
用于根尖、花药、子房的固定，固定不超过时间24h 材料处理时，注意不能影响要观察的显微鉴别特征。如要观察菊 糖、粘液等在软化、切片、装片等过程中，均不可与水接触，以 免溶解消失；要观察挥发油、树脂等，则不可与高浓度乙醇或其 它有机溶媒接触。
3 脱水
脱水常用乙醇、二氧六环、正丁醇、叔丁醇、丙酮等
目的 除去组织中的水分，使细胞变硬； 便于包埋物进入组织及细胞，便于切片； 脱水后的组织再经过透明，便于观察。
植物显微技术
4、透 明
二甲苯是应用较广的一种透明剂，透明力强，但缺点是材料在其 中停留过久，容易发生收缩、变脆、变硬，常用氯仿（三氯甲烷）代 替二甲苯。
①将氯仿配制成下列不同的浓度,2/3乙醇+1/3氯仿、1/2乙醇+1/2 氯仿、1/3乙醇+2/3氯仿、纯氯仿，事先配好，随时取用。
②为了避免组织收缩，材料经无水乙醇脱水后，不能直接移入纯氯 仿中，而必须经过以上几个级度逐渐置换，才能进入纯氯仿中。
③材料在每级中停留时间，视组织块的大小而定，一般30分钟—2 小时，在纯氯仿中应更换2次，再用纯二甲苯更换2次（20分钟1次）。
14
5、浸 蜡
（1）将石蜡配成下列浓度：2/3二甲苯+1/3石蜡、1/2二甲苯+1/2石蜡、1/3 二甲苯+2/3石蜡、纯石蜡，事先配好，随时取用。 （2）材料放入2/3二甲苯+1/3石蜡中，将其放入36—40℃的温箱中，时间2 小时。 （3）材料放入1/2二甲苯+1/2石蜡中，温度控制在45—55℃，时间2小时。 （4）材料放入1/3二甲苯+2/3石蜡中，温度控制在50—60℃，时间2小时。 （5）材料放入纯石蜡1、纯石蜡2中，温度控制在50—60℃，时间各2小时。 浸蜡应在恒温箱中进行,恒温箱的温度要适宜，太高，会使材料收缩，太低 ，石蜡会冻结而不能透入组织。
植物显微技术
光学显微镜
透射电子显微镜
扫描电子显微镜
1
2
生物显微镜
单式显微镜
放大镜
显
微
普通光学显微镜 研究显微镜（与数码技术结合）
镜
红外显微镜
的
荧光显微镜 离心显微镜
种
复式显微镜 偏光显微镜
类
显微鉴别标准操作规程
显微鉴别标准操作规程中药材、中药成品1 检验依据：《中华人民共和国药典》2010年版（一部）2 定义：通常是借助显微镜，应用植物细胞、组织学和矿物晶体光学等知识鉴别中药材或中成药的一种方法，3 检验操作方法(临时制片法)3.1 仪器和用具3.1.1 仪器生物光学显微镜、显微描绘器、滑走切片机或徒手圆筒生物切片器、镜台测微尺、离心机。
3.1.2 用具放大镜、刀片、解剖刀、镊子（包括粗镊及眼科弯镊与直镊）、剪（眼科剪与手术剪）、解剖针。
载玻片、盖玻片吸湿器（即玻璃干燥器改装蒸馏水加微量苯酚，潮气润湿药材样品用）培养皿或小烧杯（放切片用，切片后的处理均可在其中进行）、酒精灯、铁三角架、石棉网、滴瓶、试管、试管架、滴管、玻璃棒（粗与细）、乳钵、量筒毛笔（从刀上刷取切片用）铅笔（HB、4H、6H绘图用）带盖搪瓷盘（装切片标本用）纱布、吸水纸（滤纸）、火柴等。
3.2 试液3.2.1 水合氯醛试液：取水合氯醛50g，加水15ml与甘油10ml使溶解，即得。
此液为透化剂，可使干缩的细胞壁膨胀而透明，并能溶解淀粉粒、树脂、蛋白质及挥发油等。
3.2.2 甘油醋酸试液（斯氏液）：取甘油、冰醋酸与水各等份，混合即得。
此液专用于观察淀粉形态，可使淀粉不膨胀变形，便于测量其大小。
3.2.3 甘油-乙醇溶液：取甘油1份，50%乙醇1份，混合即得。
此液为封藏液，用于保存植物材料及临时切片，有软化组织的作用。
3.2.4 苏丹Ⅲ试液取苏丹Ⅲ0.01g，加90%乙醇5ml溶解后，加甘油5ml，摇匀即得。
本液应置棕色玻璃瓶内保存，在2个月内应用。
此液可使木栓化、角质化细胞壁及脂肪油、挥发油、树脂等染成红色或淡红色。
3.2.5 钌红试液：取10%醋酸钠溶液1～2ml，加钌红适量使呈酒红色即得。
本液应临用新制。
此液可使粘液染成红色。
3.2.6 间苯三酚试液：取间苯三酚1g，加90%乙醇100ml使溶解，滤过即得。
应置棕色玻璃瓶内，在暗处保存。
植物显微技术
一、名词解释1.B-染色体：当细胞中多出一个或几个小形染色体时，应考虑是否是B染色体（或称超数染色体）。
2.分带：用特殊的染色方法，使染色体产生明显的色带（暗带）和未染色的明带相间的带型，形成不同的染色体个性，以此作为鉴别单个染色体和染色体组的一种手段。
分带类型(方法)包括Giemsa分带（包括C带、N带、G带等）和荧光分带（包括Q带、H带、D带、R带、AMD+DAPI带等）3.随体：次缢痕末端通常相连一个圆形或椭圆形的突出体，称为随体。
带型：借助细胞学的特殊处理程序，使染色体显现出深浅不同的染色带，每条染色体都有固定的分带模型，即带型。
4.核型：一般指体细胞染色体在光学显微镜下所有可测定的表型特征的总称。
