总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法)
血清总胆固醇TC测定操作规程
血清总胆固醇TC测定操作规程.docx血清总胆固醇（TC）测定操作规程1. 目的本操作规程旨在规范血清总胆固醇（TC）的测定过程，确保检测结果的准确性和重复性。
2. 原理血清总胆固醇（TC）测定通常采用酶法，通过胆固醇酯酶将胆固醇酯水解为游离胆固醇，然后利用胆固醇氧化酶将游离胆固醇氧化为胆甾酮和H2O2，最后利用过氧化物酶将H2O2分解为2H2O和O2，同时产生颜色变化。
颜色的深浅与血清中胆固醇含量成正比，可通过比色法测定。
3. 试剂和材料酶试剂盒（含胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶等）校准品和质控品血清样本蒸馏水移液枪及吸头比色杯恒温水浴箱自动生化分析仪或分光光度计4. 操作步骤4.1 准备工作确保所有试剂和样本均已在室温下平衡至25°C。
校准生化分析仪或分光光度计至适当的波长（通常为500-550nm）。
4.2 试剂准备根据试剂盒说明书，将酶试剂混合均匀，并预热至25°C。
4.3 样本处理取适量的血清样本，避免溶血和脂血样本。
如有必要，对样本进行离心，去除沉淀物。
4.4 加样使用移液枪准确取样，将血清样本加入比色杯中。
按照试剂盒说明书，加入等量的酶试剂至每个比色杯中。
4.5 反应将比色杯放入恒温水浴箱中，保持37°C反应一定时间（通常为5-10分钟）。
4.6 比色测定将反应后的比色杯放入自动生化分析仪或分光光度计中。
读取吸光度值，并根据标准曲线计算血清总胆固醇浓度。
5. 质量控制每次测定前，使用校准品进行仪器校准。
定期使用质控品进行质量控制，确保结果的准确性和稳定性。
6. 结果记录与报告记录所有测定结果，包括吸光度值、胆固醇浓度等。
根据医院或实验室的标准操作程序，编写并发布检测报告。
7. 安全注意事项操作时应穿戴适当的个人防护装备，如手套和实验服。
避免接触试剂和样本，尤其是避免吸入和摄入。
按照当地法规处理废弃物。
8. 维护和校准定期对生化分析仪或分光光度计进行维护和校准，确保仪器的准确性。
总胆固醇测定试剂盒说明书
总胆固醇（total cholesterol，TC）含量测定试剂盒说明书分光光度法50管/48样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：TC包括游离胆固醇和胆固醇酯。
TC是指组织中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。
测定原理：利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆固醇酯转化为FC；进一步利用胆固醇氧化酶催化FC氧化，生成△4-胆甾烯酮和H2O2；最后利用过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物；在500nm有特征吸收峰，其颜色深浅与TC含量成正比。
自备仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、异丙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：异丙醇50mL（自备）。
试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；试剂四：液体100μL×1瓶，4℃保存TC标准品：液体1mL×1支，0.5μmol/mL，4℃保存。
TC的提取：1、组织中TC的提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清，即TC待测液。
2、细胞、细菌中TC的提取：先收集400-500万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加1mL试剂一，超声波破碎1min（强度20％，超声2s，停1s），即TC待测液。
3、血清（浆）等样品：直接测定。
测定操作：1. 分光光度计预热30 min，调节波长到500 nm，蒸馏水调零。
2. TC工作液的配制：临用前，吸取约0.8mL试剂二分别加入试剂三和试剂四瓶中，充分溶解后再全部转移回试剂二瓶中，充分混匀，TC工作液置于37℃水浴10min。
用不完的工作液4℃保存一周。
3. 标准管：依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC标准液和900μL TC工作液，混匀，37℃静置3h后于500nm测定A标准管。
血清总胆固醇测定标准操作规程
血清总胆固醇测定标准操作规程1.检验原理：（氧化酶法）血清中总胆固醇（TC ）包括游离胆固醇（FC ）和胆固醇酯（CE ）两部分。
血清中胆固醇可被脂蛋白酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸（FFA ），胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在4-氨基安替比林和对羟基苯甲酸钠存在时，晶过氧化物酶（POD ）催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC 含量成正比。
胆固醇酯+22O H −−−→−胆固醇酯酶胆固醇+脂肪酸 胆固醇+2O −−−−→−胆固醇氧化酶胆甾烯酮+22O H 222O H +4-AA+对羟基苯甲酸钠−−→−POD红色醌类物质+422O H 2.试剂主要组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清。
在22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃可保存1年。
样本应避免反复冻融！4.检验方法；仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程） 5参考范围：6.检验结果的解释：6.1样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V）的氯化钠溶液稀释样本。
