第四章 培养基的制备及灭菌设备PPT课件
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培养基的制备和灭菌设备
5-培养基出口 6-喷淋冷却 7-冷却水
②.喷射加热-真空冷却连续灭菌流程
流程:喷射加热、管道维持、真空冷却
蒸汽
喷射加热器
真空
生培养液
❖培养基用泵打入喷射加
膨胀阀
热器与蒸汽混合升温
维持管
急聚蒸发室
❖进入管道维持器保温
一定时间
❖进入真空闪急蒸发室 冷却降温
灭菌好的培养液
图2-5 加热-真空冷却连续灭菌流程
膨胀阀 急聚蒸发室
❖ 真空冷却可能造成培养 基重新污染
灭菌好的培养液
图2-5 加热-真空冷却连续灭菌流程
③.板式换热连续灭菌流程 流程:薄板换热器加热、管道维持、薄板换
热器冷却
灭菌好的培养液
蒸汽
水冷 却段
热回 收段
加热 段
冷却水
生培养液
维持段
图2-6 薄板换热器连续灭菌流程
特点
❖ 在一台薄板换热器中完成培养液的预热、加热及 冷却三个过程
(二)灭菌方法
灭菌:射线灭菌、药物灭菌、热灭菌 分离:离心沉淀、介质过滤
(三)加热灭菌方式
培养基→加热升温→维持保温→冷却降温→发酵
分批灭菌:三个过程在一个设备内完成 连续灭菌:三个过程分别在不同的设备内完成
(四)灭菌要求
❖ 达到无菌程度 ❖ 尽量减少营养成分损失 ❖ 降低能量消耗
(五)理论灭菌时间
控制
缺点:需要专门设备,投资较大 设备较多,染菌机会也相应较多
2、要求
①.加热设备:加热均匀, 144℃ 20s 2-3min 20s 快速升温到灭菌温度
(温度一致)
②.维持设备:使培养基按
温 度
顺序流动,维持灭菌
温度达到灭菌时间
②.喷射加热-真空冷却连续灭菌流程
流程:喷射加热、管道维持、真空冷却
蒸汽
喷射加热器
真空
生培养液
❖培养基用泵打入喷射加
膨胀阀
热器与蒸汽混合升温
维持管
急聚蒸发室
❖进入管道维持器保温
一定时间
❖进入真空闪急蒸发室 冷却降温
灭菌好的培养液
图2-5 加热-真空冷却连续灭菌流程
膨胀阀 急聚蒸发室
❖ 真空冷却可能造成培养 基重新污染
灭菌好的培养液
图2-5 加热-真空冷却连续灭菌流程
③.板式换热连续灭菌流程 流程:薄板换热器加热、管道维持、薄板换
热器冷却
灭菌好的培养液
蒸汽
水冷 却段
热回 收段
加热 段
冷却水
生培养液
维持段
图2-6 薄板换热器连续灭菌流程
特点
❖ 在一台薄板换热器中完成培养液的预热、加热及 冷却三个过程
(二)灭菌方法
灭菌:射线灭菌、药物灭菌、热灭菌 分离:离心沉淀、介质过滤
(三)加热灭菌方式
培养基→加热升温→维持保温→冷却降温→发酵
分批灭菌:三个过程在一个设备内完成 连续灭菌:三个过程分别在不同的设备内完成
(四)灭菌要求
❖ 达到无菌程度 ❖ 尽量减少营养成分损失 ❖ 降低能量消耗
(五)理论灭菌时间
控制
缺点:需要专门设备,投资较大 设备较多,染菌机会也相应较多
2、要求
①.加热设备:加热均匀, 144℃ 20s 2-3min 20s 快速升温到灭菌温度
(温度一致)
②.维持设备:使培养基按
温 度
顺序流动,维持灭菌
温度达到灭菌时间
细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术ppt课件
20
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法,从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶,活性污泥或土壤或湖水1瓶, 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它:接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌,但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h,确定无菌才能使用。
18
实验程序4
(培养基和玻璃器材的灭菌方法)
过滤除菌法: 不能用加热灭菌的 液体物质(如维生 素、血清),一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
