第五章高效液相色谱法的应用

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高效液相色谱法及其应用

高效液相色谱法及其应用
高效液相色谱法
基本概念分离原理系统结构分析方法实际应用
色谱法（Chromatography）
希腊语chroma(色)和graphos(谱)
石
油
1903年
醚
俄罗斯植物学家
Tsweet茨维特
植物色素玻璃柱 CaCO3 石油醚淋洗
色谱分析法的定义
色谱分析法是一种物理化学分离方法,其分离原理是：溶于流动相(石油醚)中的样品(植物色素) 各组分经过固定相 (CaCO3)时，其与固定相发生吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和等相互作用，且其作用的大小、强弱不同，导致在固定相中滞留的时间也不同，从而先后从固定相中流出，实现了不同组分的分离。当分离后的组分由流动相携带进入检测器时，就得到了一个一个的色谱峰。
• （3）内标物的性质和浓度尽量与预测定峰的接近。
• （4）内标物是样品中不存在的，与样品各组分、柱填料和移动相不发生化学反应。
• 根据组分百分含量与其色谱峰面积成正比的关系进行计算：
HPLC的日常操作条件
最好是恒温、恒湿温度：15—30℃ 相对湿度<80%
房间应有良好的通风避免光线直射远离高电磁干扰、高振动设备
色谱柱的选择应考虑：
➢固定相类型的选择, 主要取决于样品及其分离模式； ➢ 柱填料的结构, 主要指颗粒的形状大小、均匀性、比表面、平均孔径和孔容等； ➢ 柱规格指柱内径、柱长度和填料粒度
色谱柱的分离效率（简称柱效），可定量地用理论塔板数N来表示。
柱
效
检
测
次序：尿嘧啶/苯酚/ 4-氯硝基苯/甲苯
用待测组分标准物制备一系列标准溶液，在选定的色谱条件下取一定体积的标准溶液进样分离，用待测组分的峰面积对浓度做标准曲线，此标准工作曲线应是通过原点的直线。标准工作曲线的斜率即为绝对校正因子。

高效液相色谱法的应用

在药品分析鉴定的作用
3 在西药鉴别中的应用在HPLC法中,保留时间与组分的结构和性质有关,是定性的参数,可用于药物的鉴别.如中国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定:在含量测定项下记录的色谱图中,供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致.头抱拉定,头孢噻酚钠等头孢类药物以及地西泮注射液,曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别. 4.在体内药物分析中的应用 HPLC由于测定迅速准确，流动相选择范围广，灵敏度高(10-12 g／mL以上)，填充柱种类多，且可供选择的检测器也多。所以是实验室研究中一种很好的体内分析方法。在国内外都很受重视．大多数药物都有紫外吸收，所以最常用的检测器是紫外检测器。多数药物及内源性物质极性均较大，利用其极性差，可以采用RP-HPLC色谱柱，可获得良好分离效果。
在药品分析鉴定的作用
1.天然药物分析天然药物的来源有动物、植物和矿物之分，其中以植物类为主。由于天然药物的化学成分复杂，其有效成分，可能有一个，也可以有多个，这对于控制药品质量，建立质量标准来说比较困难，HPLC可通过对天然药物的有效成分进行式，可以判定药材的质量高低。 2..天然药物及复方成药分析复方制剂、杂质或辅料干扰因素多的品种多采用高效液相色谱法。增免扶正片系由当归、党参、黄芪（图3）等十几味天然药物精制而成，具有益气生津、活血养血、滋补肝肾、健脾开胃之功效，主要用于抗缺氧、抗疲劳、抗衰老，长期服用可扶正祛邪，提高机体免疫功能，健身强体，益寿延年。该药对心、肝、脾、肾虚、纳差、心脑血管疾病、神经衰弱、慢性肝炎、脂肪肝等都有较好的防治作用。由于化学药品的开发费用昂贵，而且毒副作用大，近年来人们已把目光转向自然、民族传统医药、草药、植物药等天然药物，据世界卫生组织统计，当前全世界60多亿人口中80％的人使用过天然医药。在全世界药品市场中，天然物质制成的药品已占30％，国际上植物药市场份额已达300亿美元，且每年以20％以上的速度增长。HPLC分析必定能为我国传统中医药实现现代化，走向世界提供强有力的技术支持。