6.2.单位换算：mg/dl=mmol/L×38.77.检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊，或以水空白在500nm处吸光度大于0.080时不能使用。
8.试剂性能指标8.1试剂外观：无色透明或淡黄色液体，无悬浮物及沉淀。
8.2装量：不低于标识值。
8.3空白吸光度：在500nm处，光径1cm时，空白吸光度A≤0.0808.4线性区间：试剂的线性区间为[0.5-20.0]mmol/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.9900；b)[2.0-20.0]mmol/L区间内，线性相对偏差不超过±10%。
8.5准确度：使用具有溯源性的标准品进行测定，实测值与标识值的相对偏差应在±10%内。
8.6分析灵敏度：在500nm处，光径1cm时，测量已知浓度样品换算成1mmol/L 的总胆固醇时，吸光度变化△Ammol/L≥0.0028.7批内精密度：CV≤4.0%8.8批间差：R≤6.0%8.9稳定性：（2-8）℃下，原包装存放的试剂有效期为12个月.取到期后1个月的试剂进行测试，应满足1-8.7的要求。
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇【原理】血清中总胆固醇(total cholesterol ，TC)包括游离胆固醇(free cholesterol ，FC)和胆固醇酯(cholesterol ester ，CE)两部分。
血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和过氧化氢，H 2O 2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC 含量成正比。
【试剂】1．胆固醇液体酶试剂组成(具体含量见相关文献)GOOD's 缓冲液(pH6.7) 50mmol/L 胆固醇酯酶 ≥200U/L 胆固醇氧化酶 ≥100U/L 过氧化物酶 ≥3 000U/L 4-AAP 0.3mmol/L 苯酚5mmol/L2．胆固醇标准溶液5.17 mmol/L (200 mg/dl) 精确称取胆固醇200 mg ，用异丙醇配成100 ml 溶液，分装后，4℃保存，临用取出。
也可用定值的参考血清作标准。
【操作步骤】 终点法检测TC 按下表依次加样。
酶法测定TC 操作步骤项目 测定管 标准管 空白管 血清(μl) 50 － － 标准液/定值血清(μl)－ 50 － 蒸馏水(μl) － － 50 酶试剂(μl)1.501.501.50混匀后，37℃保温5 min ，用分光光度计比色，于500 nm 波长处以空白管调零，读出各管吸光度。
【计算】血清TC (mmol/L)＝标准管吸光度测定管吸光度×胆固醇标准液浓度【参考范围】血清参考值：3.0～5.20 mmol/L；危险阈值：5.20～6.20 mmol/L；高胆固醇血症：≥6.20 mmol/L。
【临床意义】1．TC增高常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家族性ApoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。
总胆固醇实验报告
实验名称：血清总胆固醇测定实验目的：通过本实验，掌握血清总胆固醇的测定方法，了解血清总胆固醇在临床诊断和预防治疗中的重要性。
实验原理：血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）是血液中所有胆固醇的总和，包括游离胆固醇和胆固醇酯。
血清总胆固醇的测定方法主要有酶法、比色法、沉淀法等。
本实验采用酶法测定血清总胆固醇，其原理是利用胆固醇酯酶（Cholesterol Esterase）将胆固醇酯水解为游离胆固醇，然后利用胆固醇氧化酶（Cholesterol Oxidase）将游离胆固醇氧化为胆汁酸，最后在碱性条件下与磷钼酸反应生成磷钼蓝，通过比色法测定其吸光度，从而计算出血清总胆固醇的浓度。
实验材料：1. 血清样品：取自健康志愿者，经离心分离后获得。
2. 胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、磷酸盐缓冲液、磷钼酸、抗坏血酸、硫酸铜、邻苯二甲酸氢钾、氯仿、无水乙醇等试剂。
3. 仪器：酶标仪、移液器、恒温水浴锅、离心机等。
实验步骤：1. 样品处理：取血清样品1.0ml，加入氯仿和无水乙醇（1:2，V/V）混合液5.0ml，涡旋混合，离心10分钟，取上清液待测。
2. 标准曲线绘制：将胆固醇标准品配制成一系列浓度梯度的标准溶液，分别加入胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、磷酸盐缓冲液、磷钼酸等试剂，按照实验步骤进行操作，测定吸光度。
以胆固醇浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：取处理后的血清样品，按照标准曲线绘制步骤进行操作，测定吸光度。
根据标准曲线，计算样品中血清总胆固醇的浓度。
实验结果：1. 标准曲线绘制：以胆固醇浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
结果显示，胆固醇浓度在0.5-10.0mg/dl范围内，吸光度与胆固醇浓度呈线性关系。
2. 样品测定：根据标准曲线，计算样品中血清总胆固醇的浓度为X mg/dl。
实验讨论：1. 血清总胆固醇是人体内重要的脂质成分，其浓度异常与心血管疾病、动脉粥样硬化等疾病密切相关。
临床医学检验总胆固醇(TC)
