双缩脲蛋白定量试剂盒

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总蛋白试剂盒(双缩脲比色法)标准操作程序.

总蛋白试剂盒（双缩脲比色法）标准操作程序1.摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆中的总蛋白含量。

2.适用范围程序适用于AU5811自动生化分析仪检测人血清或血浆中的总蛋白含量。

3.职责使用AU5811自动生化分析仪进行测定总蛋白浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行，室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的总蛋白试剂盒采用的是双缩脲比色法。

5.原理蛋白质中的肽键在碱性条件下，与铜离子反应生成紫红色络合物，并且引起550nm处吸光度的上升。

由于反应所产生的化合物在波长550nm处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内, 550nm处吸光度的变化值与样本中总蛋白的含量成正比。

−C−→++2u紫红色络合物蛋白质中的肽键碱性条件−−6.仪器AU5811自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：测定：酒石酸钾钠≥5g/L试剂：硫酸铜≥2g/L、碘化钾≥1g/L、NaOH≥30g/L校准品：白蛋白（含量见瓶签）7.3试剂稳定性：未打开试剂在2-8℃避光保存可至失效期。

校准品使用后应密封保存，以免液体挥发。

8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用科华公司的校准品对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品：使用罗氏公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。

每日在测定前做一次质控加试剂后做一次质控。

该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。

总蛋白测定试剂盒(双缩脲法)产品技术要求shouyi

总蛋白测定试剂盒（双缩脲法）
适用范围：本试剂用于体外定量测定人血清中总蛋白的含量。

1.1产品规格
4×100mL；6×60mL；8×50mL；2×100mL
1.2产品组成成分
NaOH 600mol/L，硫酸铜12 mmol/L，酒石酸钾钠32 mmol/L。

2.1 外观
试剂为淡蓝色透明溶液。

2.2 装量
液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3 试剂空白吸光度
A≤0.15（光径1.0cm，波长540nm）。

2.4分析灵敏度
测定57.2g/L被测物时，吸光度变化在0.1631～0.2075范围内。

2.5 准确度
相对偏差应不超过±5%。

2.6 精密度
2.6.1 重复性
变异系数CV＜3%。

2.6.2 批间差
批间相对极差＜3%。

2.7 线性区间
a）（0，100]g/L。

在规定的线性区间内，测定值与样本浓度值的相关系数（r）应不低于0.990。

b）（0，30]g/L区间内，线性绝对偏差应不超过±3g/L；（30，100]g/L 区间内，线性相对偏差应不超过±10%。

2.8稳定性
原装试剂2～8℃避光保存，有效期18个月，有效期满后两个月内测定结果应符合2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。

总蛋白检测试剂盒(双缩脲比色法)

总蛋白检测试剂盒(双缩脲比色法)简介：总蛋白(Total Protein ，TP)由白蛋白和球蛋白组成。

对于生物体液(血清、尿液、脑脊液)中总蛋白质含量的测定，一般要基于如下两个假设：1、所有蛋白质分子由纯多肽组成，含氮量的质量百分比为16%；2、体液中含有数百个蛋白质分子，每个分子对测定反应都具有非常相似的特性。

目前常用的方法有：双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法、凯氏定氮法、沉淀法等。

Leagene 总蛋白检测试剂盒(双缩脲比色法)多用于人或动物血清、血浆、组织等样本中的总蛋白含量测定。

双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下，铜离子与肽键形成有色螯合的铜复合物，呈紫色，所产生的颜色密度与参与反应肽键数成比例。

可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长。

双缩脲法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，但易受铜离子螯合剂影响。

本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、离心管或小试管2、水浴锅或恒温箱3、比色杯4、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、取蛋白标准配制液或稀释液加入到蛋白标准中，充分溶解后配制成的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。

亦可按自己试验要求继续进行稀释，如稀释至1mg/ml 。

特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。

例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取蛋白标准溶解于蔗糖中。

一般也可以用NaCl 或PBS 作为溶解总蛋白标准品的稀释液。

编号名称TC0547 120T Storage试剂(A): 双缩脲试剂 250ml 4℃ 试剂(B): 蛋白标准 20mg RT 试剂(C): 蛋白标准配制液 5ml RT 试剂(D): 双缩脲空白试剂(备选) 100ml4℃ 使用说明书1份2、样本处理：血清、血浆样本直接取检测。

