33第11章 弧菌属、气单胞菌属和邻单胞菌属
《医学微生物学》第11章弧菌属练习题及答案
《医学微生物学》第11章弧菌属练习题及答案【知识要点】1.掌握：霍乱弧菌的生物学性状、致病性。
2.熟悉：（1）霍乱弧菌的微生物学检查法与防治原则。
（2）副溶血性弧菌的致病性3.了解：副溶血性弧菌诊断与防治。
【课程内容】第一节霍乱弧菌一、生物学性状（一）形态与染色（二）培养特性与生化反应（三）抗原构造与分型（四）抵抗力二、致病性与免疫性（一）致病物质（二）所致疾病（三）免疫性三、微生物学检查法（一）标本（二）直接镜检（三）分离培养（四）血清学诊断四、防治原则第二节副溶血性弧菌一、生物学性状（一）形态与染色（二）培养特性与生化反应（三）抗原结构与分型（四）抵抗力二、致病性（一）致病物质（二）所致疾病三、诊断与防治【应试习题】一、名词解释1．霍乱肠毒素（CT）2．O139群霍乱弧菌3．O1群霍乱弧菌4．非O1群霍乱弧菌5．神奈川现象二、填空题1．霍乱弧菌可分为O1群霍乱弧菌、_______和_______，前者包括_______和_______两个生物型。
2．霍乱弧菌耐_______不耐酸，其选择性增菌培养基是_______。
3．霍乱肠毒素的A1肽链作用于腺苷酸环化酶，使_______不断转化为_______，引起肠液大量分泌，导致严重腹泻。
4．霍乱肠毒素的毒性中心是_______，结合中心是_______，后者与肠上皮细胞的_______结合，使毒素分子变构。
5．霍乱弧菌根据O抗原不同可分为_______个血清群，其中_______和_______引起霍乱。
6．副溶血性弧菌是一种嗜_______性弧菌，能引起_______。
7．O1群霍乱弧菌有两个生物型分别是__________和__________。
三、单选题（一）A型题1．霍乱弧菌的主要致病物质不包括A．鞭毛 B．菌毛 C．毒素共调菌毛D．外毒素 E．内毒素2．关于霍乱弧菌的生物学性状，叙述错误的是A．革兰阴性弧菌，有单鞭毛B．霍乱弧菌耐碱不耐酸C．在霍乱病人粪便悬滴标本中，可见“鱼群样穿梭”现象D．E1Tor生物型霍乱弧菌抵抗力强，是因为有芽胞形成E．有菌毛和荚膜3．关于霍乱肠毒素，叙述正确的是A．A亚单位与细胞受体结合B．B亚单位进入细胞发挥毒性作用C．激活鸟苷酸环化酶，使cGMP升高D．其受体是糖蛋白 E．不耐热外毒素致病4．霍乱病人排泄物的特点A．脓血便 B．水样便 C．米泔水样便D．果酱样便 E．柏油样便5．关于霍乱的叙述错误的是A．属于烈性传染病B．人类是霍乱弧菌的唯一易感者C．病愈后，少数病人可长期带菌D．病后的免疫力短暂E．接种霍乱死菌苗可增强人群的特异性免疫力6．弧菌主要分布于A．空气 B．水 C．土壤 D．人体肠道 E．动物肠道7．关于ElTor生物型霍乱弧菌与古典生物型霍乱弧菌所致疾病的叙述，下列错误的是A．两者感染后，机体免疫力有强弱之别B．两者所致疾病的临床表现轻重不一C．人类是唯一易感者D．传染源均为病人或带菌者E．传播途径均为污染水源或食物经摄入8．对可疑病人的“米泔水”样大便作细菌培养，应接种于A．S．S琼脂平板B．巧克力色琼脂平板C．血清肉汤培养基D．血琼脂平板E．碱性蛋白胨水培养基9．副溶血性弧菌引起的食物中毒经哪一途径传播A．污染用水 B．病畜肉C．病鼠尿污染食物 D．苍蝇污染食物 E．海产品或盐渍制品10．一男性病人，43岁，头晕，腹胀，剧烈腹泻呈水样便伴呕吐l天。
弧菌属的致病性
弧菌属、气单胞菌属 邻单胞菌属
广州医学院 吴爱武
分类
弧菌属
O1群霍乱弧菌
非O1群霍乱弧菌
副溶血弧菌 拟态弧菌 · · · · · 等66个种
弧菌科
异单胞菌属 发光杆菌属 等共8个属
弧菌属（Vibrio）的共同生物学特性:
除麦氏弧菌外，氧化酶阳性、还原硝酸盐
发酵葡萄糖产酸罕见产气
对O/129敏感（近年出现抗性株） 钠离子能刺激其生长，部分菌株嗜盐 兼性厌氧，营养要求不高 革兰阴性、弧形（短杆）菌、动力（＋）
生物分型：O1群霍乱弧菌
古典生物型
El-Tor生物型
噬菌体分型：
第IV组噬菌体 第V组噬菌体
古典生物型 El-Tor生物型
霍乱的流行史
1817-1923 共6次 印度恒河三角洲
古典生物型
1961 第7次 印度尼西亚 Eltor生物型 1992.10 孟加拉湾的印度、孟加拉 O139
霍乱的流行史
A2:连接亚单位 5000
B：结合亚单位
霍乱弧菌肠毒素（CE, cholera enterotoxin）
临床意义
发病机制
演示
临床意义
发病机理
霍乱弧菌在小肠黏膜部位的致病机制
临床意义
感染途径
临床意义
感染途径
临床意义
感染途径
临床意义
感染途径
临床意义
感染途径
临床意义
感染途径
演示
临床意义
引起的疾病
霍乱弧菌在含亚碲酸钾的琼脂平板上将碲离子还 原成原子态的碲，形成有灰褐色中心的菌落
生物学特性
(重要的生化反应)
氧化酶
霍乱弧菌 副溶血弧菌 拟态弧菌 · · · · · · 麦氏弧菌 ＋ ＋ ＋
病原微生物第11章弧菌属