(培养基的配制方法和步骤) 3. 调pH值:用10% NaOH调pH至7.6,用精 密pH试纸对照。 4. 分装:将培养基分装于5支试管,其余全部 倒入250mL锥形瓶中,分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆,挂上标签,注明何种培养基。 6. 灭菌备用:培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h,确定无菌生长,方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它:培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法,从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶,活性污泥或土壤或湖水1瓶, 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它:接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌,但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h,确定无菌才能使用。
18
实验程序4
(培养基和玻璃器材的灭菌方法)
过滤除菌法: 不能用加热灭菌的 液体物质(如维生 素、血清),一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
(培养基的配制方法和步骤) 3. 调pH值:用10% NaOH调pH至7.6,用精 密pH试纸对照。 4. 分装:将培养基分装于5支试管,其余全部 倒入250mL锥形瓶中,分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆,挂上标签,注明何种培养基。 6. 灭菌备用:培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h,确定无菌生长,方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它:培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
微生物实验培养基制备和灭菌课件
• 溶液或试剂:牛肉膏,蛋白胨,可溶性淀粉,葡 萄糖,NaCl,K2HPO4,KNO3,MgSO4·7H2O, FeSO4·7H2O,琼脂,孟加拉红,链霉素,1mol/L NaOH,1mol/L HCl等。
称量:按培养基配方比例依次准确地称 取所需药品逐一放入搪瓷杯中
溶化:在电炉上加热溶解。
注:琼脂要在沸水中溶解,用玻棒不断搅拌,直至 完全溶解(分装试管)。
• 高氏一号培养基(同上)
1个组:配1000ml,分装三角瓶(150ml/瓶)
• 马丁氏培养基(同上)
2个组:各配500ml,分装三角瓶(150ml/瓶)
实验安排( 4人/组)
一、器皿包扎和灭菌 (1)培养皿12只(6只1包) (2)1mL移液管6支 (3)干热灭菌(160 ℃ ,2h)
二、制备无菌水 (1)250mL三角瓶:内装玻璃珠和90mL水 (2)试管6支:分装9mL水/支 (3)牛皮纸包扎,高压蒸汽灭菌(121 ℃,20min)
• 一般采用0.103 MPa的蒸汽压力,此时温度是121.1℃,维 持15~20 min。当灭菌物品中有易破坏的成分,可采用 较低温度115℃(蒸汽压力0.075 MPa)下维持30 min左右.
手提式高压蒸汽灭菌锅
图示 手提式灭菌锅结构 1、安全阀;2、压力表;3、放气阀;4、软管;5、螺 栓6、灭菌桶;7、筛架;8、水
不同的微生物对培养基 pH要求不同,霉菌和酵母菌的 培养基 pH一般是偏酸性的,而细菌和放线菌的培养基 pH
一般为中性或微碱性。
实验器材
• 仪器或其他用具:搪瓷杯,试管,三角瓶,烧杯, 量筒,玻棒,电磁炉、培养基分装器,高压蒸汽 灭菌锅,精密pH试纸(pH 5.5~9.0),牛角匙, 棉花(或橡胶塞),牛皮纸,记号笔,纱布,棉 绳等。
称量:按培养基配方比例依次准确地称 取所需药品逐一放入搪瓷杯中
溶化:在电炉上加热溶解。
注:琼脂要在沸水中溶解,用玻棒不断搅拌,直至 完全溶解(分装试管)。
• 高氏一号培养基(同上)
1个组:配1000ml,分装三角瓶(150ml/瓶)
• 马丁氏培养基(同上)
2个组:各配500ml,分装三角瓶(150ml/瓶)
实验安排( 4人/组)
一、器皿包扎和灭菌 (1)培养皿12只(6只1包) (2)1mL移液管6支 (3)干热灭菌(160 ℃ ,2h)
二、制备无菌水 (1)250mL三角瓶:内装玻璃珠和90mL水 (2)试管6支:分装9mL水/支 (3)牛皮纸包扎,高压蒸汽灭菌(121 ℃,20min)
• 一般采用0.103 MPa的蒸汽压力,此时温度是121.1℃,维 持15~20 min。当灭菌物品中有易破坏的成分,可采用 较低温度115℃(蒸汽压力0.075 MPa)下维持30 min左右.
