33第11章 弧菌属、气单胞菌属和邻单胞菌属

临床意义
发病机制
演示
临床意义
发病机理
霍乱弧菌在小肠黏膜部位的致病机制
临床意义
感染途径
临床意义
感染途径
临床意义
感染途径
临床意义
感染途径
临床意义
感染途径
临床意义
感染途径
演示
临床意义
引起的疾病
霍乱弧菌的致病过程
临床意义
临床表现
剧烈上吐下泻， 严重脱水、酸 中毒、痉挛、 尿闭、休克、 死亡。
A1为毒素活性单位，通过B亚单位结合细胞膜上GM1受体的通道 或“内吞”进入细胞内，激活腺苷酸环化酶（cAMP酶），使细 胞内cAMP大量增加。快速向细胞外分泌水和电解质，使肠腔内 水、钠潴留，导致呕吐和腹泻，机体陷于缺水和电解质、酸碱 平衡紊乱状态。


B亚单位分子量为11 677Da，由103个氨基酸组成，为5个单体组成 中空的寡聚体。与肠粘膜上皮细胞膜上的神经节苷脂GM1受体结合
弯曲弧形 或逗点状， 粪便标本 中可首尾 相接鱼群 样平行排 列
霍乱弧菌的革兰染色结果
鱼 群 样 排 列
霍乱弧菌形态（电镜）
生物学特性
(纯培养扫描电镜)
描述： 弯曲弧 形或逗 点状
霍乱弧菌的扫描电镜图（金属镀膜）
生物学特性
(电镜)
霍乱患者小肠黏膜上皮 局部平切电镜图
霍乱弧菌扫描电镜图
（金属镀膜）
最适生长温度37℃ ,16~44℃均可生长.
具耐碱性，最适pH8.2～9.0 Max:10.2 (耐碱怕酸) 在pH6.8~10.2范围均可生长 在pH8.2~9.0的碱性胨水或碱性平板上生长迅速， 其他杂菌被抑制生长 在pH8.5的碱性胨水中经35℃4~6h增菌后可在液 体表面大量繁殖形成菌膜 Eltor生物型在血平板上可形成β -溶血（有变异）
弧菌属（Vibrio）的共同生物学特性:
除麦氏弧菌外，氧化酶阳性、还原硝酸盐
发酵葡萄糖产酸罕见产气
对O/129敏感（近年出现抗性株） 钠离子能刺激其生长，部分菌株嗜盐 兼性厌氧，营养要求不高 革兰阴性、弧形（短杆）菌、动力（＋）
弧菌属的致病性：
（含盐和海水环境中自身微生物群的一部分）
肠道内感染（霍乱、胃肠炎）
【教学内容】
第11章
弧菌属、气单胞菌属 邻单胞菌属
教学要求及目的



一、掌握霍乱弧菌的微生物学检验与鉴别 要点。 二、掌握副溶血性弧菌的鉴别要点 三、熟悉霍乱弧菌与副溶血性弧菌的临床 意义。 四、了解气单胞菌属、邻单胞菌属

弧菌科



一群菌体短小、弯曲成弧形或直杆状的 革兰阴性细菌 兼性厌氧，发酵葡萄糖，许多菌株生长 需要2%~3%氯化钠 大多数菌株氧化酶阳性 具有一端单一鞭毛、运动迅速 弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中 最为多见。其中有一些种对人类致病。
临床意义






主要引起人类腹泻，也可导致肠道外感染如伤口感染、 败血症等 氧化酶均阳性 除麦氏弧菌外 能发酵葡萄糖，对弧菌抑制剂O/129敏感 钠离子能刺激其生长，有些菌种在无盐条件下不能生长 ，称为嗜盐菌（halophilic bacteria） 多数能在血平板或普通琼脂平板上生长，在血平板上可 呈现α、β或不溶血菌落。 在肠道选择性培养基上如含乳糖或肌醇的麦康凯平板， 许多致病性弧菌可以生长，形成糖类不发酵的菌落
程名称：临床微生物学检验 NO：33 授课班级 13检验3、4 班 授课学时 2 授课日期 2015. 4 .17 模块三：临床细菌学 学习任务三十四: 第11章 弧菌属、气单胞菌属邻单胞菌属 【学重难点】 霍乱弧菌的微生物学检验。 【教学方法】 讲授+多媒体 【导入新课】 通过霍乱病例介绍引入新课。
霍乱弧菌的致病 （严重时液体丢失量达500～1000ml/h）
临床意义
临床分期 1.前驱期
无明显前驱症状，或轻度腹
鸣、腹胀和不适。
临床意义
临床分期 2.吐泻期
持续2～3天，因剧烈吐泻造
成大量水分和电解质丧失。
临床意义
临床分期
3.脱水虚脱期
脱水貌，洗衣工手； 循环衰竭、代谢中毒、急性肾衰； 水电解质平衡紊乱导致肌肉痉挛。
常用的选择性培养基



硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖 (Thiosufale-citratesalts-sucrose, TCBS)琼脂平板 霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色 含亚碲酸钾的选择平板有4号琼脂、庆大霉素琼脂 生长并将培养基中的碲离子还原成元素碲,形成灰褐 色菌落中心 能在无盐培养基上生长 在血琼脂平板上菌落较大, El-Tor生物型可形成β溶血环 在含明胶的培养基上O139群霍乱弧菌可形成不透明的浅 灰色菌落，周围有一圈不透明带，此菌落涂片观察可发 现荚膜
4.恢复期
各种症状趋于缓解，但可出现发热
生物学特性
形态





新从患者标本中分离出的细菌革兰染色阴性， 弧形或逗点状 在患者“米泔水”样便中，可呈头尾相接的“ 鱼群”样排列 菌体一端有鞭毛，悬滴观察时呈“穿梭”样运 动 有普通菌毛和性菌毛 O139群有荚膜
生物学特性(纯培养革兰染色)
描述： 革兰阴性，
分类
弧菌属
O1群霍乱弧菌
非O1群霍乱弧菌 副溶血弧菌 拟态弧菌
弧菌科
异单胞菌属
气单胞菌属 邻单胞菌属
· · · · ·
等66个种
发光杆菌属等共8个属
发光杆菌属主要存在于海水中，对 人类不致病
第一节 弧菌属


弧菌属（Vibrio）共有36个种。其中有12 个种与人类感染有关 霍乱弧菌

引起霍乱
引起食物中毒
抗原 O 抗原（A、B、C)：是分群和分型的基础。
1.依据O抗原不同分155个血清群（O1群、 O139群、非O1群霍乱弧菌） 2.O1群有三个血清型 AB构成小川型（Ogawa) AC构成稻叶型（Inaba）
ABC构成彦岛型(Hikojima）
3.每个血清型根据表型不同分成 Tor两个生物型。 古典和El-
肠道外感染（伤口感染、败血症等）
致病性弧菌所引起的疾病
种 所致疾病 临床意义 标本来源
O1群霍乱弧菌 霍乱 主要致病菌 O139群霍乱弧菌 霍乱 主要致病菌 非O1群霍乱弧菌 胃肠炎 主要致病菌 副溶血弧菌 胃肠炎 主要致病菌 创伤弧菌 败血症、伤口感染 主要致病菌 少女弧菌 伤口感染 散发感染 溶藻弧菌 伤口感染 散发感染 霍利斯弧菌 胃肠炎 散发感染 拟态弧菌 胃肠炎 散发感染 河弧菌 胃肠炎 罕见感染 麦氏弧菌 胃肠炎 罕见感染 氟尼斯弧菌 胃肠炎 罕见感染 辛辛那提弧菌 菌血症、脑炎 罕见感染 鲨鱼弧菌 伤口感染 罕见感染
粪便 粪便 粪便、血 粪便、伤口 粪便、伤口 伤口 耳、伤 粪便 粪便 粪便 粪便
霍 乱 弧 菌
Vibrio cholerae O1 and源自文库O139
霍乱弧菌是烈性肠道传染病霍乱的 病原菌，为我国法定传染病（甲类）， 俗称2号病。（1号病为鼠疫）。
血清学分群（型）在流行病学上有价值
H 抗原：共同抗原，特异性低
其他致病物质

El-Tor生物型能产生不耐热溶血素和血凝素 不耐热溶血素

具有溶血活性、细胞毒、心脏毒和致死毒性 El-Tor生物型的溶血特性可发生变异 能凝集鸡红细胞 能被D-甘露糖抑制

血凝素


致病机制





正常情况下，胃液中的胃酸可消灭食物中的霍 乱弧菌 但在胃酸降低时，或摄入大量的霍乱弧菌时， 霍乱弧菌可以从胃进入肠道。 进入肠道的霍乱弧菌通过鞭毛运动穿过肠粘膜 表面的粘液层，通过菌毛定植于肠粘膜上皮细 胞表面繁殖 产生由染色体介导的对热不稳定的霍乱毒素（ cholera toxin, CT）而致病 O1群和O139群的致病机制和过程是一样的

