细胞学堂｜细胞冻存与复苏的技术原理和操作步骤

细胞学堂｜细胞冻存与复苏的技术原理和操作步骤

细胞冻存与复苏是一种常用的细胞保存方法，用于长期保存细胞并保持其生理活性。下面将详细介绍细胞冻存与复苏的技术原理和操作步骤。技术原理：

细胞冻存是通过将细胞在低温下快速冷冻，并加入保护剂以减少冷冻引起的细胞损伤，从而降低细胞的新陈代谢活动，保持细胞的生命特性。具体原理如下：

1.冷冻缓慢升温原理：冷冻过程中细胞内水分形成冰晶，容易损伤细胞结构。为了降低损伤，冷冻时的降温速率应尽量缓慢。而复苏时，也需要采取缓慢升温的方法，以避免溶解冰晶时造成的细胞破坏。

2.保护剂的添加：在冷冻过程中，加入一定浓度的保护剂能够防止细胞水分快速冻结而形成冰晶，从而减少冷冻引起的细胞膜和细胞器损伤。一般常用的保护剂有甘露醇、二甘醇和甘油等。

操作步骤：

下面将介绍细胞冻存与复苏的具体操作步骤：

1.细胞选择与培养：选择要冻存的细胞，并保证细胞处于健康和活跃状态。采用无菌操作，将细胞培养在适当的培养基中，并严格控制培养条件。

2.细胞冻存液的配制：将适当的冻存液配制好。一般的冻存液组成包括培养基、胎牛血清/胎儿犊牛血清、20%-50%的甘油或其他保护剂。保护剂的浓度取决于细胞的类型和耐受性。

3.细胞冻存：将培养好的细胞用冻存液冷冻保存。首先，用培养基洗

涤细胞，去除残留的培养基。然后，添加冻存液，将细胞悬浮均匀。最后，将细胞悬液装入标记好的冻存管中，并缓慢冷冻至-80℃或液氮中。

4.细胞复苏：将冷冻的细胞迅速取出，用温暖的手掌加热，迅速溶化

冰晶。将细胞悬液转移到离心管中，并加入预先配制好的培养基。然后，

用离心机离心，除去冻存液或保护剂。最后，加入适当的培养基，将细胞

继续培养。

5.细胞复苏后培养条件的控制：在细胞复苏后的培养过程中，需要严

格控制培养条件，包括温度、CO2浓度、培养基成分和营养物质的供给等，以确保细胞能够正常生长和繁殖。

总结：

细胞冻存与复苏是一种常用的细胞保存技术，可以长期保存细胞并保

持其生理活性。通过控制好冷冻和复苏的操作步骤，加入适当的保护剂，

可以有效降低细胞损伤，保证细胞的存活率和生活特性。细胞冻存与复苏

技术的应用，对于细胞学研究和细胞工程等领域都具有很大的意义。