植物组织石蜡切片的制作26页PPT
合集下载
组织切片制作PPT课件
载玻 片
第18页/共25页
九 、烤 片 40℃需烤1天或1昼夜；60℃烤0.5至1小时，放在酒精
灯上烤片（必须来回晃动），或70℃左右的温度烤片， 只需3至5分钟即可。
第19页/共25页
十、 染 色 1 苏木精（素）－伊红染色方法
具体步骤：
（1）二甲苯 I
（10 min）
（2）二甲苯II
（5 min）
1 切片前的准备 （1）切片前必须了解切片机的基本结构和性能。装刀架、刀片。检验刀片是否锋利。 （2）载玻片、盖玻片的处理：洗液浸泡24小时后用自来水充分洗涤，95％酒精中浸泡，
再用软绸布或纱布擦干待用 。 （3）为了使切出的薄片能粘贴在载玻片上，可用蛋清与甘油（1:1）混合物均匀抹在载玻
片上，再使切片附贴在玻片上。 （4）另外，准备水浴锅、蓬松的中号毛笔，眼科镊，水槽等物。
第17页/共25页
2 切片制作过程
（1）冷冻组织蜡块，固定刀架、刀片 和蜡块。 （2）切片 ：切片厚度：5μm；转速： 40至50次/分钟。 （3） 展片 （4）捞片 、烫片（45o ）、捞片
（5）切片过程中，固定好蜡块、刀片，注意刀与蜡块的角度（5o ）。出现蜡片上卷、裂隙、 刀痕等立即移动刀片或切片刀，换至刀刃锋利处。毛笔必须由下向上拔动，烫片时水温不宜 过高等等。
第4页/共25页
二、固 定
固定就是将采取的新鲜组织，放入固定液内，借助化学药品的作用使细胞内 的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成份沉淀保存下来。同时，使组织硬化不变形， 有利于固定以后的处理。
第5页/共25页
1
固定液的用量
应充足，一般为组织块体积的10倍左右。
2
固定时间
应根据组织的种类、性质、大小，固定液的种类、性质、渗透力的强弱而定。
第18页/共25页
九 、烤 片 40℃需烤1天或1昼夜；60℃烤0.5至1小时，放在酒精
灯上烤片（必须来回晃动），或70℃左右的温度烤片， 只需3至5分钟即可。
第19页/共25页
十、 染 色 1 苏木精（素）－伊红染色方法
具体步骤：
（1）二甲苯 I
（10 min）
（2）二甲苯II
（5 min）
1 切片前的准备 （1）切片前必须了解切片机的基本结构和性能。装刀架、刀片。检验刀片是否锋利。 （2）载玻片、盖玻片的处理：洗液浸泡24小时后用自来水充分洗涤，95％酒精中浸泡，
再用软绸布或纱布擦干待用 。 （3）为了使切出的薄片能粘贴在载玻片上，可用蛋清与甘油（1:1）混合物均匀抹在载玻
片上，再使切片附贴在玻片上。 （4）另外，准备水浴锅、蓬松的中号毛笔，眼科镊，水槽等物。
第17页/共25页
2 切片制作过程
（1）冷冻组织蜡块，固定刀架、刀片 和蜡块。 （2）切片 ：切片厚度：5μm；转速： 40至50次/分钟。 （3） 展片 （4）捞片 、烫片（45o ）、捞片
（5）切片过程中，固定好蜡块、刀片，注意刀与蜡块的角度（5o ）。出现蜡片上卷、裂隙、 刀痕等立即移动刀片或切片刀，换至刀刃锋利处。毛笔必须由下向上拔动，烫片时水温不宜 过高等等。
第4页/共25页
二、固 定
固定就是将采取的新鲜组织，放入固定液内，借助化学药品的作用使细胞内 的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成份沉淀保存下来。同时，使组织硬化不变形， 有利于固定以后的处理。
第5页/共25页
1
固定液的用量
应充足，一般为组织块体积的10倍左右。
2
固定时间
应根据组织的种类、性质、大小，固定液的种类、性质、渗透力的强弱而定。
石蜡切片PPT课件
• 透蜡温度要恒定，不第可21忽页/共高26忽页 低；操作要迅速，在
石蜡切片机
第22页/共26页
横向调整旋钮
蜡块竖向调整旋钮 蜡块固定器锁紧扳手 蜡块钳 旋转手轮 刀片固定旋钮
手轮停止旋转手柄 滑动刀座
离合器
切片接收托盘
切片厚薄粗调器 切片厚薄微调器
切片刀倾斜角度调整扳手
第23页/共26页
第24页/共26页
第17页/共26页
17、脱水Ⅱ
• 放入95%乙醇中洗去多余的红色，然后放入无水乙醇中3～5min。最后用吸水纸吸干多余的乙醇。 第18页/共26页
18、透明