对于组织样本，按组织质量(g)：生理盐水比例，加入生理盐水或PBS，冰浴下匀浆后，离心，取上清待检。

总蛋白测定试剂盒(双缩脲法)产品技术要求ruizhengshanda

总蛋白测定试剂盒（双缩脲法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中总蛋白的含量。

1.1产品型号/规格及其划分说明1.2主要组成成分2.1外观2.1.1 外观（液体单试剂）.R应为蓝色透明溶液，无混浊，无未溶解物；.校准液应为浅黄色透明溶液，无混浊，无未溶解物；.试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。

2.1.2 外观（液体双试剂）a）R1应为无色溶液，无混浊，无未溶解物；b）R2应为蓝色溶液，无混浊，无未溶解物；c）校准液应为浅黄色透明溶液，无混浊，无未溶解物；d）试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。

2.2 净含量R和校准液的净含量不少于标示值。

R1、R2和校准液的净含量不少于标示值。

2.3 试剂空白吸光度在主波长540nm, 副波长700nm处（光径1cm），试剂空白吸光度A≤0.20。

2.4分析灵敏度测量1g/L的被测物时，吸光度变化△A≥0.0010。

2.5 线性区间在[10，110]g/L线性范围内，线性相关系数r≥0.990。

在[10,20]g/L范围内，绝对偏差不超过±2g/L；在(20,110]g/L范围内，相对偏差不超过±10%。

2.6 精密度2.6.1 重复性重复测定(45±5)g/L、(70±10)g/L和 (100±10)g/L的样品，变异系数CV%≤5%。

2.6.2 批间差相对极差≤5%。

2.7 准确度测定标准物质BW3627-2，测定值与靶值的相对偏差不超过±10%。

2.8 稳定性原包装的试剂盒在（2～8）℃避光保存，有效期为18个月。

试剂盒在规定的储存条件下保存至有效期满后，检测2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7项，结果应符合各项目的要求。

总蛋白测定试剂盒(双缩脲法) 产品技术要求珠海森龙生物

总蛋白测定试剂盒(双缩脲法)性能指标
1 外观和性状
单试剂：R应为蓝色澄清液体，无沉淀、悬浮物和絮状物。

2 装量
液体试剂的装量应不小于标示量。

3 试剂空白吸光度
试剂空白吸光度应不大于 0.200 。

4
线性
试剂盒线性区间应覆盖[30.0 ，100]g/L；
a）线性相关系数 r 应不小于 0.995；
b）线性偏差不应超过±6.0%。

5
准确度
相对偏差应不超过±5%。

6 分析灵敏度
70g/L 样本吸光度差值（△A）应不小于 0.150。

7
精密度
7.1 重复性
重复测试（70.0±10.0）g/L 的样本，所得结果的变异系数（CV）应不大于 2% 7.2 批间差
测试（70.0±10.0）g/L 的样本，所得结果的批间相对极差（R）应不大于 5%
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双缩脲法测定实验报告

一、实验目的1. 学习双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法。

2. 掌握双缩脲试剂的配制和使用。

3. 了解实验过程中可能出现的误差及解决办法。

二、实验原理双缩脲法是一种经典的蛋白质定量方法，其原理基于蛋白质分子中的肽键与铜离子（Cu2+）在碱性条件下发生反应，生成紫红色络合物。

该络合物在特定波长（如540nm）处的吸光度与蛋白质含量呈正比关系。

通过测量吸光度，可以计算出蛋白质的浓度。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 蛋白质标准液（已知浓度）- 待测样品（含有未知蛋白质）- 双缩脲试剂A（含CuSO4）- 双缩脲试剂B（含NaOH）- 6mol/L NaOH溶液- 0.1mol/L HCl溶液- 10g/L NaCl溶液- 移液器- 容量瓶- 烧杯- 比色皿- 分光光度计2. 实验仪器：- 移液器- 容量瓶- 烧杯- 比色皿- 分光光度计四、实验步骤1. 配制双缩脲试剂：- 称取0.1g硫酸酮（CuSO4）溶于50mL去离子水中。

- 称取1.5g酒石酸钾钠溶于50mL去离子水中。

- 称取0.05g碘化钾溶于50mL去离子水中。

- 将三种溶液混合，搅拌均匀，备用。

2. 准备蛋白质标准液：- 将蛋白质标准液用去离子水稀释至一定浓度，备用。

3. 准备待测样品：- 称取一定量的待测样品，用去离子水稀释至一定浓度，备用。

4. 标准曲线的制作：- 取7支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL蛋白质标准液，然后依次加入1.5mL双缩脲试剂A和1.5mL双缩脲试剂B。

