(019)初始污染菌检验规程

文件编号：XX/TF/PZ/019—2010页码：第1页共5页

1、目的

通过检验产品的初始污染菌，了解产品在生产过程中受微生物的情况，以便更好地提高产品质量。

2、范围

本方法适用于本公司生产的一次性使用静脉输液针（简称：输液针）、一次性使用无菌配药注射器带针（简称：配药注射器）、一次性使用无菌注射器带针（简称：注射器）、一次性使用输液器带针（简称：输液器）、一次性使用袋式输液器带针（简称：袋式输液器）及其配件、无菌产品初始包装等的初始污染菌的检验。

3、依据

GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准

中华人民共和国药典2010版第二部

GB 8368 一次性使用输液器

GB/T 19973.1-2005 （ISO 11737-1:1995）医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分:产品上微生物总数的估计

GB 15980 一次性使用医疗用品卫生标准

4、要求

灭菌产品管道类内腔污染菌数：应≤10cfu/件次，外部应≤100cfu/件次；非管道类应≤100cfu/件次；敷料类应≤100cfu/g；消毒产品应≤1000cfu/件次或重量（g），具体见表1。

表1

初始污染菌含量

产品名称

内腔污菌数外表面污染菌数注射器或配药注射器

输液器、袋式输液器

≤10cfu/件次≤100cfu/件次输液针

无菌产品初始包装≤100cfu/件次或重量

（g）

注射针≤100cfu/件次

5 检验方法

5.1卵磷脂、吐温80－营养琼脂培养基的配制：

成份：

蛋白胨 20 g

牛肉膏药 3 g

氯化钠 5 g

琼脂 15 g

文件编号：XX/TF/PZ/019—2010页码：第2页共5页卵磷脂肪 1 g

吐温80 7 g

蒸馏水 1000 g

制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分(除琼脂外)加到其余的蒸馏水中，溶解。加入已溶解的卵磷脂、吐温80，混匀，调pH值为7.1～7.4加入琼脂，121℃高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。

5.2 样品采样数量：各类产品每批随机抽取10件样品。

5.3 供试液制备

5.3.1.供试品是敷料、可以破坏性类可用无菌手续称取10g,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为1：10的供试液。

5.3.2.供试品是液体取10ml加至100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为1：10的供试液。

5.3.3.对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积为100cm2，加入灭菌生理盐水100ml。作为1：10的供试液。

5.3.4.可用破坏性方法取样供试品：（参照中华人民共和国药典2005年规定进行)

5.3.5 供试品为输液器（或袋式输液器）及注射器（或配药注射器）产品的供试液制备

5.3.5.1内腔供试液制备：每套输液器内腔注入20mL（袋式输液器注入量为280 mL）灭菌生理盐水,振摇5次，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。作为1：1的供试液。每支注射器抽取灭菌生理盐水至公称容量，振摇5次，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。作为1：1的供试液。

5.3.5.2外部供试液制备：按产品外表面积每10cm2用1mL的灭菌生理盐水冲洗（可用无菌棉拭子沾无菌生理盐水在输液器表面往返涂抹10次后，将棉试子放入10ml灭菌生理盐水的试管中,将试管震打80次混匀作为供试液），汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。作为

1：1的供试液。

5.3.6 供试品为注射针或溶药针产品的供试液制备

除去单包装，内外表面积每10cm2用10mL的灭菌生理盐水冲洗，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中[或将1支注射针直接完全浸入10mL无菌、无热原的生理盐水中每支注射针内外表面积约5cm2）]。作为1：20的供试液。

5.3.7 供试品为输液针产品的供试液制备

5.3.7.1内腔供试液制备：每支输液针内腔缓慢注入5 mL灭菌生理盐水，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。作为1：5的供试液。

5.3.7.2 外部供试液制备：除去单包装，外表面积每10cm2用10mL的灭菌生理盐水冲洗，汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。作为1：10的供试液。

5.3.8 供试品为扩张器产品及无菌产品初始包装的供试液制备

文件编号：XX/TF/PZ/019—2010页码：第3页共5页按产品外表面积每10cm2用1mL的灭菌生理盐水冲洗（可用无菌棉拭子沾无菌生理盐水在产品内表面往返涂抹10次后，将棉试子放入10ml灭菌生理盐水的试管中,将试管震打80次混匀作为供试液），汇聚在一无菌及无热原的烧杯中。作为1：1的供试液。

5.4 移至培养基（平板倾注法）

将每样取3份平行样，每个稀释级各吸取1ml（不超过45℃）至每个灭菌平皿，也就是每个稀释级注3个平皿。经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至45～50 ℃时，倾注上述各个平皿15ml，另倾注一个不加样品灭菌空平皿作空白对照。以顺时针或逆时针方向快速转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。冷却后将已经凝固的平板倒置于37℃培养箱中，一般培养48±2h。

注：对于液体基质中含有杀灭或抑制微生物时，采用0.45µm孔径滤膜过滤，再将滤膜移至培养基平皿中，具体详见GB/T 19973.1-2005中A.4.2.6.2膜过滤法（薄膜过滤器。国产的价格大概500元左右，全套的话可能要在1000~2000.1.供试液制备：取定量或定重的样品，浸泡至一定量的浸提液（0.9%无菌氯化钠溶液或者

pH=7.0蛋白胨-氯化钠溶液）中，浸提30min，此溶液即为供试液。2.将薄膜过滤器的薄膜用0.9%无菌氯化钠溶液浸湿，然后将浸提液无菌操作倒入过滤器中过滤，在完全滤完前，倒入一定量的0.9%无菌氯化钠溶液作为冲洗液。3.取出滤膜，贴在营养琼脂培养基上，倒置培养。这个主要是基本步骤，根据不同情况还有其它问题。可以参考中国药典2005年版附录无菌检查法）。

5.5计数方法：将平板置菌落计数器或从平板的背面直接以肉眼用标记笔点计，以投射光衬以暗色背景，仔细观察，计数。必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。

菌落特征：⑴形态特征：常为白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、淡黄色（如果培养基中加入0.1%TTC试剂，菌落为红色）

⑵边缘整齐或不整齐，表面有光滑、粗糙，皱褶、突起或扁平。

⑶大小差异很大。

5.6计算公式为：

平均菌数×稀释倍数

菌数/每件次（或g）=

件次或重量（g）

6 检验规则

6.1 若每个平行样中无菌或菌落数小于或等于表1时，则报出菌数符合规定。

6.2 产品的初始污染菌是为一次/周。

6.3 产品取样应在完成整个包装过程以后，而又在灭菌前从大包装内取；对零组件取样应在流入下道工序之前取样。

7．注意事项

7.1供试品的取样必须在万级环境中100级净化条件下，无菌操作，防止污染。

7.2应严格遵守无菌操作，同时消除抑菌成份的干扰。

7.3 外部污染菌数超标一般为工人的的手污染菌数超过300cfu/只手或操作台面污染菌数