弧菌属细菌是一大群菌体短小，弯曲成弧形的 G-单毛菌。 分布广泛，尤以水中最多，致病菌主 要有霍乱弧菌、副溶血性弧菌。
1883年，在埃及发生了一次严重疾 病的流行，得病者上吐下泻，很快陷入 休克或死亡。这种病威胁着千千万万人 的生命，一时间，恐慌、混乱、死亡笼 罩了这个国家。这就是霍乱病。科学家 们冒着生命危险去解剖一具具尸体，终 于在死者的肠粘膜上和病人的粪便里发 现了一种身上长了纤毛的弧形细菌。它 就是置成千上万人于死地的罪魁祸首— —霍乱弧菌。
致病机理：霍乱弧菌不入血，无菌血症和败血症，
为什么霍乱出现喷射状呕吐和腹泻呢？
B亚单位与小肠粘膜上皮C受体（N节苷脂G、M，GMI）结合 通道 内吞 从而使A亚单位穿过细胞膜进入细胞内。 激活 细胞内膜的腺苷环化酶 促使细胞内ATP CAMP↑ 腺C分泌功能↑
肠液分泌↑
快速
水、电解质大量潴留肠腔内
呕吐、腹泻
2. 霍乱为什么会出现淘米水样便呢？
试验研究表明，在霍乱弧菌的滤液中，发现霍乱弧菌 可产生多种酶（如凝固酶、脂酶和粘液蛋白酶）其中粘液 蛋白酶的毒害作用——促使肠粘膜上皮C脱落。故出现淘 米水样便与此有关。
免 疫 性
病后产生牢固免疫，再感染者少见。
肠道分泌型IgA为主要的中和抗体。
微生物学检查法
肌肉痉挛
我国法定传染病
甲类传染病（2类）是指：鼠疫、霍乱。 乙类传染病（26类）是指：肺结核、病毒性肝炎、细菌性 和阿米巴性痢疾、伤寒和副伤寒、艾滋病、淋病、梅毒、 脊髓灰质炎、麻疹、百日咳、白喉、流行性脑脊髓膜炎、 猩红热、流行性出血热、狂犬病、钩端螺旋体病、布鲁氏 菌病、炭疽、流行性和地方性斑疹伤寒、流行性乙型脑炎、 黑热病、疟疾、登革热、高致病性禽流感和传染性非典型 肺炎、甲型H1N1流感。 丙类传染病（11类）是指：血吸虫病、丝虫病、包虫病、 麻风病、流行性感冒、流行性腮腺炎、风疹、新生儿破伤 风、急性出血性结膜炎、除霍乱、痢疾、伤寒和副伤寒以 外的感染性腹泻病。2008年5月2日新增手足口病为丙类传 染病。
弧菌
弧菌科种类
弧菌属 气单胞菌属 邻单胞菌属
2013-7-29
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三个菌属的鉴别
试验
肌醇 粘丝试验 鸟氨酸 精氨酸
150 μgO/129
弧菌属
－ ＋/(－) ＋/－ ＋/－ S ＋ ＋/－
气单胞菌属 邻单胞菌属
－ － － ＋/－ R － － ＋ － ＋ ＋ S － －
4
TCBS生长 耐盐（7％）
16
霍乱流行病学特点（2）
霍乱发病季节在夏秋季，本市主要在5-10月份， 7-9月为发病高峰 人群普遍易感，在同源感染因素下易造成爆发和 流行
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霍乱预后及危害
霍乱能引起机体剧烈吐泻、失水、电介质紊乱以 致死亡
病死率高低与病情轻重以及医疗条件、抢救的时 效性有关。病情重、医疗条件差、抢救不及时病 死率可高达20%-50%
霍乱流行病学特点（1）
霍乱（O139与O1群霍乱），具有传染性强、传播 迅速、易出现暴发和流行特征；世界卫生组织将 其纳入霍乱范畴，我国将它列入法定报告的甲类 烈性传染病 霍乱弧菌主要通过水、食物、日常生活接触和苍 蝇传播，以食物传播为主，常可借助食用被霍乱 弧菌污染的食物而致病
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全国霍乱O139流行情况（1）
1992年在印度、孟加拉首次发现霍乱O139后， 短期内在这两个国家造成流行，发病人数高 达10多万例，并在几年间已传入亚洲、欧洲、 美洲等20多个国家 1993年传入我国后，即在新疆南部柯坪县发 生霍乱O139引起的暴发，报告病例数202例， 死亡4例
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弧菌科及检验
弧菌科共同特征
革兰阴性菌，短小弯曲弧状,无芽胞， 多数有鞭毛、有菌毛。 需氧兼性厌氧 具有一端单一鞭毛、运动迅速 氧化酶＋ 发酵葡萄糖产酸不产气,许多菌株生长 需要2%~3%氯化钠 弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中 最为多见。其中有一些种对人类致病。
11章 弧菌
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霍乱病人
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三、免疫性
人类感染霍乱弧菌后，机体能获得牢固持久免疫力， 再感染少见。患者发病数月后，血液和肠腔中可出现特异
性抗肠毒素抗体及抗菌抗体。O1群获得的免疫对O139群
感染无交叉免疫。
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四、微生物学检查法
1. 标本 采集患者粪便、肛拭。 观察有无典型形 2. 直接镜检
