黄曲霉毒素B1快速检测卡(胶体金法)说明书
黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书
苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。
用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。
纯化后的样品可用不同的分析方法测定。
【适应范围及产品性能】用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。
柱吸附能力：≥50ng/支，≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；回收率：75%~90%。
柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）；25支/盒；1mL柱管/支；说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】（1）谷物、花生及其制品----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。
黄曲霉毒素B1酶联免疫定量检测试剂盒 说明书
1ELISA kit for quantitative detection of aflatoxin B1一、概要黄曲霉毒素主要是两种霉菌黄曲霉及 A.paraticus的二级代谢物。
这些霉菌在湿热的环境和耕作土地上污染的植物产生。
黄曲霉毒素B1（AFB1）属于自然最强烈的致癌物质，它一般产生于花生、玉米、巴西坚果和棉花种子中。
本试剂盒利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）对各种谷物、饲料及其他食品中的AFB1含量进行快速、定量检测。
二、原理本试剂盒是利用直接竞争酶联免疫吸附微孔模式进行检测，灵敏度可达0.1 µg/kg（ppb）。
样品或标准品中游离的黄曲霉毒素B1与酶标抗原竞争结合包被在微孔中的抗体上的结合位点，经洗板洗去多余的酶标抗原与黄曲霉毒素B1后加入显色剂与反应底物，其与酶标物作用而成蓝色，加入反应停止液后颜色由蓝色转变为黄色，黄色越深则表明黄曲霉毒素B1越少，用酶标仪在450 nm处测定光吸收值可准确定量检测样品中的黄曲霉毒素B1的污染水平。
三、试剂盒构成1、反应板支架……………………………………………………………………………1块2 黄曲霉毒素B1抗体包被反应板……………………………………………………96孔3、黄曲霉毒素B1标准品溶液（0 ppb，0.1 ppb，0.25 ppb，0.5 ppb，1 ppb，2 ppb）…1套4、酶标记物…………………………………………………………………4瓶5、酶稀释液……………………………………………………………………1瓶6、样品稀释液………………………………………………………………1瓶7、显色剂溶液………………………………………………………………………1瓶8、反应底物溶液………………………………………………………………1瓶9、终止液………………………………………………………………………………1瓶10、浓缩洗涤液（20 X）………………………………………………………1瓶四、注意事项1、试剂盒请置放于2-8℃条件下保存，使用过程中不要让微孔干燥，使用后立即将试剂放回至2-8℃条件下冷藏。
黄曲霉毒素AFB1_说明书
6. 浓缩洗涤液 （10×） …………………………… 40ml 7. 样品稀释液（10×） ……………………………… 20ml 8. 操作说明书一份
注意：标准品含有低浓度黄曲霉毒素、终止液含 2M HCl， 需小心取用。勿在有效期外使用本试剂盒。
【需要而未提供的设备及试剂】
设备： ┅┅微孔板酶标仪 450nm/630nm ┅┅振荡器 ┅┅涡旋仪 ┅┅离心机 ┅┅天平：感量 0.01g ┅┅微量移液器：单道 20μl～200μl、200μl～1000μl 多道 250μl ┅┅滤纸
【样本前处理步骤】
（一） 谷物（大、小米，玉米等脂肪含量少的谷物）（稀 释倍数：10）
┅┅取 1.0g 粉碎的样品与 4.0ml50%甲醇/水溶液混合均 匀；
┅┅强力振荡 3 分钟； ┅┅5000g 离心 10min； ┅┅取400μl 上清液，加入600μl 样品稀释液进行稀释， 充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （二） 花生（稀释倍数：10）
1