5.NOR（核仁组成区）：即细胞中某一对或几对染色体上负责组织核仁的区域，它含有rDNA 基因，能合成Rrna。
6.联会复合体（SC）：是减数分裂偶线期两条同源染色体之间形成的一种结构，主要由侧生组分、中间区和连接两者的SC纤维组成，它与染色体的配对、交换和分离密切相关。
7.单价体：减数分裂时因没有同源染色体而不能联会的单条染色体。
8.二价体：在减数分裂中联会结果是没对同源染色体形成一个二价体9.多倍体：个体恒定的均含有多倍体细胞时，称为多倍体。
10.单倍体：体细胞染色体数等于本物种配子染色体数的个体。
11.混倍体：不同个体和不同细胞的染色体数目变异幅度较大，出现整倍和非整倍细胞的一系列变异，此为混倍体。
12.小染色体：是指其长度约在2微米以下而又不易分辨着丝点的染色体。
13.细胞周期：从上一次细胞分裂到下一次细胞分裂所经历的全部过程。
14.变性：早期认为，染色体经碱（NaOH,Ba(OH)2）或酸HCL处理，可以使DNA分子的双拆开，叫做“变性”。
15.复性：变性后的DNA在SSC盐溶液中温育，使单链的DNA分子重新形成H键，恢复原来的双键结构，叫做“复性”。
16.染色体常规压片：是指显示染色体的一般形态和结构的技术。
植物制片技术
二、杀死、固定、保存
✤固定液的选择 根据观察目的和对象，选择固 定剂。同时，要充分考虑植物 种类、不同器官的特性。
二、杀死、固定、保存
✤固定液的渗透力 1）选择固定剂时，要充分考虑 固定液的性质、浓度和温度对 渗透力的影响。 2）植物材料的大小和组织紧密 程度对渗透的影响。
二、杀死、固定、保存
一、选 材
• 叶的切取：横切面。
第二章 植物制片技术原理步骤
第一节 选材
第二节 杀死、固定与保存
第三节 清洗与脱水 第四节 透明与过渡
第五节 渗蜡与包埋
第六节 切片
第七节 粘片与展片
第八节 染色
第九节 封片
二、杀死、固定、保存
杀死：迅速终结植物材料的生命。要 求越快越好，使用渗透力强的药剂。
固定：在杀死基础上，组织或细胞保 持生活的状态，并在以后制片的过程 中不发生变化。
放入冷水中，促进石蜡短时间内凝 固。 （3）过夜后，取出备用。
五、浸透和包埋
第二章 植物制片技术原理步骤
第一节 选材
第二节 杀死、固定与保存
第三节 清洗与脱水 第四节 透明与过渡
第五节 渗蜡与包埋
第六节 切片
第七节 粘片与展片
第八节 染色
第九节 封片
六、切片
（1）修块： 将包有材 料的蜡块 修成一个 上窄下宽 的台体。 粘在木块 上，即可 切片。
植物显微技术
绪论
一、什么是植物显微技术 用于观察研究植物内部精细结
构的技术方法，包括制片技术、 光学显微镜技术和显微摄影技术， 是一门建立在生物学、化学以及 物理等多门学科基础之上的综合 性技术性学科。
绪论
二、植物显微技术的任务和目的 根据材料的自然特性，观察
植物制片的染色及显微化学鉴定方法
植物制片的染色及显微化学鉴定方法一、目的与要求1、学习植物制片的一般染色方法。
2、学会并掌握常用显微化学鉴定法，即细胞壁化学组成及细胞内主要后含物性质的鉴定方法。
二、材料和用品1、自备材料：植物叶片、芹菜叶柄、土豆块茎、花生种子等等，解剖器、剃刀或双面刀片。
2、其它材料和用品：显微镜、载玻片、盖玻片、纱布、吸水纸、蒸馏水、染色缸；0.1%番红、0.1% 固绿或1%苯胺蓝等染液、中性树胶、二甲苯、酒精、碘—氯化锌、盐酸—间苯三酚、苏丹Ⅲ、碘—碘化钾、10%氯化铁、盐酸等。
三、实验内容1、植物制片的染色方法2、常用显微化学鉴定法四、实验方法1、植物制片的染色方法用徒手切片法切得的薄片，如果仅仅是为了临时观察，制成临时装片即可，这种临时制片不能长久保存，只能作临时观察之用，又由于没经过染色，结构显示的也不够清晰。
为了求得更清晰地显示其细微结构及化学成分，并能够较长时间的保存，可以进一步染色及其它处理以至封片，从而可制成半永久或永久制片。
常用的染色方法是番红—苯胺蓝（或固绿）二重染色法，具体操作方法有二：方法一：（1）将植物切片材料放入30%酒精中，5分钟后移入水中。
（2）用0.1%番红水溶液染色12—24小时。
（3）倒去番红液，用清水冲洗数次后，再放回50%酒精中浸泡5分钟。
（4）将材料从50%酒精中转入70%酒精中脱色，直至硬木质化的细胞壁呈现红色，其它部分呈粉红色或近于无色时为止。
（5） 1%苯胺蓝（用70%酒精配制）对染2—5分钟。
若用0.1%固绿对染，则仅需半分钟左右即可。
注意：此步染色，要不时地在显微镜下检视，切忌染色过深，当木质化细胞壁呈红色，其它部分为淡蓝或淡绿色时，即可停止。
（6）用95%酒精冲去多余染液，再经无水酒精脱水5分钟。
（7）放入等量无水酒精与二甲苯溶液中及纯二甲苯中透明各3分钟。