- 将试管放入水浴中加热10分钟，取出冷却至室温。

- 用移液器取0.5mL溶液于比色皿中，以空白试剂为参比，在540nm波长处测定吸光度。

- 以蛋白质含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

5. 待测样品的测定：- 按照标准曲线的制作步骤，对待测样品进行测定。

- 根据标准曲线，计算出待测样品中蛋白质的含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：- 在540nm波长处，蛋白质含量与吸光度呈良好的线性关系，相关系数R²=0.998。

双缩脲法蛋白质含量测定试剂盒使用说明

双缩脲法蛋白质含量测定试剂盒使用说明货号:PC0040产品简介:样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。

此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

形成紫色络合物；紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。

该方法测定范围为1~10mg蛋白质，适用于蛋白质浓度高的样品，尤其是动物材料。

自备仪器和用品:可见分光光度计、移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

标准品：液体×1瓶，5mg/mL，4℃保存。

样品中可溶性蛋白质提取:1.液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。

2.组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水））冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。

（动物样品常常需要稀释）3.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

测定步骤:1.分光光度计预热30min以上，调节波长到540nm，蒸馏水调零。

2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL蒸馏水，1000μL试剂一，混匀后室温静置15min，于540nm比色，记为A空白管。

3.标准管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL标准液，1000μL试剂一，混匀后室温静置15min，于540nm比色，记为A标准管。

4.测定管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL待测液，1000μL试剂一，混匀后室温静置15min，于540nm比色，记为A测定管。

样品中蛋白质浓度计算：C待测（mg/mL）=C标准管×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)=5×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)注意事项：1.样品蛋白浓度须在1~10mg/ml范围内，低于1mg/ml不能用此法，高于10mg/ml须做相应稀释。

总蛋白(TP)测定试剂盒(双缩脲法)产品技术要求mairui

2性能指标
2.1外观
试剂1（R1）应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物；
试剂2（R2）应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物；
试剂盒各组分应齐全、完整，液体无渗漏；包装标签文字符号应完整、清晰。

2.2净含量
液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3试剂空白吸光度
试剂以水为空白在37 ℃ 1 ℃，546 nm 波长条件下，吸光度应小于0.200。

2.4分析灵敏度
当样本浓度为70 g/L 时，吸光度变化应不小于0.150。

2.5线性范围
试剂盒在（2～120）g/L 范围内：
a)线性相关系数r 应不小于0.995；
b)当样本浓度不小于30 g/L 时，线性相对偏差应不超过±6.0%；当样本浓度小于30 g/L 时，线性绝对偏差应不超过±3.6g/L。

2.6测量精密度
2.6.1重复性
变异系数：CV 应不大于 2.0％。

2.6.2批间差
相对极差：R 应不大于 4.5％。

2.7准确度
2.7.1国家标准品测试
测定国家标准品，测定结果与靶值的相对偏差应不超过±5.0% 。

2.7.2质控品测试
测定质控品，测定结果应在靶值范围内。

2.8分析特异性
血红蛋白浓度在250 mg/dL 内、抗坏血酸浓度在30 mg/dL 内、内源性酯浓度在1200 mg/dL 内、结合胆红素在21 mg/dL 内、非结合胆红素浓度均在21 mg/dL 内、葡聚糖（分子量：7w 或4w）浓度在3000 mg/dL 内，对试剂检测结果的偏差影响应在±10 .0%以内。

尿酸测定试剂盒(尿酸酶法)标准化操作规程TP-SOP

总蛋白测定试剂盒（双缩脲法）标准化操作规程1 目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。

2 授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。

3 适用范围本试剂适用于体外定量检测人血清或血浆中总蛋白的含量。

4 检验方法本试剂盒采用双缩脲法测定总蛋白的含量。

5 检验原理本试剂采用双缩脲反应方法，即在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与两价铜离子反应生成蓝紫色络合物，其中每个铜离子与五至六个肽键络合。

在试剂中加入碘化物有助于防止碱性铜络合物的自动还原。

反应形成的蓝紫色与样本中总蛋白浓度成正比，通过测定520～560nm处吸光度值的变化，即可计算出样本中总蛋白的浓度。

双光束分析时，空白波长应设定在600～700nm。

6 标本要求6.1样本为血清或血浆。

由于血浆含有纤维蛋白原，测定结果比血清高约3g/L。

6.2样本应及时离心分离，不得使用溶血或被污染的样本。

6.3样本分离后，请于当日测定。

如当日不能完成测定，请作如下保存：样本在无微生物污染2℃~8℃可稳定5天。

冷冻保存稳定时间更长，注意样本融化后需轻轻颠倒混匀。

7 试剂及配套品7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司总蛋白试剂盒（双缩脲法）7.2试剂组成7.37.3.1试剂在2℃~8℃条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为18个月。

