实验六 淀粉酶动力学分析
淀粉酶活力测定实验报告
淀粉酶活力测定实验报告淀粉酶活力测定实验报告实验三、淀粉酶活性的测定实验报告实验四、淀粉酶活性的测定一、实验目的:1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义;2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。
二、实验原理:淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最强，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。
根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化;β-淀粉酶不耐热，70? 15min 则被钝化。
测定时，使其中一种酶失活，即可测出另一种酶的活性。
淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖，利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，测定其吸光度，从而确定酶液中淀粉酶活力(单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量)。
三、实验用具:1、实验设备研钵,具塞刻度试管,离心管，分光光度计，酸度计，电热恒温水浴锅，离心机，电磁炉。
2、实验材料与试剂(1)0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液:称取柠檬酸20.01g，定容至1000ml;B液:称取柠檬酸钠29.41g，定容至1000ml;取A液55ml与B液145ml混匀。
(2)1%可溶性淀粉溶液:1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液;(3)1%3,5-二硝基水杨酸试剂:称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g，定容至100ml水中，紧盖瓶塞，勿使CO2进入;(4)麦芽糖标准溶液:取麦芽糖0.1g溶于100ml水中;(5)pH 6.8的磷酸缓冲液: 取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，加水稀释至1000ml即得。
(6)0.4mol/L的NaOH溶液;(7)1%NaCl溶液。
(8)实验材料:萌发的谷物种子(芽长约1cm)四、操作步骤1、酶液提取:取6.0g浸泡好的原料，去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液，磨碎后以2000r/min 离心10min，转出上清液备用。
淀粉酶活力测定实验报告
淀粉酶活力测定实验报告一、实验目的1、学习和掌握淀粉酶活力测定的原理和方法。
2、了解淀粉酶的作用特点及其在生物体内的重要性。
3、培养实验操作技能和数据处理能力。
二、实验原理淀粉酶是能够水解淀粉分子中α-1,4 糖苷键的一类酶的总称，包括α淀粉酶和β淀粉酶。
α淀粉酶可以随机地作用于淀粉分子内部的α-1,4 糖苷键，生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。
β淀粉酶则从淀粉分子的非还原性末端依次水解相隔的α-1,4 糖苷键，生成麦芽糖。
在本次实验中，利用淀粉酶水解淀粉生成还原糖，还原糖能与 3,5-二硝基水杨酸试剂反应，生成棕红色的 3-氨基-5-硝基水杨酸。
颜色的深浅与还原糖的量成正比，通过比色法测定吸光度，并与标准曲线对比，即可计算出淀粉酶的活力。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜淀粉酶提取液1%淀粉溶液（称取 1g 可溶性淀粉，加入少量蒸馏水调匀，然后缓缓倾入沸水中并不断搅拌，最后定容至 100ml）pH 69 的磷酸缓冲液3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS 试剂）麦芽糖标准溶液（1mg/ml）2、实验仪器分光光度计恒温水浴锅移液器离心机试管、刻度吸管、容量瓶等四、实验步骤1、标准曲线的绘制取 7 支干净的具塞刻度试管，编号，按下表加入试剂：｜管号｜麦芽糖标准液（ml）｜蒸馏水（ml）｜ DNS 试剂（ml）｜麦芽糖含量（mg）｜｜｜｜｜｜｜｜ 0 ｜ 0 ｜ 20 ｜ 20 ｜ 0 ｜｜ 1 ｜ 02 ｜ 18 ｜ 20 ｜ 02 ｜｜ 2 ｜ 04 ｜ 16 ｜ 20 ｜ 04 ｜｜ 3 ｜ 06 ｜ 14 ｜ 20 ｜ 06 ｜｜ 4 ｜ 08 ｜ 12 ｜ 20 ｜ 08 ｜｜ 5 ｜ 10 ｜ 10 ｜ 20 ｜ 10 ｜｜ 6 ｜ 12 ｜ 08 ｜ 20 ｜ 12 ｜摇匀后，在沸水浴中加热 5 分钟，取出后立即用冷水冷却至室温，再向每管中加入蒸馏水 20ml，摇匀。
以 0 号管为空白对照，在 540nm 波长下测定各管的吸光度值。
淀粉酶活性的测定实验报告
淀粉酶活性的测定实验报告淀粉酶活性的测定实验报告引言淀粉酶是一种重要的酶类，能够催化淀粉的降解为葡萄糖。
淀粉酶活性的测定对于了解酶的特性以及其在生物化学过程中的作用具有重要意义。
本实验旨在通过测定淀粉酶的活性，探究其受到不同因素的影响，为进一步研究酶的功能提供基础数据。
材料与方法1. 实验材料：淀粉酶溶液、淀粉溶液、缓冲液、I2-KI试剂、洗涤液。
2. 实验仪器：比色皿、移液管、离心机、恒温水浴。
实验步骤：1. 预热水浴至37°C。
2. 准备不同浓度的淀粉溶液（0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%），并分别加入比色皿中。
3. 向每个比色皿中加入相同体积的淀粉酶溶液，混匀后立即放入预热的水浴中。
4. 在反应开始后的不同时间点（如0、5、10、15、20分钟），取出一个比色皿，立即加入I2-KI试剂，形成蓝色淀粉-碘复合物。
5. 使用比色计测定各比色皿中的吸光度，并记录下实验数据。
6. 重复实验步骤2-5，以获得可靠的结果。
结果与讨论通过实验测定得到各个时间点下不同淀粉浓度的吸光度值，进而计算出淀粉酶的活性。
实验结果显示，随着淀粉浓度的增加，淀粉酶的活性也随之增加。