（8）将切片材料移入载玻片上，在二甲苯未干时立即加一滴中性树胶封片，尔后将玻片平放，自然凉干或置于摄氏35度温箱中烘干。
植物制片的一般原理
植物制片的一般原理
细胞核染料（碱性染料）： 苏木精，亚甲蓝，中性红，碱性品红，洋 红，地衣红，结晶紫，番红，甲苯绿，碱 蓝。 细胞质染料（酸性染料）： 酸性品红，亮绿，苯胺蓝，固绿，刚果红， 橘红G，曙红，贾纳斯绿，孔雀绿，甲基橙。
植物制片的一般原理
3. 染色方法
⑴死细胞染色。 ⑵活细胞染色。 选无毒性染料。 观察细胞质流、精子或流动孢子等。
植物制片的一般原理
5. 封边剂
石蜡，油漆，指甲油。
植物制片的一般原理
四、染色 一般做成永久切片观察的材料， 都需要染色。
植物制片的一般原理
1. 染色原理
很复杂，难以解释。 ⑴物理学的解释 ①毛细作用或渗透作用而进入组织的内部——因 为组织材料有孔隙。 ②电子吸附作用——因而染色牢度有强有弱。 ⑵化学上的解释 组织或细胞中的各部分，或是酸性的（结合阳离 子，即碱性染料），或是碱性的（结合阴离子， 即酸性染料）。但没有新物质形成。
植物制片的一般原理
⑶醋酸（乙酸，CH3COOH） 单独使用，浓度为0.3－5%。 特点：渗透力大，固定十分迅速，但易使 细胞发生膨胀。 常与甲醛（易引起收缩）混合使用。
植物制片的一般原理
⑷锇酸（OsO4） 四氧化锇，灰黄色结晶，中性，昂贵——白金。 使用浓度为1－2%。 强氧化剂，配制水要超净，不宜与还原性固定剂 配合。 特点： ①最好的固定剂，对细微结构的固定良好，是脂 肪性物质唯一的固定剂。
植物制片的一般原理
④不改变原生质原来的体积（膨胀或缩 小）； ⑤增加细胞内含物折光程度，易于鉴别； ⑥可增加媒染作用和染色能力； ⑦又能有保存作用。 单一的化学药品难以具备以上所有条件； 而几种药品混合，可成近似理想的混合固 定剂。
植物制片的一般原理
植物常规染色体制片-染色和镜检
实验三植物常规染色体制片Ⅲ染色和镜检--染色和镜检（综合性实验）遵义师范学院生命科学学院韦若勋实验目的1掌握植物根尖染色体制片过程中染色的方一、实验目的1、掌握植物根尖染色体制片过程中染色的方法；2、观察各分裂时期染色体形态,测量典型染察时期染,染色体长臂和短臂；3、熟悉染色液的配制；4、了解植物染色体核型分析的标准。
二实验原理二、实验原理主缢痕二、实验原理2、核型分析原理因着丝粒在染色体上的位置差异导致了各染色因着丝粒在染色体上的位置差异导致各染色体形态差异。
Denver将人体染色体划分成四大类型请问：Denver划分如下4类染色体的臂比临界请问D值标准是多少？三实验器具及试剂三实验器具及试剂(二)实验试剂1、45%醋酸量取45ml冰醋酸，蒸馏水定溶至100ml。
2姬姆萨母液2、姬姆萨母液姬姆萨3.8g与甘油250ml研磨15分钟，60℃水浴2小时，加60℃预热甲醇250m1，混匀、过滤，棕色瓶室温长期保存。
3磷酸缓冲液3、磷酸缓冲液称Na2HPO44.735g，少许蒸馏水溶解后，定溶500ml；称KH2PO45.35g ，少许蒸馏水溶解后，定溶500ml，等量混合。
四实验材料四、实验材料涂片法得到的蚕豆或其它植物根尖制片。
五实验方法与步骤1、染色实（1）方法①Giemsa母液︰缓冲液= 1 ︰7，配成稀释液；浸没全部材料室温染色1530i②浸没全部材料，室温染色15-30min；③染色后,用小流量自来水冲洗玻片至无色，晾干。
（2）注意事项染色前材料要定要干否则着色不佳①染色前材料要一定要干，否则着色不佳；②植物固定时间长易着色,反之则反。
第一部分植物染色体标本制备物种：蚕豆根尖细胞有丝分裂.2014.6.5姓名：×××五、实验方法与步骤五实验方法与步骤2、镜检观察（1）分裂细胞观察低倍镜找分裂细胞区,高倍镜观察染色体形态。
估计染色体数目。
40倍下观察，记录3个视野的细胞总数、分裂细胞和典型染色体细胞数；计算出分裂细胞及典型染色体图象细胞频率。
显微制片的一般原理与方法
第四章显微制片的一般原理与方法第一节石蜡切片显微制片是生命科学实验技术中的重要组成部分，石蜡切片是动物﹑植物和病理组织切片工作中最重要﹑最常用的一种方法，一般包括材料的固定﹑洗涤﹑脱水﹑透明﹑包埋以及切片和染色等过程，其中的每个步骤都能影响制片的效果和质量。
1. 材料的选择与分割(1) 应选取新鲜的材料，然后立即固定处理。
(2) 材料大小要适当（直径5 mm左右）2. 固定及保存(Fixation and Store)固定：将器官、组织、细胞按原来的形态保存下来，并为后续制片保持固有形态，这样才达到固定的要求。
保存：组织块经杀生固定后，能较长时间保存下来。
经久保存下来的组织块，仍能制片，但不同试剂的保存效果差异较大，如酒精、醋酸、福尔马林液保存时间较长，而铬酸类固定液，常须转换至70％酒精液后，才可较长时间保存。