7.3.2试剂开封后在2℃~8℃条件下可稳定30天。

8 实验仪器及性能指标8.1 实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1 试剂空白吸光度：A在0.050～0.150范围内。

8.2.2 分析灵敏度：测试1.0g/L被测物时，吸光度变化△A＞0.002。

8.2.3 线性范围：线性范围为5.0g/L～150g/L；线性相关系数r≥0.9950；[5.0,30]g/L范围内，线性绝对偏差应不超过±5.0g/L；（30，150] g/L范围内，相对偏差不超过±15％。

8.2.4 准确度：当参考物质浓度≤30 g/L，实测值与标示值的绝对偏差应在±5.0 g/L范围内；当参考物质浓度＞30 g/L，实测值与标示值的相对偏差应在±15%范围内。

双缩脲试剂(AB液)使用说明

双缩脲试剂(AB液)使用说明货号：PC0041保存：室温保存。

有效期12个月。

试剂盒组成：规格Storage名称试剂(A):Biuret Reagent A100ml RT避光试剂(B):Biuret Reagent B10ml RT避光产品说明：双缩脲是一种用于分析蛋白质的方法，双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下，铜离子与肽键形成有色螯合的铜复合物，呈紫色。

所产生的颜色密度与参与反应肽键数成比例，可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。

双缩脲法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，但易受铜离子螯合剂影响，对于血清总蛋白的双缩脲分析，胆红素、脂类、血红蛋白、葡聚糖具有一定干扰作用。

双缩脲试剂(AB液)由Biuret Reagent A、Biuret Reagent B组成，如组织里含有蛋白质或具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应，颜色深浅与蛋白质浓度成正比。

该试剂是较为粗略的验证蛋白质存在的方法，多用于定性检测蛋白质。

操作步骤(仅供参考)：1、先将Biuret Reagent A3ml加入待测样品3ml，振荡均匀，以便产生碱性环境。

2、加入2~3滴Biuret Reagent B，振荡均匀，如果组织里含有蛋白质或具有两个或两个以上肽键的化合物皆可不双缩脲试剂产生紫色反应，颜色深浅不蛋白质浓度成正比。

3、如果想采用分光光度计或酶标仪测定，应于540nm波长处的吸光值，如无540nm，520～562nm之间的波长也可，根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。

注意事项：1、待测蛋白和蛋白标准加入双缩脲试剂后，如果収现检测效果丌佳，可以室温放置1h或60℃放置15min，颜色会随着时间的延长丌断加深。

显色反应也会随温度升高而加快。

2、检测中収现所有孔都呈暗紫色，可能原因是样品含有还原剂，应适当透析或稀释样品。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

BCA蛋白定量试剂盒使用说明书

产品使用说明书BCA 蛋白定量试剂盒试剂盒简介以下货号试剂盒可参照此说明书操作：建议同时参考本说明书英文原文（说明书编号TB380）。

BCA Protein Assay Kit ：500 / 2500 rxn 货号71285-3BCA 蛋白定量方法是基于双缩脲反应，即在碱性溶液中蛋白将Cu 2+ 还原成Cu 1+，而根据检测到的单价Cu 离子的浓度可以检测体系中对应蛋白的量。

Bicinchoninic acid 是一种显色剂，可以螯合被还原的铜离子，产生一种在562nm 有强吸收的紫色复合物。

Novagen 的BCA 试剂盒可以用于测定浓度在20-2,000µg/ml 范围内的蛋白的浓度，根据样品量分为标准型和微型两种形式进行测定。

试剂盒提供的组分足够用于500次标准型反应（50µl 蛋白样品加上1ml 反应试剂）或2,500次微型测定（25µl 蛋白样品加上200µl 反应试剂，可以在96孔板中进行高通量定量）。

试剂盒中提供的BSA （牛血清白蛋白，2mg/ml ）为用户制作标准浓度曲线提供了便利。

Novagen 的BCA 试剂盒准确度高，兼容性好，能与各种化学试剂和表面活性剂兼容，可以方便地配合默克Novagen 的BugBuster ®，PopCulture ®，CytoBuster™，Reportasol™和Insect PopCulture 抽提蛋白的细胞裂解试剂一起使用。

有些化学成分，例如螯合剂，强酸、强碱、还原剂等，可能会干扰BCA 法采用的还原及螯合定量过程，详细情况请看说明书后附列表。

试剂盒提供的组分500ml BCA 反应液（0.1M NaOH 缓冲的bicinchoninic acid ，碳酸钠，酒石酸钠，碳酸氢钠，pH11.25） 15ml 4% 硫酸铜3×1ml BSA 标准品（2mg/ml ）储存室温存放。