手提式高压蒸汽灭菌锅
图示 手提式灭菌锅结构 1、安全阀;2、压力表;3、放气阀;4、软管;5、螺 栓6、灭菌桶;7、筛架;8、水
不同的微生物对培养基 pH要求不同,霉菌和酵母菌的 培养基 pH一般是偏酸性的,而细菌和放线菌的培养基 pH
一般为中性或微碱性。
实验器材
• 仪器或其他用具:搪瓷杯,试管,三角瓶,烧杯, 量筒,玻棒,电磁炉、培养基分装器,高压蒸汽 灭菌锅,精密pH试纸(pH 5.5~9.0),牛角匙, 棉花(或橡胶塞),牛皮纸,记号笔,纱布,棉 绳等。
培养基的制备与灭菌PPT课件
2021/3/12
3
三、实验器材
1. 药品:牛肉膏;蛋白胨;氯化钠;琼脂;可溶 性淀粉;葡萄糖;蔗糖;K2HPO4;KNO3; MgSO4.7H2O;FeSO4.7H2O;NaNO3;KCl;1N NaOH; 1N HCl;链霉素;孟加拉红;
2. 仪器及其他:试管;移液管;锥形瓶;烧杯; 量筒;玻璃棒;漏斗;纱布;棉花;报纸;天平或 台秤;马铃薯;黄豆芽等。
配制培养基时,按100 mL马铃薯浸汁加入葡萄糖 2克,琼脂1.5-2.0克。
4. 无菌水的制备
在每个250 mL锥形瓶内装99 mL自来水(或生理 盐水),在每个小试管内装4.5 mL自来水(或生 理盐水),塞上棉塞,15磅/寸2灭菌20分钟待用。
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(二)培养基的分装及棉塞的制作
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3. 马铃薯葡萄糖培养基(分离霉菌用)
制法:将马铃薯去皮,并切成薄片,立即放入水 中。否则马铃薯易氧化变黑。每200克马铃薯加 自来水1000 mL。80℃温水浸泡1小时,用纱布过 滤,然后稀释到1000 mL。15磅/寸2灭菌20分钟, 即为20%的马铃薯浸汁,贮存备用。
用锥形瓶分装培养基时,容量应不超过容积 的一半为宜。
图2-1 分装培养基
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2. 棉塞的制作 为了过滤空气,避免污染,试管或锥形瓶口需用棉花堵塞(脱脂棉易吸水,勿
用)。为了节省棉花或节省时间,在配置实验临时所用的无菌水和培养基时,也 可以用金属试管帽代替棉塞。装液体培养基的锥形瓶口,可包扎6-8层纱布以代 替棉花。 制作棉塞时,应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块,铺展于左手拇指和食指扣 成的圆孔上,用右手食指将棉花从中央压入圆孔中制成棉塞,然后直接压入试管 或锥形瓶口。也可借用玻璃棒塞入,也可以用折叠卷塞法制作棉塞(见图2-2)。
培养基灭菌及设备 PPT
3、N/N0 为灭菌程度的指标。 例如:培养基100m3,含菌105个/ml,,要求灭菌后存活菌数10-3个/罐,
则N0/N = (100×106×105 /10-3) = 1016,为计算方便,取 ln(N0/N )=36、8 分批灭菌过程:升温、保温和降温,灭菌主要是在保温过程中实现 的,在升温的后期和冷却的初期,培养基的温度特别高,因而对 灭菌也有一定贡献。
➢ 内部结构合理(主要是 无死角),焊缝及轴封装 置可靠,蛇管无穿孔现 象
➢ 压力稳定的蒸汽 ➢ 合理的操作方法。
发酵罐的接管图
(二)基础条件的确定
1、污染度N0 :一般假定位104~106个/ml 2、灭菌度N:实际计算时取N =10-3,即处理1000只有一个或微生
物(一般是针对周期长,成本高的发酵)。
t=t1+t2+t3
(三)灭菌效率的计算
1、分批灭菌的时期
若灭菌温度恒定为T,那么到规定灭菌度(N)
所需杀菌时间
