砂仁挥发油GC_MS指纹图谱与其镇痛作用的关系_李生茂

Tab. 1 Sources of Amomi Fructus
编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 S16 S17
S18
产地 广东阳春 广西崇左 广东吴川 广西钦州 广东阳春 云南西双版纳 广东阳春 广东阳春 广东吴川 广东阳春 广东阳春 广东阳春 广东阳春 广东阳春 广东阳春 广东阳春 云南普洱
纤维素 化 工 有 限 公 司，批 号 20130416 ） ； 正 己 烷
（ 国药集团化学试剂有限公司，批号 T20100928） ；
无水硫酸钠 （ 国药集团化学试剂有限公司，批号
20140114） ； 冰醋酸 （ 成都市科龙化工试剂厂，批
号 20100826） 均为分析纯； 水为蒸馏水。
表 1 砂仁来源
346
2016 年 2 月 第 38 卷 第 2 期
中成药 Chinese Traditional Patent Medicine
February 2016 Vol． 38 No． 2
一步对砂仁挥发油 GC-MS 指纹图谱及其镇痛作用
进行了研究，并采用灰色关联度分析法考察其化学
信息谱与镇痛作用的关系，以期初步揭示砂仁挥发
桉油烯 ＞ D-柠檬烯 ＞ 莰烯 ＞ 月桂烯。结论 砂仁挥发油的镇痛作用为多组分联合效应的结果。
关键词： 砂仁； 挥发油； GC-MS 指纹图谱； 镇痛作用； 灰色关联度
中图分类号： R284. 1
文献标志码： A
文章编号： 1001-1528（ 2016） 02-0346-05
doi： 10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2016. 02. 025
镇痛 等 活 性 较 显 著［5-6］， 为 砂 仁 药 材 的 质 控 成 分［1］，而其它 几 种 主 要 成 分 是 否 也 起 到 相 关 作 用 目前尚不清楚。同时，目前对砂仁挥发油的研究大 多为化学成分指纹图谱分析或药效学实验，而对其 药效作用与化学物质基础的整体性、联系性探索较 少。本课题组前期对不同品种砂仁的抗炎活性进行 比较，并研究其物质基础，发现该活性与龙脑、芳 樟醇、乙酸龙脑酯等多种成分关系密切。本实验进
缅甸
品种 阳春砂 （ Amomum villosum Lour． ） 阳春砂 （ Amomum villosum Lour． ） 阳春砂 （ Amomum villosum Lour． ） 阳春砂 （ Amomum villosum Lour． ） 阳春砂 （ Amomum villosum Lour． ） 阳春砂 （ Amomum villosum Lour． ） 阳春砂 （ Amomum villosum Lour． ） 阳春砂 （ Amomum villosum Lour． ） 阳春砂 （ Amomum villosum Lour． ） 阳春砂 （ Amomum villosum Lour． ） 阳春砂 （ Amomum villosum Lour． ） 阳春砂 （ Amomum villosum Lour． ） 阳春砂 （ Amomum villosum Lour． ） 阳春砂 （ Amomum villosum Lour． ） 阳春砂 （ Amomum villosum Lour． ） 阳春砂 （ Amomum villosum Lour． ） 阳春砂 （ Amomum villosum Lour． ） 绿壳砂 （ Amomum villosum Lour． Var． xanthioides T． L． Wu et Senjen）
2016 年 2 月 第 38 卷 第 2 期
中成药 Chinese Traditional Patent Medicine
February 2016 Vol． 38 No． 2
砂ຫໍສະໝຸດ Baidu挥发油 GC-MS 指纹图谱与其镇痛作用的关系
李生茂1 ， 叶 强2 ， 敖 慧2* （ 1． 川北医学院药学院，四川 南充 637000； 2． 成都中医药大学，四川 成都 611137）
ABSTRACT： AIM To study the relationship between the gas chromatography-mass spectrometry （ GC-MS） fingerprints of essential oil from Amomi Fructus and its analgesia effect． METHODS The fingerprints of eighteen batches of essential oil from Amomi Fructus from different growing areas were established by GC-MS． The analgesia effect was tested by frequency body torsion caused by acetic acid in mice． The relationship between fingerprints and analgesia effect was analyzed by grey correlation． RESULTS There were seven common peaks in GC-MS fingerprints． All the common peaks had a certain correlation with the analgesia effect （ 0. 858 － 0. 718） with the rank of camphor ＞ bornyl acetate ＞ borneol ＞ spathulenol ＞ D-limonene ＞ camphene ＞ myrcene． CONCLUSION The analgesia effect of essential oil from Amomi Fructus is the result of multicomponent combined effect． KEY WORDS： Amomi Fructus； essential oil； GC-MS fingerprints； analgesia effect； grey correlation