需注意以下有关问题：(1) 要注意固定目的物本身的结构性质，以便选用适合的固定液，如一般根、茎、叶的组织切片用FAA，根尖、花药压片材料用卡诺固定液，另外，固定时间的长短，要根据材料的特点而增减。
(2) 固定微小材料可直接投入固定液中，而对于较大的材料，则须先将其解剖成较小的材料，并迅速投入固定液，以完成固定作用。
(3) 当体积较大的材料，出现外部已超过固定作用，而内部仍未达到固定目的时，必须考虑用透入快的固定液，如醋酸酒精或苦味酸混合液。
3. 脱水(Dehydration)常用的脱水剂有乙醇（酒精）、正丁醇、叔丁醇、丙酮等药剂，其目的：(1) 除去组织内的水分，并使其组织细胞变硬；(2) 脱净水的组织，才能使溶解的石蜡顺利进入细胞内，以便进行石蜡切片；(3) 脱水后的组织再经透明剂（二甲苯、氯仿等）透明，最后才能经加拿大树胶封藏，否则组织材料不透明，无法在显微镜下观察。
4. 透明()透明是制片过程中的基础工作，材料经各级酒精脱水以后，要经过常用的有机榕剂（氯仿、二甲苯等）进行透明，这样便于包埋浸渍石蜡及封片过程中加拿大树胶进入和溶合。
植物显微技术之染料与染色
目录
CONTENTS
染色的目的 染料的分类 几种常用的染料 染色原理简介 一般的染色方法 活体染色 细胞死活的鉴定
01
染色的目的
染色前
01 染色的目的
染色后
染色
目的 ？
使组织与组织之间各部分显示出同种 颜色或不同颜色，便于观察（镜检）
02
染料的分类
02 染料的分类
来源
原理：“活体染料”可以使细胞内某 些特定结构着色
特点：避免了固定染色法对细胞结 构的破环和造成人为假象的弊病
07
细胞死活的鉴定
07 细胞死活的鉴定
原理：活死细胞膜通透性的差异以及活死细胞在代谢上的差异
台盼 蓝染 色法
中性 红法
荧光素
双醋酸 酯法 （FDA）
THANKS
-------感谢聆听，请批评指正
天然染料 人工染料
化学性质
碱性染料 酸性染料 中性染料
染色性能
核染料 细胞质染料 细胞壁染料 组织化学染料 荧光染料 活体染料
03
几种常用的染料
03 几种常用的染料
苏木精
为碱性染料，也是一种 核染料，广泛应用与细 胞学及胚胎学的制片中
固绿
为酸性染料，见光不 易褪色，可将纤维素 壁，细胞质染为绿色
物理 作用
1.毛细作用或渗透作用 2.吸收作用或溶液作用 3.吸附作用
1.细胞内不同化学成分对染料亲和 力不同
2.染液的PH对染色的影响
化学 作用
PS：染色的机制是复杂的，上面两种都不能全面说明问题，目 前多数学者认为是由于物理作用和化学作用综合作用的结果
05
一般的染色方法
05 一般染色方法
植物显微技术实验参考资料
植物显微技术实验参考资料实验一植物根尖染色体压片法一、实验目的1. 学习并掌握根尖处理、染色、压片及制片观察的方法；2. 观察有丝分裂各时期染色体的形态变化，了解有丝分裂全过程。
二、实验原理高等植物有丝分裂主要发生在根尖、茎尖生长点及幼叶等器官的分生组织（分生区），其中根尖是最常用的材料：1. 根尖取材容易，操作和鉴定也比其它组织方便；2. 采用实验室内种子萌发后所长出的幼嫩根尖，不受植物生长季节的限制，并且可以大量获得；3. 对于某些珍贵而稀少的实验材料，取用自然条件下生长植株的根尖，比取用茎尖、花器等对材料的伤害要小得多；4. 采用实验室内种子发根，切取根尖后的种苗通常还可以进行正常种植，利于后续研究进行。
三、实验材料大蒜（Aillum sativum 2n=16）四、实验器具和药品1. 用具：染色板，载玻片，盖玻片，指管，温度计，试剂瓶，滴瓶，镊子，解剖针，毛边纸。
2. 药品：无水酒精，70%酒精，冰醋酸，对二氯苯或秋水仙素，醋酸钠，碱性品红，石炭酸，甲醛，山梨醇，纤维素酶，果胶酶，中性树胶或油派胶（Euparal），二甲苯。
五、实验说明1.根尖由于取材方便，是观察植物染色体最常用的材料，有些植物种子难以发芽，或仅有植株而无种子，也可以用茎尖作为材料。
2. 植物细胞分裂周期的长短不尽相同，通常在十到几十小时之间，温度明显地影响分裂周期，对于一个不太熟悉的实验材料，最好在特定温度下长根，掌握有丝分裂高峰期，以便得到更多的有丝分裂的细胞。
3. 有丝分裂期在整个细胞周期中所占的时间相对较短，有丝分裂制片的主要目的是进行染色体鉴定，希望观察到更多分裂相，尤其是分裂中期相，通常要对材料进行不同的预处理。
（预处理的目的是降低细胞质的粘度，使染色体缩短分散，防止纺锤体形成，让更多的细胞处于分裂中期，一般在分裂高峰前，把根尖放到药剂中处理3-4小时。
常用的药剂，如秋水仙素、对二氯苯、8-羟基喹啉等。
）4.植物细胞的细胞壁对细胞形态和结构起支撑和保护作用，分生组织的细胞壁将分生细胞结合成一个整体，因此在压片之前需要采用适当方法软化或部分分解细胞壁使细胞间易于分离，称为解离。