1
2.303
t K ln(N0 / N S ) K lg(N0 / N S )
dN / dt KN AeE / RT . N
当灭菌℃随时间变化时,K也变化,则有
积分
ln( N0
/
NS)
A
t e E / RT dt
0
用V表示灭菌效果,则有 V总=ln(N0/NS)=V加+V保+V冷
升温、维持和冷却过程中灭菌效果分别为
V加
ln(N0 / N1 )
A
t1 e E / RT dt
0
V保
ln(N1 / N2 )
A
t2 e E / RT dt
0
KTt 2
则N0/N = (100×106×105 /10-3) = 1016,为计算方便,取 ln(N0/N )=36、8 分批灭菌过程:升温、保温和降温,灭菌主要是在保温过程中实现 的,在升温的后期和冷却的初期,培养基的温度特别高,因而对 灭菌也有一定贡献。
➢ 内部结构合理(主要是 无死角),焊缝及轴封装 置可靠,蛇管无穿孔现 象
➢ 压力稳定的蒸汽 ➢ 合理的操作方法。
发酵罐的接管图
(二)基础条件的确定
1、污染度N0 :一般假定位104~106个/ml 2、灭菌度N:实际计算时取N =10-3,即处理1000只有一个或微生
物(一般是针对周期长,成本高的发酵)。
t=t1+t2+t3
(三)灭菌效率的计算
1、分批灭菌的时期
若灭菌温度恒定为T,那么到规定灭菌度(N)
所需杀菌时间
1
2.303
t K ln(N0 / N S ) K lg(N0 / N S )
dN / dt KN AeE / RT . N
当灭菌℃随时间变化时,K也变化,则有
积分
ln( N0
/
NS)
A
t e E / RT dt
0
用V表示灭菌效果,则有 V总=ln(N0/NS)=V加+V保+V冷
升温、维持和冷却过程中灭菌效果分别为
V加
ln(N0 / N1 )
A
t1 e E / RT dt
0
V保
ln(N1 / N2 )
A
t2 e E / RT dt
0
KTt 2
培养基的制备和灭菌设备课件
培养基的制备和灭菌设备课件
目 录
• 培养基的制备概述 • 灭菌设备概述 • 培养基的制备技术 • 灭菌设备的操作和维护 • 培养基制备和灭菌实验 • 培养基制备和灭菌设备的安全与防护
01 培养基的制备概述
培养基的定义和种类
定义
培养基是指供微生物生长繁殖的,由 不同营养物质组合配制而成的营养基 质。
VS
预防措施
为预防设备事故的发生,应采取一系列预 防措施。如定期对设备进行检查、保养; 加强操作人员的培训,提高其操作技能和 安全意识;制定并执行严格的安全管理制 度,确保设备的安全使用。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
零部件更换
在设备使用过程中,如有零部件损 坏,应及时更换。更换零部件时, 应选用原厂配件,以确保设备的性 能和安全性。
事故应急处理和预防措施
应急处理
在设备使用过程中,如发生意外事故, 应立即切断电源,并采取相应的应急处 理措施。如火灾事故,应使用灭火器等 消防设备进行灭火;如人员伤害事故, 应立即拨打急救电话,进行紧急救治。
设备维护
除了日常的清洁外,还需要定期对灭菌设备进行维护。这包括更换磨损 的部件,检查并调整设备的性能,以确保其始终保持良好的工作状态。
05 培养基制备和灭菌实验
实验目的和原理
实验目的 学习和掌握培养基制备的方法和技术。
熟悉和掌握灭菌设备的操作原理和使用方法。
实验目的和原理
• 通过实验操作,验证培养基制备和灭菌的效果。
灭菌设备的选择和使用
选择依据:在选择灭菌设备时,需考虑物品的性质、灭 菌效果、操作简便性、成本等因素。 • 操作前应对设备进行检查,确保其正常运行。
• 注意设备的安全使用,避免烫伤、辐射等危险。
