小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
小鼠骨髓细胞染色体
实验步骤
预处理——取股骨——冲洗骨髓——离 心——低渗——离心——固定——离心——
滴片——染色——观察
1. 取材及前处理：取健康小白鼠（约65-90天龄）， 腹腔注射0.1%秋水仙素溶液0.1ml，剂量为 4ml/Kg动物体重 2. 取骨髓：将已用秋水仙素前处理的小白鼠，经过 2-3小时后，用损伤脊椎法处死小白鼠，立即取出 两侧股骨，把肌肉刮净，然后从骨股两端关节处 剪下，用2%柠蒙酸钠溶液洗净骨股上的血污及肌 肉残渣，剪去骨股两端膨大的关节头，使其露出 骨髓，然后用吸有3-5ml2%柠檬酸钠溶液的注射 器，从股骨的一端插入针头，往骨髓内冲洗多次， 直至股骨断面变成粉白色为止，可多剪几个断面 反复冲洗，这样制备了骨髓细胞悬浮液，也可用 眼科镊子小心地取出骨髓，置于有少量柠檬酸钠 溶液培养皿中捣碎，然后再加入2%柠檬酸钠溶液 适量，制成3-5ml骨髓细胞悬液
骨髓细胞染色体的制备与观察
2010级生物技术专业——冯德
实验目的 实验原理
实验用品 实验方法
实验目的
初步掌握小白鼠骨随细胞染色体的制 备方法，计算骨髓细胞分裂中期的分裂相 的染色体数目并观察端着丝点的形态特 点．
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞能生成 各种血细胞和原始细胞，具有较高的分裂 能力。本实验采用这一材料，通过前处理， 低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色 体标本，可观察到许多处于分裂中期的染 色体
3.
பைடு நூலகம்1.
低渗处理：用吸管将骨髓细胞悬液移入带刻度离心管 内，1000rpm离心10分钟，吸去上清液。加入0.075M氯 化钾溶液5ml立即将细胞团吹打均匀，置37℃水浴25-30 分钟 4. 预固定、固定：经低渗处理后的细胞，加入卡诺氏 固定液5-6滴搅拌均匀进行预固定10分钟，然后以 1000rpm离心10分钟，此为第一次固定然后以同法离心， 弃上清液，仅留约0.2-0.3ml的细胞团与部分上清液，吹 均匀制成细胞悬浮液涂片观察。如果细胞分散的不好， 可再按上述方法再固定1-2次，使染色体进一步分散 气干法制片：取预先冰冻的载玻片，滴2-3滴细胞 悬浮液于其上，立即吹气均匀打散、过火、置室温中自 然干燥
小鼠骨髓染色体标本的制备(共5张PPT)
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦去附 着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注射器吸取 KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗，用离心管接收 冲洗液。
2、低渗处理：加KCL至2/3管，用吸管打匀使细胞悬浮于低渗液中，放入
4．离3心：72℃000恒转/分温，离水心5浴min锅，弃中上清，液，静留下置沉淀2物5。min。（吹打不宜过猛） 345678．．、、、、预离固再再制固 心 定 固离片定：：定心：：沿：2：用0加离再02滴00入心加转0管固管入0/吸转分定壁固细/，液加定分胞离入 液5，滴心悬固2离－吹5定液心m3打液，滴i5混n5m，从，m匀打i2弃nl。打0匀，上－匀。弃清3，上0液室c清，m温液留高下，下度固沉留定滴淀下1在物0沉冰m。淀i水n物。预。浸泡的 548394043335130230581168331093091477777、 ． 、 ． 、 ． ． ． ． ． 、 、 ． 、 、 、 、 、 、 ． ． 、 、 ． 、 、 ．55555固离制预染离离预预预固取预低预固制取取再制预预取染预染取离mmmmmooooo定心片固色心心固固固定材固渗固定片材材离片固固材色固色材心lllll/////：：：定：：：定定定：定处定：：：：心：定定：：定：：：LLLLL)))))溶溶溶溶溶沿2用：G22：：：沿以：理：沿用以以：用：：以G：G以20000iii液 液液液液离滴加加加加离颈加：加离滴颈颈滴加加颈加颈2eee0000mmm00000， ，，，，心管入入入入心椎入加入心管椎椎管入入椎入椎0转转转转sss0将 将将将将aaa管吸固固固固管脱固固管吸脱脱吸固固脱固脱K///转/染染染分分分分C针 针针针针壁细定定定定壁臼定定壁细臼臼细定定臼定臼/L液液液，，，分，头 头头头头至加 胞 液 液 液 液 加 法 液 液 加 胞 法 法 胞 液 液 法 液 法染染染离离离，离插 插插插插2入悬入处入悬处处悬处处555555555色色色/心心心离心滴滴滴滴滴滴滴滴滴3入 入入入入固液固死固液死死液死死管777555心5吹吹吹吹吹吹吹吹吹骨 骨骨骨骨定，定小定，小小，小小mmmmmmm，5打打打打打打打打打iiii髓 髓髓髓髓液从液鼠液从鼠鼠从鼠鼠miiinnnnnnn用混混混混混混混混混，，，，、、、i腔 腔腔腔腔，，，，，525522n吸mmm0匀匀匀匀匀匀00匀匀匀弃弃弃，弃细细细上 上上上上取取取取取－－－管lll。。。。。。。。。