┅┅取 1.0g 粉碎的样品与 2.0ml 石油醚混合均匀； ┅┅再加入 4ml50%甲醇/水溶液混合均匀； ┅┅强力振荡 3 分钟； ┅┅5000g 离心 10min； ┅┅取 400μl 下层清液，加入 600μl 样品稀释液进行稀 释，充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （三）食用油（稀释倍数：10） ┅┅取 1.0g 粉碎的样品与 4.0ml 石油醚混合均匀； ┅┅再加入 4ml50%甲醇水溶液混合，振荡 1min； ┅┅静置 10min； ┅┅取 400μl 下层清液，加入 600μl 样品稀释液进行稀 释，充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （四）饲料（稀释倍数：5） ┅┅取 1.0g 粉碎的样品与 4.0ml50%甲醇/水溶液混合均 匀； ┅┅强力振荡 3 分钟； ┅┅5000g 离心 10min； ┅┅取上层清液 2.0ml，加入 2.0ml 三氯甲烷用 1.5ml 样 品稀释液进行稀释； ┅┅取 1ml 下层液（三氯甲烷层），60℃氮气吹干； ┅┅加入 500ul 50%甲醇/水（1:1）溶液溶解，并加入 750ul 样品稀释液，充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （五）面粉（稀释倍数：10） ┅┅取 1g 面粉样品，加入 4ml 50%甲醇/水溶液； ┅┅充分振荡 3min； ┅┅5000g 离心，10min； ┅┅取上层清液 500ul 并加入1ml 三氯甲烷，轻摇三分钟， 静置分层； ┅┅取 500ul 下层液（三氯甲烷层），60℃氮气吹干； ┅┅加入 250ul 50%甲醇/水溶液溶解，并加入 375ul 样 品稀释液，充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （六）葡萄酒（稀释倍数：5） ┅┅取 1.0ml 葡萄酒样品，加入 4.0ml 三氯甲烷； ┅┅轻摇三分钟，静置分层； ┅┅取 1ml 下层液（三氯甲烷层），60℃氮气吹干； ┅┅加入 500ul50%甲醇/水溶液溶解，再加入 750ul 样品 稀释液，充分混匀；
粮油检验粮食中黄曲霉毒素B1检测胶体金快速定量法编制说明
《粮油检验粮食中黄曲霉毒素B1检测胶体金快速定量法》编制说明黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1简写为AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素）。
黄曲霉毒素B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种。
在天然食物中以黄曲霉毒素B1最为多见，危害性也最强，国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。
黄曲霉毒素B1对包括人和若干动物具有强烈的毒性，其毒性作用主要是对肝脏的损害。
黄曲霉毒素B1污染的食物主要是花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等粮油食品，且以南方高温、高湿地区受污染最为严重。
目前，GB 2761-2011《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》中对谷物及其制品中黄曲霉毒素B1的最高限量为20μg/kg。
黄曲霉毒素B1的检测方法主要有高效液相色谱法、酶联免疫法、胶体金免疫层析法等，以往利用胶体金免疫快速检测法可对黄曲霉毒素B1样品进行定性分析，适用于阳性样品的初筛，不能准确定量。
本标准项目是通过化学合成法制备黄曲霉毒素B1人工抗原，利用此抗原免疫实验动物制备黄曲霉毒素B1单克隆抗体，基于此原料基础上开发黄曲霉毒素B1快速检测试纸条，再通过胶体金读数仪进行大米、玉米、小麦样品中黄曲霉毒素B1的定量分析。
本标准有助于提高粮食样品检测、监测效率，降低成本，保护环境，保障从业人员健康安全。
1工作简况1.1任务来源及起草单位本行业标准是在2012年12月国家粮食局标准质量中心组织对美国Charm公司开发的ROSA真菌毒素快速定量测试系统进行测试验证，并对验证结果进行专家评审通过的基础上提出并立项。
根据国家粮食局标准质量管理办公室质检办便函[2014]15号文件《关于下达2014年粮油行业标准制定计划的通知》的要求，由湖北省粮油食品质量监测站牵头负责《粮油检验粮食中黄曲霉毒素B1检测胶体金快速定量法》的起草工作。
起草单位成立了标准起草组负责进行本标准的各项工作。
上海快灵生物黄曲霉毒素B1检测卡说明书
快灵生物黄曲霉毒素B1检测卡检测原理：快灵生物黄曲霉毒素B1检测卡基于胶体金免疫层析技术。