态的霍乱弧菌。
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长。
引起食物中毒，尤其因食用未煮熟的海产品，但确切致 病机制尚未阐明。
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二、致病性
1. 致病物质 （1）黏附因子：菌毛、鞭毛促进细菌黏附到小肠黏膜上
皮细胞。
（2）O139还具有多糖荚膜和特殊LPS毒性决定簇。 （3）霍乱肠毒素：由１个A亚单位、５个B亚单位组成。
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临床表现 上吐下泻
剧烈腹泻和呕吐（米泔水样腹泻物）， 大量水分和电解质丧失 ，低容量性休 克及心力不齐和肾衰竭（死亡率高达60%）
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(完整PPT)弧菌
弧菌科共同特征
革兰阴性菌，短小弯曲弧状,无芽胞， 多数有鞭毛、有菌毛。
需氧兼性厌氧 具有一端单一鞭毛、运动迅速
氧化酶＋
发酵葡萄糖产酸不产气,许多菌株生长 需要2%~3%氯化钠
弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中 最为多见。其中有一些种对人类致病。
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3.分离培养与鉴定
(1)增菌培养 标本接种1%NaCl碱性胨水或4%NaCl蛋白胨水 中进行选择性增菌
(2)分离培养 标本直接接种或增菌后接种TCBS平板或嗜盐菌 选择平板 TCBS平板：绿色或蓝绿色菌落，不透明，直径 1~2mm微突起菌落 嗜盐菌选择性平板：较大、圆形、隆起，稍混 浊、半透明或不透明、无粘性菌落
耐热直接溶血素相关溶血素（TRH），生物学特性与 TDH相似
生物学特性
1. 形态
革兰阴性杆菌，有鞭毛（极单毛），无荚膜， 无芽胞
2. 抗原结构
耐热的菌体（O）抗原，具有群特征性，副溶 血性弧菌的O抗原有13种
鞭毛抗原，不耐热，无型特异性
3．培养特性
营养要求不高 在无盐培养基上不能生长，最适合生长的
动力观察： -压滴法或暗视野镜检，注意运动方式
制动试验： -诊断血清与菌体结合，动力消失
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形态染色
革兰阴性 弧形或逗点状 单鞭毛，运动呈“穿梭样”或“流星样” 无芽胞，无荚膜（O139有薄的荚膜） 在新鲜粪便中成“鱼群样”排列
2Hale Waihona Puke 20/2/527霍乱弧菌电镜照片
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作用机制示意图
霍乱流行病学特点（1）
霍乱（O139与O1群霍乱），具有传染性强、传播 迅速、易出现暴发和流行特征；世界卫生组织将 其纳入霍乱范畴，我国将它列入法定报告的甲类 烈性传染病
微生物检验11
弧菌科
一群菌体短小、弯曲成弧形或直杆状的 革兰阴性细菌 兼性厌氧，发酵葡萄糖，许多菌株生长 需要2%~3%氯化钠 需要2%~3%氯化钠 大多数菌株氧化酶阳性 具有一端单一鞭毛、运动迅速 弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中 最为多见。其中有一些种对人类致病。
弧菌科( 弧菌科(Vibrionaceae)
1.形态 1.形态
新从患者标本中分离出的细菌革兰染色阴性， 弧形或逗点状 在患者“米泔水” 在患者“米泔水”样便中，可呈头尾相接的 “鱼群”样排列 鱼群” 菌体一端有鞭毛，悬滴观察时呈“穿梭” 菌体一端有鞭毛，悬滴观察时呈“穿梭”样运 动 有普通菌毛和性菌毛 O139群有荚膜 O139群有荚膜
2. 抗原成分
3.标本直接检查 3.标本直接检查
涂片染色镜检 取标本直接涂片，固定染色。油镜观察有无“鱼群” 取标本直接涂片，固定染色。油镜观察有无“鱼群”样排列的革兰阴 性弧菌 动力和制动试验 直接取“米泔水”样便，制成悬滴(或压滴)标本后， 直接取“米泔水”样便，制成悬滴(或压滴)标本后，在暗视野或相差 显微镜下直接观察呈穿梭样运动的细菌。 显微镜下直接观察呈穿梭样运动的细菌。 同法重新制备另一标本涂片，在悬液中加入1滴不含防腐剂的霍乱多 同法重新制备另一标本涂片，在悬液中加入1 价诊断血清(效价≥1：64)。 价诊断血清(效价≥1：64)。可见最初呈穿梭状运动的细菌停止运动并 发生凝集，则为制动试验阳性。 发生凝集，则为制动试验阳性。可推定为霍乱弧菌存在 快速诊断 通过直接荧光抗体染色和抗O1群抗原的单克隆抗体凝集试验 群抗原的单克隆抗体凝集试验， 通过直接荧光抗体染色和抗O1群抗原的单克隆抗体凝集试验，能够 快速诊断霍乱弧菌感染 霍乱毒素的测定 用改良的ELISA法 将纯化的GM1包被 以俘获标本中的CT。 包被， 用改良的ELISA法，将纯化的GM1包被，以俘获标本中的CT。或采 用乳胶凝集测定CT， 用乳胶凝集测定CT，有较高的灵敏度和特异性