这是因为淀粉浓度的增加会提供更多的底物供淀粉酶催化反应，从而增加反应速率。
然而，当淀粉浓度超过一定范围时，淀粉酶的活性开始饱和，即使再增加淀粉浓度，反应速率也不再显著增加。
此外，实验结果还显示，随着反应时间的增加，淀粉酶的活性逐渐增加，但增加速率逐渐减缓。
这是因为淀粉酶需要一定的时间来结合底物，并催化反应发生。
随着反应进行，底物逐渐减少，淀粉酶与底物的结合也变得更加困难，从而导致反应速率的下降。
此外，实验还可以探究其他因素对淀粉酶活性的影响，如温度、pH值等。
通过调节这些因素，可以进一步了解淀粉酶的特性以及其在生物体内的作用机制。
结论通过本实验的测定，我们得出了淀粉酶活性与淀粉浓度和反应时间的关系。
实验结果表明，淀粉酶活性随着淀粉浓度的增加而增加，并随着反应时间的增加而逐渐饱和。
实验六产淀粉酶细菌的分离筛选
吸取稀释液 无菌操作法分别吸取10-3、10-4 土壤稀释液0.1mL，分别加在 已制好的2块淀粉平板培养基上。
涂板 用涂布棒将稀释液在培养基上充分混匀铺平，静置5min
划线分离 将10-1土壤稀释液用接种环挑取一环，每人在一块淀粉培养 基上进行划线分离。然后倒置于恒温箱培养。看演示
培养 倒置于房间37℃恒温箱培养24小时。
观察水解圈的产生，并测量其半径
24小时后(定时间），在之前稀释涂布和划线的3块 淀粉培养基上选取典型细菌菌落（尽量选取边缘整 齐和规则的菌落），测量其菌落半径（C值）并用 记号笔进行编号、记录。
然后将编号后的菌落用无菌牙签挑取，在备用的1 块淀粉培养基平板上分别点种。演示
2
1
12 3
加入碘液到长有菌落的3块淀粉培养基上，观察是 否有水解圈的产生，并测量其半径（H值） 。
制备土壤稀释液，
振荡5min，即为稀释10-1的土壤悬液。然后在离心管中依次 稀释至10-3、10-4 稀释度。 制备淀粉培养基平板
每组制5块牛膏蛋胨培养基平板 具体制法为：倒入融化好的牛膏蛋胨培养基约15 ml后 （温度为不烫手为宜），置于桌面冷却为固体平板。在无菌 培养皿底部注明分离菌名、稀释度、组别、班级。
实验六 产淀粉酶细菌的分离筛选
实验目的
掌握分离筛选产生淀粉酶细菌的方法 学习酶活分析
实验材料
样品：新鲜土壤样品（同学自备）。 培养基：淀粉培养基。 无菌水：带有玻璃珠装有18mL无菌水三角瓶。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌离心管、 电子天平、记号笔、玻璃涂棒、酒精灯、火柴。
实验步骤
对照备用点种平板和编号菌落的水解圈大小，挑 取水解圈最大的一个菌斑（计算H/C），用记号笔 将其勾选出来。
实验六 淀粉酶的专一性和温度pH激动剂抑制剂对酶活性的影响
实验六淀粉酶的专一性和温度、pH、激活剂及抑制剂对酶活性的影响实验类型：验证型目的和要求1.通过本实验观察、验证酶的专一性和温度、pH、激动剂及抑制剂对酶活性的影响。
2.熟悉淀粉及其酶解产物的特殊显色方法；电热恒温水浴的使用。
3.了解唾液淀粉酶的收集与预处理。
原理酶具有高度专一性，一种酶只能催化一种或一类底物发生反应，如淀粉酶只能水解淀粉，不能水解蔗糖。
当淀粉被淀粉酶彻底水解为还原性麦芽糖和葡萄糖时，能使班氏试剂的Cu2+还原成Cu1+，生成砖红色Cu2O沉淀。
淀粉酶的活性受温度、pH、激动剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多种因素影响，因而水解淀粉生成一系列分子大小不同的糊精。
不同程度的水解糊精可与碘反应生成紫色、棕色或红色络合物。
通过上述特征性反应，并以蔗糖等作对照，便可观察、验证淀粉酶是否具有专一性以及它的催化活性是否受到影响。
操作方法一、唾液淀粉酶的收集与处理1.制备唾液实验者先将痰咳尽，用自来水漱口，以清除口腔内食物残渣，再在口腔内含蒸馏水约15ml，并作咀嚼咕漱运动，3分钟后吐入垫有两层经润湿处理的脱脂纱布的漏斗内，过滤于小烧杯中备用，为与下面稀释唾液相区别，此称制备唾液。
2.煮沸唾液取上述唾液约2ml，盛入1中号试管中,置沸水浴煮沸5分钟备用。
3.稀释唾液调整唾液淀粉酶活性，使之在pH6.8、37℃和既无激动剂又无抑制剂条件下，作用5min，水解淀粉至红色糊精为宜。
具体做法是取12凹白瓷反应板一块，按下列步骤操作：①第1排每凹各加1滴制备唾液，12、13、14凹分别加生理盐水1、2、3滴，用滴管采用抽吸法，由稀到浓（14→12）小心混匀各凹，勿使溅入相邻凹中。
每混匀一凹便取其1滴放入同列的2排凹中，剩余稀释唾液应全部放回原凹中。
②在盛有不同稀释度唾液的第2排各凹中，均加入4滴缓冲液（pH6.8），2滴1%的淀粉液和2滴蒸馏水，用①混匀法充分混匀，置37℃下5min。
③在第2排各凹中加I液一滴，混匀，观察比较各凹颜色，以浅棕-红色对应的稀释倍数，用生理盐水稀释3ml制备唾液备用。
淀粉酶的活力测定分析
保温
在40℃恒温水浴中准确保温5min
3,5—二硝基水杨酸
0
（mL）
2.0 2.0 0
2.0 0
（五）、结果计算
计算Ⅰ- 2、Ⅰ- 3光密度平均值与Ⅰ- 1光密度之差，在 标准曲线上查出相应的麦芽糖含量（mg），按下列公式 计算α- 淀粉酶的活力。
淀粉酶活力=C*VT/（W*VS*T） 式中，C为从标准曲线上差得的麦芽糖含量，mg；VT为 淀粉酶原液总体积，mL；VS为反应所用淀粉酶原液体积， mL；W为样品质量，g；T为反应时间，min。
2、接种与产酶培养
将菌种接种于培养基斜面，35℃培养三天， 然后转接到摇瓶种子培养基，摇瓶培养一定时 间，当菌体进入对数生长期时，以0.5%接种量 接入固体培养基（麸皮7g,米糠2g，豆饼粉1g， 烧碱0.5，水100ml，pH7，常压蒸汽1小时，冷 却到38~40℃）在厚层通风制曲箱内，通风保持 37~42℃，培养48小时出曲风干。
项目二 淀粉酶的制备及活力测定
目录
一、有关酶的基础知识 二、淀粉酶的制备 三、淀粉酶的活力测定 四、问题思考 五、注意事项
一、淀粉酶的基础知识
淀粉酶是水解淀粉（包括糖原、糊精）中糖苷 键的一类酶的统称，广泛存在于动植物和微生物 中。它是研究较多、生产最早、产量最大和应用 最广的一类酶。 根据对淀粉酶的作用方式不同，淀粉酶可分为 四种主要类型：α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀 粉酶和异淀粉酶。