检测时，样品中的黄曲霉毒素B1在流动过程中与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体与固相载体膜上的黄曲霉毒素B1-BSA偶联物的结合，如果样品中的黄曲霉毒素B1含量大于灵敏度，检测线在规定时间内不显颜色，结果为阳性，反之，检测线显红色色带，结果为阴性。
无论检测液中黄曲霉毒素B1浓度高低，C线均显红色色带。
适用情况：黄曲霉毒素B1检测卡适用于饲料、粮食、食品企业进行黄曲霉毒素B1的定性或半定量检测；检测样品：谷物、饲料、发酵酒、酱油、醋、食用油等；检测下限：5ppb；试纸特点：黄曲霉毒素B1检测卡可以通过调整稀释倍数准确地检测5ppb、10ppb、20ppb、50ppb或更高阈值；回收率高而稳定（80%左右）；黄曲霉毒素B1检测卡检测背景影响小；通过设置检测梯度实现半定量检测；无毒无害，安全环保；有效期：2~30°C保存18个月。
常见问题：1）用试剂盒定量检测为阳性，但是用试纸卡检测为阴性？答：黄曲霉毒素的生长是呈现不均匀性的，采样不均一可能导致这种结果。
2）说明书后面的残留限量表怎么用？答：残留限量表上面一栏标注有“残留限量”单位是ppb的栏目，是要客户根据自己要测定的标准来选择下面对应稀释液的数量，比如客户是饲料厂，国标规定黄曲霉毒素B1的含量不能超过20ppb，那么在试验中，客户需要加的稀释液的量就是20ppb下面对应的数量。
3）除了产品以外，客户还需要购买其他配套设备和试剂吗？答：配套设备只需要准备基础的实验器材，比如烧杯，电子称等，试剂需要配备乙酸乙酯有机溶剂，规格是分析纯，到普通的化学试剂店就可以买到，价格便宜。
4）试验中提到的纯水可以用蒸馏水代替吗？答：可以。
5）检测时间大概多久？答：加上前处理最多需要半个小时。
6）阴性和阳性各代表什么意思？答：阴性代表样品中不含有毒素或者含有的毒素含量没有超过检测的限量；阳性代表样品中的毒素含量超过了检测限量。
食用油中黄曲霉毒素B1的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201708)
附件2食用油中黄曲霉毒素B1的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201708）1范围本方法规定了食用油中黄曲霉毒素B1的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于花生油、玉米油、大豆油及其他植物油脂等食用油中黄曲霉毒素B1的快速测定。
2原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。
样品中的黄曲霉毒素B1经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中黄曲霉毒素B1进行定性判定。
3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1试剂3.1.1甲醇。
3.1.2十二水磷酸氢二钠。
3.1.3二水磷酸二氢钠。
3.1.4氯化钠。
3.1.5吐温-20。
3.1.6提取液：30%甲醇水或胶体金免疫层析检测试剂盒专用提取液或根据产品使用说明书配置。
—1—3.1.7稀释液：称取2.90 g十二水磷酸氢二钠（3.1.2），0.296 g二水磷酸二氢钠（3.1.3），4.50g 氯化钠（3.1.4），溶解于400 mL水中，加入0.5 mL吐温-20（3.1.5），用水稀释至500mL，混匀即成稀释液；或使用胶体金免疫层析检测试剂盒专用稀释液。
3.2参考物质黄曲霉毒素B1参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥90%。
表1 黄曲霉毒素B1参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量注：或等同可溯源物质。
3.3标准溶液的配制3.3.1 黄曲霉毒素B1标准储备液（0.1 mg/mL）：精密称取适量黄曲霉毒素B1标准品（3.2），置于10 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.1 mg/mL的黄曲霉毒素B1标准储备液；或可直接购买黄曲霉毒素B1标准储备液。
-20℃避光保存备用，有效期3个月。
黄曲霉毒素试剂盒说明书
黄曲霉毒素 B1酶联免疫检测试剂盒使用说明书Ⅰ．样品处理方法一、食品1、脂肪含量小的固体样品（如大米、玉米、小米等）称取5.0g样品（已粉碎）于100ml具塞三角瓶中，准确加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，振摇15min，过滤，弃去1/4初滤液，收集试样滤液，根据样品的国家允许量标准，用A试剂将滤液进行稀释（见表1：样品稀释表）。