高效液相色谱方法及应用

一、流动相脱气（1）吹氦脱气法（2）加热回流法（3）抽真空脱气法（4）超声波脱气法（5）在线真空脱气法
高压输液泵及梯度洗脱装置
一、高压输液泵高压输液泵可以分为以下两类： 1．恒流泵：可输出恒定体积流量的流
动相。（1）注射式泵（又称注射式螺杆泵）（2）往复型泵 2．恒压泵：恒压泵又称气动放大泵，
一类是选择性检测器，如紫外一可见分光光度检测器；
另一类是通用型检测器，如示差折光检测器。
(1)紫外一可见分光光度检测器。
如今此技术已在分析咖啡中的黄嘌泠、调料中的核苷酸及核苷、果汁中的有机酸、米中的维生素、牛奶中的维生素D等都对食品营养价值提供有效数据。热不稳定物、离子型化合物及高聚物的分离及测量有困难，致使其应用受到了很大的限制。又如止痛药或退烧药也可用此法分离并测得各组分的含量。染料厂排出废水中的苯胺等。用液相色谱分析简便迅速。分析食品中的有毒成分，如苹果中农药萘乙酸、稻米中的黄曲霉素、鱼体中的有机汞等。是输出恒定压来自的泵。二、梯度洗脱装置
1．梯度洗脱（gradient elution）又称停流进样是在高压泵停止供液、体系压力下降的情况下，将样品直接加到柱头。
一、与经典液相色谱法比较
为梯度淋洗或程序洗脱。在同一个分析用离子交换柱和缓冲游泳梯度淋洗。
多种不同性能的配位体键联在固相基体上分析食品中的有毒成分，如苹果中农药萘乙酸、稻米中的黄曲霉素、鱼体中的有机汞等。
高效液相色谱法的特点
一、与经典液相色谱法比较经典液相（柱）色谱法使用粗粒多孔固定相，装
填在大口径、长玻璃柱管内，流动相仅靠重力流经色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度缓慢，柱入口压力低，仅有低柱效，分析时间冗长。
高效液相色谱法使用了全多孔微粒固定相，装填在小口径、短不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵进入高柱压的色谱柱，溶质在固定相的传质，扩散速度大大加快，从而在短的分析时间内获得高柱效和高分离能力。

高效液相色谱分析技术的应用

高效液相色谱分析技术的应用在当今社会中，高效液相色谱分析技术已经成为了化学研究中不可或缺的重要工具。

它可以用来分离、检测和定量各种化合物，是一个通用的分析方法。

在医药、环保、食品和农业等领域，高效液相色谱分析技术都有着广泛的应用，如下所述。

1. 医药研究高效液相色谱分析技术在生物医药领域中有着非常广泛的应用。

例如，它可以用来检测蛋白质、核酸和药物等生物大分子，分析药品的质量和含量，探测药物中残留的有害物质等。

这些都是基础医学、临床医学和制药工业中必不可少的步骤。

2. 环保工程高效液相色谱分析技术也可以应用在环保领域中。

例如，它可以用来检测水、空气和土壤中的重金属、有机化合物和细菌等污染物，帮助人们找到环境污染的原因和来源，进而采取相应的治理措施。

这些工作可以保障人们健康和环境的可持续发展。

3. 食品行业高效液相色谱分析技术在食品行业也有着广泛的应用。

例如，它可以用来分析食品中的营养成分、添加剂、防腐剂、色素等物质，检测食品中的微量有害物质和重金属等。

这些分析结果可以保证食品质量和安全。

4. 农业科技高效液相色谱分析技术不仅可以应用在生物医药、环保和食品等领域，也可以用于农业科技。

例如，它可以用来检测农产品中的农药残留、重金属含量和污染物等，分析土壤中的养分和微生物等。

这些都可以为农业科技发展提供数据和支持。

总之，高效液相色谱分析技术在各个领域中都有着广泛的应用前景。

但是，同时也需要注意分析技术的精度和可靠性，以及对环境和健康的影响。

在未来的发展中，应该注重提高技术水平、完善检测标准和加强科学技术的应用。

【培训课件】高效液相色谱法的应用

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流速和柱温均可适当改变，以适应测定的需要。如含量测定时，可适当加大流速和提高柱温；柱温降低和流速降低均可对分离效果提高。顺便提及：同样的测定条件，不同公司生产的色谱柱C18柱，出峰时间都有可能相差很大。这十分正常。目前国外已基本采用一根色谱柱对一个产品，特别是一些特殊的柱型，质量标准中均详细注明。国内虽做不到，但可在色谱条件上下工夫，以适应不同的色谱柱型号，即后面即将讲到的方法认证中的系统耐用性。
该仪器分析。分离效率高：复方分析、辅料干扰时等情况下，
更显示其威力。速度快：一般出峰时间均在30min以内。这里需
要强调的是，通常采用流速为1.0ml/min，柱温 30~40℃的测定条件。一般含量测定、溶出度可调整为出峰时间快一些，有关物质测定一般调整的慢一些，最好10~15min左右出峰为好。
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HPLC仪的一般操作
1. 几大仪器生产厂商的介绍和使用下来的体会。包括国内目前可以生产的部件；根据自己工作需要购买某一品牌。 2. 流动相的配制（梯度洗脱）和处理（过滤膜） 3. 柱子的安装。 4. 操作顺序 5. 平衡时间、色谱柱清洗！ 6. 如有气泡，如何处理。
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（1）分析生化样品、血液制品和手性色谱柱时，最好加一预柱以保护。（2）配备柱温箱，以保证试验的重现性和降低柱压等（3）最好能配一电脑和国产软件。不要用积分仪。（4）压力不稳时，绝大多数情况是有气泡混入。应排除。（5）试验后色谱柱冲洗。（6）色谱柱不用、存放时，两头柱塞一定塞住，否则容易挥发干损伤柱子。（7）建立仪器使用登记本。（8）仪器维修培养一位同志
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灵敏度高：可检测物质达10-9μg左右，一般最低检测浓度均可达10-1~10-3μg/ml（进样体积10~20μl）。这是紫外测定无法匹敌的。有些浓度非常低的，紫外检测不到或者说紫外无法测定的，应用HPLC法均可得到满意的解决！并可通过使用不同的检测器，测定不同物质，或再提高测定灵敏度。