2．为什么要将各试管中的淀粉酶原液和1%淀粉 溶液分别置于40℃水浴中保温？ 回答：酶反应需要适当的温度，只有在一定的温 度条件下才表现出最大活性，40℃是淀粉酶的最 适温度，所以应将酶液和底物（淀粉液）先分别 保温至最适温度， 然后再进行酶反应，这样才能 使测得的数据更加准确。
固定化-淀粉酶及活性测定要点
固定化-淀粉酶及活性测定要点实验六固定化α-淀粉酶及活性测定一、实验目的：学会交联法制备固定化酶的操作技术二、实验原理：制备固定化酶的方法很多，利用双功能试剂或多功能试剂在酶分子间，酶分子与惰性蛋白间，或酶分子与载体间进行交联反应，以共价键制备固定化酶的方法称为交联法，本实验即采用这种方法。
交联剂为戊二醛，载体为甲壳素。
三、实验器材：1．恒温水浴锅2．恒温振摇仪四、实验试剂1. 5%戊二醛2. 甲壳素3. 碘原液：称取碘1.1g。
碘化钾2.2g，置于小烧杯中，加10ml 蒸馏水使之溶解，然后转入容量瓶中。
再加少量的蒸馏水洗涤烧杯数次，洗涤液均转入容量瓶中，最后定容至50ml。
摇均后放于棕色试管中备用。
4. 比色稀碘液：取碘原液2ml，加碘化钾20g，再用蒸馏水定容至5000ml。
5. 2%淀粉溶液：称取2g可溶淀粉，放入小烧杯中，加少量蒸馏水做成悬浮液。
然后在搅拌下注入沸腾的蒸馏水中，继续煮沸一分钟，冷却后加蒸馏水定容至100ml。
6. pH6磷酸氢二钠——柠檬酸缓冲液：称取磷酸二氢钠（Na2HPO4.12H2O）45.23g,柠檬酸（C6H8O7.H2O）8.07g,先在烧杯中使之溶解，然后转入容量瓶中定容至1000ml。
7. 标准终点色溶液，A液：精确称取氯化钴（CoCl.6H2O）40.2493g和重洛酸钾（K2GrO7）0.4878g，用蒸馏水定容至500ml.B液:：精确称取络黑T40mg，用蒸馏水定容至100ml.同时取A液40ml、B液5ml、混合后置于冰箱中待用。
混合液在15天内使用有效。
五、实验操作1. 酶液的制备：精确称取α-淀粉酶2g，先用少量40℃pH6的磷酸二氢钠——柠檬酸缓冲液溶解，溶解过程中轻轻用玻璃棒捣研。
将上层液小心倾入100ml容量瓶，沉渣部分再加入少量上述缓冲液，如此反复捣研3—4次。
最后，将溶液与残渣全部移入容量瓶中，用缓冲液先定容摇匀后，通过四层纱布过滤，溶液供测定使用。
淀粉酶活性测定实验报告(完整版)
报告编号：YT-FS-2637-32淀粉酶活性测定实验报告(完整版)After Completing The T ask According To The Original Plan, A Report Will Be Formed T o Reflect The Basic Situation Encountered, Reveal The Existing Problems And Put Forward Future Ideas.互惠互利共同繁荣Mutual Benefit And Common Prosperity淀粉酶活性测定实验报告(完整版)备注：该报告书文本主要按照原定计划完成任务后形成报告，并反映遇到的基本情况、实际取得的成功和过程中取得的经验教训、揭露存在的问题以及提出今后设想。
文档可根据实际情况进行修改和使用。
淀粉酶活性的测定一、研究背景及目的酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白，几乎所有的生化反应都离不开酶的催化，所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色，因此对酶的研究有着非常重要的意义。
酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的基础。
酶活力由酶活力单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称，按照其水解淀粉的作用方式，可分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。
α-淀粉酶和β-淀粉酶是其中最主要的两种，存在于禾谷类的种子中。
β-淀粉酶存在于休眠的种子中，而α-淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。
α-淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标,α-淀粉酶活性低的品种抗穗发芽,反之则易穗发芽。
目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种,活力单位的定义也各不相同,国内外测定α-淀粉酶活性的方法常用的有凝胶扩散法、3 ,5-二硝基水杨酸比色法和降落值法。
这3 种方法所用的材料分别是新鲜种子、萌动种子和面粉,获得的α-淀粉酶活性应该分别是延二、实验原理萌发的种子中存在两种淀粉酶，分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶，β-淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6下则发生钝化。
实验6 影响酶活性的因素
2
步骤
取三只试管，按下表加入试剂。
试 管 号 0.1% 硫 酸 铜 1%氯化钠 氯化钠 蒸 馏 水 0.1% 淀 粉 淀粉酶 碘—碘化钾溶液 碘化钾溶液 8 \ 1ml \ 3ml 1ml 2—3d \ \ 3ml 1ml 2—3d 9 1ml 10 \ \ 1ml 3ml 1ml 2—3d
混匀37 保温10—15min冷却。 冷却。 混匀 ℃保温 冷却
六思考题
1. 激动剂和抑制剂有哪几种类型？其作用原理是什么？ 2．温度和pH影响酶活性的原理是什么？ 3．联系实验结果及所学理论，说明pH对酶活性的影响有什么规 律和实际意义？ 4. 酶作为生物催化剂具有哪些特征？ 5. 进行酶学实验必须注意控制哪些条件？为什么？
向各试管中加入淀粉酶的时间尽量保持一致。 向各试管中加入淀粉酶的时间尽量保持一致。将各 试管内容物混匀，并依次置于37 恒温水浴中保温。 37ºC 试管内容物混匀，并依次置于37 C恒温水浴中保温。
2
步骤
第8管加入淀粉酶2min后，每隔1min由第7管 取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1小 滴碘 化钾—碘溶液，检验淀粉的水解程度。待混合 液变为黄色时，向所有试管依次添加1—2滴碘 化钾—碘溶液。添加碘化钾—碘溶液的时间尽 量保持一致.