将样品稀释液进行定量或限量测定。
2、酱油、醋称取5.0g样品于25ml小烧杯中，用5ml蒸馏水将试样转移到125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。
放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中，65℃水浴通风挥干。
挥干冷却后，准确加入25.0ml 甲醇水（1+1），将蒸发皿中的凝结物充分溶解。
根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。
将样品稀释液进行定量或限量测定。
3、食用油（如菜油、麻油、色拉油、花生油等）称5.0g油样于25ml小烧杯中，用20ml石油醚或正乙烷分次将试样转移至125ml分液漏斗中，准确加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，加塞轻轻振摇5min，静置分层，放出下层甲醇水提取液。
根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。
将样品稀释液进行定量或限量测定。
4、葡萄酒准备称取5.0g葡萄酒于125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。
放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中， 65℃水浴通风挥干。
黄曲霉毒素快速检测卡使用方法
黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株所产生的有毒代谢产物，最主要的4种分别为：B1、B2、G1、G2。
黄曲霉毒素具有很强的急性毒性，也有明显的慢性毒性及强致癌性。
黄曲霉毒素主要污染粮、油及其制品，其中受污染最严重的是花生、棉籽、玉米及其制品；其次是稻米、小麦、大麦、高粱、芝麻、茶叶等。
【检测原理】该试剂盒采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术进行检测。
【检测范围】酱油检测限为5ppb花生、玉米、小麦、大米、茶叶、饲料检测限为10ppb食用油检检测限为10ppb【产品组成】名称数量名称数量黄曲霉毒素B1卡10条样品稀释液11瓶样品稀释液21瓶乙酸乙酯1瓶15ml离心管2只2ml离心管10只一次性手套3只滴管10支说明书1份【检测步骤】1、酱油检测：取100ul酱油加入配套的2ml离心管中，加400ul稀释液1，摇匀. 取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。
5~10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。
2、花生、玉米、小麦、大米、茶叶、饲料等检测⑴. 取5g以上有代表性的粉碎后的谷物样品（过20目筛），准确称取0.5g均匀粉碎试样，加入到配套的15ml离心管中。
⑵．向离心管中准确加入纯净水和乙酸乙酯各2mL，将瓶塞盖紧密封，用力振荡5分钟，4000rpm离心1分钟（备注：如实验室没有大离心机设备，可以用小离心管取1.5ml上清液，用小离心机离心）。
⑶．用吸管取0.6mL上清液到小玻璃杯中，吹干滤液，然后用0.3ml体积稀释液1复溶杯底固体。
此溶解液即为检测液.⑷．取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。
⑸．5~10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。
取1ml待测食用油样品于2ml离心管中，加入1ml样品稀释液2，振荡5min，取上清液100ul，加100ul 样品稀释液1稀释，加样检测。
5~10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。
黄曲霉毒素B 检测卡说明书
黄曲霉毒素B 检测卡说明书1. 产品介绍该检测卡是一种用于检测食品中黄曲霉毒素B（简称“黄曲霉素B”）含量的便捷、快速的测试工具。
黄曲霉素B是一种常见的食品毒素，长期摄入可能对人体健康造成危害。
使用该检测卡能够准确、迅速地检测食品中的黄曲霉素B含量，从而保障消费者的食品安全。
2. 产品特点（1）便捷快速：该检测卡采用便携式设计，操作简单，不需要专业设备，30分钟内即可得到检测结果。
（2）高灵敏度：该检测卡具有高灵敏度，能够准确检测低至10ppb（微克/升）的黄曲霉素B含量。
（3）适用广泛：该检测卡适用于各类食品，如谷物、坚果、肉制品等。
（4）可靠准确：该检测卡经过严格的质量控制，具有较高的准确性和可靠性。