目 录
• 培养基的制备概述 • 灭菌设备概述 • 培养基的制备技术 • 灭菌设备的操作和维护 • 培养基制备和灭菌实验 • 培养基制备和灭菌设备的安全与防护
01 培养基的制备概述
培养基的定义和种类
定义
培养基是指供微生物生长繁殖的,由 不同营养物质组合配制而成的营养基 质。
VS
预防措施
为预防设备事故的发生,应采取一系列预 防措施。如定期对设备进行检查、保养; 加强操作人员的培训,提高其操作技能和 安全意识;制定并执行严格的安全管理制 度,确保设备的安全使用。
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零部件更换
在设备使用过程中,如有零部件损 坏,应及时更换。更换零部件时, 应选用原厂配件,以确保设备的性 能和安全性。
事故应急处理和预防措施
应急处理
在设备使用过程中,如发生意外事故, 应立即切断电源,并采取相应的应急处 理措施。如火灾事故,应使用灭火器等 消防设备进行灭火;如人员伤害事故, 应立即拨打急救电话,进行紧急救治。
设备维护
除了日常的清洁外,还需要定期对灭菌设备进行维护。这包括更换磨损 的部件,检查并调整设备的性能,以确保其始终保持良好的工作状态。
05 培养基制备和灭菌实验
实验目的和原理
实验目的 学习和掌握培养基制备的方法和技术。
熟悉和掌握灭菌设备的操作原理和使用方法。
实验目的和原理
• 通过实验操作,验证培养基制备和灭菌的效果。
灭菌设备的选择和使用
选择依据:在选择灭菌设备时,需考虑物品的性质、灭 菌效果、操作简便性、成本等因素。 • 操作前应对设备进行检查,确保其正常运行。
• 注意设备的安全使用,避免烫伤、辐射等危险。
微生物培养基的配制和灭菌 PPT课件
化學藥劑消毒滅菌: 微生物實驗室中常用的化學殺菌劑有升汞、甲醛、高錳酸鉀、酒 精、碘酒、龍膽紫、石炭酸、漂白粉、新潔爾滅、煤酚皂溶液, 它們有的是殺菌劑,有的是抑菌劑,詳見表6—4。
實驗程式18
(培養基和玻璃器材的滅菌方法)
思考題
固體培養基加瓊脂後加熱溶化時要注意哪些問 題? 培養基中加瓊脂的作用是什麼? 幹熱滅菌、高壓蒸汽滅菌和間歇滅菌的場合有 何不同? 如何檢查培養基滅菌是否徹底?
實驗程式16
(培養基和玻璃器材的滅菌方法)
實驗程式17
(培養基和玻璃器材的滅菌方法)
紫外線滅菌法: 一般30W燈管,9m3空間,距地面2m每次打開紫外線照射0.5h, 就使室內空氣滅菌。若照射紫外線時先噴灑石炭酸等化學消毒劑, 可增強滅菌效果。紫外線雖有較強的殺菌力,但穿透力弱,即使 一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除,因此只適用於空氣 及表面殺菌。
實驗程序
培養基的配製 分離培養微生物常用器皿的準備 培養基和玻璃器材的滅菌方法
實 驗 程 序1
(培養基的配製)
培養基的種類 培養基的配製方法和步驟 三種培養基的配方及配製 無菌水的製備
實 驗 程 序2
(培養基的種類)
據組成成分可分為:
1.合成培養基:由各種純化學物質按一定比例配製而成。 2.半合成培養基:有一部分純化學物質和另一部分天然物質配製 而成。 3.天然培養基:利用天然來源的有機物配製而成。
實 驗 程 序9
(三種培養基的配方及配製)
澱粉瓊脂培養基(高氏一號Gause´1),用於分離 和培養放線菌,是一種合成培養基。配方如下:
可溶性澱粉
KNO3 K2HPO4 MgSO4• 7H2O NaCl FeSO4• 7H2O 瓊脂 自來水
實驗程式18
(培養基和玻璃器材的滅菌方法)
思考題
固體培養基加瓊脂後加熱溶化時要注意哪些問 題? 培養基中加瓊脂的作用是什麼? 幹熱滅菌、高壓蒸汽滅菌和間歇滅菌的場合有 何不同? 如何檢查培養基滅菌是否徹底?