临床医学检验总胆固醇(TC)胆固醇是脂质成分之一，机体中胆固醇80％～90％由肝和肾上腺自身合成，而多种因素可影响体内TC的水平，包括：①年龄与性别，TC水平往往随年龄上升，但到70岁或80岁以后有所下降，中青年期女性低于男性，50岁以后女性高于男性；②长期的高胆固醇，高密度饱和脂肪和高热量包含可使TC增高；③遗传因素；④其他，如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC升高。
胆固醇的增高与多种疾病有关，所以胆固醇的检验是临床检验的主要项目之一。
(一)酶法1.原理血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Cho1)，后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4-胆甾烯酮并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)，生成红色醌亚胺色素(Trind er反应)。
醌亚胺的最大吸收在500 nm左右，吸光度与标本中TC含量成正比。
反应式如下：2.计算TC(mmol／L)=A测定／A标准×定标血清TC浓度(mmol／L)。
速率法测定根据仪器性能及所用试剂的反应速度设计操作程序，一般要求试剂中酶用量较高。
3.技术指标(1)精密度：终点法批内CV<1.5％，批间CV≤2.5％。
(2)准确性：以参考方法(ALBK法)定值的血清为标准液时，本法测定结果与ALBK法基本一致。
以Chol水溶液为标准时，结果往往比AL-BK法低，故不宜采用Chol水溶液。
(3)灵敏度：显色剂用酚时，TC 5.2 mmol／L(200 mg／d1)时的吸光度A500nm0.30-0.35，故A500nm=0.005时的TC浓度约0.08 mmol／L(3 mg／d1)。
(4)测定范围：血清与酶试剂用量之比为1：100时，测定上界为13 mmol／L(500 mg／d1)。
(5)特异性：血清中多种非胆固醇甾醇会不同程度地与本试剂显色。
正常人血清中非胆固醇甾醇约占TC的l％，故在常规测定时这种影响可以不计。
南京建成 产品目录及价格表 17-3-22
抗坏血酸过氧化物酶（APX）测试盒（紫外 比色法） 抗坏血酸氧化酶（AAO）活性测试盒（比色 抗坏血酸（AsA）含量测试盒（紫外比色 γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL）测试盒 （比色法） 硫氧还蛋白氧化还原酶（TrxR）测试盒（比 色法） 硫氧还蛋白过氧化物酶（TPX）测试盒（紫 外比色法） NAD激酶（NADK）测试盒（比色法） NADH氧化酶（NOX）测试盒（比色法） 辅酶ⅡNADP（H）含量测试盒（比色法） 辅酶ⅠNAD（H）含量测试盒（比色法） 腺苷脱氨酶（ADA）测试盒（酶比色法） （微板法） 游离脂肪酸（NEFA）测试盒（酶法，双试 剂）（微板法） 5’－核苷酸酶（5’-NT）测试盒（酶比色法） （微板法） 糖化血清蛋白（GSP）试剂盒（NBT法） （微板法） 胆碱酯酶（CHE）测试盒（速率法）(微板 白蛋白（ALB）测定试剂盒（带标准：溴甲 酚绿法） 柠檬酸合成酶（CS）测定试剂盒（微板法） 柠檬酸合成酶（CS）测定试剂盒（微板法） 植物提取液 蔗糖测定试剂盒（国标法） 蔗糖测定试剂盒（紫外比色法） γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）测定试剂 盒（速率法） 糜蛋白酶测定试剂盒 谷氨酸测定试剂盒（紫外比色法） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、 T－ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、 T－ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、 T－ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、 T－ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+－ ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+－ ATP酶）
超微量酶法检测血清总胆固醇的实验探讨
作者：吴斌张春妮王志军黄易张军韩建鹏【关键词】超微量血清【摘要】目的用超微量血清在微孔板内进行酶法检测总胆固醇（TC），分析其线性范围、准确度、精密度、回收率，并与日立7600型全自动生化分析仪进行测定比较，以探讨超微量酶法检测总胆固醇结果的可靠性。
方法采用超微量酶法，酶标生化多功能分析仪比色测定。
结果本法的线性范围达15.1mmol/L，批内变异系数（CV）为1.29%～2.45%，日间变异系数（CV）为1.95%～2.67%，回收率为99%～105%，平均102.8%，与全自动生化分析仪比较具有良好的相关性，y=1.112x-0.339，r=0.9839。
结论本法操作简单，血清、试剂用量少，检测快速，准确性及重复性好，结果可靠，利于微量检测血清总胆固醇的推广应用。
关键词超微量血清酶法总胆固醇【Abstract】 Objective To evaluate the reliability of super-micro-quantityzymed method for determining the levels of serum total cholesterol.Methods Super-micro-zymed method was adopted，zyme-labelled biochemiˉcal multifunctional analyzer was used for colorimetric analysis.Results The linear scope was15.1mmol/L，inside CV1.29%～2.45%，daytime CV1.95%～2.67%，recovery rate99%～105%，mean102.8%.Itwas well correlations with the results from antomatic biochemistry analyzer，y=1.112x-0.339，r=0.9839.Conclusion The methods would be useful to determine the levels of serum total cholesterol.Key words super-microserum zymed method total cholesterol酶法检测血清总胆固醇是目前公认为最适于作血清总胆固醇测定的常规方法［1］，在各大中小医院实验室测定TC大多采用酶法，既可于作终点法手工操作，分光光度计比色测定，也可于半自动、全自动生化分析仪检测。