3. 使用说明（1）样品处理：将待测试的样品按照说明书的要求进行处理，提取出样品中的黄曲霉素B。
（2）装置准备：在平整的工作台上，将黄曲霉素B检测卡取出，待温度适应后，打开包装袋。
（3）取样：使用专用吸样管吸取待测试样品提取物，滴入检测卡指定位置。
（4）加液：使用专用注射器，向指示位置加入3滴洗涤缓冲液。
（5）等待反应：将检测卡平放，避免震动，等待约5分钟，让反应发生。
（6）解读结果：观察测试线上是否出现红色或粉色条纹。
如果出现了测试线，表示样品中含有黄曲霉素B，颜色深浅与含量成正比。
若没有出现测试线，表示样品中黄曲霉素B含量低于检测限。
4. 注意事项（1）请勿使用已经过期的检测卡，以免影响测试结果。
（2）使用前请仔细阅读产品说明书，并严格按照要求进行操作。
（3）使用过程中注意个人卫生，避免污染样品。
（4）请将检测卡妥善保管，避免受潮、受热等情况。
（5）本检测卡仅用于食品中黄曲霉素B的初步筛查，如需精确测量，请使用专业仪器。
5. 注意事项（1）本产品仅适用于黄曲霉素B的检测，不适用于其他毒素的检测。
（2）本产品仅供科研和食品安全监测使用，不得用于其他非法用途。
（3）本产品的开发商、制造商对于由于使用不当、操作失误等原因造成的检测结果不准确或任何直接或间接损失概不负责。
黄曲霉毒素B1 ELISA快速检测试剂说明书
黄曲霉毒素B1 ELISA快速检测试剂盒【产品概述】黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性。
主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液、动物饲料相关的产品中。
天然污染的黄曲霉毒素以AFB1为主。
1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织的癌症研究机构划定为类致癌物，是一类毒性极强的剧毒物质。
它被证明对人和动物的肝脏、肾脏等组织和器官具有很大的危害。
产生黄曲霉毒素的霉菌（如黄曲霉、寄生曲霉等）遍及世界各地，黄曲霉的污染可以发生在植物的生长、收获和加工、储藏、运输等过程中、及时发现污染源是最好的预防黄曲霉毒素污染的方法。
【产品原理】本产品是利用免疫竞争法检测原理建立的一种定量检测试剂盒。
具有简单、快速，无需特殊的仪器设备，既可以在实验室进行，也可在农场、饲料混合车间等实地进行测定。
结果准确，灵敏度度为0.05ppb，准确率大于95% 。
适用于谷物、饲料等样板中的黄曲霉毒素的检测。
【产品特性】1）试剂盒灵敏度: 0.05ppb2）试剂盒变异系数：小于20%。
3）试剂盒准确度：回收率范围在80％-110％之间。
【试剂盒组成】1）包被有抗原的96微孔板：1块（96 孔，12 条×8 孔）2）黄曲霉标准品：0 ppb 、0.05 ppb、0.12 ppb、0.25 ppb、0.5ppb、1 .0 ppb、2.0ppb1 瓶× 1.0ml3）200×黄曲霉抗体浓缩液： 1 瓶× 0.25ml4）60×酶标二抗浓缩液： 1 瓶× 0.25ml5）10×浓缩洗涤液： 1 瓶× 50ml6）稀释缓冲液： 2 瓶×40ml7）显色底物液 1 瓶×7ml8）反应终止液： 1 瓶× 7ml9) 试剂盒说明书【仪器试剂】仪器—酶标仪450nm—过滤漏斗—微量移液器20μl～200μl，100μl～1000μl—刻度移液管—天平：感量0.01g—50ml离心管或25ml锥形瓶—定性滤纸试剂—甲醇—蒸馏水【样本的前期处理】1. 玉米、花生等谷物----称取10g样品，加入20ml样品提取液（每100ml中含60ml甲醇，40ml蒸馏水），剧烈振荡3分钟（用手或振荡器）----将提取液用普通滤纸过滤，用稀释缓冲液按1：9的比例稀释过滤液（吸取100u过滤液，加入900ul稀释液缓冲液）样本稀释倍数为20倍2. 饲料（1）普通饲料----称取5g样品，加入25ml样品提取液（每100ml中含60ml甲醇，40ml蒸馏水），剧烈振荡3分钟（用手或振荡器）----将提取液用普通滤纸过滤，用稀释缓冲液按1：9的比例稀释过滤液（吸取100u过滤液，加入900ul稀释液缓冲液）样本稀释倍数为50倍（2）浓缩饲料----称取5g样品，加入25ml样品提取液（每100ml中含60ml甲醇，40ml蒸馏水），剧烈振荡3分钟（用手或振荡器）----将提取液用普通滤纸过滤，取2ml滤液，加入3ml三氯甲烷，振荡1分钟，静置1分钟，3500rpm离心5分钟。
粮油检验谷物中黄曲霉毒素B1的快速测定—免疫层析法编制说明
《粮油检验 谷物中黄曲霉毒素B 1的快速测定—免疫层析法》编制说明标准起草组 2011年11月《粮油检验 谷物中黄曲霉毒素B 1的快速测定—免疫层析法》编制说明一． 制定本标准的必要性及意义黄曲霉毒素B 1（AFB 1）是目前已知致癌性和毒性极强的化学物质之一，能致癌、致畸、致诱变。