• 切片放入二甲苯-乙醇等量混合液中约5min，然后放入纯二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3～5min。二甲苯应尽量保持 无水，应经常更换，或用纱布包无水硫酸铜放入染色缸内吸收水分。切片如在二甲苯中出现白雾现象，说 明脱水未尽，应退回乙醇中重新脱水，否则切片难以镜检。
第14页/共26页
14、漂洗
• 切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。低倍镜检查见细胞核呈蓝色、结构清楚；细胞质或结缔组织纤维 成分无色为标准。然后放入蒸馏水中漂洗一次。
第15页/共26页
15、脱水Ⅰ
• 切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各3～5min。
第16页/共26页
16、复染
• 用0.5%伊红乙醇液对比染色2~5min。伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏木精染细胞核的浓淡相配合， 如果细胞核染色较浓，细胞质也应浓染，以获得鲜明的对比。反之，如果细胞核染色较浅，细胞质也应淡 染。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。
第3页/共26页
【实验过程】
石蜡切片Ⅰ
• 取材 • 固定 • 洗涤 • 脱水 • 透明 • 透蜡 • 包埋 • 切片 • 贴片
石蜡切片机
第22页/共26页
横向调整旋钮
蜡块竖向调整旋钮 蜡块固定器锁紧扳手 蜡块钳 旋转手轮 刀片固定旋钮
手轮停止旋转手柄 滑动刀座
离合器
切片接收托盘
切片厚薄粗调器 切片厚薄微调器
切片刀倾斜角度调整扳手
第23页/共26页
第24页/共26页
第17页/共26页
17、脱水Ⅱ
• 放入95%乙醇中洗去多余的红色，然后放入无水乙醇中3～5min。最后用吸水纸吸干多余的乙醇。 第18页/共26页
18、透明
• 切片放入二甲苯-乙醇等量混合液中约5min，然后放入纯二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3～5min。二甲苯应尽量保持 无水，应经常更换，或用纱布包无水硫酸铜放入染色缸内吸收水分。切片如在二甲苯中出现白雾现象，说 明脱水未尽，应退回乙醇中重新脱水，否则切片难以镜检。
第14页/共26页
14、漂洗
• 切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。低倍镜检查见细胞核呈蓝色、结构清楚；细胞质或结缔组织纤维 成分无色为标准。然后放入蒸馏水中漂洗一次。
第15页/共26页
15、脱水Ⅰ
• 切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各3～5min。
第16页/共26页
16、复染
• 用0.5%伊红乙醇液对比染色2~5min。伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏木精染细胞核的浓淡相配合， 如果细胞核染色较浓，细胞质也应浓染，以获得鲜明的对比。反之，如果细胞核染色较浅，细胞质也应淡 染。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。
第3页/共26页
【实验过程】
石蜡切片Ⅰ
• 取材 • 固定 • 洗涤 • 脱水 • 透明 • 透蜡 • 包埋 • 切片 • 贴片
石蜡切片技术课件
第25页，幻灯片共46页
二、固定的目的和效果 固定组织的目的是设法得到接近正常生命
状态的细胞结构，有人说“形态学的美是 良好固定产物”，这说明固定的特殊重要 作用。
第26页，幻灯片共46页
1、抑制自溶和腐败： 组织的固定能保持细胞与生活时的形态 相似。因为当机体生命活动停止、或局部器官、组织割离机体 之后，组织细胞的代谢功能即行丧失，新鲜组织如果不经固定 ，任意放置，由于细胞内酶对蛋白质的分解，以及细胞的孳生 等各种因素的作用，则易因细菌繁殖而致组织腐烂。细胞内的 蛋白质分解酶将蛋白质分解为氨基酸后脱离细胞而引起组织的 自溶。
第9页，幻灯片共46页
1. 了使组织切片的结构清楚，取材要及时，组织块必须争取时间
及时固定，组织的固定以愈新鲜愈好。
2. 取材时对大体标本（肉眼标本）绘制图象，进行仔细描述 。包括形状、大小，硬度，颜色，病灶（或可疑病变）部位等 。对所取的组织应定位编号。