第五章高效液相色谱法

2019/7/25
数据处理系统
打开工作站，选择工作通道编辑方法文件，设置方法名称、运行时间及定量方法输入路径名、样品名、操作者等样品分离完成后，记录谱图文件名和色谱峰峰高、峰面积和保留值等
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四. 液相色谱固定相
1.液-固色谱固定相
种类：硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等；结构类型：全多孔型和薄壳型；粒度：5～10 μm；
（3）硬质凝胶多孔硅胶、多孔玻珠等；化学稳定性、热稳定性好、机械强度大，流动相性质影响
小，可在较高流速下使用。可控孔径玻璃微球，具有恒定孔径和窄粒度分布。
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气相色谱中的固定相原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。
选择合适的固定相，降低填料粒度可显著提高柱效，但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。
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光电二极管阵列检测器
光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。
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二极管阵列检测器
样品池 D2 / W 灯
光栅
每一组分可在每一波长处得到一吸光度值
二极管阵列
二极管阵列检测器的优点
1）采集三维谱图 2）峰纯度检验 3）光谱库检索 4）可以发现单波长检测时未测到的峰
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2. 液-液色谱固定相
（1）全多孔型担体由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体；早期采
用100μm的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多见；现采用10μm以下的小颗粒，化学键合制备柱填料；
（2）表面多孔型担体（薄壳型微珠担体） 30～40μm的玻璃微球，

高效液相色谱法在药物分析中的应用

高效液相色谱法在药物分析中的应用引言：药物分析是研究药物有关品质、特性和性能的科学，为解决药物的质量控制、卫生监督、疗效评价等问题提供重要依据。

高效液相色谱法（HPLC）作为一种广泛应用的分析技术，被广泛用于药物分析领域。

本文将介绍HPLC的原理、分类、样品前处理以及在药物分析中的应用。

一、高效液相色谱法的原理高效液相色谱（HPLC）是依据溶质在液相中的分配行为，通过使用高压将流动相以高流速通过填充在色谱柱中的填充物，使溶质在液相中迅速地分离和富集的色谱法。