血清总胆固醇测定实验报告
血清总胆固醇测定实验报告一、实验目的血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）测定是临床生化检验中的常见项目之一，本实验旨在掌握血清总胆固醇测定的原理、方法和操作步骤，熟悉实验过程中的注意事项，并对实验结果进行准确分析和判断。
二、实验原理目前，血清总胆固醇测定常用的方法是酶法。
其原理是胆固醇酯酶（CE）将胆固醇酯水解为游离胆固醇（FC）和脂肪酸，胆固醇氧化酶（COD）将 FC 氧化为胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶（POD）的催化下与 4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应生成红色醌亚胺。
在一定波长下，通过比色法测定吸光度，从而计算出血清总胆固醇的含量。
三、实验材料与设备1、材料血清样本：新鲜无溶血、无脂浊的血清。
试剂盒：包含胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、酚等试剂。
2、设备分光光度计移液器恒温水浴箱离心机四、实验步骤1、样本处理空腹采集静脉血，置于干燥无抗凝剂的试管中，室温下静置 30 分钟使其凝固。
以 3000 转/分钟离心 10 分钟，分离血清，备用。
2、试剂准备按照试剂盒说明书的要求，将试剂 R1 和试剂 R2 分别配制好，并放置于恒温水浴箱中预热至规定温度。
3、测定操作取两支干净的比色管，分别标记为空白管和测定管。
空白管中加入蒸馏水20μL 和试剂R1 1000μL，混匀，置于 37℃恒温水浴箱中保温 5 分钟。
测定管中加入血清样本20μL 和试剂R1 1000μL，混匀，置于 37℃恒温水浴箱中保温 5 分钟。
然后，向空白管和测定管中分别加入试剂R2 500μL，混匀，置于37℃恒温水浴箱中保温 10 分钟。
4、比色测定以空白管调零，在分光光度计 500nm 波长处读取测定管的吸光度值（A）。
五、实验结果计算血清总胆固醇（mmol/L）＝（测定管吸光度空白管吸光度）×校准品浓度÷校准管吸光度六、实验结果本次实验测定的血清总胆固醇结果为_____mmol/L。
Elabscience 总胆固醇(TC)比色法测试盒说明书
（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）Elabscience®总胆固醇(TC)比色法测试盒(单试剂COD-PAP法)Total Cholesterol (TC) Colorimetric Assay Kit (Single Reagent, COD-PAP Method)产品货号：E-BC-K109-M产品规格：48T(44 samples)/96T(92 samples)检测仪器：酶标仪(495-525 nm)使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
用途本试剂盒适用于检测血清（浆）、组织的总胆固醇含量。
检测原理总胆固醇(Total Cholesterol，TC)包括游离胆固醇和胆固醇酯。
胆固醇酯可被胆固醇酯酶（cholesterol esterase，CE）水解成胆固醇和游离脂肪酸，胆固醇在胆固醇氧化酶（cholesterol oxidase，CO）的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和过氧化氢。
过氧化氢在4-氨基安替吡啉和酚存在时，经过氧化物酶（peroxidase，POD）催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与TC含量成正比。
其检测原理如下图：提供试剂和物品说明：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。
对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。
所需自备物品仪器：酶标仪（495-525 nm）、微量移液器（1000 μL，200 μL，100 μL，10 μL）、恒温箱、离心机。
耗材：枪头（1000 μL、200 μL、2.5 μL）、EP管（2 mL）。
试剂：双蒸水、生理盐水（0.9% NaCl）或PBS（0.01 M，pH 7.4）、无水乙醇。
血清总胆固醇(TC)测定操作规程
血清总胆固醇(TC)测定操作规程A1．2 原理血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Chol)，后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4—胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化4—氨基安替比林与酚(三者合称PAP)，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。
醌亚胺的最大吸收在500nm 左右，吸光度与标本中总胆固醇呈正比。
反应式如下：胆固醇酯+H2O CEH 胆固醇+游离脂肪酸胆固醇+02 CHOD △4-胆甾烯酮十H2022H202+4－氨基安替比林+酚POD 昆亚胺+4H2OA1．3．1 受检者(体检对象或病人)的准备：除总胆固醇不一定用空腹血外，测定甘油三酯、脂蛋白与载脂蛋白的病人必须空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，近期内体重稳定，无急性病、外伤、手术等意外情况。
妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或终止哺乳后3个月检验才能反映其基本血脂水平。
注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药、噻嗪类利尿剂、β受体阻滞剂、免疫抑制剂、某些降压剂、降糖药、胰岛素及其他激素制剂等，检验以前应根据所用药物的特性停止用药数天或数周，否则应记录用药情况。
对体检对象及做前瞻性观察者，还应注意采血的季节，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24h内不作剧烈运动。
A1．3．2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，因此影响血脂水平。
例如站立5 min 可使血脂浓度提高5％，15 min提高16％，故在采血前至少应***5min。
一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1 min，穿刺成功后立即松开止血带。
静脉阻滞5min可使甘油三酯增高10％～15％。
A1. 3．3 抗凝剂：我国多用血清作血脂检验。
如用血浆，多主张用EDTANa2(1mg／mL)抗凝。
血清总胆固醇测定法
血清总胆固醇测定法1.实验原理胆固醇酯被胆固醇酯酶水解酶(CEH)水解成游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化，使4-氨基安替比林与酚（三者合称PAP）反应，生成红色醌亚胺色素（Trinder反应）。
醌亚胺的最大吸光度在500nm左右，吸光度与标本中TC含量成正比。
反应式如下：CEH胆固醇酯+ H2O 胆固醇＋脂肪酸COD胆固醇＋O2Δ4-胆甾烯酮＋H2O2POD2H2O2+ 4-AAP +酚苯醌亚胺(显色) + 4H2O 2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA抗凝血浆。
3. 标本存放：血清稳定性：20～25℃保存可稳定1周；4～8℃保存可稳定1周；-20℃保存可稳定3个月。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂欧泰克总胆固醇试剂盒（货号：112 1307170 1 试剂8×70ml）6.1.1 试剂组成Tris缓冲液pH7.3 50mmol/L酚20mmol/L4-氨基安替比林 1.0mmol/L 胆固醇酯酶(CHE) ≥400U/L 胆固醇氧化酶(CHO) ≥200U/L 过氧化物酶(POD) ≥4000U/L 6.1.2 试剂准备试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂6.2 校准品：使用罗氏复合校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
总胆固醇测量方法
总胆固醇测量方法《总胆固醇测量方法》一、前言总胆固醇是一种有机化合物，是一种重要的体内血脂代谢物质。
总胆固醇的水平测量可以推测血液中胆固醇含量，是检测脂质代谢紊乱的重要指标。
二、测量原理总胆固醇测量一般采用酶联免疫酶法，电化学发光法，比色法等测量方法进行测试，其原理是利用抗原特异性抗体与特异抗原结合，催化特异性酶而诱导发光或比色反应，以此测定血清中总胆固醇的含量。
三、实验材料及仪器1. 操作材料：血清/血浆样本，质控品，抗原及抗体，洗涤液，酶标板，酶，3,3',5,5'-四甲基联苯胺棕榈酸根（TMB）试剂级及稀释剂，发光消除液。
2. 仪器：酶标仪、微量滴定管、离心机、分光光度计、体外诊断试剂诊断仪、热微波消解仪等。
3. 试剂：总胆固醇质控品及标准品，TMB和助剂试剂。
四、步骤1. 酶标仪的设置：在酶标仪中进行试剂和质控程序的设置，确定比色曲线，并计算相应的曲线斜率，计算相关性系数的可信度水平。
2. 加样：按试剂的操作规程，向各个试管中加入合适的血清样本、抗体和抗原。
3. 免疫反应：将各个试管放置在摇床中，摇晃3—5分钟，以使其充分混合，催化特异性酶而诱导发光或比色反应。
4. 测量：将试管放入离心机进行离心，将各个试管的比色结果通过分光光度计或其他胆固醇测量仪法进行测量。
5. 校正：将质控试管的测定结果与标准值进行比较，根据结果，调节测量结果的可信度水平。
6. 报告：根据测量结果，报告总胆固醇的测定结果及可信度水平。
五、注意事项1. 在质控品、样本标记及加样时要注意完整性及准确性，以防止交叉污染等偏差。
2. 加样时，要注意充分混合，以保证实验的准确性。
3. 测量结果要经过校正后，才能确定总胆固醇的测定结果及可信度水平。
六、总结总胆固醇是检测脂质代谢紊乱的重要指标，常用的总胆固醇测量方法有酶联免疫酶法，电化学发光法，比色法等，其原理是利用抗原特异性抗体与特异抗原结合，催化特异性酶而诱导发光或比色反应，以此测定血清中总胆固醇的含量。
总胆固醇试剂盒使用说明书
波长：500nm (480~520nm)
反映温度：37℃
比色杯光径：1cm 取一定量 R2(参看 R1 瓶签)复溶 1 瓶 R1，溶解后即为工作液。
空白管
校准管
样品管
工作液
1.0ml
1.0ml
1.0ml
ห้องสมุดไป่ตู้
蒸馏水
10ul
——
——
校准
——
10ul
——
样品
——
——
10ul
分别混合均匀，在 37℃保温 6 分钟，以试剂空白管校零，度 A校准 及 A样品 。
计算：
总胆固醇浓度= A样品 ×校准浓度（mmol/L 或 mg/dl） A校准
参考值：