弧菌科
五、防治原则
1. 控制传染源 2. 切断传播途径： 改善社区环境，加强水源管理，
3. 提高易感者免疫力
疫苗预防接种
4.治疗霍乱的关键
及时补充液体和电解质
副溶血性弧菌（V. parahemolyticus）
生物学特性
嗜盐（halophilic），3.5%NaCl生长最好
在含0%NaCl和 10%NaCl的培养基中不生长。
弧菌属
目前弧菌属共有36个种，分为四大类： O-1群霍乱弧菌，O-139群霍乱弧菌，非 O-1群霍乱弧菌，其他弧菌。多为非致病 菌，但有部份为强致病菌，如霍乱弧菌。
霍乱弧菌
是烈性传染病霍乱的病原菌。 分O-1群霍乱弧菌，O-139群霍乱弧菌和 非O-1群霍乱弧菌 O-1群和O-139群霍乱弧菌的致病性强于 非O-1群霍乱弧菌。 O-1群霍乱弧菌又分为古典生物型 (classical biotype)和埃尔伯生物型(El Tor biotype)。
弧菌科及检验
华中科技大学同济医学院检验系 吉 曾
弧菌科(Vibrionaceae)是一群氧化酶阳性， 具有端极鞭毛，菌体短小、直或微弯的 革兰阴性杆菌。分为弧菌属、气单胞菌 属、邻单胞菌属和发光杆菌属等四个菌 属。
弧菌科的特征
1. 菌体细小，弯曲成弧形或直的革兰阴 性杆菌； 2. 能发酵葡萄糖； 3. 多数菌株生长都需要盐； 4. 大多数氧化酶都为阳性； 5. 具有一端单一鞭毛。
气单胞菌的检验
生物学特性： 1.革兰阴性直杆菌，多数有动力； 2.营养要求不高，不嗜盐； 3.氧化酶阳性；
邻单胞菌属
本属只有一个菌种，类志贺邻单胞菌； 1.可引起肠胃炎，常因食生水或海产品而引起； 2.革兰阴性直杆菌，氧化酶阳性； 3.营养要求不高； 4.与志贺菌有交叉血清学反应。
第11章 弧菌属
1
弧菌属（Vibrio）
细菌是一大群氧化酶阳性、单端 一根鞭毛、动力阳性的革兰阴性菌
2
第一节 霍 乱弧菌 (V.cholerae)
--------
霍
乱
烈性肠道传染病 国际检疫传染病 我国法定甲类传染病 俗称“二号病”
3
分类
19世纪初至今已引起7次世界性大流行。
1817～1923年的百余年间，在亚、非、欧、美、 澳等发生的六次世界性霍乱大流行——皆由古典生物 型引起。
舟状腹
“洗衣工手”
皮肤干皱、湿冷无弹性 26
血压下降
霍乱患儿
27
意识障碍
重型
腹泻次数一日20次以上，极度 烦躁甚至昏迷，皮肤弹性消失，眼窝 深凹，明显发绀，严重肌肉痉挛，脉 搏微弱而速，甚或无脉，血压下降或 测不到，尿量每日少于50ml或无尿， 脱水程度儿童相当于体重10%以上， 成人8%以上。
•
• • • • •
世界上第一次分离出结核病细菌；
世界上第一次发明了预防炭疽病的接种方法； 世界上第一次发现了霍乱弧菌； 世界上第一次提出了霍乱预防法； 世界上第一次发现了鼠蚤传播鼠疫的秘密； 世界上第一次发现了睡眠症是由采采蝇传播的。
8
• 制定科赫法则：（科赫为研究病原微生物制订了严格 准则,被称为科赫法则,包括:一种病原微生物必然存在 于患病动物体内,但不应出现在健康动物内;此病原微 生物可从患病动物分离得到纯培养物;将分离出的纯 培养物人工接种敏感动物时,必定出现该疾病所特有的 症状;从人工接种的动物可以再次分离出性状与原有 病原微生物相同的纯培养物。） • 创立了固体培养基划线分离纯种法。
28
29
及时经口或静脉补充水、电解质
概述： 气单胞菌属和邻单胞菌属
气单胞菌种之间的鉴别
气单胞菌属鉴定 OX（+），o/129（R），6%NaCL（-）
+
七叶苷水扬苷
葡萄糖产气
赖氨酸
+
阿拉伯糖 精氨酸
靛基质
舒伯特 舒 伯 特 + + VP
+
-
豚鼠气单胞 + 简达气单胞 脆弱气单胞
胞气 胞威 水 隆 气 气 单 单
蔗 -甘 糖 露 + 醇 温和气单胞
舒伯特气单胞
-
+
气单+ + +/+/+/+/-
+ + +/+/-
+ + + +
与志贺菌属、非发酵菌属区别
志贺菌 邻单胞 非发酵 属 菌属 菌属 G -B G染色 氧化酶 发酵葡萄 + 糖 G -B + + G -B + -
弯曲菌属
弯曲菌属：氧化酶（+）、动力（+）、 革兰氏阴性、微需氧的细菌。 1973 年 Verson 和 Chatelain 另立为属，目 前有 13 种，与人类致病关系最为密切的 有5种，空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿 弯曲菌、粘膜弯曲菌、简明弯曲菌
临床意义
HP是自身免疫性慢性胃炎的致病菌，与 十二指肠溃疡有密切的关系，是引起胃 癌的危险因子。
微生物检查
标本采集：采集胃粘膜活检标本，放无菌生理 盐水中立即送检 染色镜检：用活检标本染色，在油镜下找G- 、 细长弯曲的细菌 快速尿酶试验：将小的组织快放入装有 Christensen尿素培养基的瓶内，如果培养基由 黄色变红色为阳性。 碳标记呼吸试验、血清学诊断、分子生物学技 术