3. 切取各组织块时，切勿挤压损伤，对典型或具有教学和 科研价值的肉眼标本，不能因取材而对标本造成人为的“ 病变”。
任何固定液对人体都有损害作用，因此固定液的容器必须密闭，以防挥发损伤 器官和眼睛，忌用手与固定剂直接接触，以免损伤皮肤。
第32页，幻灯片共46页
四、固定剂的选择 理想的固定剂应该具备下列几种性能： 1、渗透性强：固定剂必须能迅速渗入组织，这样组织内各种成分才能
尽快地被固定在原位置，而不致弥散。 2、组织在固定液的作用下，不应发生显著的收缩和膨胀现象
福尔马林主要是由甲醛的聚合形式构成，然而聚合形式的固定效
果低于单体形式构成的10%福尔马林，为阻止在放置一定时间 的重聚作用，一般将溶液的PH值调节至中性或偏碱性。
10. 切取镜检组织块后，可将剩余的组织放入70%洒精 中保存，这样有利于日后再取材切片时的细胞染色 。
二、固定的目的和效果 固定组织的目的是设法得到接近正常生命
状态的细胞结构，有人说“形态学的美是 良好固定产物”，这说明固定的特殊重要 作用。
第26页，幻灯片共46页
1、抑制自溶和腐败： 组织的固定能保持细胞与生活时的形态 相似。因为当机体生命活动停止、或局部器官、组织割离机体 之后，组织细胞的代谢功能即行丧失，新鲜组织如果不经固定 ，任意放置，由于细胞内酶对蛋白质的分解，以及细胞的孳生 等各种因素的作用，则易因细菌繁殖而致组织腐烂。细胞内的 蛋白质分解酶将蛋白质分解为氨基酸后脱离细胞而引起组织的 自溶。
第9页，幻灯片共46页
1. 了使组织切片的结构清楚，取材要及时，组织块必须争取时间
及时固定，组织的固定以愈新鲜愈好。
2. 取材时对大体标本（肉眼标本）绘制图象，进行仔细描述 。包括形状、大小，硬度，颜色，病灶（或可疑病变）部位等 。对所取的组织应定位编号。
3. 切取各组织块时，切勿挤压损伤，对典型或具有教学和 科研价值的肉眼标本，不能因取材而对标本造成人为的“ 病变”。
任何固定液对人体都有损害作用，因此固定液的容器必须密闭，以防挥发损伤 器官和眼睛，忌用手与固定剂直接接触，以免损伤皮肤。
第32页，幻灯片共46页
四、固定剂的选择 理想的固定剂应该具备下列几种性能： 1、渗透性强：固定剂必须能迅速渗入组织，这样组织内各种成分才能
尽快地被固定在原位置，而不致弥散。 2、组织在固定液的作用下，不应发生显著的收缩和膨胀现象
福尔马林主要是由甲醛的聚合形式构成，然而聚合形式的固定效
果低于单体形式构成的10%福尔马林，为阻止在放置一定时间 的重聚作用，一般将溶液的PH值调节至中性或偏碱性。
10. 切取镜检组织块后，可将剩余的组织放入70%洒精 中保存，这样有利于日后再取材切片时的细胞染色 。
第二节石蜡切片制作
❖ 4%多聚甲醛-磷酸盐缓冲液：4g多聚甲醛+100ml磷酸盐缓冲 液（适用于免疫组化学技术）。
不同浓度梯度酒精配制
梯度酒精的作用： 将组织中的水分经过梯度酒精的作用，置换出 来，以达到组织脱水的目的。
配制：例如70%的酒精配制，70ml（100%纯 酒精）+30ml蒸馏水混匀即可。
石蜡切片所需的实验器材
过滤。混合即可使用。
❖ 2.伊红水溶液的配制： ❖ 伊红Y（0.5-1.0g）+100ml蒸馏水，溶解至溶
液中无伊红沉淀，过滤即可使用。
0.5%~1%盐酸酒精溶液的配制
❖ 浓盐酸（0.5~1ml）+70%~90%酒精溶液 100ml，混合均匀即可。
❖ 注意事项：因为浓盐酸对皮肤具有强烈的腐 蚀作用及对呼吸道具有刺激作用，因此在配 置的过程中一定要注意自身的安全。
❖ 注意：熔蜡及浸蜡温度保持在65℃左右。 ❖ 经过浸蜡之后的组织，必须包埋好才能
切片。
第六步：切片
❖ 切片之前必须修整好蜡块，并且固定在木块 之上，再将四周多余的残蜡用刀片削去，否 则不易于切片和展片。
❖ 切片使用旋转切片机时，应固定好木块；调 整好切片刀与蜡块的距离与角度，一般刀的 倾斜度为4-6度；根据切片的厚度不同调节厚
也能被及时的固定。 4：固定后的组织应软硬适宜，便于切片。 5:固定后的组织应容易被染料着色。 ！注意:不同固定剂固定时间不一样。具体问题具体分
析。
第三步：冲洗、脱水、透明。
❖ 冲洗的目的在于弃去组织中过剩的固定剂，以免固 定剂沉淀于组织之中影响切片的质量。
❖ 脱水的过程就是用梯度酒精逐步取代水的过程，组 织脱水一般由70%——80%——90%—— 95%——100%梯度酒精完成。在95%的时间可
不同浓度梯度酒精配制