中老年人合适水平＜5.17mmol/L(200mg/dl) 临界值 3.17mmol/L~6。47mmol/L(200mg/dl~250mg/dl) 高胆固醇血症＞6.47mmol/L(250mg/dl) 各医院应根据本地区实际情况建立自己的参考值。 线性上限：` 总胆固醇浓度可达 12.93mmol/L(500mg/dl) 主要性能指标： 1. 试剂空白吸光度：在 500nm(480~520nm)处，A≤0.1。 2. 准确性：相对偏差不超过±5%。 3. 瓶间差：变异系数（CV%）≤3% 4. 批间差：随机抽取三批试剂盒的批间差≤4%。 5. 线性误差：在 1.13mmol/L~11.29mmol/L 范围内不超过±10%。 注意事项： 1. 若样品胆固醇含量过高，可用生理盐水稀释样品，重新测定。结果乘以稀释倍数。 2. 本产品仅用于体外诊断，内含叠氨钠，应避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。 3. 本产品应在 2~8℃条件下贮存。 4. 若试剂在全自动生化分析仪上使用，可参照本公司提供的相应型号仪器的参数，并在本
血清总胆固醇测定实验报告
血清总胆固醇测定实验报告一、实验目的血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）测定是临床生化检验中常见的项目之一。
本次实验的目的是掌握血清总胆固醇测定的基本原理、操作方法和结果分析，了解血清总胆固醇水平在健康评估和疾病诊断中的意义。
二、实验原理目前常用的血清总胆固醇测定方法为酶法。
胆固醇酯酶（CE）首先将胆固醇酯水解为游离胆固醇和脂肪酸，胆固醇氧化酶（COD）催化游离胆固醇氧化生成胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶（POD）的作用下与 4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应生成红色醌亚胺化合物。
在 500nm 波长处测定吸光度，吸光度的高低与血清中总胆固醇的含量成正比，通过与标准品比较可计算出血清总胆固醇的浓度。
三、实验材料1、仪器分光光度计恒温水浴箱移液器离心机2、试剂胆固醇测定试剂盒（包括胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、酚等）标准胆固醇溶液（浓度已知）血清样本四、实验步骤1、试剂准备按照试剂盒说明书将试剂配制成工作液，置于 37℃恒温水浴箱中预温。
2、样本处理采集空腹静脉血，离心分离血清。
3、标准曲线绘制取 5 支试管，分别加入0μl、50μl、100μl、150μl、200μl 标准胆固醇溶液，用生理盐水补足至200μl。
各管中胆固醇的浓度分别为0mmol/L、25mmol/L、50mmol/L、75mmol/L、100mmol/L。
向各管中加入 20ml 工作液，充分混匀，37℃水浴 10 分钟。
以空白管调零，在 500nm 波长处测定各管吸光度。
以胆固醇浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
4、样本测定取200μl 血清样本，加入 20ml 工作液，充分混匀，37℃水浴 10 分钟。
测定样本管的吸光度，根据标准曲线计算出血清总胆固醇的浓度。
五、实验结果1、标准曲线记录各标准管的胆固醇浓度和对应的吸光度值，绘制标准曲线。
标准曲线应呈线性关系，相关系数（r）应大于 098。
朗道总胆固醇测定试剂盒－TC（CHOD-PAP法）说明书
总胆固醇测定试剂盒－TC （CHOD-PAP 法）说明书通用名称：总胆固醇测定试剂盒（CHOD-PAP 法）包装规格：单一试剂：4×40mL 单一试剂：5×60mL 单一试剂：2×100mL预期用途本试剂用于体外定量测定人体血清中总胆固醇的含量。
血清中TC 水平升高是冠心病的主要危险因素之一。
病理状态下，高TC 有原发与继发两类。
原发的如家族性高胆固醇血症、家族性APOB 缺陷症、混合性高脂蛋白血症。
继发的见于肾病综合征、甲状腺功能减退、糖尿病等。
〔1〕临床测定总胆固醇用于冠心病、糖尿病等的辅助诊断。
检验原理脂化的胆固醇经酯酶水解成游离胆固醇，游离胆固醇与胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、对羟基苯甲酸反应，生成红色的敖合物。
该敖合物颜色的深浅与血清中的总胆固醇的含量成正比。
通过与同样处理的标准液比较即可求出血清中的总胆固醇的含量。
主要组成成份缓冲液100mmol/L CHO（胆固醇氧化酶）≥1KU LPL（酯酶）≥1.5KU POD（过氧化物酶）≥35KU 4-AA（4-氨基安替比林）0.5mmol/L 对羟基苯甲酸3mmol/L 表面活性剂2%注：不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。
储存条件及有效期试剂原包装2～8℃储存，有效期为18个月。
开口后的试剂在试剂仓中可稳定30天。
适用仪器日立7020、东芝-40，7600，迈瑞300、奥林巴斯AU400、东软400、7170、AU640、贝克曼LX20全自动生化分析仪。
样本要求样本应为新鲜、不溶血血清。
在2℃～8℃可存放30天。
检验方法使用全自动生化分析仪时基本参数及操作：测定温度37℃波长520nm 吸光度范围0-2A 比色杯光径 1.0cm 试剂用量300μL 样本用量3μL 测试模式终点法测定时间300秒操作流程图：试剂：300µl 标本：3µl520nm 测定0秒300秒计算方法样本浓度校准品浓度（校准）样本）=⨯A A (校准品及质控品本产品使用朗道公司的校准品、质控品已进行了性能验证。
总胆固醇检测试剂盒说明书
总胆固醇（TC ）含量检测试剂盒说明书微量法货号：BC1985规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体100 mL×1瓶（自备）4℃保存试剂一液体30 mL×1瓶4℃保存试剂二液体200 μL×1支4℃保存试剂三液体30 μL×1支4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制：1、提取液：自备异丙醇，4℃保存。
2、标准品：10 mg 胆固醇，临用前加入517 μL 提取液，振荡溶解，即为50 μmol/mL 的胆固醇标准溶液。
