豫马铃薯茎尖组织培养脱毒体系的建立
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1 材料与方法
1．1 供试材料 根据豫马铃薯一号、二号的品种特性，在大田选
择种性退化较轻的植株作为脱毒材料，收获后，对薯 块外观进行严格挑选，待被挑选的材料通过自然休眠 期后， 在室内育苗盘中切块育苗。 当苗高 6~7 cm、有 3~4 片叶时， 掐取 2 cm 左右的顶芽进行剥离培养，侧 芽长成后可作为第 2 批材料进行剥离，依次循环。 1.2 茎尖培养基制备
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KI8
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生产。 茎尖培养脱毒效果主要取决于 4 个因素。
①用于茎尖培养材料本身的带病毒 情况。 一般不选择退化较严重的马铃薯 做脱毒原始材料，避免增加脱毒的难度， 影响脱毒效果；
②所培养茎尖的大小。 茎尖的大小 是影响成苗的直接因素， 同时也是影响 脱毒效果的重要因素，茎尖越小，成苗率 越低而脱毒率越高， 因此在茎尖培养中
- 25 -
（学术版） ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＡＮＧＪＩＡＮＧ ＶＥＧＥＴＡＢＬＥＳ
DOI:10.3865/j.issn.1001-3547(x).2008.10.009
2008，10b：25－26
豫马铃薯茎尖组织培养脱毒体系的建立
庞淑敏 方贯娜 周建华 （郑州市蔬菜研究所，河南郑州，450015）
收 稿 日 期 ：2008-07-21
浓度配比， 共配制如表 1 所示 18 种培养基作为茎尖 培养的诱导培养基。 1.3 外植体的消毒处理
将顶芽剥去外叶在自来水下冲洗 30 min，然后在 75%酒精中蘸 2 s,放入 0.1%升汞溶液中消毒 20 min， 用无菌水冲洗 4~5 次，在无菌室进行茎尖剥离。 1.4 剥离与培养
表 3 病毒检测结果
病毒
豫马铃薯二号
豫马铃薯一号
种类 检测数/个 阴性数/个 脱毒率/% 检测数/个 阴性数/个 脱毒率/%
PLRV 85
70
82.4
59
42
71.2
较难脱除的病毒， 建议结合高温处理等 综合的手段提高其脱毒率。
④培养基中激素的类别和激素浓度 的不同配比也是影响成苗率的关键因
PVX
85
KN1
32
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要在保证存活的情况下， 尽量剥较小的
KN2
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茎尖进行培养以保证脱毒效果， 试验显
KN3
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44.6
示， 带一个叶原基的茎尖是比较合适的
KN4
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8.3
茎尖大小，还应注意的是，茎尖的大小和
KN5
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品种以及发芽状态有关， 同一品种顶芽
- 26 -
表 1 茎尖培养基配方
培养基编号
培养基配方
培养基编号
培养基配方
KI1
MS+1 mg/L KT+5 mg/L IAA
KN1
MS+1 mg/L KT+0.005 mg/L NAA
一号、 二号， 在同一浓度配比的培养基 上，成苗时间和成苗率差别不是很大。 2.4 病毒检测结果
KI2
MS+1 mg/L KT+15 mg/L IAA
在 40 倍解剖镜下， 剥取 0.2~0.3 mm 带 1 个叶原 基的茎尖分生组织接种在各类培养基上。 培养条件为 光 强 3 000 lx、光 照 时 间 16 h/d、温 度 25℃，在 培 养 过 程中观察并调查茎尖转绿成苗情况。 1.5 试管苗的少量扩繁
以不添加任何激素的 MS 为扩繁培养基， 将获得 的豫马铃薯一号、二号的试管苗切成带 1 个叶片的茎 段，接种到培养基上进行培养，培养条件同上，培养 20 d 后，取一部分试管苗进行病毒检测。 1.6 病毒检测
KN7
MS+10 mg/L KT+0.05 mg/L NAA
KI8
MS+10 mg/L KT+15 mg/L IAA
KN8
MS+10 mg/L KT+0.5 mg/L NAA
茎尖组织培养是马铃薯脱毒种薯繁
KI9
MS+10 mg/L KT+30 mg/L IAA
KN9
MS+10 mg/L KT+0.005 mg/L NAA
KN6
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38.4
的茎尖较大，侧芽较单薄。
KN7
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7.6
③病毒种类。 不同病毒脱毒难易程
KN8
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合计