混匀，37℃保温15min. ℃
Benedict 2ml 2ml
混匀，沸水浴中煮2 3min。观察有无黄色沉淀产生。 黄色沉淀产生 混匀，沸水浴中煮2—3min。观察有无黄色沉淀产生。
二 温度对酶活力的影响
1 原理
酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的 反应速度最高。大多数动物酶的最适温度37—40℃ ，植 物酶的最适温度为50—60℃ 。酶对温度的稳定性与其存 在形式有关。有些酶的干燥制剂，虽加热到100℃ ，其活 性并无明显变化，但在100℃的溶液中却容易失活。低温 能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。
测定淀粉酶活性实验报告
一、实验目的1. 了解淀粉酶的生物学特性及其在生物体内的作用。
2. 掌握淀粉酶活性的测定方法。
3. 分析淀粉酶活性受温度、pH值等因素的影响。
二、实验原理淀粉酶是一种水解淀粉的酶，可以将淀粉分解为麦芽糖和葡萄糖。
淀粉酶活性是指单位时间内淀粉酶催化淀粉分解的速率。
本实验采用DNS法测定淀粉酶活性，DNS 法是一种灵敏、准确、精确度高的测定方法，适用于测定小样品淀粉酶活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：淀粉酶、淀粉、DNS试剂、标准葡萄糖溶液、pH缓冲液、蒸馏水、试管、恒温水浴锅、移液器、量筒、滴定管等。
2. 实验仪器：pH计、电子天平、电子显微镜、分光光度计等。
四、实验步骤1. 配制淀粉酶溶液：称取适量淀粉酶，用蒸馏水溶解，配制成一定浓度的淀粉酶溶液。
2. 配制淀粉溶液：称取适量淀粉，用蒸馏水溶解，配制成一定浓度的淀粉溶液。
3. 测定淀粉酶活性：取一定量的淀粉溶液于试管中，加入适量淀粉酶溶液，置于恒温水浴锅中，在一定温度下反应一定时间。
4. 测定DNS反应液：取一定量的反应液，加入DNS试剂，置于沸水浴中反应一定时间。
5. 比色：用分光光度计在特定波长下测定DNS反应液的吸光度。
6. 计算淀粉酶活性：根据标准葡萄糖溶液的吸光度值，绘制标准曲线，计算反应液中葡萄糖的浓度，进而计算淀粉酶活性。
五、结果与分析1. 淀粉酶活性随温度升高而增加，在一定温度范围内达到最大值，之后随温度升高而降低。
2. 淀粉酶活性随pH值升高而增加，在一定pH范围内达到最大值，之后随pH值升高而降低。
3. 淀粉酶活性受激活剂和抑制剂的影响，其中激活剂可以增强淀粉酶活性，抑制剂可以抑制淀粉酶活性。
六、实验结论1. 淀粉酶是一种水解淀粉的酶，在生物体内具有重要作用。
2. DNS法是一种灵敏、准确、精确度高的测定淀粉酶活性的方法。
3. 淀粉酶活性受温度、pH值、激活剂和抑制剂等因素的影响。
七、实验讨论1. 实验过程中，淀粉酶溶液和淀粉溶液的浓度对实验结果有较大影响，需要严格控制浓度。
实验六：酶促反应动力学
淀粉 深蓝
(C6H10O5)n
糊精 蓝紫、红
(C6H10O5)n
麦芽糖 无色
C12H22O11
温度对酶活性影响
温度低时，酶促反应减弱。温度逐渐升高时， 反应速度也随之逐渐增加。当温度升到某一 定值时，酶促反应速度达到最大值，此温度 称为酶作用的最适温度。但酶是蛋白质，随 温度升高而发生变性，继续升高温度，反而 使酶促反应速度降低。一般温度升至70-80℃ 以上，酶活性几乎全部丧失。
实验内容： （一）温度对酶活性的影响
1、将1号A管试剂迅速加入温度对应的B管中(为了 最大限度保证酶的量)，此时为计时的起点（使用 秒表），摇匀后放回对应温度继续水浴。注意： 转移A管试剂前需将其摇匀。 2、然后每隔1min按上步操作依次把2、3、4、5、 6号的A、B管混合 ，严格控制好时间。 3、准确反应13min，向1号管加入2滴1M HCl溶液， 立即混匀，中止反应，按上一步的顺序和时间间 隔依次对各管进行操作，并移至试管架。后再各 用2滴1M NaOH溶液中和每管。 4、在每管中各加入2ml碘液并混匀，观察现象。 5、若不同温度梯度间现象差别不明显，则进行比 色，通过光密度值来比较。
实验原理
本实验以唾液淀粉酶为例，它催化淀粉 水解生成各种糊精和麦芽糖。不同温度、 离子下唾液淀粉酶对淀粉的水解程度是 不同的。 淀粉与碘反应呈蓝色。
糊精是淀粉分解的中间产物，其化学分 子式与淀粉相同都是(C6H10O5)n，但聚合度介 于淀粉与麦芽糖之间，根据分子大小与碘反 应呈蓝紫、红等不同颜色.聚合度低的糊精不 发生显色反应。麦芽糖与碘不呈色。根据上 述性质，可用碘检查淀粉是否水解及其水解 程度，间接判断淀粉酶是否存在及其活性大 小。
酶促反应动力学
___温度和离子对酶活性的影响
淀粉酶活性测定实验报告
班级：植物092 姓名：徐炜佳学号：0901080223淀粉酶活性的测定一、研究背景及目的酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白，几乎所有的生化反应都离不开酶的催化，所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色，因此对酶的研究有着非常重要的意义。
酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的基础。
酶活力由酶活力单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称，按照其水解淀粉的作用方式，可分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。
α-淀粉酶和β-淀粉酶是其中最主要的两种，存在于禾谷类的种子中。
β-淀粉酶存在于休眠的种子中，而α-淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。
α-淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标,α-淀粉酶活性低的品种抗穗发芽,反之则易穗发芽。
目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种,活力单位的定义也各不相同,国内外测定α-淀粉酶活性的方法常用的有凝胶扩散法、3,5-二硝基水杨酸比色法和降落值法。
这3种方法所用的材料分别是新鲜种子、萌动种子和面粉,获得的α-淀粉酶活性应该分别是延迟(内源)α-淀粉酶、萌动种子α-淀粉酶和后熟面粉的α-淀粉酶活性。
本实验的目的在于掌握α-淀粉酶和β-淀粉酶的提取和测定方法。
二、实验原理萌发的种子中存在两种淀粉酶，分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶，β-淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6下则发生钝化。
