重组乙型肝炎疫苗ppt课件

（二） 甲基营养型酵母
• 共有4种表达系统。甲基营养型酵母生产
HbsAg具有培养基廉价，目的基因与酵母染 色整合的优点， 不仅可克服质粒丢失，还 可提高表达量。汉逊酵母（Hansenula Polymorpha，H.P.）和毕赤酵母（Pichia Pastoris，P.P.）系统已应用于工业化生产。 已上市的酿酒酵母和甲基营养型酵母表达 乙肝疫苗为含HbsAg成份的疫苗。
重组乙型肝炎疫苗
背景
• 乙型肝炎是由病毒引起的，约占所有病毒性
肝炎的40﹪，它可以急性发病，也可以形成 慢性肝炎，并进而引发肝硬化，肝癌，而其 中很大一部分人可以是健康的病毒携带者， 不出现症状，但表面抗原（HbsAg）阳性， 或者同e抗原（HbeAg）阳性，常常是重要 的传染源。在我国，人口众多，而这样的慢 性病毒携带者约有一亿人，是对公共卫生的 一个重要威胁。
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鉴别与检查
• 【鉴别 】 取本品，照《中国生物制品规程》酶
联免疫吸附法，与已知乙型肝炎表面抗体确证其 为乙型肝炎表面抗原。 查如下项目。 纯度 不得低于98%。 氢氧化铝 每1ml不得过1mg。 硫柳汞 不得过0.01%。 甲醛 不得过0.01%。 异常毒性 取本品，依法检查，应符合规定。 热原 取本品，依法检查，应符合规定。 无菌 取本品，用直接接种法检查，应符合规 定。
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（一）酿酒酵母
• 1982年Valenzuela首先在酿酒酵母中成功表达乙
型肝炎病毒表面抗原（HBsAg），1986年9月美国 默克公司的重级酵母乙肝疫苗首次取得专利并得 到美国FDA的批准。1989年7月比利时史克比成公 司的另一重组酵母乙肝炎疫苗也取得专利。目前 重组酵母乙肝疫苗的生产厂家除默克公司，史克 公司外，我国北京天坛生物，深圳康泰公司也大 量生产该种疫苗。其优点为：酵母为低等真核微 生物，易于在营养成份简单的培养基中高密中发 酵培养，利用工业化生产，表达量高，目前世界 上大规模生产和上市的疫苗大多数由该表达系统 制备而成。
• 【检查】照《中国生物制品规程》规定的方法检 • • • • • • •
• 【效价测定】取本品，照《中国生物制品规程》
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测定，应符合规定。 酵母乙型肝炎疫苗的ED50不得过1.5μg。体 外相对效力试验抗原含量与参比苗的抗原比值不 低于0.5。 CHO乙型肝炎疫苗的ED50与参比苗的ED50比 值不低于1.0。 【类别】亚单位疫苗。 【规格】酵母乙型肝炎疫苗 0.5ml:5μg CHO乙型肝炎疫苗 1ml:10μg 【贮藏与效期】在2～8℃的暗处保存。有效 期2年。
持9-10年，国产重组乙肝疫苗（主要为酵母疫苗） 的免疫效果和免疫持久性如何，是人们关心的重 点。因为乙肝病毒缺乏易感动物模型，乙肝疫苗 的免疫效果考核只能应用人体考核来评价，既往 研究证明应用乙肝苗阻断HbsAg、HbeAg双阳性 母亲的新一儿传播HBV是评价乙肝疫苗的效力的 最直接指标，且1-10岁儿童对乙肝疫苗反应较好。 我们选择新生儿和儿童作为疫苗考核对象，进行 国产酵母乙肝疫苗的免疫效果和持久性研究。阶 段结果报告如下：
• 乙肝病毒属DNA病毒科，有三种外壳的基因编码。