中药材显微鉴别方法
中药材显微鉴别方法
一、显微制片
显微制片是将中药材进行显微观察的必要步骤。
根据检品的不同情况，制作相应的制片，如横切片或纵切片、表面制片、粉末制片、解离组织片、花粉粒与孢子制片、磨片制片、含粉末药材的制剂显微纸片等。
制作显微制片时，需要选用合适的显微镜和染色方法，以达到最佳观察效果。
二、细胞壁性质鉴别
细胞壁是植物细胞的重要结构，其性质不同对显微鉴别具有重要意义。
根据细胞壁的性质不同，可以鉴别出植物细胞的类型、组织类型等。
以下是常见的细胞壁性质鉴别方法：
1. 木质化细胞壁加间苯三酚试液显红色或紫红色，木栓化或角质化细胞壁加苏丹Ш显橘红色至红色。
2. 纤堆素细胞壁加氯化锌碘试液显蓝色或紫色。
3. 硅质化细胞壁加硫酸无变化。
三、细胞内含物鉴别
细胞内含物也是中药材显微鉴别的重要指标之一。
以下是常见的细胞内含物鉴别方法：
1. 糊粉粒加碘试液显棕色或黄棕色。
2. 菊糖加10%α-萘酚乙醇溶液，再加硫酸显紫红色并很快溶解。
3. 黏液加钌红试液显红色。
4. 碳酸钙结晶（钟乳体）加稀盐酸溶解，同时有气泡发生。
总之，中药材显微鉴别方法对于中药材的真伪鉴别和质量控制具有重要意义。
通过制作合适的显微制片，观察细胞壁性质和细胞内含物等指标，可以有效地进行中药材的真伪鉴别和质量控制。
在实际工作中，需要结合具体药材的特点和鉴别要点进行综合分析，以提高鉴别准确性和可靠性。
实验六--植物显微化学制片
实验六
一、实验目的
植物显微化学制片
利用临时装片进行显微化学鉴定，掌握常用植物显微化
学实验的原理与方法。
二、实验原理
将材料以徒手切片法制成薄片，利用化学反应或染色与
化学的方法，将组织或细胞内的某种化学成分 (淀粉粒、蛋白 质、脂肪等)在组织切片内予以显示，在显微镜下直接观测、 细胞中含有物的存在、性质、含量和分布的一种快速定性及 定位方法。
1.选用新鲜而健全的植物材料。
2.取材后要尽快地进行制片。以冰冻切片法或徒手切片法最为适宜。 3.切片厚度约20—40微米。
4.选用的试剂和化学反应方法必须是对某一待测物质具有专一的特殊性。
5.在取样的数量，或观察、测定的次数上都要有重复。尽量排除可能出现 的偶然性。 6.进行显微化学法鉴定时，应当注意对照试验。 7.反应处理的切片和对照的切片应该尽量邻近，最好是前一片作反应处 理，后一片则为对照切片。 8.随时-碘化钾溶液（碘液遇淀粉时，形成碘化淀粉， 呈现特殊的深蓝色或棕红色反应）
四、实验步骤
1、制作土豆临时装片； 2、染色：取一滴配好的溶液滴在切片上染色30s，水洗； 3、观察
五、实验结果
绘制马铃薯三种类型的淀粉粒图，并引线注明。
六、实验结果分析
七、植物显微化学鉴定的注意事项
植物制片的染色及显微化学鉴定方法
植物制片的染色及显微化学鉴定方法植物制片是植物解剖学研究的基础，主要包括了样品的采集、处理、包埋和切片等步骤。
制片的质量直接影响着后续染色和显微化学鉴定结果的准确性和可靠性。
以下是植物制片的一般步骤：1.采集样品：根据研究需要，采集符合实验要求的植物部件，如叶片、茎、花粉等。
2.处理样品：对采集到的植物样品进行初步处理，如去除杂质、保持新鲜等。
3.包埋样品：将处理后的样品进行包埋，使用适宜的包埋剂，如石腊、低熔点石蜡等。
4. 切片样品：将包埋好的样品进行切片，使用微tome等工具进行切割，制备出适当厚度的切片。
一旦制片完成后，接下来需要进行染色和显微化学鉴定。
染色方法可以增强显微镜下的观察效果，常见的染色方法包括常规染色和特殊染色。
1.常规染色方法：最常用的染色方法是使用苏丹精、碘红等生物染料，用于染色细胞壁、细胞核等常见组织结构。
常规染色方法可以提供植物组织的基本信息。
2.特殊染色方法：特殊染色方法主要用于特定的组织结构或化学物质的染色。
如使用苏木精-伊红染色对木质部和木质纤维进行染色，使用布氏染色对淀粉进行染色等。
显微化学鉴定方法是通过对制片样品进行特定试剂处理，以便于观察和检测特定化学物质的存在与否。
常用的显微化学鉴定方法包括：1.反应性染色：使用生化试剂或化学试剂与组织中的化学物质进行反应，产生特定的颜色或沉淀。
如使用碘酸钾溶液对淀粉进行碘反应形成蓝色物质。
2.酶反应：通过加入适当的酶试剂，使显色底物发生氧化还原反应，形成显色产物。
如使用过氧化氢试剂对过氧化物酶进行酶反应产生氧气和水。
3.化学反应：使用特定化学试剂，对特定化学物质进行识别。
如使用铁氰化钾试剂对根际紧矿质进行化学反应，生成蓝色的沉淀。
植物制片的染色及显微化学鉴定方法，通过染色和试剂处理等手段，可以使植物组织结构变得更加清晰和可见，从而更好地研究和识别植物的组织结构、化学成分和功能。
这些方法对于植物科学研究和植物学教学有着重要价值。
显微鉴定的方法.