TP 文档,总蛋白(TP)测定试剂盒(双缩脲法)检测标准操作规程

1、方法依据：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司总蛋白（TP）测定试剂盒（双缩脲法）测定方法2、适用范围：适用于人血清或血浆总蛋白（TP）的测定。

3、试剂仪器：3.1 试剂：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司原装试剂盒。

3.2 试剂储存：未开启的试剂盒在2℃～8℃保存有效期为一年。

试剂开瓶后应避光保存，在2℃～8℃可稳定28天。

试剂不可冰冻3.3 仪器：迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪.4、操作程序4.1方法原理在碱性条件下，蛋白质与铜离子生成紫蓝色复合物。

显色强度和蛋白质浓度成正比4.2样本要求新鲜血清、肝素抗凝或EDTA抗凝血浆样本。

采集后及时测定，应避免溶血和污染4.3上机操作4.3.1试剂装载、校准、样品和质控血清分析操作详见“《迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪标准操作、维护、保养规程》”。

4.3.2 校准：4.3.2.1 标准液的准备：标准液的准备：校准品使用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司配套冻干品，按说明书要求稀释后分装，-20℃冷冻保存，用前提前15分钟从冰箱中取出，复溶到室温后上机检测。

4.3.2.2 校准程序：首次使用校准。

当有以下情况时需重新校准：1）换试剂批号或出现质控漂移时；2）当仪器做完保养后；3）仪器进行零件更换时。

每次试验前用准备好的校准品进行校准，校准通过后进行检测。

4.3.2.3 质控：在标本开始之前做质控，质控通过后方能进行标本的检测。

4.3.3 测试基本参数4.4参考范围60～80 g/L（注：各实验室应有自己的参考范围。

）4.5 方法评价线性范围：2～120 g/L。

样本中含量超出可报告范围，请用生理盐水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。

反应曲线异常时应进行重复测定确认。

精密度:批内 CV ≤ 3%批间 CV ≤ 4.5%分析灵敏度：本试剂盒检测低限2 g/L。

5、临床意义TP 分为白蛋白和球蛋白两类，具有维持胶体渗透压，运输多种代谢物，调节被运输物质生理作用等功能，与机体免疫功能密切相关。

BCA蛋白定量试剂盒使用说明书

BCA蛋白定量试剂盒使用说明书一、产品简介BCA 蛋白定量试剂盒是一种常用的、准确且灵敏的蛋白质定量方法。

它基于双缩脲反应，并在碱性条件下，蛋白质将 Cu²⁺还原为 Cu⁺，Cu⁺与 BCA 试剂形成紫色络合物，在 562nm 处有最大光吸收值。

该试剂盒具有操作简便、稳定性好、灵敏度高、线性范围宽等优点，适用于各种蛋白质样品的定量测定。

二、试剂盒组成1、 BCA 工作液 A：＿____2、 BCA 工作液 B：＿____3、蛋白标准品（浓度为_____）：＿____4、 96 孔板：＿____三、所需设备及试剂1、分光光度计或酶标仪（能够测定 562nm 波长）2、移液器（量程包括20μL、200μL、1000μL）3、涡旋振荡器4、离心机5、去离子水或超纯水四、操作步骤1、标准曲线的绘制（1）将蛋白标准品用去离子水或超纯水稀释成一系列不同浓度的标准溶液（如0μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL、1000μg/mL）。

（2）在 96 孔板中，分别加入25μL 不同浓度的标准溶液。

（3）向每个孔中加入200μL BCA 工作液（A 液与 B 液按照_____的比例混合），轻轻振荡混匀。

（4）将 96 孔板在 37℃下孵育 30 分钟。

（5）使用分光光度计或酶标仪在 562nm 处测定各孔的吸光度值。

（6）以蛋白浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

2、样品测定（1）将待测蛋白样品用去离子水或超纯水适当稀释。

（2）取25μL 稀释后的样品加入 96 孔板中。

（3）按照与标准曲线绘制相同的步骤，加入 BCA 工作液，孵育并测定吸光度值。

五、计算样品蛋白浓度根据所测样品的吸光度值，在标准曲线上查出对应的蛋白浓度。

然后乘以样品的稀释倍数，即可得到样品的原始蛋白浓度。

六、注意事项1、实验过程中应避免使用含有 Triton X-100、SDS 等去污剂的溶液，因为这些物质会干扰 BCA 反应。

蛋白质鉴定双缩脲试剂的使用方法

蛋白质鉴定双缩脲试剂的使用方法# 蛋白质鉴定双缩脲试剂的使用方法## 简介蛋白质鉴定是生物学和生物化学研究中的一个重要步骤，而双缩脲试剂是一种常用的蛋白质鉴定试剂。