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度差别很大， 这一点在本研究中得到了
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进 一 步 验 证 ，；例 如 PVS，不 仅 在 本 试 验
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中，在随后的大量茎尖培养经验中，都是
以 MS 为 基 础 培 养 基 ， 生 长 素 类 激 素 选 择 IAA， NAA，细胞分裂素类激素选择 KT，每种激素选用 3 种
庞 淑 敏 （1967－），女 ，副 研 究 员 ，主 要 从 事 马 铃 薯 脱 毒 及 生 物 技 术 育 种 研 究 ，电 话 ：0371－68797863 ，13503863969 。 E-mail：psmm9508@126.com
从表 2 中还可以看出，就本试验而言，豫马铃薯
题， 在本研究中的 2 个品种在同一培养 基成苗率和成苗周期都差异不显著，然而，笔者在随 后的茎尖培养中利用这一培养基对多个马铃薯品种 进行了茎尖培养时发现， 虽然都得到了较好的成苗 率，但在培养成苗的周期上，某些品种间出现了显著 性差异，因此不同基因型马铃薯茎尖培养的各项差异 还有待进一步研究。
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素。
PVY
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除此之外， 不同基因型马铃薯茎尖
PVS
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5.1
培养的差异也是研究者常常考虑的问
同浓度配比下，茎尖诱导成苗的情况差异也很大。 从 表 2 可以看出， KN3，KN6，KN9 的成苗率较高， 其中 KN3 的最高，豫马铃薯一号达到 44.6%，豫马铃薯二号 达 36.5%。 2.3 品种对茎尖培养的影响
上的成苗情况。 从表 2 可以看出，不同生长素类激素 的培养基上马铃薯茎尖诱导成苗的情况差异很大，在 18 类培养基中， 使用 NAA 的培养基成苗率普遍比使 用 IAA 的高， 说明 NAA 在这 2 个马铃薯品种的茎尖 培养中是比较适合的生长素类激素；同类生长激素不
2008/10(下)
庞淑敏,等.豫马铃薯茎尖组织培养脱毒体系的建立
选用快捷灵敏的 ELISA 方法进行病毒检测，主要 检测 PLRV，PVY，PVX，PVS 等 4 类病毒。 试剂盒购于 上海华瑞生物技术有限公司。 检测方法遵照试剂盒说 明，根据酶联板显色情况，定性判断试管苗带病毒情 况。
2 结果与分析
2．1 激素种类对茎尖培养的影响 茎尖培养 2 个月后，调查 2 个品种在不同培养基
摘 要 针对豫马铃薯种性退化严重的问题，利用茎尖组织培养技术及 ELISA 病毒检测技术，获得豫马铃薯一号、二号的 脱毒株系，建立了豫马铃薯茎尖组织培养脱毒的技术体系。 关键词 豫马铃薯 茎尖组织培养 脱毒
马 铃 薯 （Solanum tuberosum L.） 为 一 年 生 草 本 块 茎植物，是世界上仅次于稻、麦、玉米的 4 大粮食作物 之一。 我国是世界马铃薯种植第一大国，常年种植面 积近 500 万 hm2，占全球种植面积的 20%以上。 地处中 原腹地的河南省，马铃薯常年栽培面积 9 万 hm2，大部 分平原地区属马铃薯二季作区， 部分山区为一季作 区，每年 4~8 月，10~11 月都有产品供应上市，能补充 北方淡季需求。 河南省主栽品种豫马铃薯一号、二号 （郑薯五号、六号）是 20 世纪 80 年代 末 育 成 ，90 年 代 初推广的优良早熟品种，由于种植时间较长，病毒病 引起的种性退化问题，严重影响了河南省马铃薯产业 的发展，因此，郑州市蔬菜研究所于 2000 年开展了豫 马铃薯系列品种的脱毒快繁及产业化应用研究，现将 茎尖组织培养脱毒体系建立的部分研究介绍如下。
育的主要技术基础， 目前被广泛应用于
表 2 茎尖培养基筛选试验结果
培养基
豫马铃薯二号
豫马铃薯一号
编号 接种数/个 成苗数/个 成苗率/% 接种数/个 成苗数/个 成苗率/%
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KI5 MS+5 mg/L KT+15 mg/L IAA KN5 MS+5 mg/L KT+0.5 mg/L NAA 类病毒的脱毒率都高于 50％以上。
KI6
MS+5 mg/L KT+30 mg/L IAA
KN6
MS+5 mg/L KT+0.005 mg/L NAA
3 小结与讨论
KI7
MS+10 mg/L KT+5 mg/L IAA
KN2
MS+1 mg/L KT+0.5 mg/L NAA
从表 3 的检测结果看出， 在本研究
KI3
MS+1 mg/L KT+30 mg/L IAA
KN3
MS+1 mg/L KT+0.05 mg/L NAA
检 测 的 4 类 病 毒 中 ，PVS 的 脱 除 最 为 困
KI4 MS+5 mg/L KT+5 mg/L IAA KN4 MS+5 mg/L KT+0.05 mg/L NAA 难，2 个品种脱毒率只有 5％左右，其他 3