3、试剂三：液体置于试剂瓶内EP 管中。
4、工作液的配制：将试剂一：试剂二：试剂三按3 mL ：20 μL ：3 μL 的比例配制工作液，现用现配。
产品说明：总胆固醇（Total Cholesterol ，TC ）是指所有脂蛋白所含胆固醇的总和，包括游离胆固醇和胆固醇酯。
利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC ）和游离脂肪酸（FFA ），从而把胆固醇酯转化为FC ；进一步利用胆固醇氧化酶催化FC 氧化，生成4-胆甾烯酮和H 2O 2；最后利用过氧化物酶催化H 2O 2氧化4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物，其在500nm 有特征吸收峰，其颜色深浅与TC 含量成正比。
技术指标：最低检出限：0.143 μmol/mL 线性范围：0.156-5 μmol/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、天平、低温台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、EP 管、蒸馏水、异丙醇。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1.组织：按照组织质量（g ）：提取液体积（mL ）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆。
波音特生物科技(南京) 血清胆固醇检测试剂盒（CHOD-PAP 法）说明书
波音特生物科技（南京）有限公司PO IN TE BIO TEC H(N ANJ ING ) C O., LTD.血清胆固醇检测试剂盒（CHOD-PAP 法）使用说明书【产品名称】 通用名称：血清胆固醇检测试剂盒（CHOD-PAP 法）【包装规格】型号 规格通用型 300ml (3×100ml) 通用型 280ml (4×70ml) 通用型200ml (4×50ml)【预期用途】本试剂盒用于体外测定人血清或血浆中胆固醇的含量。
【检验原理】生成的醌类化合物在520nm 处有最大吸收峰，其吸光度与标本中胆固醇的含量成正比。
【主要组成成份】试 剂成 份 含 量 胆固醇酯酶 ≥1500U/L 胆固醇氧化酶 ≥400 U/L 过氧化物酶≥3000 U/L 4—氨基安替吡啉 2mmol/L 2-羟基-3，5-二氯苯磺酸 1.8mmol/L 磷酸盐缓冲液 50mmol/L R稳定剂与防腐剂【储存条件及有效期】本试剂盒在2~8℃避光密封贮存12个月；开启后在2~8℃避光保存可稳定30天。
【适用仪器】本试剂通用型适用于日立7170/7180/7080/7600 /7060/7150 /7 020;奥林巴斯AU400/640/7200/5400; Abbott Aeroset 2000/C 8000;SHIMADZU CL7200/7300/8000；东芝40FR/120FR/200FR;迈瑞BS-300；利霸；Beckman CX/LX;DADE Behring AR/RxL/X –Pand 。
【样本要求】血清，采血后应及时分离，避免溶血。
【检验方法】分析方法： 1点终点法 校准方式： 线性 反应方向： 上升 测定温度： 37℃ 样品：3.0μl试剂：R 1300μl样品与R 1在37℃恒温混合后孵育600秒，在主波长520nm 处，以试剂空白管调零，测定吸光度A 。
样品 3.0μlR 1 300μl主波长520nm副波长600nm （可不用）测光600秒计算样品中CHOL 含量（mmol/L ）=△A 测／△A 标×标准液浓度mmol/L【参考值（参考范围）】＜5.2mmol/L （＜200mg/dl ）建议各实验室建立自己的参考值范围。
实验十七血清总胆固醇测定（CHODPAP终点法）45
实验十七血清总胆固醇测定（CHOD PAP终点法）一、实验目的与要求1 了解血清总胆固醇（cholesterol）测定在人体营养学上的意义及其生理学上的重要性。
2 掌握血清总胆固醇测定方法及721型分光光度计或半自动生化多用仪的使用方法和现代生化检测试剂盒的应用。
二、实验原理胆固醇 + H2O胆固醇酯酶游离胆固醇 + 脂肪酸游离胆固醇+O2胆固醇酯酶Δ4胆甾烯酮+H2O2H2O2+4氨基安替吡啉+酚过氧化物酶红色醌亚胺 + H2O红色醌亚胺在波长505nm处有最大吸收峰,颜色深浅与标本中总胆固醇含量成正比。
三、实验仪器与试剂1 仪器（1） AT648半自动生化分析仪1台；（2）四孔恒温水浴锅1个；（3）振动摇床1台。
2 分组及仪器2人一组，每组仪器包括：（1）试管架1个；（2） 2ml试管10个；（3） 10μl微量加样器1个；（4） 1ml移液管1个；（5） 2ml移液管2个；（6）吸耳球1个；（7）搪瓷盘1个；（8）微量加样滴头；（9）吸水纸。
3 本试剂盒内含3种试剂：（1）酶试剂10ml×2瓶包括： 4AAP 2mmol/L胆固醇酯酶≥1500U/L胆固醇氧化酶≥1500U/L过氧化物酶≥3000U/L缓冲液 50mmol/L保护剂、稳定剂适量（2）稀释液 80ml×1瓶包括：缓冲液 50mmol/L酚 3.889mmol/L胆酸盐、乳化剂适量（3）胆固醇标准液 2ml×1瓶［5.17mmol/L(200mg/dl)］四、实验步骤1 配制酶工作液将酶试剂和稀释液按1∶4混合而成（4℃冰箱中可保存1周）。
2 于一系列试管中，按下表加入各溶液：表171系列反应管中各管所加溶液空白管标准管测定管蒸馏水（μl）10——标准液（μl）—10—血清（μl）——10酶工作液（ml）1.01.01.03 混合，置37℃水浴保温15min。
4 于波长510nm处以空白校零，读取各管吸光度（A）。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 单试剂比色法)
简介：
胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，分子式C 27H 46O ，分子量为3860.65。