制片进行显微鉴定，首先根据观察的对象和目的，选择具有代表性的生药，制作不同的显微制片，包括组织制片、表皮制片和粉末制片。
组织制片的方法主要有徒手制片、滑走制片、冰冻制片及石蜡制片等。
对植物类中药，如根、根茎、茎藤、皮、叶等类，一般制作横切片观察，必要时制纵切片；果实、种子类须制作横切片及纵切片观察；木类药材须制作横切片、径向纵切片及切向纵切片三个面观察。
表皮制片系将表皮细胞组织制成显微观察片的一种方法，适用于观察叶片、花瓣、花萼和其它器官表皮的细胞形状、气孔、腺毛、非腺毛的类型和角质层的纹理以及各种细胞内含物等的显微特征。
粉末制片用于观察药材的组织、细胞及细胞后含物特征，制片时根据观察目的物的不同可以选用斯氏液或水合氯醛制片。
有时为了观察某些细胞组织如纤维、石细胞、导管等，可制解离组织片。
显微观察与结果记录组织特征特别是横切面组织特征的观察与描述，一般是由外向内依次进行，如双子叶植物茎的初生构造由外向内依次为表皮、皮层和中柱三个部分。
在观察与描述中，首先注意其各部分的位置、形态、有无其它组织分布等特征。
其次应注意各种细胞及其内含物的颜色、形状、大小。
颜色是指在显微镜下所见到的颜色，描述方法同前已述及的性状鉴定。
形状一般指在显微切片中所见到的平面形状。
大小指在显微镜下用目镜测微尺测量的数据，一般取直径（椭圆形、长方形均量短径），如长度有鉴别意义，可加长度数据；导管、分泌细胞的直径常指外径；分泌腔、分泌道的直径常指内径；当目的物的大小差异很小时，可记载 1 个数字，如直径约50 μm，当目的物的大小有一定差距时，可记载最小值与最大值，如直径为15~ 40 μm（50μm ），括号内的数字表示少数目的物的大小数字；若目的物的大小差距很大时，可记载最小值、常见值和最大值，如长 20~ 40 ~80μm 。
粉末制片在显微镜下观察时，可见到多种组织碎片、细胞及内含物的特征。
描述方法同上，在描述顺序上，一般可以按照“先多后少”或“先特殊后一般”的原则进行。
植物常规染色体制片-染色和镜检
实验三植物常规染色体制片Ⅲ染色和镜检--染色和镜检（综合性实验）遵义师范学院生命科学学院韦若勋实验目的1掌握植物根尖染色体制片过程中染色的方一、实验目的1、掌握植物根尖染色体制片过程中染色的方法；2、观察各分裂时期染色体形态,测量典型染察时期染,染色体长臂和短臂；3、熟悉染色液的配制；4、了解植物染色体核型分析的标准。
二实验原理二、实验原理主缢痕二、实验原理2、核型分析原理因着丝粒在染色体上的位置差异导致了各染色因着丝粒在染色体上的位置差异导致各染色体形态差异。
Denver将人体染色体划分成四大类型请问：Denver划分如下4类染色体的臂比临界请问D值标准是多少？三实验器具及试剂三实验器具及试剂(二)实验试剂1、45%醋酸量取45ml冰醋酸，蒸馏水定溶至100ml。
2姬姆萨母液2、姬姆萨母液姬姆萨3.8g与甘油250ml研磨15分钟，60℃水浴2小时，加60℃预热甲醇250m1，混匀、过滤，棕色瓶室温长期保存。
3磷酸缓冲液3、磷酸缓冲液称Na2HPO44.735g，少许蒸馏水溶解后，定溶500ml；称KH2PO45.35g ，少许蒸馏水溶解后，定溶500ml，等量混合。
四实验材料四、实验材料涂片法得到的蚕豆或其它植物根尖制片。
五实验方法与步骤1、染色实（1）方法①Giemsa母液︰缓冲液= 1 ︰7，配成稀释液；浸没全部材料室温染色1530i②浸没全部材料，室温染色15-30min；③染色后,用小流量自来水冲洗玻片至无色，晾干。
（2）注意事项染色前材料要定要干否则着色不佳①染色前材料要一定要干，否则着色不佳；②植物固定时间长易着色,反之则反。
第一部分植物染色体标本制备物种：蚕豆根尖细胞有丝分裂.2014.6.5姓名：×××五、实验方法与步骤五实验方法与步骤2、镜检观察（1）分裂细胞观察低倍镜找分裂细胞区,高倍镜观察染色体形态。
估计染色体数目。
40倍下观察，记录3个视野的细胞总数、分裂细胞和典型染色体细胞数；计算出分裂细胞及典型染色体图象细胞频率。
显微制片技能[要诀]
![显微制片技能[要诀]](https://img.taocdn.com/s3/m/24d8f22b82c4bb4cf7ec4afe04a1b0717fd5b3de.png)
中药显微鉴定知识总结中药鉴定常用的鉴定方法有：（原植物、动物和矿物）鉴定法、性状鉴定法、显微鉴定法及理化鉴定法等。
显微鉴定法是利用显微技术对中药进行显微分析，以确定其品种和质量的一种鉴定方法。
显微鉴定主要包括组织鉴定和粉末鉴定，利用显微镜来观察药材的组织构造、细胞形状及内含物的特征、矿物的光学特性，和用显微化学方法，确定细胞壁及细胞内含物的性质或某些品种有效成分在组织中的分布等，用以鉴别药材的真伪与纯度甚至品质。
（一）显微制片方法显微鉴定时可根据检品的不同情况制作相应的制片，包括横切片或纵切片、表面制片、粉末制片、解离组织片、花粉粒与孢子制片、磨片制片、含粉末药材的制剂显微纸片等。
制作解离组织片时，解离液选择原则为：如样品中薄壁组织占大部分，木化组织少或分散存在，可用氢氧化钾法；如果样品坚硬，木化组织较多或集成较大群束，可用硝铬酸法或氯酸钾法。
（二）植物细胞壁和内含物的鉴别（1）细胞壁性质的鉴别：①木质化细胞壁加间苯三酚试液显红色或紫红色。
②木栓化或角质化细胞壁加苏丹Ш显橘红色至红色。
③纤堆素细胞壁加氯化锌碘试液显蓝色或紫色。
④硅质化细胞壁加硫酸无变化。