1．1 供试材料 根据豫马铃薯一号、二号的品种特性，在大田选
择种性退化较轻的植株作为脱毒材料，收获后，对薯 块外观进行严格挑选，待被挑选的材料通过自然休眠 期后， 在室内育苗盘中切块育苗。 当苗高 6~7 cm、有 3~4 片叶时， 掐取 2 cm 左右的顶芽进行剥离培养，侧 芽长成后可作为第 2 批材料进行剥离，依次循环。 1.2 茎尖培养基制备
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生产。 茎尖培养脱毒效果主要取决于 4 个因素。
①用于茎尖培养材料本身的带病毒 情况。 一般不选择退化较严重的马铃薯 做脱毒原始材料，避免增加脱毒的难度， 影响脱毒效果；
②所培养茎尖的大小。 茎尖的大小 是影响成苗的直接因素， 同时也是影响 脱毒效果的重要因素，茎尖越小，成苗率 越低而脱毒率越高， 因此在茎尖培养中
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（学术版） ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＡＮＧＪＩＡＮＧ ＶＥＧＥＴＡＢＬＥＳ
DOI:10.3865/j.issn.1001-3547(x).2008.10.009
2008，10b：25－26
豫马铃薯茎尖组织培养脱毒体系的建立
庞淑敏 方贯娜 周建华 （郑州市蔬菜研究所，河南郑州，450015）
收 稿 日 期 ：2008-07-21
浓度配比， 共配制如表 1 所示 18 种培养基作为茎尖 培养的诱导培养基。 1.3 外植体的消毒处理
将顶芽剥去外叶在自来水下冲洗 30 min，然后在 75%酒精中蘸 2 s,放入 0.1%升汞溶液中消毒 20 min， 用无菌水冲洗 4~5 次，在无菌室进行茎尖剥离。 1.4 剥离与培养
表 3 病毒检测结果
病毒
豫马铃薯二号
豫马铃薯一号
种类 检测数/个 阴性数/个 脱毒率/% 检测数/个 阴性数/个 脱毒率/%
PLRV 85
70
82.4
59
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较难脱除的病毒， 建议结合高温处理等 综合的手段提高其脱毒率。
④培养基中激素的类别和激素浓度 的不同配比也是影响成苗率的关键因
PVX
85
KN1
32
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要在保证存活的情况下， 尽量剥较小的
KN2
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茎尖进行培养以保证脱毒效果， 试验显
KN3
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44.6
示， 带一个叶原基的茎尖是比较合适的
KN4
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茎尖大小，还应注意的是，茎尖的大小和
KN5
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品种以及发芽状态有关， 同一品种顶芽
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表 1 茎尖培养基配方
培养基编号
培养基配方
培养基编号
培养基配方
KI1
MS+1 mg/L KT+5 mg/L IAA
KN1
MS+1 mg/L KT+0.005 mg/L NAA
一号、 二号， 在同一浓度配比的培养基 上，成苗时间和成苗率差别不是很大。 2.4 病毒检测结果
KI2
MS+1 mg/L KT+15 mg/L IAA
在 40 倍解剖镜下， 剥取 0.2~0.3 mm 带 1 个叶原 基的茎尖分生组织接种在各类培养基上。 培养条件为 光 强 3 000 lx、光 照 时 间 16 h/d、温 度 25℃，在 培 养 过 程中观察并调查茎尖转绿成苗情况。 1.5 试管苗的少量扩繁
以不添加任何激素的 MS 为扩繁培养基， 将获得 的豫马铃薯一号、二号的试管苗切成带 1 个叶片的茎 段，接种到培养基上进行培养，培养条件同上，培养 20 d 后，取一部分试管苗进行病毒检测。 1.6 病毒检测
KN7
MS+10 mg/L KT+0.05 mg/L NAA
KI8
MS+10 mg/L KT+15 mg/L IAA
KN8
MS+10 mg/L KT+0.5 mg/L NAA
茎尖组织培养是马铃薯脱毒种薯繁
KI9
MS+10 mg/L KT+30 mg/L IAA
KN9
MS+10 mg/L KT+0.005 mg/L NAA
KN6
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38.4
的茎尖较大，侧芽较单薄。
KN7
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7.6
③病毒种类。 不同病毒脱毒难易程
KN8
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度差别很大， 这一点在本研究中得到了
