细胞色素C的标准曲线

3.含量测定

所得制品是还原型细胞色素C水溶液，在波长520nm处有最大吸收值，根据这一特性，用721型分光光度计，先作出一条标准细胞色素C浓度和对应的光密度值的标准曲线(图1)，然后根据测得的待测样品溶液的光密度值就可以由标准曲线的斜率求出待测样品的含量。具体操作如下：

⑴标准曲线的绘制：

取1毫升标准品(81mg/ml)，稀释至25ml，从中分别取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分别置于五支试管中，每管补加蒸馏水至4m1，并加少许联二亚硫酸钠作还原剂，然后在520nm处测得各管的光密度，分别为0.179，0.330，0.520，0.700，0.870。以浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线图，从图中求得斜率为l／3.71。

⑵样品测定

取1ml样品，稀释适当倍数，再加少许联二亚硫酸钠，在波长520nm处测定光密度。最后根据标准曲线的斜率计算其细胞色素C的含量。

五、实验结果

计算公式：细胞色素C的含量=3.71×OD×稀释倍数×终体积

在本实验中，500克的猪心原料，应获得75mg以上的细胞色素C的制品。

(注：在细胞色素C的实际工作中，除了含量测定以外还要测定含铁量即纯度的鉴定和活性，后两项测定，此处从略)。