梯度酒精的作用： 将组织中的水分经过梯度酒精的作用，置换出 来，以达到组织脱水的目的。
配制：例如70%的酒精配制，70ml（100%纯 酒精）+30ml蒸馏水混匀即可。
石蜡切片所需的实验器材
过滤。混合即可使用。
❖ 2.伊红水溶液的配制： ❖ 伊红Y（0.5-1.0g）+100ml蒸馏水，溶解至溶
液中无伊红沉淀，过滤即可使用。
0.5%~1%盐酸酒精溶液的配制
❖ 浓盐酸（0.5~1ml）+70%~90%酒精溶液 100ml，混合均匀即可。
❖ 注意事项：因为浓盐酸对皮肤具有强烈的腐 蚀作用及对呼吸道具有刺激作用，因此在配 置的过程中一定要注意自身的安全。
❖ 注意：熔蜡及浸蜡温度保持在65℃左右。 ❖ 经过浸蜡之后的组织，必须包埋好才能
切片。
第六步：切片
❖ 切片之前必须修整好蜡块，并且固定在木块 之上，再将四周多余的残蜡用刀片削去，否 则不易于切片和展片。
❖ 切片使用旋转切片机时，应固定好木块；调 整好切片刀与蜡块的距离与角度，一般刀的 倾斜度为4-6度；根据切片的厚度不同调节厚
也能被及时的固定。 4：固定后的组织应软硬适宜，便于切片。 5:固定后的组织应容易被染料着色。 ！注意:不同固定剂固定时间不一样。具体问题具体分
析。
第三步：冲洗、脱水、透明。
❖ 冲洗的目的在于弃去组织中过剩的固定剂，以免固 定剂沉淀于组织之中影响切片的质量。
❖ 脱水的过程就是用梯度酒精逐步取代水的过程，组 织脱水一般由70%——80%——90%—— 95%——100%梯度酒精完成。在95%的时间可
植物石蜡切片技术16页PPT
植物石蜡切片技术
•
46、寓形宇内复几时，曷不委心任去 留。
•
47、采菊东篱下，悠然见南山。
•
48、啸傲东轩下，聊复得此生。
•
49、勤学如春起之苗，不见其增，日 有所长 。
•
50、环堵萧然，不蔽风日；短褐穿结 ，箪瓢 屡空， 晏如也 。
▪
26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
▪
只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
▪
28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
▪
29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
▪
30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
16
•
46、寓形宇内复几时，曷不委心任去 留。
•
47、采菊东篱下，悠然见南山。
•
48、啸傲东轩下，聊复得此生。
•
49、勤学如春起之苗，不见其增，日 有所长 。
•
50、环堵萧然，不蔽风日；短褐穿结 ，箪瓢 屡空， 晏如也 。
▪
26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
▪
只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
▪
28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
▪
29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
▪
30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
16
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基
谢谢！
植物组织石蜡切片的制作
11、获得的成功越大，就越令人高兴 。野心 是使人 勤奋的 原因， 节制使 人枯萎 。 12、不问收获，只问耕耘。如同种树 ，先有 样只 会使人 胆孝懒 惰，因 为不实 践，甚 至不接 触社会 ，难道 你是野 人。(名 言网) 13、不怕，不悔(虽然只有四个字，但 常看常 新。 14、我在心里默默地为每一个人祝福 。我爱 自己， 我用清 洁与节 制来珍 惜我的 身体， 我用智 慧和知 识充实 我的头 脑。 15、这世上的一切都借希望而完成。 农夫不 会播下 一粒玉 米，如 果他不 曾希望 它长成 种籽； 单身汉 不会娶 妻，如 果他不 曾希望 有小孩 ；商人 或手艺 人不会 工作， 如果他 不曾希 望因此 而有收 益。-- 马钉路 德。