HPLC的关键是：高流速、高效分离柱、高灵敏检测器及自动化数据处理。

其主要原理是利用在流动相动力学不断交互和琢磨下，溶质主动与固定在填充柱中的固定相交互和琢磨而实现分离。

二、高效液相色谱法的分类1. 液相色谱法液相色谱法是利用液相作固定相，将溶质吸附于填充柱的一端的一种色谱法。

根据固定相的种类，又可分为吸附色谱、间隙色谱、离子交换色谱等。

2. 气相色谱法气相色谱法是利用气相作固定相，溶质在气相中沿柱壁表面扩散、交换、迁移分离的一种色谱法。

根据固定相的种类，又可分为草胺酸色谱、膜层分离、毛细管电色谱等。

三、高效液相色谱法中的样品前处理样品前处理在药物分析领域扮演着重要的角色。

在HPLC分析中，如果样品中的杂质较多，可能会干扰分析结果，影响分析的准确性和灵敏度。

因此，合适的样品前处理方法可以减少或消除干扰物，提高分析效果。

常见的样品前处理方法包括前处理、萃取、分配、浓缩、保护性介质法等。

四、高效液相色谱法在药物分析中的应用1. 药物纯度检测HPLC广泛用于药物纯度检测，可以准确测定药物的含量、杂质、有关化合物等。

通过HPLC可以快速、准确地得到药物的质量信息，保证药物的合格出货。

2. 药物稳定性研究药物稳定性对药物的长期储存和使用具有重要意义。

HPLC可以对药物与其他成分的相互作用、不同储存条件下的降解行为进行研究，评估药物在不同条件下的稳定性。

高效液相色谱技术在食品安全检测中的应用

高效液相色谱技术在食品安全检测中的应用第一章：引言随着社会经济的不断发展，人们对食品质量和安全的关注日益增加。

尤其是近年来，食品安全问题时有发生，引起广泛关注。

因此，为了确保人们的身体健康和生活质量，需要对食品进行严格的安全检测。

而高效液相色谱技术因其具有高效、准确、快捷等诸多优点，在食品安全检测中得到广泛应用。

第二章：高效液相色谱技术概述高效液相色谱（HPLC）是由液相为驱动力的一种分析技术。

通过将样品在液态移动相中进行分离，然后用检测器检测每个分离出来的物质的特定信号，最终得到色谱峰。

HPLC是一种灵活性强、可靠性高、分离效率高、分析速度快、灵敏度高的分离技术，它在食品安全领域应用广泛。

第三章：高效液相色谱在食品安全检测中的应用3.1 食品添加剂检测食品添加剂是食品加工过程中添加的各种化学物质，用于增加食品的色、香、味、营养价值和保质期等。

但是，有些食品添加剂可能对人体健康有害。

因此，如何检测食品添加剂成为食品安全领域的重要问题。

高效液相色谱技术在食品添加剂检测中有着很广泛的应用。

例如，利用HPLC可以对食品中的亚硝酸盐、硫代硫酸盐等添加剂进行检测。

3.2 食品中的农药残留农药是农业生产中一个重要的辅助决策因素，但是如果没有恰当地控制其使用，就可能对人造成危害。

因此，对食品中的农药残留情况进行监测和控制是很重要的。

高效液相色谱技术具有灵敏度高、准确性高、分析速度快等特点，可以对食品中的农药残留情况进行精确的检测，如对克百威、毒死蜱、硫磺磷等常见农药进行检测。

3.3 食品中的罕见氨基酸检测高效液相色谱技术作为营养学、化学与生物学等学科的重要分析手段，在食品科学中也被广泛地应用。

在检测食品中罕见氨基酸方面小分子双酰胺（NBD-F）标记和高效液相色谱（HPLC）测定法对于检测食品中的氨基酸具有重要意义第四章：高效液相色谱技术在食品安全领域的优势高效液相色谱技术在食品安全检测中具有以下几个优势：4.1 灵敏度高高效液相色谱技术不仅可以检测低浓度的物质，而且还可以提高精确度。

第五章高效液相色谱法

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基本理论
热力学理论：塔板理论——平衡理论热力学理论：塔板理论——平衡理论动力学理论：速率理论—— 范第姆特动力学理论：速率理论 ——范第姆特方程色谱图的基本参数：与气相色谱法类似
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各类高效液相色谱法的分离原理及选择
液-固吸附色谱液-液分配色谱离子交换色谱体积排阻色谱亲和色谱
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高效液相色谱法的类型
根据固定相的不同液-固色谱液-液色谱根据分离机理的不同分配色谱吸附色谱离子交换色谱体积排阻色谱亲和色谱
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分配色谱：分离组分在两相中的分配系数不同吸附色谱：固定相对分离组分的吸附能力不同离子交换色谱：不同离子与固定相上的相反电荷离子间作用力大小不同体积排阻色谱：根据样品分子尺寸的不同按分子大小分开亲和色谱：不同基体上键合多种不同特性的配位体作固定相，用具有不同pH的缓冲溶液做流动相，依据生物分子与基体上键联的配位体之间存在的特异性亲和作用力不同
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流动相
1. 流动相特性
(1)液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂液相色谱的流动相又称为：淋洗液，液相色谱的流动相又称为。流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分流动相组成改变，极性改变，分离状况；分离状况； (2)亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流亲水性固定液常采用疏水性流动相，亲水性固定液常采用疏水性流动相动相的极性小于固定相的极性，动相的极性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。谱法，极性柱也称正相柱。 (3)若流动相的极性大于固定液的极性，则称若流动相的极性大于固定液的极性，若流动相的极性大于固定液的极性为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分 31 在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。

高效液相色谱技术在生物分析中的应用

高效液相色谱技术在生物分析中的应用高效液相色谱技术（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种在生物分析中广泛运用的分离和分析方法。