實驗程式16
(培養基和玻璃器材的滅菌方法)
實驗程式17
(培養基和玻璃器材的滅菌方法)
紫外線滅菌法: 一般30W燈管,9m3空間,距地面2m每次打開紫外線照射0.5h, 就使室內空氣滅菌。若照射紫外線時先噴灑石炭酸等化學消毒劑, 可增強滅菌效果。紫外線雖有較強的殺菌力,但穿透力弱,即使 一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除,因此只適用於空氣 及表面殺菌。
實驗程序
培養基的配製 分離培養微生物常用器皿的準備 培養基和玻璃器材的滅菌方法
實 驗 程 序1
(培養基的配製)
培養基的種類 培養基的配製方法和步驟 三種培養基的配方及配製 無菌水的製備
實 驗 程 序2
(培養基的種類)
據組成成分可分為:
1.合成培養基:由各種純化學物質按一定比例配製而成。 2.半合成培養基:有一部分純化學物質和另一部分天然物質配製 而成。 3.天然培養基:利用天然來源的有機物配製而成。
實 驗 程 序9
(三種培養基的配方及配製)
澱粉瓊脂培養基(高氏一號Gause´1),用於分離 和培養放線菌,是一種合成培養基。配方如下:
可溶性澱粉
KNO3 K2HPO4 MgSO4• 7H2O NaCl FeSO4• 7H2O 瓊脂 自來水
常用培养基的制备、灭菌与消毒幻灯片PPT
2、制备污水稀释液:10g土样,参加90ml 无菌水中,在三角瓶中振摇20min。取0.5ml 参加 盛有4.5ml无菌水的试管中,以此类推,制成不同稀 释度。
3、涂布:将上述每种培养基平板底面标记 稀释度,然后用无菌吸管从最后三种稀释度,即104、10-5和10-6的试管中吸取0.1ml对号放入平板上, 用玻棒涂布。
护剂的使用。
5、真空枯燥法 这类方法包括冷冻真空枯燥法和L-枯燥法。 冷冻真空枯燥法是将要保藏的微生物样品先经低温预冻,然
后在低温状态下进展减压枯燥。 L-枯燥法那么不需要低温预冻样品,只是使样品维持在10
-20C˚范围内进展真空枯燥。
操作方法
1、斜面保藏法
将菌种转接在适宜固体斜面培养基上, 待其充分生长后,用牛皮纸将棉塞局部包 扎好〔棉塞换成胶塞效果更好〕,置4C˚ 冰箱中包藏。
2、热空气灭菌利用高温枯燥空气〔160-170C〕 加热灭菌1-2h,适用于玻璃器皿和培养皿等。 原理加热使蛋白质变性,与水的含量有关,当 环境和细胞含水量越大,凝固越快。
3、本卷须知:
1〕培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法;
2〕温度控制在<180°;
3〕物品不能太挤;
4〕温度降至70°时才开箱门。
微生物培养技术 1、斜面接种 2、液体培养基接种 3、穿刺接种 4、将已接种的斜面、半固体和液体培养
基放置培养箱中培养 5、将生长好的菌种用牛皮纸包好,置4℃
冰箱中保存。
实验三、菌种保藏
几种常用的保藏方法: 1、传代培养法
保藏的菌种通过斜面、穿刺或 疱肉培养基〔用于厌氧细菌〕培养好 后,置4C˚冰箱中存放,定期进展传代 培养、再存放。
1〕冷空气彻底排除;2〕加水;3〕压力降为“0〞时方 可翻开。
3、涂布:将上述每种培养基平板底面标记 稀释度,然后用无菌吸管从最后三种稀释度,即104、10-5和10-6的试管中吸取0.1ml对号放入平板上, 用玻棒涂布。
护剂的使用。
5、真空枯燥法 这类方法包括冷冻真空枯燥法和L-枯燥法。 冷冻真空枯燥法是将要保藏的微生物样品先经低温预冻,然
后在低温状态下进展减压枯燥。 L-枯燥法那么不需要低温预冻样品,只是使样品维持在10
-20C˚范围内进展真空枯燥。
操作方法
1、斜面保藏法
将菌种转接在适宜固体斜面培养基上, 待其充分生长后,用牛皮纸将棉塞局部包 扎好〔棉塞换成胶塞效果更好〕,置4C˚ 冰箱中包藏。
2、热空气灭菌利用高温枯燥空气〔160-170C〕 加热灭菌1-2h,适用于玻璃器皿和培养皿等。 原理加热使蛋白质变性,与水的含量有关,当 环境和细胞含水量越大,凝固越快。
3、本卷须知:
1〕培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法;
2〕温度控制在<180°;
3〕物品不能太挤;
4〕温度降至70°时才开箱门。
微生物培养技术 1、斜面接种 2、液体培养基接种 3、穿刺接种 4、将已接种的斜面、半固体和液体培养
基放置培养箱中培养 5、将生长好的菌种用牛皮纸包好,置4℃
冰箱中保存。