世界上很多国家都对AFB 1设定了严格的限量标准。
当前国家标准中对黄曲霉毒素B 1的检测手段主要有免疫亲和层析净化高效液相色谱法（HPLC 法）和酶联免疫吸附法（ELISA 法）。
但是HPLC 法法设备费用昂贵难以普及，ELISA 法检测时间长，因此不可能作为粮食现场收购的快速检测。
快速检测卡能够在较短的时间完成内对粮食谷物中的黄曲霉毒素B 1的检测，可以对粮食谷物中黄曲霉毒素B 1是否超标进行初筛。
但是检测卡操作步骤、样品提取方法和提取时间、以及方法的准确性等等还不够完善，有必要进一步研究试验、验证，制定规范、简单、高效的快速检测卡测定谷物中黄曲霉毒素B 1的行业标准方法。
二． 工作基本情况按照粮油标准化技术委员会和国家粮食局标准质量中心的要求，由湖北省粮油食品质量监测站、北京国家粮油质检中心、重庆粮油质检中心和广西粮油质检中心参与标准的制订研究工作，湖北省粮油食品质量监测站负责起草本标准。
该标准制定任务下达后，成立了标准起草工作小组，制定了工作计划，开展的主要工作如下：1. 查阅相关文献和与有关真菌毒素检测卡生产企业沟通，了解检测卡运用情况。
2. 2008年6月中旬采集黄曲霉毒素B 1的阳性稻谷和玉米样品，用国标方法对样品进行制备和定值。
3.2008年7月18-19日在国家粮食局标准质量中心的组织领导下，湖北省粮油食品质量监测站、北京国家粮油质检中心和2家检测卡厂家在湖北站召开了快速检测卡测定谷物中黄曲霉毒素B1的国家标准制订研讨会及检测方法研究实验，进行了“不同样品提取液的验证实验”、“样品不同粉碎颗粒的验证实验”、“探讨制备样品均一性问题和样品的定值方法”等实验。
黄曲霉素B1检测卡说明书(完整版)
黄曲霉毒素B1检测卡说明书【简介】黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株所产生的有毒代谢产物，最主要的4种分别为：B1、B2、G1 G2黄曲霉毒素具有很强的急性毒性，也有明显的慢性毒性及强致癌性。
黄曲霉毒素主要污染粮、油及其制品，其中受污染最严重的是花生、棉籽、玉米及其制品；其次是稻米、小麦、大麦、高粱、芝麻、茶叶等。
鉴于这些霉菌毒素的毒性，欧盟国家规定，黄曲霉毒素B1的残留限量值为5ppb。
【检测原理】该试剂盒采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术进行检测。
【检测范围】花生、玉米、小麦、大米、茶叶、油脂、饲料等；【产品组成】黄曲霉毒素B1免疫胶体金快速检测卡（40份/盒）滴管（40支）干燥剂（40片）一次性手套（5只）【技术指标】检测下限：5 g/kg;【检测步骤】1.取5g以上有代表性的粉碎后的谷物样品（过20目筛），准确称取0.5g均匀粉碎试样，加入到配套的15ml离心管中。
2. 向离心管中准确加入纯净水和乙酸乙酯各 2mL 将瓶塞盖紧密封,用力振荡5分钟，4000rpm 离心1分钟(备注：如实验室没有大离心机设备，可以用小离心管取1.5ml 上清液，用小离心机离心)。
3. 用吸管取0.6mL 上清液到小玻璃杯中，吹干滤液(吹风机或烘箱)，然后用0.3ml 体积稀释液复溶杯底固体。
此溶解液即为检测液4. 取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。
5. 5~10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。
【结果判断】1、阴性：测试线(T)与对照线(C)都出现，表明样品中黄曲霉毒素的 浓度小于5ug /kg 。
2、阳性:只有对照线(C),无测试线(T),表明样品中黄曲霉毒素的浓 度大于或等于5卩g /kg 。
3、无效:对照线(C)和测试线(T)都不出现，或者对照线(C )不出现。
n M J * 1= nwiw.lfiJLfrlP.rJli 1、本产品在2〜30C 密封干燥保存；忌冷冻；检测卡保存期18个月;公诃 加祥？L —*阴性 即屈堆一► 遂测煤一＞苏州快捷康生物技术有限 kJ k b i Q « c n无效 无效T 待检楼品【注意事2、在环境温度15〜37C下操作；检测卡极易受潮，打开小包装后应立即使用；3、乙酸乙酯为易挥发液体，保存为12个月，不用时要盖紧瓶塞；（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）。
总黄曲霉毒素检测卡说明书(完整版)
总黄曲霉毒素快速检测卡【产品简介】黄曲霉毒素是真菌的次级代谢产物，主要是由黄曲霉、寄生曲霉和特曲霉产生。
它易天然存在于花生、棉籽、玉米、小麦和稻米等农作物中具，有强烈的毒性和致癌性。