本文将按照不同的生物样本进行分类，分别探讨高效液相色谱技术在生物分析中的应用。

一、蛋白质分析中的应用蛋白质是生物体内的重要组成部分，其分析对于理解生物功能具有重要意义。

通过高效液相色谱技术，可以实现对蛋白质的定性与定量分析。

其中，常用的方法包括离子交换色谱、逆相色谱、尺寸排除色谱等。

这些方法可以用于研究蛋白质的氨基酸组成、结构以及功能变化，有助于药物研发、疾病诊断等方面的应用。

二、核酸分析中的应用核酸在遗传信息传递中具有重要作用，因此，了解和分析核酸的结构和功能对于生物研究至关重要。

高效液相色谱技术可以进行核酸的分离与测定，如DNA测序、构象分析等。

此外，还可以通过耦合质谱仪实现核酸的序列识别、修饰鉴定等。

三、药物分析中的应用高效液相色谱技术在药物分析中有着广泛应用。

药物对于生物系统的作用机制及药效评价等需要进行分析研究。

高效液相色谱可以用于药物的纯度、含量、分离以及代谢产物的测定。

同时，通过样品前处理的方法，可以实现对药物残留的分析，以确保药物的安全性和合规性。

四、代谢物分析中的应用代谢物是生物体内代谢活动的产物，对于理解生物体内的代谢过程具有重要作用。

通过高效液相色谱技术可以分离和鉴定代谢物，以及测定其浓度。

这对于疾病诊断、药物研发等具有重要意义。

五、环境分析中的应用环境污染物的分析是环境保护和生态安全的重要组成部分。

高效液相色谱技术可以用于环境样品的分析和监测，如水质分析、空气污染物的检测等。

通过该技术，可以快速、准确地检测出环境中的有害物质，为环境管理和保护提供科学依据。

六、食品分析中的应用食品安全是人们关注的焦点之一，而食品分析则是保证食品安全的关键一环。

高效液相色谱技术可以对食品中的添加剂、农药残留、重金属等进行分析和检测。

高效液相色谱分析技术的应用

高效液相色谱分析技术的应用高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）作为一种重要的分析技术，广泛应用于化学、制药、食品、环保等领域。

其基本原理是利用物质在固/液相中的分配系数不同，使分离物质分离出来，达到物质检测和分析的目的。

本文就高效液相色谱分析技术的应用进行探讨。

一、基本原理高效液相色谱不同于传统的色谱技术，其分离性能更高、分离速度更快、分析灵敏度更高。

其主要原理就是将需要分离的样品在移动相中通过液体固定相或液体液体分配相的不同分配系数，分离出各种成分，从而得到需要的结果。

而常用的分离机理包括反相色谱、正相色谱、离子交换色谱、层析色谱等。

由于HPLC分离机理的多样性，使其能够适应多种复杂的样品体系的分离与分析。

二、应用领域（一）化学分析目前，高效液相色谱在化学分析中的应用越来越广泛。

例如，高效液相色谱技术可用于金属离子及其有机配合物的定量分析，在有机合成反应中也可以利用该方法完成反应产物的纯化过程。

此外，在催化剂和生物分子的分离与纯化、天然产物的分离与鉴定，高效液相色谱都具有优越的分离和分析能力，已成为化学分析研究中的必备工具。

（二）制药企业在制药企业中，高效液相色谱已成为一种不可或缺的分析技术。

从新药开发到产品质量控制、制药工艺中间物质的纯化等领域，HPLC技术都有广泛的应用，并被制药企业广泛采用去检测原材料、辅料和成品药的纯度，保证了药品的质量和安全性，保障了广大人民群众的健康。

（三）食品安全在食品安全领域，高效液相色谱也得到了广泛的应用。

例如，研究人员可以利用其对食品中添加的有害物质进行检测。

例如，通过高效液相色谱对食品中的铅、镉、汞等重金属元素、农药残留、食品中的营养成分进行过滤分离，可以为食品安全提供保障，保障了人们饮食安全的权益。

三、技术进展随着科学技术日新月异，高效液相色谱技术不断发展，近年来，其技术进步也得到了广泛的关注。

高效液相色谱方法及应用

1.1.1 与经典液相色谱法比较：
高速、高效、高灵敏度、高自动化。
1.1.2 与气相色谱法比较
应用范围广、更利于选择最佳分离条件且可在常温下操作。
1.1.3 高效液相色谱法的特点
（1）分离效能高（2）选择性高（3）检测灵敏度高（4）分析速度快适合于高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。
1.2 高效液相色谱法的分类
按溶质在两相分离过程中的物理化学原理分类 1.2.1 吸附色谱（Adsorption
Chromatography） 1.2.2 分配色谱（Partition Chromatography） 1.2.3 离子色谱（Ion Chromatography） 1.2.4 体积排阻色谱（Size Exclusion
2.3.3 柱温箱的温度控制要求比较精确，因为流体的粘度受温度的影响较大。
2.4 检测器
2.4.1 检测器的性能指标（1）噪声（2）基线漂移（3）灵敏度（4）线性范围（5）检测器的池体积
2.4.2 检测器的种类
2.4.2.1 紫外吸收检测器
（ultraviolet－visible detector，UVD ）
• 进样系统：进样器，进样阀。 • 分离系统：色谱柱，恒温箱。 • 检测系统记录系统：检测器、记录装置
2.1 高压输液系统
2.1.1 贮液罐 2.1.2 流动相脱气
（1）吹氦脱气法（2）加热回流法（3）抽真空脱气法（4）超声波脱气法（5）在线真空脱气法
2.1.3 高压输液泵
（1）恒流泵：输出恒定体积流量的流动相（2）恒压泵：又称气动放大泵，输出恒定压力的泵。
Chromatography） 1.2.5 亲和色谱（Affinity Chromatography）