副溶血弧菌

弧菌属



与人类感染有关的弧菌属细菌 霍乱弧菌 O1群霍乱弧菌（V. cholerae O1 group） O139群霍乱弧菌(V. cholerae O139 group) 非O1群霍乱弧菌（V. cholerae non-O1 group） 副溶血性弧菌(V. parahaemolyticus)、 霍利斯弧菌（V. hollisae）、拟态弧菌（V. minicus） 、河弧菌（V. fluvialis）、创伤弧菌（V. vulnificus） 、溶藻弧菌（V. alginolyticus）、少女弧菌（V. damsela）、麦氏弧菌（V. metschnikovii）、辛辛那 提弧菌(V. cincinnatiensis)、弗尼斯弧菌（V. furnissii ）、卡佳丽弧菌（V. carchariae）
病例分析1 某患者因腹泻1天前来就诊。临床检查 无腹痛，亦无里急后重感，体表凉；每天 腹泻十几次，粪便外观呈稀水样，量多， 逐渐呈灰白色水样便，伴呕吐；患者神志 淡漠并感口渴。 (1) 此时需做何必要检查? (2) 若TCBS平板上出现较大黄色菌落，如 何进一步鉴定?
病例分析1 (1) 粪便标本直接涂片镜检、动力和制动试验：革兰染 色阴性弧菌，呈穿梭样运动有助于诊断霍乱弧菌；直 接荧光抗体染色和抗体凝集试验：应用01群和0139群 霍乱弧菌的多价和单价抗血清进行凝集，可快速诊断 霍乱弧菌感染；粪便标本碱性蛋白胨水增菌；粪便标 本接种选择性平板，如TCBS、庆大霉素平板分离培养 ；霍乱毒素的测定。 (2) 氧化酶试验：霍乱弧菌应为阳性；血清凝集试验： 挑选可疑菌落进行01群和0139群霍乱弧菌的多价和单 价抗血清作凝集反应；生化鉴别试验：如霍乱红试验 、粘丝试验、0/129敏感试验，其中包括古典生物型和 EI-Tor生物型的鉴别试验等，如多粘菌素B敏感试验。
生物学特性
(电镜)
霍乱弧菌的糖原颗粒（*）超薄切片，×105 000
生物学特性：(米泔水样便)
描述： 穿梭或 流星样 动力
霍乱弧菌的运动模式图
生物学特性
(电镜)
霍乱弧菌的鞭毛
生物学特性
(特殊染色×10,000)
霍乱弧菌的鞭毛染色
生物学特性 (培养特性－－培养条件)
需氧或兼性厌氧，营养要求不高
O139群霍乱弧菌在亚洲的流行(1992.10-1994.11)
临床意义
(致病因素)
1.侵袭力
进入小肠，鞭毛、菌毛、分泌黏液，O139群有荚膜
穿过小肠黏膜表面黏液层
黏附于小肠黏膜上皮细胞刷 状缘的微绒毛上大量繁殖
临床意义
(致病因素)
2.霍乱肠毒素
MW：80000-90000
A1:活性亚单位 21812
病例分析2 女，21岁，在欠发达地区工作，突发剧烈腹泻， 不久开始呕吐，每日腹泻10多次，大便呈米泔水样。 机体一般情况迅速恶化。急送医院，检查：病人脱水 ，血压为70/50mmHg（正常时为：120/80mmHg）， 脉搏快但弱。医师诊断为霍乱，并立即给予抗菌补液 治疗。病情得以逐步好转。 问题： ⑴ 如何取样快速诊断证明病人为霍乱弧菌感染？ ⑵ 如何进行病原菌的分离培养进一步证明是霍乱弧 菌感染？ ⑶ 霍乱弧菌引起腹泻的毒力物质是什么？简述其结 构。 ⑷ 该毒力物质引起腹泻脱水的关键机制是什么？
生物分型：O1群霍乱弧菌
古典生物型
El-Tor生物型
噬菌体分型：
第IV组噬菌体 第V组噬菌体
古典生物型 El-Tor生物型
霍乱的流行史
1817-1923 共6次 印度恒河三角洲
古典生物型
1961 第7次 印度尼西亚 Eltor生物型 1992.10 孟加拉湾的印度、孟加拉 O139
霍乱的流行史
病例分析2 ⑴ 采取病人“米泔水样”大便或呕吐物制成悬滴或压 滴片，观察细菌动力，可见流星或穿梭状运动的细菌 。｛如条件许可，可进一步作制动试验（即标本+霍 乱多价诊断血清，用暗视野镜观察，3分钟内运动被 抑制），阳性者可诊断。｝ ⑵ ① 标本采集：米泔水”样便。 ② 分离培养与鉴定：将标本直接接种碱性胨水， 35℃ 6～8 h后，接种至TCBS平板（出现黄色菌落） 或庆大霉素琼脂平板（出现中心灰褐色的菌落）， 35℃ 12h～18h出现可疑菌落，结合菌落特征和菌体形 态与生化反应（粘丝试验、霍乱红反应等），最后使 用Ｏl群和Ｏ139群多价和单价抗血清进行凝集，确定 血清型，作出报告。
A2:连接亚单位 5000
B：结合亚单位
霍乱弧菌肠毒素（CE, cholera enterotoxin）
CT(cholera toxin)

结构基因是ctxAB操纵子 由A和B两个蛋白质亚单位组成

A亚单位分子量为21 812Da，由240个氨基酸组成，在成熟过程 中由蛋白水解酶切割成A1和A2两部分，以二硫键相连