打打打上上上弃上水水水段 段段段段两两两两两333打匀匀匀清清清上清000冲冲冲冲 冲冲冲冲腿腿腿腿腿ccc匀，，，液液液清液mmm洗洗洗洗 洗洗洗洗股股股股股使高高高室室室，，，液，、、、， ，，，，骨骨骨骨骨细度度度温温温留留留，留晾晾晾用用 用 用 用，，，，，胞滴滴滴下下下下下下留下干干干离 离离离离剔剔剔剔剔悬在在在固固固沉沉沉下沉。。。心 心心心心净净净净净浮冰冰冰定定定淀淀淀沉淀管 管管管管肌肌肌肌肌于水水水111物物物淀物接 接接接接肉肉肉肉肉000低预预预。。。物。mmm收 收收收收，，，，，渗iii浸浸浸。nnn冲 冲冲冲冲擦擦擦擦擦。。。液泡泡泡洗 洗洗洗洗去去去去去中的的的液 液液液液附附附附附，洁洁洁。 。。。。着着着着着放净净净在在在在在入载载载上上上上上3玻玻玻7面面面面面℃片片片的的的的的恒上上上血血血血血温，，，污污污污污水立立立，，，，，浴即即即剪剪剪剪剪锅用用用取取取取取中口口口两两两两两，吹吹吹端端端端端静散 散 散股 股 股 股 股置，，，骨骨骨骨骨2在在在头头头头头5m酒酒酒，，，，，i精精精n暴暴暴暴暴。灯灯灯露露露露露上上上骨骨骨骨骨过过过髓髓髓髓髓几几几腔腔腔腔腔次次次，，，，，或或或用用用用用吹吹吹注注注注注风风风射射射射射机机机器器器器器吹吹吹吸吸吸吸吸干干干取取取取取。。。KKKKKCCCCCLLLLL(((((00000..... 洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风机吹干。 5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
滴片：
➢滴2~3滴于玻片上，吹气， ➢在酒精灯火焰过火8次， ➢做记号，凉干，染色
滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，10~15分 钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。
作业与思考题
• 1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染 色体中期分裂相。
• 2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各 起什么作用？
15
9+16+15=40
4.细胞增殖指数统计
细胞增殖指数=
分裂细胞数
×100%
分裂细胞数+间期细胞数
实验三 细胞器的观察
一、中心体 二、高尔基体
一、中心体（4×10）
• 马蛔虫子宫横切片全貌
中心体（10×10）
中心体（40×10）
二、高尔基体（4×10）
脊神经节切片
高尔基体（10×10）
2.了解小鼠染色体核型。
3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。
• 器材与试剂
• 内容与方法
（一）小鼠骨髓细胞染色体制备
预处理
取材，收集细胞
低渗
染色
滴片
固定、再固定
❖取材前2～3h，向腹腔 内注射秋水仙素。注射 浓度随动物种类不同而 异。秋水仙素的主要作 用是使分裂细胞阻断在 有丝分裂中期，增加中 期分裂相的比例。
• 3、简述实验中应注意那些关键问题？
（二）染色体标本片观察 1.标本片质量评价 （1）细胞密度合适、均匀； （2）背景干净，细胞核和染色体清晰； （3）有较多的分裂相； （4）染色体分散较好。
细胞密度
染色体 分散度
2.染色体形态特征观察
3.染色体计数
40
10
（100×10）
高尔基体（40×10）
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察ppt课件
9．在干净、湿冷的载玻片上以高距离滴2～3 滴上层细胞悬液，气干或在酒精灯上文火 烘干。注意在滴片时要有一定的高度（大 于40cm），使细胞膜破裂后易于使染色体 散开，并尽量使滴片上的细胞分布均匀， 不要重叠。
10．气干，染色。 在一块洁净的玻板上，将玻片标本有细胞的一面 朝下用牙签架空于玻板上。 11．用滴管将配好的染液充满于玻板与载玻片之间 的空隙中，注意载片上有细胞面的进行染色并在 滴加染液时注意排除气泡。视室温而定，染色15 分钟。 12．染色后，轻轻揭起玻片，倾斜玻片在自来水管 下细水流冲洗数秒，冲掉染液，擦干玻片标本底 面和四周，显微镜观察和分析。注意不要搞错沾 有细胞的一面。选择染色较好、较分散、形态清 晰的细胞分裂相，进行显微观察。