高效液相色谱仪的应用

ELSD优缺点
与示差折光检测器相比：灵敏度高；对流动相系统温度变化不敏感；可进行梯度洗脱。与紫外-可见光检测器相比：能解决最困难的HPLC检测问题。可对磷脂、皂苷、
糖类、聚合物、树脂等无紫外吸收或紫外吸收系数很小的化合物进行检测；无需测定定量校正因子。
蒸发光散射检测器（ELSD）
应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。
凝胶色谱
固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布)；
原理：按分子大小分离，又称为排阻色谱（反筛子）。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。按试样中分子大小的不同来进行分离。充填剂多采用：一定孔径的多孔性聚合物。
5 高效液相色谱仪的结构
高压输液系统进样系统分离系统检测系统色谱数据处理系统
高压输液系统
包括：流动相贮存器高压输液泵（核心部件）: 能提供150-450kg/cm2的压强；流
速稳定，流量可以调节；应符合：密封性好、输出流量恒定、压力平稳、可调范围宽、便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等要求。过滤器梯度洗脱装置 : 可将两种或两种以上的不同极性溶剂，按一定程序连续改变组成，以提高分离效果，缩短分离时间。
液固吸附色谱
分配色谱
固定相与流动相均为液体；基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动
相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）.
正向色谱法与反相色谱法比较
领域，它既可用于混合物的分离和样品纯度的检查，又可用于对化合物的定性和定量分析。

高效液相色谱技术在化学分析中的应用

高效液相色谱技术在化学分析中的应用高效液相色谱技术（High-performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种广泛应用于化学分析中的重要技术。

在现代科学研究中，我们经常会遇到需要分离和测定复杂混合物中的成分的情况。

传统的色谱方法通常会受到时间、分离效率和灵敏度等方面的限制，而HPLC技术的出现为我们解决了这些难题。

HPLC技术的原理是利用液相在固定相上的流动速度差异实现分离，进而测定和定量样品中的分子成分。

相比传统色谱技术，HPLC技术在分离效率、分析速度和操作灵活性方面有重要突破。

首先，HPLC技术采用高压力泵将流动相经由固定相床，以高速度通过样品，并通过检测器进行分析。

这种高压力条件下的操作使得HPLC可以实现极高的分离效率，即能够将样品中非常相似的化学物质分离开来。

其次，由于HPLC技术的快速性，使得分析师能够更迅速地完成分析。

这对于高通量分析以及快速反应等需要时间敏感的实验非常重要。

此外，HPLC技术还具有灵活性强的特点，可以通过改变流动相组分、调整流动相流速以及改变固定相等方式来实现谱图增加和分离效果优化。

在分析实验室中，HPLC技术可以广泛应用于各个领域。

例如，在食品和饮料工业中，HPLC可以用于检测食品中的添加剂、农药残留、重金属等有害物质，并确保产品的安全性和质量。

在医药领域，HPLC技术可以用于药物的纯度、含量和杂质的检测，保证药品的疗效和安全性。

在环境监测和保护中，HPLC技术可用于检测水中的有机和无机污染物，以及土壤和大气中的有害物质，帮助我们更好地了解环境中的污染情况。

除了这些应用领域外，HPLC技术还可以在生物化学、化学工业、材料科学等多个领域发挥重要作用。

虽然HPLC技术有着广泛的应用前景，但要想正确地应用并得出可靠的结果，仍然需要分析师具备一定的专业知识和实践经验。

在进行HPLC分析时，我们需要选择合适的液相、固定相和检测器，并做好各个操作步骤的优化。

高效液相色谱法在药物分析中的应用

高效液相色谱法在药物分析中的应用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种广泛应用于药物分析领域的分离和检测技术。