本文将介绍双缩脲试剂的使用方法，包括试剂的准备、样品的制备、反应条件的优化以及结果的分析。

## 试剂准备双缩脲试剂可以通过购买现成的试剂盒获取，也可以按照以下方法自制：1. 准备硫酸铵：将适量的硫酸加入等量的浓氨水中，搅拌均匀，过滤得到硫酸铵溶液。

2. 准备硝酸铵：将适量的硝酸加入等量的浓氨水中，搅拌均匀，过滤得到硝酸铵溶液。

3. 将硫酸铵溶液和硝酸铵溶液按照特定比例混合，制备双缩脲试剂。

具体的比例可以根据实验需求进行优化。

## 样品制备在使用双缩脲试剂进行蛋白质鉴定前，需要对样品进行制备。

下面是一般的样品制备步骤：1. 提取蛋白质：根据实验需要，选择合适的提取方法提取目标蛋白质。

常用的方法包括细胞溶解法、组织破碎法等。

2. 清洁和富集蛋白质：利用相应的技术（如超声波处理、离心等）将提取得到的蛋白质溶液进行清洁和富集，去除杂质和无关成分。

3. 确定蛋白质浓度：使用合适的方法（如BCA法、Lowry法等）确定蛋白质的浓度，以便在实验中控制适量的样品使用。

4. 根据实验需要，将样品进行必要的预处理，如还原、变性、去除糖基化等。

## 反应条件的优化在使用双缩脲试剂进行反应之前，需要对反应条件进行优化，以获得最佳的结果。

以下是一些常用的优化方法：1. 试剂浓度优化：根据蛋白质样品的特性和实验要求，调整双缩脲试剂的浓度。

一般来说，试剂浓度过高可能会导致非特异性结合，而浓度过低则可能导致信号弱。

2. 反应时间和温度优化：根据实验需求和实验室条件，确定双缩脲试剂的反应时间和温度。

一般情况下，较长的反应时间和适当的温度可以增加蛋白质和试剂之间的反应机会。

3. pH值优化：调节反应体系的pH值，使其适合双缩脲试剂的反应。

一般情况下，pH值在7-8之间可以获得较好的实验结果。

总蛋白测定试剂盒(双缩脲法)产品技术要求haomai

总蛋白测定试剂盒(双缩脲法)适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中总蛋白(TP)的含量。

1.1包装规格序号规格1 试剂1：2×50ml；校准品：1×3ml。

2 试剂1：6×60ml；校准品：1×3ml。

3 试剂1：6×100ml；校准品：1×3ml。

4 试剂1：4×100ml；校准品：1×3ml。

5 试剂1：1×1000ml；校准品：1×3ml。

6 试剂1：5×24ml；校准品：1×3ml。

7 试剂1：10L。

1.2主要组成成分本试剂由试剂1（R1）和校准品（STD）组成试剂1（R1）：氢氧化钠0.6mol/L酒石酸钾钠30mmol/L硫酸铜12mmol/L碘化钾30mmol/L校准品：蛋白质溶液（基质：水溶液；浓度：80g/L）。

2.1 外观试剂盒外观应整洁，文字符号标识清晰；R1为蓝色透明液体，校准品为无色透明液体。

液体试剂不得有沉淀和絮状物。

2.2 装量试剂瓶内液体装量应不少于标示值。

2.3 空白吸光度以生理盐水为样品，在37℃、546nm波长、1cm光径条件下，吸光度≤0.15。

2.4 分析灵敏度浓度为50g/L的样本，吸光度差值△A＞0.06。

2.5 准确性相对偏差应不大于10%。

2.6 重复性重复测试浓度在（70±10）g/L的控制血清，所得结果的重复性（变异系数，CV）应不大于10%。

2.7 线性2.7.1在(10，120)g/L范围内，线性相关系数r应不低于0.990；2.7.2 在(10，40]g/L范围内绝对偏差不超过±4.0g/L；(40，120)g/L范围内相对偏差不超过±10%。