本产品为总黄曲霉毒素胶体金快速检测卡，用于定性检测核桃奶、银杏露等各种饮品以及玉米、花生等坚果和饲料中的黄曲霉毒素B1、B2 和G1、G2 的残留，整个检测过程只需要5 分钟左右。
核桃奶、银杏露等各种饮品灵敏度为1ppb，玉米、花生等坚果和饲料的灵敏度为2ppb 。
乳液中黄曲霉毒素Ｍ１检测灵敏度为0.5ppb.【产品规格】规格：40 份/盒【样品处理】1、饮品可直接用于检测。
2、玉米、花生等坚果和饲料称取适量样品经饲料粉碎机磨细后，过20 目筛。
称取过筛后 1 克粉碎样品，用4ml 样品提取液溶解。
用手或用涡旋仪剧烈震荡 5 分钟左右。
静置10-20 分钟。
静置后轻轻取上清液，按1:2 加入样品稀释液（上清液：样品稀释液=1:2）。
充分混匀后用于检测样品提取液：60%甲醇溶液。
按体积比甲醇：纯水=3:2 配制。
样品稀释液：0.01mol/L 磷酸盐缓冲液PBS【使用步骤】1、在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡和待检样本溶液恢复至室温。
2、从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内尽快地使用。
3、将检测卡平放，用滴管吸取待检样品溶液，垂直逐滴加入4、滴无气泡样品于加样孔中，加样后开始计时。
5、5 分钟读取结果，30分钟后结果判读无效。
根据示意图判定结果。
注：如果出现无法层析至顶的情况，可酌情多滴1-2 滴。
【结果判定】阴性（-）：两条紫红色条带出现。
表示样品中不含有总黄曲霉毒素或其浓度低于检测限。
阳性（+）：检测T 线无显色，则表示样品中总黄曲霉毒素浓度高于检测限。
无效：未出现质控 C 线，表明操作过程不正确或检测卡已失效。
【注意事项】1、检测卡请在有效期内一次性使用；2、检测时避免阳光直射和电风扇直吹；3、尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面；4、样品滴管不可混用，以免交叉污染；5、如果样品出现沉淀或浑浊物，请离心后再检测；由于样品的差异，有的检测线可能偏淡或颜色偏灰，但只要出现条带，就可判定为阴性结果。
农产品快速检测技术W2103-5 胶体金速测卡快速检测玉米中的黄曲霉毒素B1-微测试
《农产品/食品质量安全检测技术》课程-微测试一、单选题1、如果样品中黄曲霉毒素B1的含量等于或高于检测限，在规定的检测时间内，T线不显色，结果为（）。
A.阳性B. 阴性C. 酸性D. 碱性参考答案：A难度：中2、检测过程中，如果检测试纸条T线显色，则说明（）A. 样品中黄曲霉毒素B1的含量低于检测限，结果为阳性B. 样品中黄曲霉毒素B1的含量高于检测限，结果为阳性C.样品中黄曲霉毒素B1的含量高于检测限，结果为阴性D. 样品中黄曲霉毒素B1的含量低于检测限，结果为阴性参考答案：D难度：高3、检测试纸条，质控线（C线）不显色，则说明（）。
A. 黄曲霉毒素B1的含量太高B. 黄曲霉毒素B1的含量太低C. 检测有效D. 检测无效参考答案：D难度：中二、多选题1、检测试纸条可能出现几种结果？（）A．C线，T线同时显色，结果为阴性B．C线显色，T线不显色，结果为阳性C．C线，T线同时不显色，结果为检测无效D．C线不显色，T线显色，结果为检测有效参考答案：ABC难度：高三、判断题1、配置80%甲醇溶液，50ml量筒中加入40ml甲醇，定容后搅拌均匀后即可。
参考答案：T难度：中2、使用天平称量时，无需进行任何准备，开机后即可进行称量。
参考答案：F难度：低四、填空题1、速测卡法检验的原理，本方法以（）为固相，通过毛细作用使样品溶液到达指定位置反应、显色来检测样品中黄曲霉毒素B1的含量。
参考答案：条状纤维层析材料；难度：中2、检测时，通过（）线颜色的有无来判断黄曲霉毒素B1是否超标。
参考答案：T难度：低五、简答题1、简要说明胶体金速测卡快速检测玉米中黄曲霉毒素B1的前处理过程。
参考答案：准确称取处理后的玉米粉5.0g，置于50ml具塞离心管中，同样方法再称取玉米粉2份备用，并用记号笔做好标记。
分别向3只离心管中加入10ml80%甲醇溶液，在涡旋振荡器上振荡3min，充分混匀后在4000r/min条件下，离心5min，取上清液100μL于ep管中，加入样品稀释液200μL，混匀后待测。
农产品快速检测技术W2103-4 胶体金速测卡快速检测玉米中的黄曲霉毒素B1-微教材
《农产品/食品质量安全检测技术》课程-微教材知识讲解1、黄曲霉毒素B1黄曲霉毒素B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种。
主要存在于土壤，动植物各种坚果，特别是花生和核桃中。
在大豆、稻谷、玉米、通心粉、调味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。