霍乱弧菌课件
霍乱弧菌
二、微生物学检验
1.标本采集： 采集粪便标本，采集的标本应及时接种于碱性蛋白 胨水增菌。不能及时接种者，应将标本置于文-腊二氏保存液或卡布运送培养基中由专人运送 2. 涂片染色镜检：取标本直接涂片革兰染色，油镜下观察到呈鱼 群状排列的革兰阴性弧菌可初步报告 3.动力及制动试验：取患者粪便制成悬滴（或压滴）标本，观察细 菌动力，见穿梭或流星样运动，O1群霍乱弧菌多价血清制动试验阳 性，可早期报告
Q1、患者最有可能患有何种疾病？ Q2、如何确诊？
霍乱弧菌
三、临床意义
1.致病物质：菌毛定植、霍乱肠 毒素 2.所致疾病：引起霍乱，为肠道 烈性传染病，主要是通过污染的 水源或食物经口摄入。临床表现 为剧烈上吐下泻，严重脱水、酸 中毒、痉挛、尿闭、休克、死亡
• 致病物质： 鞭毛与菌毛：运动并粘附至小肠粘膜 肠毒素： A—A1：毒性组分，使腺苷酸环化酶活 性增高，cAMP 大量增加。 A2：与 B 结合 B—与小肠上皮细胞神经节苷脂受体结合
/碱性琼脂平板上生长良好
碱性蛋白胨水—运送标本/增菌
碱性琼脂平板—透明/半透明
无色扁平菌落
霍乱弧菌在TCBS琼脂平板上形成
发酵蔗糖的较大的黄色菌落
霍乱弧菌
霍乱弧菌在含亚碲酸钾的琼脂平板上将碲离子还原成 原子态的碲，形成有灰褐色中心的菌落
霍乱弧菌
3. 抗原构造与分型：根据O抗原的不同将霍乱弧菌分为155个 血清群，其中O1群、O139群引起霍乱，O2群～O138群只引起 人类胃肠炎，不引起霍乱流行，称之非O1群霍乱弧菌 4. 抵抗力： 霍乱弧菌在淡水及海水中存活1～3周。对热、 干燥、日光、酸、消毒剂敏感，耐碱力较强。100℃，1～ 2min即死亡；在正常胃酸中仅能生存4min；0.5ppm氯15min能 杀死；对链霉素、氯霉素和四环素敏感，对庆大霉素耐药
弧菌属
弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属、弯曲菌属、螺杆菌属●共性：G-直或微弯杆菌，氧化酶+,分属不同科。
●第一节弧菌属●定义：一群菌体短小、弯曲成弧形或直杆状G-菌，端单H，运动迅速；兼性厌氧，葡F，多需2~3%盐；氧+；●弧菌科: 弧菌属、异单胞菌属（气、邻单胞菌、发光杆菌属、利斯顿菌属、许旺菌属......弧菌属霍乱、副霍乱：O-1群霍乱弧菌、O139群霍乱弧菌胃肠炎：非O-1群霍乱弧菌食物中毒：副溶血性弧菌胃肠炎、伤口感染菌血症：其他弧菌：拟态弧菌、河弧菌、溶藻弧菌、霍利斯弧菌、创伤弧菌、麦契尼可夫弧菌、......等）鉴别要点●弧菌：氧化酶+（区别于肠菌科）葡F（区别于假单胞菌和其他非发酵菌）霍乱弧菌临床意义一、致霍乱——烈性肠道传染病依O抗原（至少）分155个血清型O1群：生物型分古典生物型（霍乱）、ElTor生物型（副霍乱）血清型分小川型（AB）稻叶型（AC）彦岛型（ABC）O139（1992年分离）遗传及毒力基因与O1群似。
发病机制：过程：1、不洁饮食，粪-口途径传播胃酸易感2、菌毛（定植于肠粘膜上皮细胞）3、霍乱毒素（CT，属肠毒素）4、细胞分泌水、电解质；肠腔内水、钠潴留5、剧烈吐泻（“米泔水”样粪便）6、继而体液丢失、缺水、水电解质紊乱、休克、死亡微生物检查：（一）标本的采集和运送——早期用药前，肛拭或棉拭粘取患者或疑似患者大便、呕吐物以及外环境样品；采得的标本应立即接种于培养基（床边接种，置于灭菌带棉塞试管或碱性胨水中），尽早送检;较远则应放卡-布运送培养基（旧时为“文─腊氏”保存液内1:2),严密不易碎容器,室温专人送检。
需增菌的标本一般要在18小时内完成。
检验程序：步骤：见标本（呕吐物，米泔水样粪便）分别进行1、直接革兰染色Gˉ弧菌，运动活跃；2、分离培养碱性胨水、凝集反应；3、PCR肠毒各培养上的生长特征：●碱性胨水（APW，PH8.5）: （增菌液）迅速,6～9h（El：2~3h）,大量生长, 薄菌膜;●碱性琼脂: 中等大圆齐透或半无色或带青砖色如水滴状；●TCBS: 大、黄(蔗+）、轻凸;●双─洗: 大、圆、扁、齐、透或半；●亚─洗：中心呈浅灰褐色；●SS：不长;●血琼脂：古典——草绿色环；ElTor——透明溶血环生化特性：cb+明胶+“漏斗状”生长,霍乱红反应+,LOA++-,U-C+ONPG+葡乳麦甘蔗阿+-+++-，DNA酶+，0%~6%盐+羊RBC溶血、鸡RBC凝集、V-P、多B敏感、IV组Ф裂解、V组Ф裂解古典生物型/ El-Tor生物型：---++-/D++--+废弃物处理：1．污染饮用水须严格消毒处理；2．污水需经消毒处理后才能排放；3．被污染食物就地封存，消毒处理；4．粪便消毒处理达到无害化；5．污染物品须严格消毒或焚烧；6．病人尸体由治疗病人的医疗单位负责消毒处理，处理后应当立即火化。
弧菌与气单胞菌
第10章弧菌与气单胞菌弧菌属（Vibrio）是一大群氧化酶试验阳性，菌体短小，弯曲成弧形动力活泼的革兰阴性菌。
在自然界中分布广泛，以水中最多。
目前已知本菌属有56个种，至少有12个种与人类疾病有关，其中以霍乱弧菌、副溶血性弧菌最为重要。