它通过利用样品中化合物的物理化学性质在液相中的分配行为，实现对复杂混合物中目标化合物的分离和测定。

在药物研发、质量控制和临床药物监测等方面，HPLC技术发挥着重要的作用。

首先，HPLC在药物分析中的应用可以实现对药物的分离和纯化。

药物的研发过程中，需要从复杂的天然产物或合成化合物中提取出目标药物，并对其进行纯化。

HPLC技术可以通过调节流动相的组成、柱温和流速等参数，实现对目标药物的有效分离和纯化。

这为药物的结构鉴定和后续的生物活性评价提供了可靠的基础。

其次，HPLC在药物质量控制中的应用也非常重要。

药物的质量控制是保证药物安全有效的关键环节。

HPLC技术可以通过建立合适的色谱分析方法，对药物中的主要成分进行定量分析。

这些成分包括活性成分、杂质和附加剂等。

通过HPLC分析，可以准确测定药物中的目标成分的含量，以及检测和定量分析其中的杂质。

这为药物的质量控制提供了可靠的手段。

此外，HPLC在药物代谢动力学研究中也发挥着重要的作用。

药物代谢动力学研究是了解药物在体内的代谢过程和代谢产物的形成机制的关键环节。

HPLC技术可以通过建立适当的样品前处理方法和色谱分析条件，对药物及其代谢产物进行分离和检测。

通过HPLC分析，可以得到药物在体内的代谢产物的结构和含量，从而揭示药物的代谢途径和代谢动力学特征。

此外，HPLC技术在临床药物监测中也发挥着重要的作用。

药物的治疗效果和安全性与其在体内的浓度密切相关。

因此，对药物在体内的浓度进行监测是评价药物治疗效果和调整用药剂量的重要手段。

HPLC技术可以通过建立合适的生物样品前处理方法和色谱分析条件，对生物样品中的药物进行测定。

通过HPLC分析，可以准确测定药物在生物样品中的浓度，为临床用药提供科学依据。

高效液相色谱法在药物分析中的应用

高效液相色谱法在药物分析中的应用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分析方法，可广泛应用于药物分析领域。

本文将探讨HPLC在药物分析中的应用，包括样品前处理、色谱条件优化、质量控制和药物定量等方面。

一、样品前处理在药物分析中，样品的复杂性和多样性常常是分析的一大挑战。

为了获得准确可靠的结果，样品前处理是不可或缺的步骤。

HPLC分析通常需要对样品进行提取、净化和浓缩等处理。

在提取过程中，选择适当的溶剂和提取方法可以有效地将目标分析物从样品基质中分离出来。

例如，液-液萃取法、固相萃取法和超滤法等常用的提取方法可以实现对药物的富集和纯化。

净化步骤旨在去除样品中的干扰物质，以提高分析的准确性和灵敏度。

净化方法包括固相萃取、液液分配和凝胶层析等，可以根据药物特性和分析要求进行选择。

浓缩处理可以提高目标物质的浓度，以便后续的色谱分析。

浓缩方法常用的有氮吹、旋转蒸发和固相萃取等。

二、色谱条件优化色谱条件的优化对于获得良好的分离度和分析效果至关重要。

以下是一些常用的参数和技巧，可用于优化HPLC色谱条件。

1. 流动相选择：根据目标化合物的特性选择合适的流动相，包括溶剂选择和溶液pH值调整。

2. 色谱柱选择：根据目标化合物的特性和分析要求选择适当的色谱柱。

不同的色谱柱具有不同的分离性能和选择性，包括反相色谱柱、离子交换柱和手性色谱柱等。

3. 流速调整：流速对分离和保留时间有重要影响，需要根据分离要求进行调整。

4. 柱温控制：柱温对分析结果的准确性和重复性有一定影响，需要根据药物的热稳定性和分析要求进行控制。

三、质量控制在药物分析中，质量控制是确保结果准确可靠的关键环节。

HPLC技术可以提供快速、准确和灵敏的质量控制手段，主要包括以下几个方面。

1. 标准曲线建立：通过建立标准曲线，可以进行目标化合物的定量分析。

标准曲线的建立需要准备一系列不同浓度的标准溶液，并根据峰面积或峰高与浓度的关系确定标准曲线方程。

高效液相色谱技术的应用

高效液相色谱技术的应用[摘要]高效液相色谱技术具有高选择性，可快速、准确地实现多种元素同时测定，方法简便快速。

概述了高效液相色谱在应用方面的研究进展，同时还展望了高效液相色谱技术的应用前景。

[关键词]高效液相色谱应用研究进展高效液相色谱自20世纪70年代问世以来，经过近30年的发展，在基础理论、仪器装置和色谱柱等方面的研究已趋于成熟，现在已成为化学学科中最有优势的分离分析方法之一。

高效液相色谱的应用范围十分广泛，几乎能够分析所有的有机、高分子、生物样品。

具估计，目前已知的化合物中，有80%的化合物需要用高效液相色谱法进行分离分析。

此外，对无机物的分析也有很好的效果，特别是对生命活性物质的分离分析，有着其它分析方法不可替代的作用，已广泛应用于石油化工、生物化学、临床医学、食品卫生、环境监测、医药工业、商品检验、地质勘探、油田开发等领域的分离分析。

一、高效液相色谱分析原理高效液相色谱法是在高压条件下溶质在相互流动相之间进行的一种连续多次交换的过程，他借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同引起排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

液相色谱柱的分离度用下列公式表示。

R= 式中：R-液相色谱柱分离度；n-柱效率，用理论塔板数来表示；a-溶剂效率，是固定相对某两个混合物分离能力的表征；K-容量因子，是在平衡状态下组分在固定相与流动相中质量之比。