本实验的设计利用β-淀粉酶不耐热的特性，在高温下（70℃）下处理使得β-淀粉酶钝化而测定α-淀粉酶的酶活性。
酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的，淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定，由于麦芽糖能将后者还原生成硝基氨基水杨酸的显色基团，将其颜色的深浅与糖的含量成正比，故可求出麦芽糖的含量。
常用单位时间内生成麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。
实验6小麦萌发前后淀粉酶活力的比较
实验六小麦萌发前后淀粉酶活力的比较一、目的1.学习分光光度计的原理和使用方法。
2.学习测定淀粉酶活力的方法。
3.了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。
二、原理种子中贮藏的碳水化合物主要以淀粉的形式存在。
淀粉酶能使淀粉分解为麦芽糖。
2（C6H10O5）n＋H2O-------nC12H22O11麦芽糖有还原性，能使3,5-二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基5-硝基水扬酸。
后者可用分光光度计法测定。
休眠种子的淀粉酶活力很弱，种子吸胀萌动后，酶活力逐渐增强，并随着发芽天数的增长而增加。
本实验观察小麦种子萌发前后淀粉酶活力的变化。
三、器材1．25ml刻度试管；2．吸管；3．乳钵；4．离心管；5.分光光度计；6．离心机；7．恒温水浴四、试剂和材料1.小麦种子600粒2.0.1％标准麦芽糖溶液20ml精确称量100mg麦芽糖，用少量水溶解后，移入100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度。
3.pH 6.9，0.02摩尔／L磷酸缓冲液100ml0.2mol/L磷酸二氢钾67.5ml与0.2mol/L磷酸氢二钾82.5ml混合，稀释10倍。
4.l％淀粉溶液100毫升1g可溶性淀粉溶于100毫升0.02摩尔／L磷酸缓冲液中，其中含有0.0067摩尔／L氯化钠。
5.l％3,5-二硝基水杨酸试剂200ml1g 3,5-二硝基水杨酸溶于20毫升2摩尔／L的氢氧化钠溶液和50毫升水中；再加人30克酒石酸钾钠，定客至100毫升。
若溶液混浊，可过滤。
6.l％氯化钠溶液300毫升7.海砂5克五、操作步骤1.种子发芽：小麦种子浸泡2.5h后，放人25℃恒温箱内或在室温下发芽。
2.酶液提取：取发芽第三天或第四天的幼苗15株，放人乳钵内，加海砂200毫克，加1％氯化钠溶液10毫升，用力磨碎。
在室温下放置20分钟，搅拌几次。
将提取液离心（5000r／min）5分钟。
将上清液倒人量筒，测定酶提取液的总体积。
进行酶活力测定时，将酶提取液稀释10倍。
取干燥种子或浸泡2.5小时后的种子15粒作为对照（提取步骤同上）。
淀粉酶活力测定实验报告
淀粉酶活力测定实验报告淀粉酶活力测定实验报告实验三、淀粉酶活性的测定实验报告实验四、淀粉酶活性的测定一、实验目的:1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义;2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。
二、实验原理:淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最强，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。
根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化;β-淀粉酶不耐热，70? 15min 则被钝化。
测定时，使其中一种酶失活，即可测出另一种酶的活性。
淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖，利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，测定其吸光度，从而确定酶液中淀粉酶活力(单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量)。
三、实验用具:1、实验设备研钵,具塞刻度试管,离心管，分光光度计，酸度计，电热恒温水浴锅，离心机，电磁炉。
2、实验材料与试剂(1)0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液:称取柠檬酸20.01g，定容至1000ml;B液:称取柠檬酸钠29.41g，定容至1000ml;取A液55ml与B液145ml混匀。
(2)1%可溶性淀粉溶液:1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液;(3)1%3,5-二硝基水杨酸试剂:称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g，定容至100ml水中，紧盖瓶塞，勿使CO2进入;(4)麦芽糖标准溶液:取麦芽糖0.1g溶于100ml水中;(5)pH 6.8的磷酸缓冲液: 取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，加水稀释至1000ml即得。
(6)0.4mol/L的NaOH溶液;(7)1%NaCl溶液。
(8)实验材料:萌发的谷物种子(芽长约1cm)四、操作步骤1、酶液提取:取6.0g浸泡好的原料，去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液，磨碎后以2000r/min 离心10min，转出上清液备用。
淀粉酶活力测定实验报告
淀粉酶活力测定实验报告淀粉酶活力测定实验报告引言：淀粉是一种常见的多糖类物质，广泛存在于植物的种子、块茎和根部等部位。
淀粉酶是一类能够催化淀粉水解为糖类的酶，广泛存在于植物、动物和微生物中。
淀粉酶活力的测定对于研究淀粉酶的性质、功能以及酶的催化机制具有重要意义。
本实验旨在通过测定淀粉酶活力的方法，探究淀粉酶的催化作用及其影响因素。
实验材料与方法：材料：1. 淀粉溶液2. 淀粉酶溶液3. 碘液4. 盐酸5. 碘化钾溶液6. 蒸馏水方法：1. 预先制备好一定浓度的淀粉溶液和淀粉酶溶液。
2. 取一定量的淀粉溶液，加入适量的淀粉酶溶液，混匀后放置一段时间。
3. 取适量的混合液，加入盐酸，停止淀粉酶的活性。