气单胞菌属（Aeromonas）广泛分布于自然界中的淡水、海水、污水、淤泥、土壤和人类粪便中。
原隶属于弧菌属，后发现其与弧菌的基因并不紧密相关，1956年Collweil等将气单胞菌属从弧菌科分出，隶属于新建的气单胞菌。
分为四个种，即亲水气单胞菌、豚鼠气单胞菌、温和气单胞菌及杀鲑气单胞菌。
有致病性菌株和非致病性菌株之分，致病性菌株可引起人类腹泻等多种感染。
第一节霍乱弧菌霍乱弧菌(Vibrio cholerae)是烈性传染病霍乱的病原菌，霍乱已在全球发生七次世界性大流行，死亡率甚高，为国际检疫的重要传染病之一，为我国甲类法定传染病。
一、生物学性状（一）形态与染色革兰染色阴性，长0.8~3μm、宽0.5~1.5μm，弯曲呈弧型或逗点状菌，从病人新分离的细菌形态典型（图9-1），人工培养后常呈杆状而不易与其他肠道菌区别。
取病人米泔水样粪便直接涂片染色镜检，可见其相互排列如“鱼群”状。
无芽胞和荚膜，有菌毛，菌体一端有一根单鞭毛，运动非常活泼。
悬滴观察，可见其呈穿梭或流星样运动。
有的有荚膜（O139）。
图10-1霍乱弧菌（扫描电镜，单位长度＝1μm）（箭头所指可见霍乱弧菌极端单鞭毛）（二）基因组特征霍乱弧菌基因组由2条环状染色体组成。
大染色体约2.91Mb，G+C占46.9%；小染色体约1.072Mb，G+C占47.7%。
总共有3885个ORF。
霍乱毒素基因位于大染色体上整合的温和丝状噬菌体CTXΦ基因组内。
（三）培养及生化反应兼性厌氧，生长繁殖温度范围广（18-37℃），营养要求不高，在普通蛋白胨水中即可生长，于pH8.0~9.0的碱性环境中生长更佳，因其他细菌在此环境中不易生长，故常用pH8.8-9.2的碱性蛋白胨作为选择培养基。
弧菌科及检验
弧菌科及检验弧菌科共同特点是一群氧化酶阳性、具有极端鞭毛、动力阳性、发酵葡萄糖的革兰阴性直或微弯的杆菌。
弧菌科包括4个菌属，即弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属和发光杆菌属。
前三属细菌均可引起人类感染，发光杆菌属对人无致病性。
一、弧菌属弧菌属的细菌分布广泛，以水中最多。
世界卫生组织腹泻病控制中心根据细菌的抗原性、生化特性、DNA同源性、致病性和耐盐性等将弧菌分为四类：①O1群霍乱弧菌；②不典型01群霍乱弧菌；③非01群霍乱弧菌；④其他弧菌（副溶血性弧菌）。
对人类致病的主要有霍乱弧菌和副溶血性弧菌，分别引起霍乱和食物中毒。
（一）霍乱弧菌霍乱弧菌是霍乱的病原菌，该病为一种急性烈性肠道传染病，发病急，传染性强，死亡率高。
1.生物学特性（1）形态染色：本菌呈弧形或逗点状，无芽胞，有菌毛，有些菌株有荚膜。
一端有一根粗而长的鞭毛，运动活泼。
取患者米泔水样粪便作悬滴观察，可见该菌呈穿梭样或流星状运动。
液体培养物滴片染色镜检，可见排列如“鱼群状”革兰阴性弧菌。
（2）培养特性：需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好。
耐碱不耐酸。
可在无盐环境生长。
碱性蛋白胨水中，经35℃培养6～9h，在液体表面大量繁殖形成菌膜，可达快速增菌的目的。
碱性琼脂平板上，经培养18～24h，形成较大、圆形、扁平、无色透明或半透明似水滴状菌落。
硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS）上，形成较大黄色菌落。
含亚碲酸钾琼脂平板上，因还原亚碲酸钾成金属碲，使菌落中心呈灰褐色。
庆大霉素琼脂上形成的菌落中心呈灰褐色。
（3）生化反应：能分解甘露醇、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖，产酸不产气。
迟缓发酵乳糖，不分解阿拉伯糖。
氧化酶、明胶酶试验和ONPG试验均阳性。
能产生靛基质，霍乱红反应（即亚硝基靛基质试验）阳性。
（4）抗原结构与分型：霍乱弧菌具有耐热的特异性0抗原和不耐热的非特异性H抗原。
H抗原为弧菌属所共有，特异性低。
O抗原特异性高，具有群特异性和型特异性，是分群和分型的基础。
第11章 弧菌属、气单胞菌属和邻单胞菌属
生物分型：O1群霍乱弧菌
古典生物型
El-Tor生物型
噬菌体分型：
第IV组噬菌体 第V组噬菌体
古典生物型 El-Tor生物型
霍乱的流行史
1817-1923 共6次 印度恒河三角洲
古典生物型
1961 第7次 印度尼西亚 Eltor生物型 1992.10 孟加拉湾的印度、孟加拉 O139
霍乱的流行史
副溶血弧菌在TCBS 上菌落
生物学特性（培养特征）
从腹泻患者中分离到的副溶血弧菌95% 以上在我妻培养基（人血培养基）上可 产生β-溶血现象，称为神奈川现象 （Kanagawa phenomenon, KP） 在SS平板上形成扁平，无色半透明，蜡 滴状的菌落，不易刮下，有辛辣味。
生物学特性（生化特征）
霍乱弧菌的运动模式图
生物学特性
(电镜)
霍乱弧菌的鞭毛
生物学特性
(特殊染色×10,000)
霍乱弧菌的鞭毛染色