小鼠骨髓细胞染色体 标本的制备与观察
实验目的：
1．初步掌握动物骨髓细胞染色体的制备方法。 2．了解小鼠骨髓细胞染色体的形态特点。Fra bibliotek实验原理：
染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定 形式，是染色质紧密包装的结果。染色体 是有机体遗传信息的载体，对染色体的研 究在生物进化、发育、遗传和变异中有十 分重要的作用。
谢 谢 大 家
核型分析均是以中期染色体为标准，对制 作出的染色体标本进行照相以获得染色体 的显微图像，并将其剪裁排列即成，或用 专用软件进行分析排列。 凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各 种处理后，细胞就可进入分裂期此时均可 用于染色体分析。
在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的 组织之一。此时给动物注射一定剂量的秋 水仙素可使许多处于分裂的细胞停滞于中 期（ 秋水仙素可阻断纺锤丝微管的组装）， 然后采用常规空气干燥法制备染色体，即 可得到大量可供分析的染色体标本。本方 法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌 操作。
试验六 小白鼠骨髓细胞染色体制备及观察
小白鼠的保定和注射
五．结果与讨论
1．结果： （1）．选取分散良好的染色体绘实物图，上 传图片1幅）。 （2）．染色体计数（2n=40）。 2．讨论： （1）．实验前注射秋水仙素的作用？不作此 步会怎样？ （2）．为何要用冷冻片？烘烤片的作用？
小鼠骨髓细胞染色体
试验六 小白鼠骨髓细胞染色 体制备及观察
一．实验目的：
1．学习小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
2．观察骨髓细胞染色体，计数染色体。
二．原理：
活跃增值的组织细胞内染色体可用于制片分 析，秋水仙素（或以对二氯苯代之）可使 细胞分裂停滞于分裂中期，经染色处理， 可得到清晰的中期染色体标本。
三．材料试剂
1．材料：小白鼠；ห้องสมุดไป่ตู้
2．试剂：Giemsa染色液，0.4％KCl，2％柠 檬酸钠，固定液（甲醇：冰乙酸＝3：1）。
四．操作步骤
1．实验前4－8h小鼠腹腔注射秋水仙素1ml （0.14mg/ml）,(据小鼠体重用量调整)或1ml饱和 对二氯苯。 • 2．脱臼处死小鼠，取后肢胫骨和股骨，去两端。 用细针头注射器吸取2％柠檬酸钠1ml，反复冲洗 骨髓腔5次，将冲洗液（离心管中）加入0.4%KCl 低渗10min（8ml,37℃）。
• 3．离心（1000rpm，8min）,去上清液，加固定 液5ml（注意缓慢加入）。充分吹打，使沉淀块 分散，静置10min，再离心10min，弃上清液， 重复一次。
4．用约2ml固定液悬浮骨髓细胞成悬液（依 沉淀量定）。
5．取冷冻载片，距载片15cm高度滴下悬液 （取悬液前吸打均匀），单向吹气展开， 酒精灯上文火烘干。
小鼠染色体
7.滴片：将预冷的载玻片（0℃冰浴），水平或倾斜45°角放置，用吸管吸取细胞悬液，从约0.5 -1m高处滴1~2滴到片子上，用口将其吹干，静置使其干燥。
8.染色：将干燥的玻片放入2ml吉姆萨原液加入40ml磷酸缓冲液（pH6.8）配成的染液中染色20min，用磷酸缓冲液（pH6.8）冲洗高倍镜和油镜观察染色体形态，统计染色体数目。可见小鼠的40条染色体呈紫红色。
三、实验小结
四、
（一）思考题
1、统计小鼠2N染色体数目，仔细观察其形态特征。
答：小鼠体内2n染色体数目为40条，形态上多为中部着丝粒染色体。
2.低渗液起什么作用，在使用过程中应注意什么问题？
答：低渗液的作用是使细胞充分吸水膨胀而不破裂，从而一直保持在胀得很大而又没有破裂的状态。进而使得细胞内的中期染色体就能够足够分散开来，从而使得经固定等步骤后仍然处于膨胀状态。之后经过滴片时的摔打和骤降温过程，使细胞及其核很快破碎，染色体进一步分散开。在滴片的时候就能够获得一团仅属于一个细胞的分散的中期染色体的片子，易于在显微镜下观察和对染色体进行计数。使用时应该十分注意适当的低渗时间和温度，以及低渗液的浓度。
（二）注意事项
1、处死小鼠的时候要果断。这次实验采用断颈法杀死小鼠，按住头部后要用力拉。出于人道主义和对实验对象的尊重，我们都应该让小鼠在最少的折磨中死去。
2、取骨后要清理干净。
3、注射低渗液的时候要注意看，如果液体从针头入口出来，说明头没有剪开，应该再剪一次。
4、低渗液处理时间可以长一点。
5、第二次加固定液是1ml而不是书上写的5ml，实验结果，加1ml和加5ml区别不大，但从节约的角度，选取1ml。
实验小鼠骨髓染色体制备和观察
8.小鼠染色体观察： 低倍镜、高倍镜下寻找染色体分散的中
期分裂相.