2.8 批间差用三个批号的试剂盒测定同一份样本，试剂盒批间相对极差应不超过10%。

2.9 稳定性试剂盒在2～8℃避光保存，可稳定22个月。

取到效期后的样品检测试剂空白吸光度、分析灵敏度、准确度、重复性、线性范围应分别符合2.3、2.4、2.5、2.6、2.7的要求。

总蛋白(TP)测定试剂盒(双缩脲法)产品技术要求derui

总蛋白（TP）测定试剂盒
2、性能指标
2.1外观和性状
外观和性状应符合表2要求。

表2 试剂盒内各组分的外观性状
2.2试剂空白吸光度
试剂以生理盐水为空白时，在波长546 nm，光径1.0 cm，温度37℃条件下，吸光度≤0.200。

2.3分析灵敏度
试剂盒测试70 g/L被测物时，吸光度变化值≥0.150。

2.4线性范围
2.4.1 试剂盒在30.0～120.0 g/L区间（范围）内，其回归系数r≥0.995。

2.4.2 在30.0～120.0 g/L 区间（范围）内，线性相对偏差应不超过±6.0%。

2.5精密度
2.5.1试剂盒重复性CV 值应≤2.0%。

2.5.2试剂盒批间相对极差（R）应≤5.0%。

2.6准确度
相对偏差（Bias%）应在±5.0%范围内。

2.7液体装量
试剂盒不同规格的净含量应不少于其标示量。

总蛋白(TP)测定试剂盒(双缩脲法)产品技术要求sainuopu

总蛋白（TP）测定试剂盒（双缩脲法）适用范围：用于体外定量测定人体血清中总蛋白的含量。

1.1 试剂盒包装规格试剂：1×20ml；2×60ml；3×40ml；4×60ml；4×400ml；2×30ml。

校准品：1×1ml；1×3ml。

1.2 试剂盒主要组成成分2.1 外观试剂：亮蓝色澄清液体。

校准品：无色至浅黄色澄清液体。

2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。

2.3 试剂空白吸光度在37℃、546nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不大于0.2。

2.4 分析灵敏度测定浓度为50g/L样本时，吸光度变化值（ΔA）应不小于0.2。

2.5 线性范围在（10，100）g/L线性范围内，线性相关系数r应不小于0.990。

在[30，100）g/L范围内的线性相对偏差应不大于±10%；在（10，30）g/L范围内的线性绝对偏差应不大于±3.0g/L。

2.6 重复性重复测试两份高低浓度的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于3%。

2.7 批间差不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于5%。

2.8 准确度相对偏差：相对偏差应不超过±10%。

2.9 校准品溯源性依据GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，校准品溯源至NIST生产的有证参考物质（SRM927）。

2.10 稳定性效期稳定性：试剂盒在2℃～8℃下有效期为12个月，取失效期的试剂盒进行检测，试验结果应满足2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.8要求。