实验三、菌种保藏
几种常用的保藏方法: 1、传代培养法
保藏的菌种通过斜面、穿刺或 疱肉培养基〔用于厌氧细菌〕培养好 后,置4C˚冰箱中存放,定期进展传代 培养、再存放。
1〕冷空气彻底排除;2〕加水;3〕压力降为“0〞时方 可翻开。
培养基的制备及消毒与灭菌ppt实用资料
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• 在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时,灭菌锅内冷空 气的排除是否完全极为重要,因为空气的膨胀 压大于水蒸气的膨胀压,所以,当水蒸气中含 有空气时,在同一压力下,含空气蒸气的温度 低于饱和蒸气的温度。
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不能灭菌的物质:
• 硝化丙烷 、硝化甘油、硝化纤维,含氮硅酯。 • 三硝基苯、三硝基甲苯、苦味酸、和其它爆炸性
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牛肉膏蛋白胨培养基的制备
❖ 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普 通的细菌基础培养基;
❖ 牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维 生素;
❖ 蛋白胨主要提供氮源和维生素; ❖ NaCl提供无机盐; ❖ 在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝
固剂; ❖ 用稀酸稀碱将其pH调至中性或微碱性。
• 要检查压力表上的指数为“0Mpa”后才能打开 锅盖。
• 外来物质(金属、液体)不能堵塞通风孔,否则 会引起装置故障、起火、短路。
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一般培养基用0.1Mpa,121.5℃,15~ 30min可达到彻底灭菌的目的。灭菌的温度 及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等 具体情况而有所改变。例如含糖培养基用 0.06Mpa,112.6℃灭菌,然后以无菌操作手 续加入灭菌的糖溶液。又如盛于试管内的 培养基以0.1Mpa,121.5℃灭菌20min即可, 而盛于大瓶内的培养基最好以0.1Mpa, 122℃灭菌30min。
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半合成培养基
❖ 在以天然有机物作为微生物营养来源的同时,适 当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基 叫半合成培养基。大多数微生物都能在此种培养 基上生长,应用广泛。
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2 连续灭菌
连续灭菌:将配制好的培养基在向发酵 罐等培养装置输送的同时进行加热、保 温和冷却而进行灭菌。
流程1:连续灭菌基本流程
流程2:喷射加热连续灭菌流程
流程3:薄板换热器连续灭菌流程
又称实罐灭菌:将配制好的培养基放在 发酵罐或其它容器中,通入蒸气将培养 基和所用设备一起灭菌的操作过程。
间歇灭菌的操作(如图):发酵 罐的空气分过滤器灭菌并用空气 吹干,进料完毕,开搅拌以防料 液沉淀。开夹套蒸气阀,使料液 预热升温至80℃,关闭夹套蒸气 阀门,开空气、出料、取样阀门 进蒸气,开排汽阀,包括小辫子 (进料管、补料管、接种管和排 汽管)。当升温至110℃左右,控 制进出汽阀门直至温度121 ℃,保 温30min,保温结束,关过滤器排 气阀、排汽阀、进汽阀,关夹套 下水道阀,开冷却水进回水阀。 待罐压低于过滤器压力时,开空 气进气阀通入无菌空气,通入冷 却水,将培养基温度降至培养温 度。
图为加热器,由三层直径 不同的套管组成,内层和 中层管壁钻有小孔,各层 套管用法兰连接。粉浆流 经中层管,高压加热蒸气 从内外两层进入,穿过小 孔向粉浆液流喷射。
(三) 真空冷却器
料液以切线进入,由于器内 为真空,醪液产生自蒸发, 产生大量的二次蒸气,醪液 在器内旋转被离心甩向周边 沿壁流下,从锥底排醪液口 排出。二次蒸气从器顶进入 进入冷凝器,在冷凝器内与 水直接接触而被冷凝,不凝 性气体由真空泵或蒸气喷射 泵抽走,造成器内真空。