乙肝病毒具有五种抗原抗体系统：即表面抗原抗 体(HBsAg与抗-HBs)、e抗原抗体(HBeAg与抗HBe)、核心抗原抗体(HBcAg与抗-HBc)、x抗原抗 体(HBxAg与抗-HBx)和HBv-DNA。有临床意义的 主要有HBsAg与抗-HBs、HBeAg与抗-HBe和抗HBc，简称“两对半”。 临床主要表现为食欲减退、恶心、厌油、乏 力、巩膜黄染、黄色尿、肝脏肿大、肝区痛等。
个月及6个月后注射第2、3针;其他人群免 疫程序为第0、1、6个月，剂量均为5ug/支。
疫苗制备
• 取国家批准的重组酵母乙型肝炎疫苗的原始菌种，经一代
扩增，制成生产菌种，逐级扩增后接种于发酵罐，在适宜 温度和时间内进行三级发酵，收集细胞，经破碎，吸附粗 提，疏水色谱法精提乙型肝炎表面抗原，再经硫氰酸盐处 理，除菌滤过，甲醛灭活，氢氧化铝吸附等，加入硫柳汞 作为防腐剂。 取国家批准的重组CHO乙型肝炎疫苗的细胞株，用静置培 养或旋转法培养细胞，当乙型肝炎表面抗原的分泌量达到 每1.0mg/L时，收获培养液，经硫酸铵盐析，2～3次密度 梯度离心和色谱法纯化后，再经浓缩，除菌滤过，甲醛灭 活，氢氧化铝吸附等，加硫柳汞作为防腐剂，分装制成。
（三） CHO疫苗
• 本疫苗系用基因工程技术将乙型肝炎表面
抗原基因片段重组到中国仓鼠卵巢细胞 (CHO)内，通过对细胞培养增殖，增殖分泌 乙肝表面抗原(HBsAg)于培养液中，经纯化 加佐剂氢氧化铝后制成。疫苗外观有轻微 乳白色沉淀。
国产酵母乙肝疫苗的ຫໍສະໝຸດ Baidu果
• 研究证明：国产血源乙肝疫苗的保护效果至少维
免疫效果
新生儿 • （1） 母婴传播阻断保护率：应用6批国产量5 μg酵母疫 苗对163例HbsAg，HbeAg双阳性母亲的新生儿进行母婴 传播阻碍断效果考核，结果保护率在81.48-92.07%之间， 远高于文献报道的10 μg（59.2%）和20 μg（74.3%）血 源乙肝疫苗,与30 μg血源乙肝疫苗的保护率(85.1%)相当, 而进口5 μg M苗(46例,)10 μgA苗(58例)和10 μg S酵母疫 苗(30例)的保护率分别为90.33%、86.59%和92.58%。表 明国产酵母疫苗免疫效果达到国外同类产品和30 μg国产 血源乙肝疫苗的保护水平。 • 2） 抗体GMT：未发现第一针免后3、9、12月时，HbsAg、 HbeAg双阳性孕妇所生新生儿的抗体GMT与HbsAg单阳性 及健康孕妇所生新生儿抗体GMT有显著差异。
重组乙型肝炎疫苗的种类及生产现 状
• 血源乙肝疫苗经过十年上亿人份人群接种，证明
具有良好的安全性的免疫原性，但存在对生产者 和献血者健康有潜在危险性，生产成本高等缺陷， 我国已经完成同重组乙肝疫苗对血源疫苗的替代 工作。 目前重组乙肝疫苗主要分为酵母，（酿酒酵 母和甲基营养型酵母）以及中国仓鼠卵巢细胞 （Chinese Hamster Ovary cell,CHO）表达疫苗。
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简介
• 重组乙型肝炎疫苗是由重组酵母或重组
CHO工程细胞表达的乙型肝炎表面抗原， 经纯化、灭活及加入佐剂吸附制成。前者 为重组酵母乙型肝炎疫苗，后者为重组 CHO乙型肝炎疫苗。其性状为白色混悬液， 静置形成可摇散的沉淀。
疫苗用法
• (2)注射部位为上臂三角肌肌内。 • (1)本疫苗注射时要充分摇匀。 • (3)新生儿第1针在出生后24小时内注射，1