它对包括人和若干动物具有强烈的毒性，其毒性作用主要是对肝脏的损害。
在天然食物中以黄曲霉毒素B1最为多见，危害性也最强，国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。
2、检验原理速测卡法检验的原理，本方法以条状纤维层析材料为固相，通过毛细作用使样品溶液到达指定位置反应、显色来检测样品中黄曲霉毒素B1的含量。
检测时，通过T线颜色的有无来判断黄曲霉毒素B1是否超标。
如果样品中黄曲霉毒素B1的含量等于或高于检测限，在规定的检测时间内，T线不显色，结果为阳性；反之，T线显色，则样品中黄曲霉毒素B1的含量低于检测限，结果为阴性。
无论样品中黄曲霉毒素B1的含量高低，质控线（C线）均显色，以示检测有效,否则检测无效。
边学边练任务：胶体金速测卡快速检测玉米中的黄曲霉毒素B1操作步骤：1、材料与设备玉米粉、80%甲醇-水溶液、黄曲霉毒素B1快速检测卡试剂盒，包括快速检测试纸条、样品稀释液、微孔试剂、记号笔、量筒、烧杯、移液器、天平、50mL离心管、离心机、涡旋振荡器等。
试剂：去离子水、石油醚、甲醇、黄曲霉毒素总量ELISA检测试剂盒等。
2、试剂配制首先向100ml量筒中加入20ml蒸馏水，然后加入80ml甲醇溶液，定容后将甲醇混合液转移到烧杯中，搅拌均匀后待用。
3、样品前处理首先，调好天平后，准确称取处理后的玉米粉5.0g，放置于50ml具塞离心管中，同样方法再称取玉米粉2份备用，并用记号笔做好标记，以免混淆。
分别向3只离心管中加入10ml80%甲醇溶液，在涡旋振荡器上振荡3min，充分混匀后在4000r/min条件下，离心5min，取上清液100μL于ep管中，加入样品稀释液200μL，混匀后待测。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
黄曲霉毒素B1快速检测卡(胶体金法)说明书
【产品名称】
产品名称：黄曲霉毒素B1快速检测卡(胶体金法)
英文名称：Aflatoxin B1 Rapid Test Card (Colloidal Gold)
【产品简介】
黄曲霉毒素是一类丝状真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）产生的有毒代谢产物，黄曲霉毒素B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种，其毒性作用主要是对肝脏的损害。
黄曲霉毒素B1污染的食物主要是玉米、稻谷、小麦、花生、花生油等粮油食品，且以南方高温、高湿地区污染最为严重。
本产品用于快速检测玉米油、花生油、葵花籽油等食用油中黄曲霉毒素B1残留，检测过程只需要20分钟，适用于家庭、超市、食堂、食品企业及检测机构的快速筛查。
【包装规格】5次/盒。
【产品组成】黄曲霉毒素B1快速检测卡（5条）；1mL刻度吸管（10支）；提取瓶（内含黄曲霉毒素B1提取液2mL，5瓶）。
【检测原理】本产品采用了竞争抑制免疫层析的原理。
【检出限】本产品检测方法对玉米油、花生油黄曲霉毒素B1检出限量为20μg/kg，对其他食用油黄曲霉毒素B1检出限量为10μg/kg。
根据《食品真菌毒素限量GB2761-2011》规定，玉米油、花生油黄曲霉毒素B1检出限量为20μg/kg，其他食用油黄曲霉毒素B1检出限量为10μg/kg。
【使用方法】
1、玉米油或花生油检测：用1mL刻度吸管向提取瓶中加入油样2mL（用吸管移加2次）；
其他食用油检测：用1mL刻度吸管向提取瓶中加入油样4mL（用吸管移加4次）。
2、盖紧提取瓶盖，用手上下振荡30-60秒，静置10分钟，待样品分成上下两层。
3、从包装袋中取出检测卡，平放在桌面，用另一只新吸管从提取瓶中吸取少量下层液体，
垂直滴加3滴（约100μL）于检测卡加样孔（S孔）中。
4、室温环境计时约10分钟，根据示意图判定结果。
【结果判定】
阴性（-）：T线显色比C线深或一样深，均表示样品中黄曲霉毒素B1浓度低于检出限。
阳性（+）：T线显色比C线明显变浅或T线不显色，表示样品中黄曲霉毒素B1浓度等于或高于检出限。
无效：未出现C线，表明操作过程不正确或试纸卡已失效。
在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试纸卡重新测试。
【注意事项】
1、请按照使用方法进行测试，检测卡打开包装后1小时内使用，检测前将检测卡和待检样品恢复至室温。
2、尽量不要触摸试纸卡中央的白色膜面，检测时避免阳光直射。
3、本检测卡为一次性产品，请勿重复使用。
4、提取瓶内液体不可食用，避免儿童接触，检测完后液体可倒入下水道，包装可随生活垃圾处理。
5、本产品检测结果仅供参考，如需确证，请参照国家相关标准方法。
【储存及有效期】
原包装应储存于2～8℃，阴凉避光干燥处，切勿冷冻；有效期12个月。