生物学特性 (培养特性－－培养条件)
需氧或兼性厌氧，营养要求不高
最适生长温度37℃
最适pH8.2～9.0 Max:10.2 (耐碱怕酸)
Eltor生物型在血平板上可形成β -溶血（有变异）
微生物学检验
检验方法
l）初步鉴定：与01群和O139群抗血清(多价和单
价）凝集试验，菌落和菌体形态、氧化酶试验等
作出初步报告。
2）最后鉴定：根据纯培养后全面生化反应、血清学 分群及分型、生物型。
微生物学检验 检验方法
1.初筛试验 (1)霍乱红试验 (2)O/129敏感试验 (3)黏丝试验 （4）耐盐试验
是否与 O1 抗血清凝集
O1 群 稻叶型 (Inaba) AC
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其他致病物质
El-Tor生物型能产生不耐热溶血素和血凝素 不耐热溶血素
具有溶血活性、细胞毒、心脏毒和致死毒性 El-Tor生物型的溶血特性可发生变异 能凝集鸡红细胞 能被D-甘露糖抑制
血凝素
致病机制
正常情况下，胃液中的胃酸可消灭食物中的霍 乱弧菌 但在胃酸降低时，或摄入大量的霍乱弧菌时， 霍乱弧菌可以从胃进入肠道。 进入肠道的霍乱弧菌通过鞭毛运动穿过肠粘膜 表面的粘液层，通过菌毛定植于肠粘膜上皮细 胞表面繁殖 产生由染色体介导的对热不稳定的霍乱毒素（ cholera toxin, CT）而致病 O1群和O139群的致病机制和过程是一样的
副溶血弧菌
弧菌属
与人类感染有关的弧菌属细菌 霍乱弧菌 O1群霍乱弧菌（V. cholerae O1 group） O139群霍乱弧菌(V. cholerae O139 group) 非O1群霍乱弧菌（V. cholerae non-O1 group） 副溶血性弧菌(V. parahaemolyticus)、 霍利斯弧菌（V. hollisae）、拟态弧菌（V. minicus） 、河弧菌（V. fluvialis）、创伤弧菌（V. vulnificus） 、溶藻弧菌（V. alginolyticus）、少女弧菌（V. damsela）、麦氏弧菌（V. metschnikovii）、辛辛那 提弧菌(V. cincinnatiensis)、弗尼斯弧菌（V. furnissii ）、卡佳丽弧菌（V. carchariae）
抗原 O 抗原（A、B、C)：是分群和分型的基础。
1.依据O抗原不同分155个血清群（O1群、 O139群、非O1群霍乱弧菌） 2.O1群有三个血清型 AB构成小川型（Ogawa) AC构成稻叶型（Inaba）
ABC构成彦岛型(Hikojima）
3.每个血清型根据表型不同分成 Tor两个生物型。 古典和El-
弧菌属（Vibrio）的共同生物学特性:
除麦氏弧菌外，氧化酶阳性、还原硝酸盐
发酵葡萄糖产酸罕见产气
对O/129敏感（近年出现抗性株） 钠离子能刺激其生长，部分菌株嗜盐 兼性厌氧，营养要求不高 革兰阴性、弧形（短杆）菌、动力（＋）
弧菌属的致病性：
（含盐和海水环境中自身微生物群的一部分）
肠道内感染（霍乱、胃肠炎）
弯曲弧形 或逗点状， 粪便标本 中可首尾 相接鱼群 样平行排 列
霍乱弧菌的革兰染色结果
鱼 群 样 排 列
霍乱弧菌形态（电镜）
生物学特性
(纯培养扫描电镜)
描述： 弯曲弧 形或逗 点状
霍乱弧菌的扫描电镜图（金属镀膜）
生物学特性
(电镜)
霍乱患者小肠黏膜上皮 局部平切电镜图
霍乱弧菌扫描电镜图
（金属镀膜）
常用的选择性培养基
硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖 (Thiosufale-citratesalts-sucrose, TCBS)琼脂平板 霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色 含亚碲酸钾的选择平板有4号琼脂、庆大霉素琼脂 生长并将培养基中的碲离子还原成元素碲,形成灰褐 色菌落中心 能在无盐培养基上生长 在血琼脂平板上菌落较大, El-Tor生物型可形成β溶血环 在含明胶的培养基上O139群霍乱弧菌可形成不透明的浅 灰色菌落，周围有一圈不透明带，此菌落涂片观察可发 现荚膜
分类
弧菌属
O1群霍乱弧菌
非O1群霍乱弧菌 副溶血弧菌 拟态弧菌
弧菌科
异单胞菌属
气单胞菌属 邻单胞菌属
· · · · ·
等66个种
发光杆菌属等共8个属
发光杆菌属主要存在于海水中，对 人类不致病
第一节 弧菌属
弧菌属（Vibrio）共有36个种。其中有12 个种与人类感染有关 霍乱弧菌
引起霍乱
引起食物中毒
生物学特性
(电镜)
霍乱弧菌的糖原颗粒（*）超薄切片，×105 000
生物学特性：(米泔水样便)
描述： 穿梭或 流星样 动力
霍乱弧菌的运动模式图
生物学特性
(电镜)
霍乱弧菌的鞭毛
生物学特性
(特殊染色×10,000)
霍乱弧菌的鞭毛染色
生物学特性 (培养特性－－培养条件)
需氧或兼性厌氧，营养要求不高
O139群霍乱弧菌在亚洲的流行(1992.10-1994.11)