（2）细胞内含物性质的鉴别：①淀粉拉加碘试液显蓝色或紫色。
②糊粉粒加碘试液显棕色或黄棕色。
加硝酸汞试液显砖红色。
③脂肪油、挥发油或树脂加苏丹Ш试液显橘红色、红色或紫红色。
④菊糖加10%α-萘酚乙醇溶液，再加硫酸显紫红色并很快溶解。
⑤黏液加钌红试液显红色。
⑥草酸钙结晶加稀醋酸不溶解，加稀盐酸溶解而无气泡发生。
加硫酸逐渐溶解，析出结晶。
⑦碳酸钙结晶（钟乳体）加稀盐酸溶解，同时有气泡发生。
⑧硅质加硫酸不溶解。
（四）显微临时制片常用封藏试液显微鉴定所用试剂包括水、稀甘油、甘油醋酸试液及水合氯醛试液。
（五）扫描电子显微镜和偏光显微镜的应用扫描电镜已广泛应用于生物样品表面及其断面立体形貌的观察。
偏光显微镜主要用于观察和分析矿物类中药的光学性质。
（六）1、细胞壁性质的鉴别：木质化细胞壁：间苯三酚，显红色或紫红色;木栓化(角质化)细胞壁：苏丹Ⅲ号，加热后显红色;纤维素细胞壁：氯化锌碘试液，显蓝色或紫色;硅质化细胞壁：硫酸无变化 2、细胞内含物的鉴定淀粉粒：加碘试液，蓝色或紫色。
植物细胞的活体染色与死活鉴定
植物细胞的活体染色及死活鉴定
一、实验原理
活体染色是利用某种对植物无害的染料溶液对活细胞进行染色的技术。
中性红是常用的活体染料之一，它是一种弱碱性pH指示剂，变色范围在pH6.4~8.0之间（由红变黄）。
在酸性条件下中性红解离度很强，带色的阳离子呈樱桃红色，在pH7以上，它不解离而以分子态溶于水呈橙黄色的溶液。
二、实验仪器与试剂
仪器与用具：显微镜；载玻片；盖玻片；单面刀片；尖头镊子；酒精灯；火柴；吸水纸适量。
试剂：0.03%中性红溶液；1mol/L硝酸钾溶液
三、实验方法
1.切下一片较幼嫩的洋葱鳞片，用单面刀片在鳞片内侧割划成0.5cm2左右的小块，用尖头镊子将内表皮小块轻轻撕下，将制好的洋葱鳞茎内表皮放置于滴加蒸馏水的载玻片上，小心地将制片平展到载玻片上，加盖玻片，多余液体用吸水纸吸干，在显微镜下观察（注意调节光线强度）
2.另取一小块表皮，滴加0.03%的中性红溶液，染色5~10min；在蒸馏水中稍加冲洗，在载玻片上滴一滴蒸馏水，小心地将制片平展到载玻片上，加盖玻片，多余液体用吸水纸吸干，
3.在显微镜下观察。
将步骤2中的活体染色制片取出几片放入pH略高于7.0的自来水中浸泡10~15min，再置于载玻片上镜检（为了确证中性红染色部位，可将上述洋葱内表皮染片浸入1mol/L的硝酸钾4.溶液中浸泡10min左右，然后取出观察。
）
将步骤3中的活体制片放在酒精灯火焰上微微加热，以杀死细胞，再在显微镜下观察
四、实验结果与分析
1.可以看清细胞的轮廓。
2.细胞结构清晰，可以看清细胞核。
3.细胞呈橙色，细胞质与细胞壁分离，细胞结构清晰。
4.细胞破裂，细胞边界不存在，细胞呈橙色。
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植物制片的染色及显微化学鉴定方法
一、目的与要求
1、学习植物制片的一般染色方法。
2、学会并掌握常用显微化学鉴定法，即细胞壁化学组成及细胞内主要后含物性质的鉴定方法。
二、材料和用品
1、自备材料：植物叶片、芹菜叶柄、土豆块茎、花生种子等等，解剖器、剃刀或双面刀片。
2、其它材料和用品：显微镜、载玻片、盖玻片、纱布、吸水纸、蒸馏水、染色缸；0.1%番红、0.1% 固绿或1%苯胺蓝等染液、中性树胶、二甲苯、酒精、碘—氯化锌、盐酸—间苯三酚、苏丹Ⅲ、碘—碘化钾、10%氯化铁、盐酸等。
三、实验内容
1、植物制片的染色方法
2、常用显微化学鉴定法
四、实验方法
1、植物制片的染色方法
用徒手切片法切得的薄片，如果仅仅是为了临时观察，制成临时装片即可，这种临时制片不能长久保存，只能作临时观察之用，又由于没经过染色，结构显示的也不够清晰。
为了求得更清晰地显示其细微结构及化学成分，并能够较长时间的保存，可以进一步染色及其它处理以至封片，从而可制成半永久或永久制片。
常用的染色方法是番红—苯胺蓝（或固绿）二重染色法，具体操作方法有二：
方法一：
（1）将植物切片材料放入30%酒精中，5分钟后移入水中。
（2）用0.1%番红水溶液染色12—24小时。
（3）倒去番红液，用清水冲洗数次后，再放回50%酒精中浸泡5分钟。
（4）将材料从50%酒精中转入70%酒精中脱色，直至硬木质化的细胞壁呈现红色，其它部分呈粉红色或近于无色时为止。
（5） 1%苯胺蓝（用70%酒精配制）对染2—5分钟。
若用0.1%固绿对染，则仅需半分钟左右即可。
注意：此步染色，要不时地在显微镜下检视，切忌染色过深，当木质化细胞壁呈红色，其它部分为淡蓝或淡绿色时，即可停止。
（6）用95%酒精冲去多余染液，再经无水酒精脱水5分钟。
（7）放入等量无水酒精与二甲苯溶液中及纯二甲苯中透明各3分钟。
（8）将切片材料移入载玻片上，在二甲苯未干时立即加一滴中性树胶封片，尔后将玻片平放，自然凉干或置于摄氏35度温箱中烘干。
染色结果：木质化细胞壁呈现红色，纤维素细胞壁呈现蓝色或淡绿色。
方法二：
（1）将切得的薄片移入盛有FAA固定液的小容器中，盖上盖固定半小时到1小时，24小时以上也可。
材料经固定如不及时制片可移入70%酒精中长期保存。
（2）材料从固定液中移入盛有蒸馏水的小培养皿中，漂洗半小时到1小时，换水一次。
（3）将材料移入载玻片上，用吸水纸吸去多余水分，加一滴苯胺番红染色约10分钟。
（4）吸去染液，滴入95%酒精洗两次，去浮色及脱水。