胆固醇广泛存在于动物体内，其中脑、神经组织最丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。
Leagene 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 单试剂比色法)又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等，血液中的胆固醇约1/3为游离胆固醇，2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯，后者被CEH 水解为游离胆固醇，使4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)反应，生成红色醌亚胺色素(Trinder 反应)。
分光光度计在500~520nm 处进行比色测定。
本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 样本处理：
①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。
②细胞样本：
a 、取适量的细胞(一般推荐>106以上)，离心，弃上清，留取沉淀。
b 、用PBS 或生理盐水清洗1~2次，离心，弃上清，留取沉淀。
c 、加入200~300μl 的PBS 或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W ，每次3~5s ，间隔30s ，重复3~5次。
亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心，待用。
③组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水或PBS(ml)=1：9的比例，加入生理盐水或PBS ，冰浴条件下手动或机械匀浆。
离心，取上清待用。
2、 分光光度计(1ml 比色杯)、半自动生化分析仪TC 测定操作:
编号 名称
TC1213100T
Storage
试剂(A): COD-PAP 工作液
Good's buffer 2×50ml
-20℃ 避光
胆固醇氧化酶 胆固醇激酶 稳定剂
试剂(B): TC 标准(5mmol/L) 1ml -20℃ 避光
试剂(C): ddH 2O 1ml
RT 使用说明书
1份
①按下表依次加入试剂：
空白管标准管待测管ddH2O(μl) 10
TC标准(5mmol/L)(μl) 10
待测样本(μl) 10
COD-PAP工作液(ml) 1.0 1.0 1.0
②充分混匀,水浴中孵育。
③分光光度计测定500~520nm吸光度。
以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。
3、普通分光光度计(2ml比色杯)TC测定操作:
①按下表依次加入试剂：
空白管标准管待测管ddH2O(μl) 20
TC标准(5mmol/L)(μl) 20
待测样本(μl) 20
COD-PAP工作液(ml) 2.0 2.0 2.0
②充分混匀,水浴中孵育。
③分光光度计测定500~520nm吸光度。
以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。
4、酶标仪TC测定操作:
①按下表依次加入试剂：
空白孔标准孔待测孔ddH2O(μl) 3
TC标准(5mmol/L)(μl) 3
待测样本(μl) 3
COD-PAP工作液(μl) 300 300 300
②充分混匀,水浴中孵育。
③酶标仪测定500~520nm吸光度。
以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。
5、全自动生化分析仪TC测定操作:
①按下表依次加入试剂：
空白管标准管待测管ddH2O(μl) 3
TC标准(5mmol/L)(μl) 3
待测样本(μl) 3
COD-PAP工作液(μl) 300 300 300
②充分混匀,水浴中孵育。
③全自动生化分析仪测定500~520nm波长处吸光度。
以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。
机器参数：
主波长/次波长500/600nm
反应类型终点法
反应方向升反应(+)
计算公式：
血清、血浆等液体样本(空白调零)：
TC(mmol/L)=｛(待测管吸光度-空白吸光度)/(标准管吸光度-空白吸光度)｝×5mmol/L 血清、血浆等液体样本(全自动生化分析仪)：
TC(mmol/L)=(待测管吸光度/(标准管吸光度)×5mmol/L
细胞、组织等样本(空白调零)：
TC(mmol/L)=｛(待测管吸光度-空白吸光度)/(标准管吸光度-空白吸光度)｝×5mmol/L÷待测样本浓度(mg/ml)
细胞、组织等样本(全自动生化分析仪)：
TC(mmol/L)=(待测管吸光度/(标准管吸光度)×5mmol/L÷待测样本浓度(mg/ml)
参考区间：
健康成年人理想范围：<5.2mmol/L(<200mg/dl)
边缘升高：<5.23~5.69mmol/L(201~219mg/dl)
升高：≥5.72mmol/L(≥220mg/dl)
备注：TC标准(5mmol/L)=442.48mg/dl
性能指标：
外观无色至淡黄色澄清液体
线性范围0.1~13mmol/L(3.6~500mg/dl)，R2>0.95
灵敏度检测下限0.1mmol/L(3.6mg/dl)
变异系数批内<3%，批间<5%
空白吸光值<0.1(1cm光径)
干扰因素胆红素<410μmol/L；血红蛋白<7g/L；甘油
三脂<28.5mmol/L时，对结果无明细影响。
稳定性密闭，12个月
注意事项：
1、上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。
2、本法可直接用于检测脑脊液中的TC含量，但不能直接检测尿液中的TC含量，因为未
经处理的尿液中含有还原性物质，影响过氧化物酶反应。
3、待测样本如不能及时测定，应置于2~8℃保存，3天内稳定。