作用:用来加热煮沸辅助原料和部分麦 芽醪液,使其淀粉液化和糊化。
构造
粉碎后的大米粉、麦芽粉 和热水由下粉筒3及进水管 混匀后送入,借助旋桨式 搅拌器8的作用,使之充分 混合。气升筒下部的环形 槽14是收集从气升筒内壁 流下的污水,经排出管排 出锅外。风门15的开启程 度用于控制醪液升温或煮 沸情况。
(二 )蒸煮设备 主要有罐式和柱式连续蒸煮设备。
罐式蒸煮设备有高温和低温蒸煮,具有设 备简单,操作容易等特点。
图为蒸煮罐,粉浆用往复 泵由下端中心进料口压入 罐内,被加热蒸气口2喷 出的蒸气加热到蒸煮温度, 经加热的醪液从管3流入 后熟器
注意:加热罐和后熟器的 直径不宜太大,以保证醪 液先进先出。
若干部分。隔板上的孔上下交错地配置,隔板固定在两 根水平秆上,能与杆一起装卸,以便清理,并可以从管 子中取出来。 安装时,通常出口的一端向下倾斜。 特点:混合效果较好,没有搅拌器,节省动力。
2.立式糖密连续稀释器
为圆筒形器身,上、下封头 为锥形。
该器的下部有两个连接管: 一个进糖蜜,另一个进热水, 流过最下面的一个中心有圆 形孔的隔板又进入冷水与糖 液混合。
四 液体培养基的灭菌
(一)灭菌的原理和方法 (二)培养基热灭菌的动力学 (三)培养基灭菌
(一) 灭菌的原理和方法 灭菌:利用物理或化学方法杀灭或除去
物料及设备中一切有生命物质的过程。 表1列出各种灭菌方法的特点及适用范围
(二)培养基热灭菌的动力学 1.对数残留公式
-dN/dτ=kN 负号表示活菌数减少。 式中 N——为培养基活菌的个数;
图为快速过滤槽,是一种在低 真空下操作的新型糖化醪过滤 设备。
在槽身的下部装有5-7层呈 网状而互相沟通的过滤管,上 有条形滤孔,每一层过滤管为 一独立的过滤单元。过滤时先 把糖化醪用泵输送到已用热水 预热过的过滤槽中,醪液通过 两个分配器均匀分布到槽内, 在滤管上形成滤层。当醪液没 过滤管后,开始用泵抽滤。开 始流出的麦汁比较混浊,用泵 返回过滤槽,待麦汁清亮透明 后送入麦汁煮沸锅。
τ——灭菌时间(s); k——反应速率常数,其因次是时间 的倒数 (s-1)、(min-1)
2 .理论灭菌时间
τ =2.3031/k logN0/Ns
式中 N0———灭菌开始时,污染的培养基中杂菌 个数(个/mL)
Ns——经灭菌时间τ后,残存活菌个数(个/ mL)
(三)培养基的灭菌
1. 间歇灭菌
(四 )糖化设备
1 连续糖化罐
目的:将已降温至60-62℃ 的糊化醪与糖化醪液或曲乳混 合, 60℃维持30-45min, 保持流动状态,使淀粉在酶的 作用下变成发酵性糖。
它可连续地把糊化醪与水稀释, 同时将糖化剂混合,通过维持 一定的温度和时间,保持流动 状态,使酶充分发挥作用。设 有自动控制液面的装置,保证 糖化醪的容量不变。
里面有7-8块具有半圆形缺口 的隔板交错配置,即圆形缺 口在左,一个半圆形缺口在 右,这样液体呈湍流运动, 使糖密和水更好地混合。
稀释器总高度为1.5m,用45mm钢板制成,
1.隔板 2.固定杆
二、淀粉质原料的蒸煮糖化设备
(一) 淀粉质原料蒸煮糖化目的: 1 将不溶性淀粉变成可溶性淀粉 2 灭菌
第四章 培养基的制备及灭菌设备
一、糖蜜原料的稀释与澄清 二、淀粉质原料的蒸煮糖化设备 三、啤酒生产中麦芽汁的制备 四、液体培养基的灭菌
一、糖蜜原料的稀释与澄清
(一)间歇式糖蜜稀释器 为一敞口容器,稀释罐内进行,内有搅拌
器。 (二)连续式糖蜜稀释器 1.水平式糖蜜连续稀释器
结构: 圆筒形水平管子,沿管长装置若干隔板和筛板,分成化锅
作用:使麦芽粉与水混 合,保持一定温度进 行蛋白质分解和淀粉 糖化。
(四) 麦汁煮沸锅
作用:
用于麦汁的煮沸和浓缩, 使麦汁达到要求的浓度;
浸出酒花的苦味及芳香物 质;
凝固蛋白质、灭菌、灭酶。
(五 )糖化醪过滤槽
作用:澄清麦汁
图为过滤槽,常压过滤 设备,平底上带有滤板 的夹层。过滤槽平底上 方8-12cm处水平铺设 过滤筛板。槽中设有耕 槽机,用以疏松麦糟和 排出麦糟。
连续糖化罐一般在常压下操作, 多采用密闭式以免染菌。
三、 啤酒生产中麦芽汁的制备
(一) 啤酒厂糖化设备的组合方式 四器组合:糊化锅、糖化锅、过滤槽(或
压滤机)和麦汁煮沸锅。 六器组合:在四器组合的基础上,增加一
个过滤槽和一个麦汁煮沸锅。 二器组合:糖化锅兼麦汁过滤槽和糊化锅
兼煮沸锅。
(二 )糊化锅