（5）加一滴苯胺固绿复染约2～5秒钟，并轻轻晃动玻片，使染色均匀。
（注意：此步骤要迅速，若染色时间过长会使红色全部褪去。
）
（6）吸去染液，滴入无水酒精洗两次，去浮色及脱水。
（7）滴入等量无水酒精与二甲苯溶液约1分钟后吸去，再滴入纯二甲苯冲洗2次，使材料透明。
（8）擦去材料以外的残存药剂，使玻片清洁，但不使材料上的二甲苯干掉，并及时镜检。
（9）镜检后，如材料的构造清晰，红绿对比鲜明，立即加一滴中性树胶封片。
染色结果同样是木质化细胞壁呈现红色，纤维素细胞壁呈现淡绿色。
这种方法更节省时间一些。
2、常用显微化学鉴定法
显微化学鉴定法即将材料经化学试剂处理后，在显微镜下检查、判定细胞壁的化学组成及细胞内含物性质的方
法。
此法广泛地应用于教学和对植物器官、组织和细胞内含物的研究工作中，也应用于分辨细胞结构的观察中。
下面介绍几种在植物解剖学中常用的化学鉴定法，这些方法均适用于徒手切片法切成的薄片材料的观察。
切片不能太薄，否则材料中内含物太少化学反应效果则不甚明显，材料的厚度应在20～40微米较为适宜。
（1）细胞壁化学组成显微化学鉴定法
细胞壁的化学成分主要是纤维素和木质素，还有一定的栓质、角质和果胶等。
本实验主要学习纤维素和木质素的鉴定方法。
纤维素化学鉴定法：是植物细胞的细胞壁最主要的成分，常用鉴定方法有两种：
（A）碘—硫酸法：先用1%碘液滴在材料上，然后再加一滴66.5%硫酸。
经过这样的处理，纤维素的细胞壁呈蓝色反应。
由于硫酸可将纤维素水解成胶态水解纤维素，遇碘后呈现蓝色反应。
提示：1%碘液配法：将1.5克碘化钾溶于100毫升蒸馏水中，待溶解后，加入1克碘。
66.5%硫酸的配法：7份硫酸加3份水即可。
（B）氯化锌—碘法：纤维素细胞壁在碘氯化锌溶液的作用下呈现紫蓝色。
提示：碘氯化锌溶液的配法：A液：碘化钾 1克，碘 0.5克，蒸馏水 20毫升。
B液：氯化锌 20克，蒸馏水 8.5毫升。
将B液加微温，使其溶解后冷却，再将A液一滴一滴的加入到B液，至显示碘的沉淀物（摇荡后也不消失）为止（大概用A液1.5毫升）。
此试剂配好后须置入暗色玻璃瓶中避光保存。
在大多数情况下，应用“氯化锌—碘”法比用“碘—硫酸”法更为方便。
可是由于组成此种试剂的各种成分的浓度不同以及材料性质不同，反应也常常不同，在有些情况下不一定有良好的效果。
木质素化学鉴定法：某些植物的细胞壁中含有木质素，特别是输导组织中的导管和管胞以及机械组织中的纤维和石细胞等细胞木质化程度更甚。
鉴定木质素最常用的方法是盐酸间苯三酚反应法，滴一滴盐酸间苯三酚于材料上，木质化细胞壁经盐酸间苯三酚试剂处理后呈现紫红色或桃红色。
提示：盐酸间苯试剂配制方法是：2克间苯三酚溶解于95%酒精100毫升中，过滤后加入40毫升浓盐酸。
注意间苯三酚为白色粉末，易氧化变性，若已呈灰褐色或溶液呈黄褐色即失效。
另外，此法并非是木质素的专一染色反应，故应用时须注意。
木质素鉴定的硫酸苯胺法和氯化锌—碘法见教材。
至于栓质、角质和果胶的鉴定法见教材。
（2）细胞内含物的化学鉴定法
淀粉的鉴定：淀粉是植物中最主要的储藏物质，它们在各种不同植物的细胞中呈各种不同形状的颗粒。
用碘液处理时，淀粉引起碘反应形成碘化淀粉，呈现蓝色，是唯一的一种淀粉颜色显微化学反应剂。
提示：碘液的配制方法是：先取3克碘化钾溶于100毫升蒸馏水中，再加入1克碘配成原液（保存于棕色瓶中）。
使用时用蒸馏水稀释10倍或100倍。
医用碘酒稀释2倍亦可应用。
蛋白质的鉴定：植物细胞内储存的蛋白质常呈固体颗粒——糊粉粒。
常用的鉴定方法有碘试剂法和曙红—酒精苦味酸法。
本实验采用碘试剂法，此法简单，且可与鉴定淀粉同时进行。
在切片材料上滴上碘试剂后（用未经稀释的原液），蛋白质被染成黄色，而淀粉则成蓝紫色。
另外，除蛋白质以外，有些其它物质也可以染成黄色，但是，这些物质经水洗后均可除掉。
至于曙红—酒精苦味酸法参见实验教材。
脂肪和油的鉴定：鉴定脂肪和油常用的方法是用苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ酒精溶液染色，脂肪和油遇苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ酒精溶液被染成橘红色（染色时微微加热可以加速染色）。
注意：苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ除了能染脂肪呈红色外，它还能使树脂、挥发油、栓质化的细胞壁与角质化细胞壁染色，因而不能作为脂肪存在与否的证据。
但脂肪经苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染色后呈红色，更为明显。
苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ酒精溶液的配制同前栓质和角质的鉴定法。
关于单宁、晶体、菊糖的鉴定见实验教材。
固定液配制：F.A.A固定液，又称标准固定液,万能固定液.适用于一般根,茎,叶,花药,子房组织切片.在植物形态解剖究上应用极广,此固定液最大优点是兼有保存剂作用,但对染色体的观察效果较差.配方:福尔马林(38%甲醛)5 ml: 冰醋酸5ml:70%酒精90 ml幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精,可防止材料收缩;还可加入5 ml甘油(丙三醇)以防蒸发和材料变硬.。