4. 加入碘液，使混合液呈现蓝黑色。
5. 用碘化钾溶液滴定至混合液呈现淡黄色，记录滴定所需的碘化钾溶液体积。
6. 重复上述步骤，分别改变淀粉酶的浓度、温度和pH值等条件，进行多组实验。
结果与讨论：通过实验测定，我们得到了不同条件下淀粉酶活力的数据，并进行了分析和讨论。
1. 淀粉酶浓度对活力的影响：在一定温度和pH值下，我们分别取不同浓度的淀粉酶溶液进行实验。
结果显示，淀粉酶活力随着酶浓度的增加而增加，但当酶浓度达到一定程度后，活力的增加趋势趋于平缓。
这说明在一定范围内，淀粉酶活力与酶浓度呈正相关关系。
2. 温度对活力的影响：我们分别在不同温度下进行实验，结果显示，淀粉酶活力随着温度的升高而增加，但当温度超过一定范围后，活力开始下降。
这是因为温度的升高可以增加酶分子的运动速度和碰撞频率，促进酶与底物的结合，从而提高活力。
然而，过高的温度会导致酶分子的构象变化和热失活，从而降低活力。
3. pH值对活力的影响：我们在不同pH值下进行实验，结果显示，淀粉酶活力在一定范围内随着pH值的变化而增加。
这是因为pH值的变化可以改变酶分子的电荷状态和离子化程度，从而影响酶与底物的结合能力和催化效率。
然而，当pH值偏离酶的最适pH值时，酶分子的构象发生改变，导致活力的降低。
淀粉酶活力测定实验报告
淀粉酶活力测定实验报告1. 引言淀粉酶是一种在生物体内起着重要作用的酶类。
它能够催化淀粉的水解，将淀粉分解成葡萄糖等可溶性糖分子。
淀粉酶活力的测定对于研究酶的功能和特性具有重要意义。
本实验旨在通过测定淀粉酶活力的方法，探究酶的催化作用及其影响因素。
2. 实验目的本实验的目的是通过测定淀粉酶活力，了解酶的催化作用和影响因素，并掌握测定酶活力的方法。
3. 实验原理淀粉酶是一种催化淀粉水解的酶，其催化作用可以用以下反应表示：淀粉 + 淀粉酶→ 可溶性糖本实验使用淀粉作为底物，通过观察淀粉水解的速度来测定淀粉酶的活力。
实验中，我们将淀粉酶和淀粉溶液一起加入反应体系中，随着反应的进行，淀粉逐渐被水解，产生可溶性糖。
我们可以通过检测可溶性糖的浓度变化来确定淀粉酶的活力。
4. 实验步骤4.1 准备实验材料和仪器•淀粉酶溶液•淀粉溶液•恒温水浴•试管•移液器•酶活性检测试剂盒4.2 实验操作步骤1.取一支试管，标记为“试验组”。
2.使用移液器向“试验组”试管中加入10 mL淀粉溶液。
3.使用移液器向“试验组”试管中加入适量的淀粉酶溶液。
4.快速将试管放入恒温水浴中，并固定温度为37摄氏度。
5.开始计时。
6.反应进行1分钟后，使用试管夹取出试管，立即加入酶活性检测试剂盒中。
7.轻轻摇动试管混合，使试剂充分反应。
8.等待适当的时间，观察试剂颜色的变化。
9.使用比色计或其他测量设备，测定试剂颜色的光密度。
10.记录测得的光密度值。
4.3 实验对照组操作步骤为了验证实验结果的准确性，我们设置了一个对照组，即不加淀粉酶的淀粉水解反应。
对照组操作步骤与实验组相同，唯一的区别是在第3步中不加入淀粉酶溶液。
5. 实验结果分析通过测定实验组和对照组的光密度值，我们可以得到淀粉酶的活力。
实验组的光密度值反映了淀粉酶催化淀粉水解的程度，而对照组的光密度值反映了没有淀粉酶催化的淀粉水解程度。
通过比较两者的差异，我们可以得出淀粉酶的活力。
淀粉酶活力的测定实验报告
淀粉酶活力的测定实验报告淀粉酶活力的测定实验报告引言：淀粉酶是一种重要的酶类，广泛存在于生物体内。
它能够催化淀粉的水解反应，将淀粉分解为可溶性糖类。
淀粉酶活力的测定对于了解酶的功能和特性具有重要意义。
本实验旨在通过测定淀粉酶活力的方法，探究酶的催化作用以及影响酶活力的因素。
实验材料与方法：材料：- 淀粉溶液- 淀粉酶溶液- 盐酸溶液- 碘液- 试管- 恒温水浴方法：1. 准备一系列浓度不同的淀粉溶液，如0.1%、0.2%、0.3%等。
2. 将试管标记为不同的浓度，并分别加入相应浓度的淀粉溶液。
3. 在每个试管中加入相同体积的淀粉酶溶液，并迅速混合。
4. 将试管放入恒温水浴中，保持恒定的温度。
5. 在一定时间间隔内，取出一定体积的反应液，加入碘液停止反应。
6. 通过比色法测定淀粉的浓度，进而计算淀粉酶的活力。
结果与讨论：实验结果显示，淀粉酶活力随着淀粉溶液浓度的增加而增加。
这是因为淀粉酶需要与淀粉分子结合才能发挥催化作用，高浓度的淀粉溶液提供了更多的底物供给，从而增加了酶的活性。
另外，我们还观察到淀粉酶活力随着反应时间的延长而增加，但在一定时间后趋于稳定。
这是因为酶的活性在反应初期较高，但随着反应进行，底物浓度逐渐减少，酶的活性也会逐渐降低。
此外，实验结果还显示淀粉酶活力受到温度的影响。
在较低温度下，酶的活性较低，而在适宜的温度范围内，酶的活性最高。
然而，当温度过高时，酶会发生变性，活性会显著下降。
结论：通过本实验，我们成功测定了淀粉酶的活力，并探究了影响酶活力的因素。
实验结果表明，淀粉酶活力受到淀粉溶液浓度、反应时间和温度的影响。
深入了解酶的催化作用和特性，有助于我们更好地理解生物体内的代谢过程，并为工业生产中的酶应用提供理论依据。
然而，本实验还存在一些局限性。
首先，我们仅仅测定了淀粉酶活力的影响因素，对于其他酶的活力测定仍需进一步研究。
其次，实验结果受到实验条件和操作的影响，仍需要进一步优化实验方法和控制实验条件。
实验六 淀粉酶动力学分析
实验六淀粉酶动力学分析（Ⅰ）——DNS法葡萄糖标准曲线的制作及不同pH和温度条件下的淀粉酶活力测定（4学时）第一部分3, 5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖含量一、实验目的学习3, 5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖的原理。
掌握3, 5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理在NaOH和丙三醇存在下，3, 5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540 nm 波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
三、实验器材与试剂实验器材1. 722分光光度计2. 电子天平3. 恒温水浴锅4. 1.5KW电炉5. 18×180 mm试管6. 40孔试管架7. 100 mL容量瓶8. 500 mL棕色试剂瓶；棕色及无色250 mL试剂瓶；无色200 mL试剂瓶；50 mL棕色试剂瓶9. 100 mL量筒10. 200 mL烧杯、500 mL烧杯11. 1 mL吸量管、2 mL吸量管、5 mL吸量管、10 mL吸量管12. 纱手套13. 玻璃棒14. 滤纸15. 称量纸16. 橡皮筋17. 化学试剂：3, 5-二硝基水杨酸、NaOH、丙三醇、葡萄糖均为分析纯实验试剂1. 3, 5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5 g DNS溶于少量蒸馏水中，移入1000 mL容量瓶中，加入2 mol/L NaOH溶液325 mL，再加入45 g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000 mL（老师准备）。