从上面公式可见，要提高分离度，共有三条途径：1.增加n。

在其他条件相同的情况下，增加n可以使色谱峰变狭.这点可以通过增加柱来实现，但增加柱长分离时间也会增加，但如果采用高效能的填充剂，不仅可提高分离度，而且能使广峰形变狭而提高检出的灵敏度。

2.增加a。

使后一组分相对于前一组分的保留时间增加来提高分离度。

这可通过改变移动相或固定相的组成来达到最有效的方法就是改变移动相的极性，这就是高效液相色谱中通常采用连续改变移动相极性的梯度淋洗法。

3.增加k。

对液相色谱来讲，移动相极性增高，k减小，色谱峰向前移，分离度降低;移动相极性减小，k增加，色谱峰的流出时间增加，同时峰形变宽，分离度提高。

第五章高效液相色谱法的应用

• 通过改变流动相中有机溶剂的浓度来改变分离结果，所以在分离过程中使用了大量的有机溶剂，这可能会导致生物大分子失去活性
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
反相色谱在食品分析中的应用
反相色谱在环境分析中的应用
8.3反相离子对色谱的应用
（1）异构体分离方面的应用
• 结构非常相似的维生素E的四种异构体、、、
• 分子结构非常相似的维生素D2和D3 • 脂溶性维生素A六种顺式异构体
脂溶性维生素A六种顺式异构体
植物蜕化激素的分离分析
(2)强极性化合物的分离
• 强极性的化合物可以采用正相色谱法来分离测定，但是找到合适的分离条件往往是比较困难的。在一些特殊的情况下，使用正相色谱法分离测定强极性的化合物时，为了缩短溶质的保留时间，减小色谱峰的拖尾现象，可以在流动相中加入少量的水或醇、酸胺等物质，这样可以获得满意的色谱分离
正相色谱在实际应用中特点
• （1）使用反相色谱法很难分离的异构体可以采用硅胶吸
附剂为固定相的正相色谱法分离，并且有很高的选择性和分离能力 • （2）根据被分离溶质的极性不同，可以进行反相色谱法所不能得到的族分离 • （3）对于在水溶液中化学不稳定的样品分离分析 • （4）对在极性有机溶剂中溶解度小的化合物进行分离分析 • （5）使用有机溶剂作为流动相，可以避免硅胶的溶解现象 • （6）由于流动相具有较大的挥发性，分离之后的样品易于富集和进一步分析 • （7）有机溶剂的粘度小，流动相的粘度也小，色谱柱的柱前压低
第五章高效液相色谱法的应用
• 5.1正相色谱法的应用 • 5.2反相色谱的应用 • 5.3反相离子对色谱的应用
5.1正相色谱法的应用
• 在正相色谱中溶质分子在固定相上的保留主要取决于溶质分子中极性最强的官能团的极性，溶质的极性增大，其保留值也增大。

高效液相色谱法的应用

9．流动相的调节为了得到较好的分离效果和柱效，
有时要在流动相中加入一些少量的有机溶剂，如三乙胺来调节峰形变“瘦”；或加入缓冲盐，调节流动相的pH值或离子强度，以改变组分的保留时间达到分离效果等。这些物质称为“改性溶剂”。一般情况下，大家如要建立色谱条件，应先去查询文献资料，再进行适当的修改。前面提到的阳（阴）离子交换色谱柱，现多采用C18柱、流动相中加入表面活性剂以代替，但此时注意流动相平衡时间较长，最好小流速晚间过夜平衡后再进行试验，如何判定仪器平衡下面将介绍。 pH值，一般色谱柱用2~8左右；目前一些新型色谱柱也
A 杂质峰面积 A 1 . 0 %自身对照主峰面积 1 .0 %
这里，需要讲解的是：如果该物质线性关系良好，稀释100倍，峰面积还呈线性的话，那么，归一化法和自身对照法所得结果基本是一致的（最多差0.02%左右）。但如果稀释100倍，峰面积不呈线性的话，那么，归一化法和自身对照法所得结果将有所差异，如此时采用归一化法，将得不到较为正确的结果，因为此时，峰面积已不能较为准确地表示质量；而采用自身对照法，则可避免该情况的发生，这也是目前推荐采用该法的原因所在。但大家可以注意，目前你们测定的化合物，稀释100倍，通常，峰面积是呈线性的，原因是因为采用紫外检测器，一般化合物的线性范围可达1~106或107，但也有一些测定物质，线性范围较窄，此时便需要摸索其范围，但又不能单纯考虑线性范围，还应着重考虑供试品溶液的浓度才是最为重要的。
还有一个优点，就是成功率较高：一般条件确定好后，均可得满意的结果，这也是与气相、毛细管电泳比最大的优点。
4．分离原理就是利用不同物质间的细微差别，使得在色谱柱上所显现的保留行为有所不同进行分离测定。主要是能够分离。两个主要参数：(1)柱效用理论板数来表达：