蛋白定量法实验报告

一、实验目的1. 掌握蛋白质定量法的基本原理和操作步骤。

2. 了解不同蛋白质定量方法的优缺点及适用范围。

3. 通过实验，验证蛋白质定量方法的有效性。

二、实验原理蛋白质定量方法主要包括比色法、电泳法和质谱法等。

本实验采用比色法中的BCA 法和双缩脲法进行蛋白质定量。

1. BCA法原理：在碱性条件下，蛋白质与Cu2+络合，将Cu2+还原成Cu+，Cu+与BCA形成紫色的络合物，其吸光度与蛋白质浓度呈线性关系。

2. 双缩脲法原理：蛋白质中的肽键与双缩脲试剂反应，形成紫色络合物，其吸光度与蛋白质浓度呈线性关系。

三、实验材料1. 蛋白质样品：牛血清白蛋白、大豆蛋白、小麦蛋白等。

2. 试剂：BCA试剂盒、双缩脲试剂、考马斯亮蓝G-250、氯化钠、硫酸铜等。

3. 仪器：紫外-可见分光光度计、移液器、酶标板等。

四、实验步骤1. BCA法：（1）配制BCA工作液：按照BCA试剂盒说明书配制。

（2）配制标准蛋白溶液：将牛血清白蛋白稀释成不同浓度的标准溶液。

（3）取酶标板，按表格加入试剂。

（4）将酶标板置于振荡器上振荡30s，37℃孵育30min。

（5）在562nm波长下，测定吸光度。

（6）以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

（7）测定样品蛋白质浓度。

2. 双缩脲法：（1）配制标准蛋白溶液：将牛血清白蛋白稀释成不同浓度的标准溶液。

（2）取酶标板，按表格加入试剂。

（3）将酶标板置于振荡器上振荡30s，室温孵育10min。

（4）在595nm波长下，测定吸光度。

（5）以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

（6）测定样品蛋白质浓度。

五、实验结果与分析1. BCA法：根据标准曲线，计算样品蛋白质浓度为X mg/mL。

2. 双缩脲法：根据标准曲线，计算样品蛋白质浓度为Y mg/mL。

3. 结果分析：通过比较两种方法的测定结果，分析其准确性和精密度。

六、实验结论1. BCA法和双缩脲法均能有效地进行蛋白质定量。

双缩脲鉴定蛋白质实验步骤

双缩脲鉴定蛋白质实验步骤亲们，今天小智要给大家分享一个超级有趣的实验——双缩脲鉴定蛋白质实验哦！这个实验可是检验我们是否是吃货的绝佳方法呢，哈哈！那么，让我们一起来看看这个实验到底是怎么进行的吧！我们需要准备以下材料：鸡蛋、碘液、双缩脲试剂盒和试管。

别忘了，这个实验可不是闹着玩儿的，所以一定要准备好哦！1. 1.1 准备鸡蛋亲们，首先要做的就是准备鸡蛋啦！我们要用到的鸡蛋最好是新鲜的，这样才能保证实验的效果哦！当然啦，如果你家里有闲置的鸡蛋也可以拿来用，但是要注意不要过期哦！2. 1.2 打破鸡蛋接下来，我们要开始处理鸡蛋啦！拿起你的榔头或者锤子，轻轻地敲击鸡蛋壳，让蛋黄和蛋白流出来。

记住，要轻柔一点哦，不要把蛋壳打碎了！3. 2.1 分离蛋黄和蛋白现在，我们已经得到了蛋黄和蛋白。

接下来，我们要把它们分开。

你可以用勺子把蛋黄舀出来，然后用棉签或者纸巾把蛋白擦干净。

这样一来，我们就可以开始进行下一步实验了！4. 2.2 加入碘液在试管里加入适量的碘液，然后把刚刚分离出来的蛋黄放进去。

记得要搅拌均匀哦，让碘液充分渗透到蛋黄里面。

这样一来，我们就可以观察到蛋黄的颜色变化了！5. 3.1 加入双缩脲试剂接下来，我们要开始添加双缩脲试剂了。

在试管里加入适量的双缩脲试剂，然后慢慢加入刚刚搅拌好的碘液。

记得要慢慢地加哦，不要一下子倒进去，否则会影响实验效果！6. 3.2 观察颜色变化现在，我们可以开始观察颜色的变化啦！随着双缩脲试剂和碘液的混合，你会发现试管里的液体逐渐变成了紫色。

这就是双缩脲试剂的作用啦！它会与蛋白质发生反应，产生紫色的络合物。

7. 4.1 对比颜色我们要做的就是对比颜色啦！你可以拿出另一支试管，加入一些水和盐，然后搅拌均匀。

这样一来，你就得到了一杯淡黄色的水。

现在，你可以把这杯水和刚才那个紫色的试管放在一起进行对比啦！你会发现，两个试管的颜色是不一样的哦！这就是因为蛋白质的存在导致的！8. 4.2 得出结论通过以上的实验过程，我们可以看出，只有含有蛋白质的食物才会使溶液变成紫色。

总蛋白测定试剂盒(双缩脲法)产品技术要求aiweide

总蛋白测定试剂盒（双缩脲法）
适用范围：本试剂用于体外定量测定人体血清中总蛋白的含量。

1.1 包装规格
a) 单一试剂：4×40mL；
b) 单一试剂：5×60mL；
c) 单一试剂：2×100mL。

1.2主要组成成分
氢氧化钠600 mmol/L
硫酸铜12 mmol/L
酒石酸钾钠32 mmol/L
碘化钾30 mmol/L
2.1外观
单一试剂：亮蓝色清亮液体。

2.2试剂装量
应不低于试剂瓶标示装量。

2.3 试剂空白吸光度
在546nm处测定试剂空白吸光度，应≤0.5。

2.4分析灵敏度
测定TP含量为50g/L样本时，其△A应≥0.01。

2.5线性范围
2.5.1测试浓度在[10，150] g/L范围内，线性回归的相关系数（r）应不低于0.990；
2.5.2测试浓度在[10，30] g/L范围内，线性绝对偏差应不超过±3g/L；
测试浓度在(30，150] g/L范围内，线性相对偏差应不超过±10%。

2.6 测量精密度
2.6.1重复性：重复测试三个水平的样本，所得结果的变异系数（CV）应不大于5％。

2.6.2批间差：抽取3个不同批号的试剂，对同一份样本进行重复测定，相对极差≤10％。

2.7准确度
以国家标准物质为检测样本时，测定结果相对偏差≤±10％。

2.8 稳定性
取在2℃～8℃条件下贮存达到18个月的试剂进行检测，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。