2. 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖200 mg，加入少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100 mL，即含葡萄糖为2.0 mg/ mL（学生配制）。
3. 样品糖溶液：0.2-1.8 mg/ mL(老师准备)。
4. 250 mL蒸馏水装于250 mL无色试剂瓶中（学生准备）。
四、实验方法1. 葡萄糖标准曲线的制作取11支18×180 mm试管，按下表分别加入2.0mg/ mL葡萄糖标准溶液和蒸馏水，实验组做两组平行实验。
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实验六淀粉酶动力学分析（Ⅰ）——DNS法葡萄糖标准曲线的制作及不同pH和温度条件下的淀粉酶活力测定（4学时）第一部分3, 5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖含量一、实验目的学习3, 5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖的原理。
掌握3, 5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理在NaOH和丙三醇存在下，3, 5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540 nm 波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
三、实验器材与试剂实验器材1. 722分光光度计2. 电子天平3. 恒温水浴锅4. 1.5KW电炉5. 18×180 mm试管6. 40孔试管架7. 100 mL容量瓶8. 500 mL棕色试剂瓶；棕色及无色250 mL试剂瓶；无色200 mL试剂瓶；50 mL棕色试剂瓶9. 100 mL量筒10. 200 mL烧杯、500 mL烧杯11. 1 mL吸量管、2 mL吸量管、5 mL吸量管、10 mL吸量管12. 纱手套13. 玻璃棒14. 滤纸15. 称量纸16. 橡皮筋17. 化学试剂：3, 5-二硝基水杨酸、NaOH、丙三醇、葡萄糖均为分析纯实验试剂1. 3, 5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5 g DNS溶于少量蒸馏水中，移入1000 mL容量瓶中，加入2 mol/L NaOH溶液325 mL，再加入45 g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000 mL（老师准备）。
2. 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖200 mg，加入少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100 mL，即含葡萄糖为2.0 mg/ mL（学生配制）。
3. 样品糖溶液：0.2-1.8 mg/ mL(老师准备)。
4. 250 mL蒸馏水装于250 mL无色试剂瓶中（学生准备）。
四、实验方法1. 葡萄糖标准曲线的制作取11支18×180 mm试管，按下表分别加入2.0mg/ mL葡萄糖标准溶液和蒸馏水，实验组做两组平行实验。
在上述试管中分别加入DNS试剂2.0 mL，试管用橡皮筋扎好，于沸水浴中加热2 min进行显色，取出后在盛有冷水的500 mL烧杯中冷却（注意换冷水），各加入蒸馏水9.0 mL，摇匀，以空白管为调零点，在540 nm波长测定吸光度值。
以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线（采用excel 中的散点图法作图，注意坐标单位和作图格式）。
2. 样品中还原糖测定取3支18×180 mm 试管，分别按下表加入试剂。
在加入上述试剂后，于沸水浴中加热2 min 进行显色，取出后在盛有冷水的500 mL 烧杯中冷却（注意换冷水），各加入蒸馏水9.0 mL ，摇匀，以空白管为调零点，在540 nm 波长测定吸光度值，从标准曲线查出葡萄糖的含量。
管号项目12345葡萄糖标准溶液（mL ） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（mL ） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 葡萄糖含量（mg /mL ） 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 DNS 溶液（mL ）2.02.02.02.02.02.0沸水浴2 min 后冷却蒸馏水（mL ） 9 9 9 9 9 9 OD 值管号项目 对照 样品0 1 2 蒸馏水（mL ） 1.0 0 0 样品溶液（mL ） 0 1.0 1.0 DNS 溶液（mL ）2.02.02.0沸水浴2 min 后冷却蒸馏水（mL ） 9 9 9 OD 值葡萄糖含量（mg /mL ）3. 样品还原糖含量的计算还原糖含量（mg/ mL）=CXC——从葡萄糖标准曲线中读得的葡萄糖含量，mg/ mL；X——样品的稀释倍数，此处为1。
第二部分PH对酶活性的影响一、实验目的了解pH对酶活性的影响学习测定酶最适pH的方法二、实验原理酶的活性受环境pH的影响极为显著。
通常各种酶只有在一定的pH范围内才表现它的活性。
一种酶表现其活性最高时的pH值，成为该酶的最适pH。
低于或高于最适pH时，酶的活性逐渐降低。
不同酶的最适pH值不同，例如，胃蛋白酶的最适pH为1.5-2.5，胰蛋白酶的最适pH为8等。
应当指出，酶的最适pH受底物性质和缓冲液性质的影响。
例如，α-淀粉酶的最适pH约为6.8，但在磷酸缓冲液中，其最适pH为6.4-6.6，在醋酸缓冲液中则为5.6。
淀粉酶活力以淀粉酶酶解淀粉形成还原糖的能力表示。