临床意义
(致病因素)
1.侵袭力
进入小肠，鞭毛、菌毛、分泌黏液，O139群有荚膜
穿过小肠黏膜表面黏液层
黏附于小肠黏膜上皮细胞刷 状缘的微绒毛上大量繁殖
临床意义
(致病因素)
2.霍乱肠毒素
MW：80000-90000
A1:活性亚单位 21812
粪便 粪便 粪便、血 粪便、伤口 粪便、伤口 伤口 耳、伤 粪便 粪便 粪便 粪便
霍 乱 弧 菌
Vibrio cholerae O1 and O139
霍乱弧菌是烈性肠道传染病霍乱的 病原菌，为我国法定传染病（甲类）， 俗称2号病。（1号病为鼠疫）。
血清学分群（型）在流行病学上有价值
H 抗原：共同抗原，特异性低
A1为毒素活性单位，通过B亚单位结合细胞膜上GM1受体的通道 或“内吞”进入细胞内，激活腺苷酸环化酶（cAMP酶），使细 胞内cAMP大量增加。快速向细胞外分泌水和电解质，使肠腔内 水、钠潴留，导致呕吐和腹泻，机体陷于缺水和电解质、酸碱 平衡紊乱状态。
B亚单位分子量为11 677Da，由103个氨基酸组成，为5个单体组成 中空的寡聚体。与肠粘膜上皮细胞膜上的神经节苷脂GM1受体结合
肠道外感染（伤口感染、败血症等）
致病性弧菌所引起的疾病
种 所致疾病 临床意义 标本来源
O1群霍乱弧菌 霍乱 主要致病菌 O139群霍乱弧菌 霍乱 主要致病菌 非O1群霍乱弧菌 胃肠炎 主要致病菌 副溶血弧菌 胃肠炎 主要致病菌 创伤弧菌 败血症、伤口感染 主要致病菌 少女弧菌 伤口感染 散发感染 溶藻弧菌 伤口感染 散发感染 霍利斯弧菌 胃肠炎 散发感染 拟态弧菌 胃肠炎 散发感染 河弧菌 胃肠炎 罕见感染 麦氏弧菌 胃肠炎 罕见感染 氟尼斯弧菌 胃肠炎 罕见感染 辛辛那提弧菌 菌血症、脑炎 罕见感染 鲨鱼弧菌 伤口感染 罕见感染
病例分析1 某患者因腹泻1天前来就诊。临床检查 无腹痛，亦无里急后重感，体表凉；每天 腹泻十几次，粪便外观呈稀水样，量多， 逐渐呈灰白色水样便，伴呕吐；患者神志 淡漠并感口渴。 (1) 此时需做何必要检查? (2) 若TCBS平板上出现较大黄色菌落，如 何进一步鉴定?
病例分析1 (1) 粪便标本直接涂片镜检、动力和制动试验：革兰染 色阴性弧菌，呈穿梭样运动有助于诊断霍乱弧菌；直 接荧光抗体染色和抗体凝集试验：应用01群和0139群 霍乱弧菌的多价和单价抗血清进行凝集，可快速诊断 霍乱弧菌感染；粪便标本碱性蛋白胨水增菌；粪便标 本接种选择性平板，如TCBS、庆大霉素平板分离培养 ；霍乱毒素的测定。 (2) 氧化酶试验：霍乱弧菌应为阳性；血清凝集试验： 挑选可疑菌落进行01群和0139群霍乱弧菌的多价和单 价抗血清作凝集反应；生化鉴别试验：如霍乱红试验 、粘丝试验、0/129敏感试验，其中包括古典生物型和 EI-Tor生物型的鉴别试验等，如多粘菌素B敏感试验。
程名称：临床微生物学检验 NO：33 授课班级 13检验3、4 班 授课学时 2 授课日期 2015. 4 .17 模块三：临床细菌学 学习任务三十四: 第11章 弧菌属、气单胞菌属邻单胞菌属 【学重难点】 霍乱弧菌的微生物学检验。 【教学方法】 讲授+多媒体 【导入新课】 通过霍乱病例介绍引入新课。
临床意义
发病机制
演示
临床意义
发病机理
霍乱弧菌在小肠黏膜部位的致病机制
临床意义
感染途径
临床意义
感染途径
临床意义
感染途径
临床意义
感染途径
临床意义
感染途径
临床意义
感染途径
演示
临床意义
引起的疾病
霍乱弧菌的致病过程
临床意义
临床表现
剧烈上吐下泻， 严重脱水、酸 中毒、痉挛、 尿闭、休克、 死亡。
生物分型：O1群霍乱弧菌
古典生物型
El-Tor生物型
噬菌体分型：
第IV组噬菌体 第V组噬菌体
古典生物型 El-Tor生物型
霍乱的流行史
1817-1923 共6次 印度恒河三角洲
古典生物型
1961 第7次 印度尼西亚 Eltor生物型 1992.10 孟加拉湾的印度、孟加拉 O139
霍乱的流行史
病例分析2 女，21岁，在欠发达地区工作，突发剧烈腹泻， 不久开始呕吐，每日腹泻10多次，大便呈米泔水样。 机体一般情况迅速恶化。急送医院，检查：病人脱水 ，血压为70/50mmHg（正常时为：120/80mmHg）， 脉搏快但弱。医师诊断为霍乱，并立即给予抗菌补液 治疗。病情得以逐步好转。 问题： ⑴ 如何取样快速诊断证明病人为霍乱弧菌感染？ ⑵ 如何进行病原菌的分离培养进一步证明是霍乱弧 菌感染？ ⑶ 霍乱弧菌引起腹泻的毒力物质是什么？简述其结 构。 ⑷ 该毒力物质引起腹泻脱水的关键机制是什么？
最适生长温度37℃ ,16~44℃均可生长.
具耐碱性，最适pH8.2～9.0 Max:10.2 (耐碱怕酸) 在pH6.8~10.2范围均可生长 在pH8.2~9.0的碱性胨水或碱性平板上生长迅速， 其他杂菌被抑制生长 在pH8.5的碱性胨水中经35℃4~6h增菌后可在液 体表面大量繁殖形成菌膜 Eltor生物型在血平板上可形成β -溶血（有变异）
霍乱弧菌的致病 （严重时液体丢失量达500～1000ml/h）
临床意义
临床分期 1.前驱期