收稿日期： 2015-06-08 基金项目： 成都中医药大学科技发展基金项目 （ ZRVI5201271） ； 成都中医药大学实验技术项目 （ 13117） ； 四川省中医药管理局青年中 医药课题 （ 2014K090） 作者简介： 李生茂 （ 1981—） ，男，博士，讲师，从事中药药效物质基础及质量标准化研究。Te1： （ 0817） 3300337，E-mail： lsm9110 @ 163． com * 通信作者： 敖 慧 （ 1980—） ，女，博士，高级实验师，从事中药药理与中药质量控制研究。Tel： （ 028） 61800192，E-mail： aohui2005 @ 126． com
摘要： 目的 研究砂仁 Amomi Fructus 挥发油 GC-MS 指纹图谱与其镇痛作用的关系。方法 GC-MS 法建立 18 批不同产
地砂仁挥发油的指纹图谱，醋酸致小鼠扭体实验研究其镇痛作用，灰色关联度法研究谱效关系。结果 GC-MS 指纹图
谱中有 7 个共有峰，与挥发油的镇痛作用有一定关联 （ 0. 858 ～ 0. 718） ，大小依次为樟脑 ＞ 乙酸龙脑酯 ＞ 龙脑 ＞ 匙叶
油的镇痛物质基础，并为进一步控制该药材的质量
提供一定依据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Agilent 7890A-5975C 气相色谱-质谱联
用仪，包括 Agilent GC-MSD 工作站 （ 美国安捷伦
公司） ； Sartorius BP211D AG 电子天平 （ 德国赛多
利斯公司） ； 轻油提取器 （ 四川蜀牛玻璃仪器有限
砂 仁 为 姜 科 植 物 阳 春 砂 Amomum villosum Lour． 、绿壳砂 Amomum villosum Lour． Var． xanthioides T． L． Wu et Senjen 或海南砂 Amomum longiligulare T． L． Wu 的干燥成熟果实［1］，其主要药效部 位是挥发油，具有抗溃疡、抗炎、镇痛、止泻、抗 菌等 广 泛 的 药 理 作 用［2］。 其 中， 乙 酸 龙 脑 酯、 樟 脑、莰烯、柠檬烯和龙脑等为砂仁挥发油的主要组 成部分［3-4］，并以乙酸龙脑酯的含有量最高，抗炎
公司） 。
1. 2 试药 18 批砂仁药材经成都中医药大学中药
资源与鉴定系陈璐讲师鉴定，确认为阳春砂 Amo-
mum villosum Lour． 或 绿 壳 砂 Amomum villosum
Lour． var． xauthioides T． L． Wu et Senjen 的干燥成
熟果实，具体见表 1。羧甲基纤维素钠 （ 西安惠安
1. 3 动物 SPF 级昆明种小鼠 200 只，雌雄各半， 许可证号 SCXK （ 川） 2008-11，体质量 18 ～ 22 g， 由成都中医药大学动物中心提供。 2 方法与结果 2. 1 砂仁挥发油镇痛作用研究
2. 1. 1 样品制备 将各批次砂仁药材粉碎，过 20 目筛，称取 10 g，置于 1 000 mL 圆底烧瓶中，加 入 30 倍 量 （ 300 mL） 水，按 《中 国 药 典》 2010 年版一部挥发油测定法 （ 附录 XD 甲法） 提取挥发 油，水蒸汽蒸馏 5 h，收集挥发油 （ 均呈淡黄色、 油状） ，0. 5% 羧甲基纤维素钠混悬，配制成相当 于生药 125 g / L 的药液，备用。 2. 1. 2 实 验 方 法 参 考 文 献 ［7 ］，取 小 鼠 200 只，随机分为 20 组，每组 10 只，分别为模型组、 阳性药组和 18 个给药组。阳性药组 （ 62. 5 mg / L 盐酸吗啡水溶液） 及各给药组按 0. 4 mL /10 g 剂量 灌胃给予相应药液，模型组灌胃给予相应体积的生 理盐水，每天 1 次，连续 3 d。最后一次给药 0. 5 h 后，腹腔注射 0. 6% 冰醋酸 （ 0. 2 mL /10 g，临用前 配制） ，记录各组小鼠给药后 20 min 内扭体 （ 腹部 收缩内凹、仲展后肢、臀部抬高、蠕行） 的次数， 计算镇 痛 率，公 式 为 镇 痛 率 = （ 模 型 组 扭 体 次 数 － 给药组扭体次数） / 模型组扭体次数 × 100% 2. 1. 3 数据处理与统计 实验数据采用 x ± s 表 示，利用 SPSS 13. 0 统计软件处理，多组间比较采 用 one-way ANOVA 检验。 2. 1. 4 实验结果 与模型组比较，18 批砂仁挥发 油均有 不 同 程 度 的 镇 痛 作 用，其 中 S3、S4、S5、 S7、S8、S9、S10、 S11、 S12、 S13、 S14、 S16 和 S17 比较明显 （ P ＜ 0. 01 或 0. 05） ，见表 2。 2. 2 砂仁挥发油 GC-MS 指纹图谱 2. 2. 1 样品制备 按 “2. 1. 1 ” 项下方法制备砂 仁挥发油，加正己烷 1 mL 稀释，无水硫酸钠除去 水分，微孔滤膜过滤，GC-MS 分析。 2. 2. 2 气相色谱-质谱联用分析 GC 条件： 载气 为氦气； 体积流量 1. 0 ℃ / min； 程序升温，初始温 度 60 ℃ ，4 ℃ / min 速率升至 124 ℃ ，8 ℃ / min速 率升至 196 ℃ ，保持 5 min，10 ℃ / min 速率上升至 260 ℃ ，保持 5 min； 分流进样，分流比 1 ∶ 60； 进 样量 1 μL； 进样口温度 250 ℃ 。MS 条件： EI 电 离； 电子能量 70 eV； 离子源温度 220 ℃ ； 全扫描 方式。 2. 3 方法学考察 2. 3. 1 精密度试验 取 S1 样品，按 “2. 2. 1” 项 下方法制备供试品溶液，在 “2. 2. 2” 项色谱条件 下连续进样 6 次，测定 GC-MS 色谱图。结果，各 共有 峰 相 对 保 留 时 间 和 相 对 峰 面 积 RSD 均 小 于 5% ，表明仪器精密度良好。 2. 3. 2 稳定性试验 取 S1 样品，按 “2. 2. 1” 项
Relationship between the GC-MS fingerprints of essential oil from Amomi Fructus and its analgesia effect
LI Sheng-mao1 ， YE Qiang2 ， AO Hui2 *
（ 1． School of Pharmacy，North Sichuan Medical College，Nanchong 637000，China； 2． Chengdu University of TCM，Chengdu 611137，China）