三、实验器材与试剂实验器材1-16. 见本实验第一部分17. 化学试剂：可溶性淀粉、柠檬酸、磷酸氢二钠均为分析纯，α-淀粉酶实验试剂1. 0.2M磷酸氢二钠溶液（共6000 mL）2. 0.1M柠檬酸溶液（共6000 mL）3. 不同pH磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液配制：按下表分别配制pH 3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液各800 mL，用于1%淀粉溶液的配制。
组成0.2 M磷酸氢二钠（mL）0.1 M柠檬酸（mL）缓冲液pH3.04.11 15.894.0 7.71 12.295.0 10.30 9.706.0 12.637.377.0 16.47 3.538.0 19.45 0.554. 1%淀粉溶液：称取1 g可溶性淀粉于200 mL烧杯中，用5 mL pH分别为3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调成糊状。
另取200 mL烧杯，盛入95 mL 3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，于电炉上烧开，倒入60 mL缓冲液于盛有淀粉糊的烧杯中，搅拌均匀，继续煮开并搅拌至透明状，冷却后转至100 mL容量瓶中，用剩余缓冲液荡洗烧杯，合并于容量瓶中，最后用蒸馏水定容至刻度（老师准备）。
5. α－淀粉酶：活性为2000 u/mL(常用单位为u：1酶活力单位为50℃，pH5.0条件下，1分钟液化可溶性淀粉1 mg成为糊精所需要的酶量；而国际单位为IU：分解或生成1 umol底物或产物所需要的酶量)的中温α－淀粉酶，用蒸馏水（应用不同pH的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液稀释，但考虑到同学们分别配制不方便，故用蒸馏水稀释，这对酶反应体系pH有一定影响，但由于淀粉溶液为缓冲液配制，且量为酶液的三倍，故对反应体系pH影响不是很大）稀释1000倍（老师准备）。
5. DNS试剂：见本实验第一部分（老师准备)四、实验方法取13支干燥的18×180 mm 试管，按下表编号，实验组做两组平行试验，加入不同pH 的淀粉溶液和α-淀粉酶溶液（mL ），50℃反应10分钟，反应液稀释一定倍数（约10倍，取1 mL 反应液，加9 mL 蒸馏水，混匀），取1 mL ，加DNS 试剂，于沸水浴中加热2 min 进行显色，取出后在盛有冷水的500 mL 烧杯中冷却（注意换冷水），各加入蒸馏水9.0 mL ，摇匀，以空白管为调零点，在540 nm 波长测定吸光度值，从标准曲线查出葡萄糖的含量，算出酶活力。
管号项目 0123456pH5.0 3.0 4.0 5.06.07.08.0 1%淀粉溶液（mL ）33 3 3 3 3 3 α-淀粉酶溶液（mL ） 1（煮沸灭活）11111150℃反应10分钟，稀释一定倍数（约10倍），取1 mL 用于DNS 反应。
DNS 溶液（mL ）2.02.02.02.02.02.02.0沸水浴2 min 后冷却蒸馏水（mL ） 9 9 9 9 9 9 9 OD 值葡萄糖含量（mg/mL ）酶活力（IU/ mL ）α-淀粉酶酶活力计算公式为（IU/mL ）：124100018010C X X ⨯⨯⨯⨯⨯C ——从葡萄糖标准曲线中读得的葡萄糖含量，mg/ mL4——酶解液共为4 mL ，测定的还原糖为1 mL 酶解液中的还原糖量，所以应×4X1——酶解液的稀释倍数X2——酶的稀释倍数1000——由mg单位转为μg单位时所乘的倍数180——葡萄糖的分子量10——反应时间为10分钟绘制α-淀粉酶在不同的pH条件下的酶活力曲线（采用excel中的散点图法作图）。
第三部分温度对酶活性的影响一、实验目的了解温度对酶活性的影响学习测定酶最适温度的方法二、实验原理酶的催化作用受温度的影响很大，一方面与一般化学反应一样，提高温度可以增加酶促反应的速度。
通常温度每升高10℃，反应速度加快一倍左右，最后反应速度达到最大值。
另一方面酶是一种蛋白质，温度过高可引起蛋白质变性，导致酶的失活。
因此，反应速度达到最大值以后，随着温度的升高，反应速度反而逐渐下降，以至完全停止反应。
反应速度达到最大值时的温度称为某种酶作用的最适温度。
高于或低于最适温度时，反应速度逐渐降低。
大多数动物酶的最适温度为37-40℃，植物酶的最适温度为50-60℃。
但是，一种酶的最适温度不是完全固定的，它与作用时间长短有关，反应时间增长时，最适温度向数值较低的方向移动。
通常测定酶的活性时，在酶反应的最适温度下进行。
为了维持反应过程中温度的恒定，一般利用恒温水浴等恒温装置。
酶对温度的稳定性与其存在的形式有关。
实践证明大多数酶在干燥的固体状态下比较稳定，能在室温下保存数月以至一年。
溶液中的酶，一般不如固体的酶稳定，而且容易为微生物污染，通常很难长期保存而不丧失其活性，在高温的情况下，更不稳定。
三、实验器材与试剂实验器材1-16. 见本实验第一部分17. 化学试剂：可溶性淀粉、柠檬酸、磷酸氢二钠均为分析纯，α-淀粉酶实验试剂1. 1%淀粉溶液：称取1 g可溶性淀粉的200 mL烧杯中，用5 mL pH5.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调成糊状。
另取200 mL烧杯，盛入95 mL pH5.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，于电炉上烧开，倒入60 mL于盛有淀粉糊的烧杯中，搅拌均匀，继续煮开并搅拌至透明状，冷却后移至100 mL容量瓶中，用剩余缓冲液荡洗烧杯，倒入容量瓶中，最后用蒸馏水定容至刻度（老师准备）。
2. α-淀粉酶：活性为2000 u/mL的中温α－淀粉酶，用pH5.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液稀释1000倍（老师准备，现用现配）。
3. DNS试剂见本实验第一部分（老师准备)四、实验方法取13支干燥的18×180 mm试管，按下表编号，实验组做两组平行试验，按下表加入pH5.0的淀粉溶液和α-淀粉酶溶液（mL），不同温度下反应10分钟（全实验室需确保有6台水浴锅，按照组号顺序分别将水浴锅温度控制在20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃，并依次循环），反应液稀释一定倍数（约10倍，取1 mL反应液，加9 mL蒸馏水，混匀）取1 mL，加DNS试剂，于沸水浴中加热2 min进行显色，取出后在盛有冷水的500 mL烧杯中冷却（注意换冷水），各加入蒸馏水9.0 mL，摇匀，以空白管为调零点，在540 nm波长测定吸光度值，从标准曲线查出葡萄糖的含量，算出酶活力。