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进 一 步 验 证 ，；例 如 PVS，不 仅 在 本 试 验
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中，在随后的大量茎尖培养经验中，都是
以 MS 为 基 础 培 养 基 ， 生 长 素 类 激 素 选 择 IAA， NAA，细胞分裂素类激素选择 KT，每种激素选用 3 种
庞 淑 敏 （1967－），女 ，副 研 究 员 ，主 要 从 事 马 铃 薯 脱 毒 及 生 物 技 术 育 种 研 究 ，电 话 ：0371－68797863 ，13503863969 。 E-mail：psmm9508@126.com
从表 2 中还可以看出，就本试验而言，豫马铃薯
题， 在本研究中的 2 个品种在同一培养 基成苗率和成苗周期都差异不显著，然而，笔者在随 后的茎尖培养中利用这一培养基对多个马铃薯品种 进行了茎尖培养时发现， 虽然都得到了较好的成苗 率，但在培养成苗的周期上，某些品种间出现了显著 性差异，因此不同基因型马铃薯茎尖培养的各项差异 还有待进一步研究。
63
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素。
PVY
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除此之外， 不同基因型马铃薯茎尖
PVS
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培养的差异也是研究者常常考虑的问
同浓度配比下，茎尖诱导成苗的情况差异也很大。 从 表 2 可以看出， KN3，KN6，KN9 的成苗率较高， 其中 KN3 的最高，豫马铃薯一号达到 44.6%，豫马铃薯二号 达 36.5%。 2.3 品种对茎尖培养的影响
上的成苗情况。 从表 2 可以看出，不同生长素类激素 的培养基上马铃薯茎尖诱导成苗的情况差异很大，在 18 类培养基中， 使用 NAA 的培养基成苗率普遍比使 用 IAA 的高， 说明 NAA 在这 2 个马铃薯品种的茎尖 培养中是比较适合的生长素类激素；同类生长激素不
2008/10(下)
庞淑敏,等.豫马铃薯茎尖组织培养脱毒体系的建立
选用快捷灵敏的 ELISA 方法进行病毒检测，主要 检测 PLRV，PVY，PVX，PVS 等 4 类病毒。 试剂盒购于 上海华瑞生物技术有限公司。 检测方法遵照试剂盒说 明，根据酶联板显色情况，定性判断试管苗带病毒情 况。
2 结果与分析
2．1 激素种类对茎尖培养的影响 茎尖培养 2 个月后，调查 2 个品种在不同培养基
摘 要 针对豫马铃薯种性退化严重的问题，利用茎尖组织培养技术及 ELISA 病毒检测技术，获得豫马铃薯一号、二号的 脱毒株系，建立了豫马铃薯茎尖组织培养脱毒的技术体系。 关键词 豫马铃薯 茎尖组织培养 脱毒
马 铃 薯 （Solanum tuberosum L.） 为 一 年 生 草 本 块 茎植物，是世界上仅次于稻、麦、玉米的 4 大粮食作物 之一。 我国是世界马铃薯种植第一大国，常年种植面 积近 500 万 hm2，占全球种植面积的 20%以上。 地处中 原腹地的河南省，马铃薯常年栽培面积 9 万 hm2，大部 分平原地区属马铃薯二季作区， 部分山区为一季作 区，每年 4~8 月，10~11 月都有产品供应上市，能补充 北方淡季需求。 河南省主栽品种豫马铃薯一号、二号 （郑薯五号、六号）是 20 世纪 80 年代 末 育 成 ，90 年 代 初推广的优良早熟品种，由于种植时间较长，病毒病 引起的种性退化问题，严重影响了河南省马铃薯产业 的发展，因此，郑州市蔬菜研究所于 2000 年开展了豫 马铃薯系列品种的脱毒快繁及产业化应用研究，现将 茎尖组织培养脱毒体系建立的部分研究介绍如下。
育的主要技术基础， 目前被广泛应用于
表 2 茎尖培养基筛选试验结果
培养基
豫马铃薯二号
豫马铃薯一号
编号 接种数/个 成苗数/个 成苗率/% 接种数/个 成苗数/个 成苗率/%
KI1
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KI5 MS+5 mg/L KT+15 mg/L IAA KN5 MS+5 mg/L KT+0.5 mg/L NAA 类病毒的脱毒率都高于 50％以上。
KI6
MS+5 mg/L KT+30 mg/L IAA
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MS+5 mg/L KT+0.005 mg/L NAA
3 小结与讨论
KI7
MS+10 mg/L KT+5 mg/L IAA
KN2
MS+1 mg/L KT+0.5 mg/L NAA
从表 3 的检测结果看出， 在本研究
KI3
MS+1 mg/L KT+30 mg/L IAA
KN3
MS+1 mg/L KT+0.05 mg/L NAA
检 测 的 4 类 病 毒 中 ，PVS 的 脱 除 最 为 困
KI4 MS+5 mg/L KT+5 mg/L IAA KN4 MS+5 mg/L KT+0.05 mg/L NAA 难，2 个品种脱毒率只有 5％左右，其他 3