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
小鼠骨髓染色体 10 ×10
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小鼠骨髓染色体 10 ×40
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
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➢ 数目观察：小鼠2倍体细胞染色
体，数目2n=40条。其中19对为常染 色体，一对为性染色体，染色体的核 型分为4组。雄性 XY, 雌性XX,Y染 色体最小。
➢形态特征观察：端着丝粒染色体
“U”“V”。
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五、注意事项
1．掌握好秋水仙素的浓度和处理时间； 2．离心前需要配平； 3. 小鼠骨髓要冲洗干净，以收集足够的骨髓细胞； 3．低渗处理是实验成败的关键，注意低渗时间； 4．固定液要现配现用，固定要充分； 5．载玻片要洁净并预冷，滴片要有一定的高度； 6. 细胞悬液不能太稀，要呈乳白色； 7. 烤片时温度不能太高。 8. 冲洗染液时水流要缓慢，以免细胞流失过多。
放出来。
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秋水仙素处理：秋水仙素溶液可抑制纺锤体的形 成，使正在分裂的骨髓细胞停止在细胞分裂中期， 积累大量中期分裂相细胞。
低渗作用: 使细胞充分膨胀，减少染色体间的相互 缠绕和重叠。
预固定：终止低渗作用，使细胞离心时不易破裂 ，固定维持细胞形态结构。
高距离滴片：使细胞膜易于破裂，获得中期染色 体标本，在显微镜下观察染色体的结构和数量。
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三、实验器材和试剂
• 1.器材 蜡盘、手术剪、小镊子、平皿、注射
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察试验目的把握动物骨髓染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理试验原理小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂力量，本试验采纳这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观看到很多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。
试验原理制备方法包括以下几个要点:1. 用肯定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观看到染色体的显微图象试验用品1．材料：小白鼠2．器具：注射器（1ml,5ml）剪刀镊子玻璃吸管10ml刻度的离心管离心机载玻片盖玻片显微镜滤纸擦镜纸纱布恒温水浴锅3．药品：0.01%秋水仙素0.075MKCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）2%柠檬酸钠改良石炭酸品红试验步骤预处理取股骨冲洗骨髓离心低渗离心固定离心滴片染色观看1．预处理：试验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙素。
2．取股骨：断颈处死小鼠后，剔去肌肉组织，洗净3．冲洗骨髓：剪去两端的股骨头，吸取10ml 2%柠檬酸钠，注射器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨，洗液收集到10ml的离心管中4 ．离心：1000r/min 离心10 min ,弃上清5 ．低渗：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低渗30 min ，中间（约15 min ）再吹散一次，使细胞分散，悬浮于溶液中6．离心：1000r/min离心10 min，弃上清7．固定：沉淀加8ml固定液，并用吸管轻轻吹匀，进行固定，中间（约15 min ）再吹散一次试验步骤8. 离心：1000r/min 离心10 min ,留1 ml 左右上清，轻轻吹打成细胞悬液9. 滴片：用吸管吸取细胞悬液，高度30-40 cm，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干10. 染色：改良石炭酸品红染色10-20 min11. 观看：低倍高倍。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备【目的要求】1.掌握小鼠细胞染色体标本制备方法。
2.计数并观察小鼠骨髓细胞分裂中期染色体的数目及特点【基本原理】在骨髓细胞中，有丝分裂旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到中期细胞。
骨髓细胞具有高度的分裂活性，经秋水仙素或秋水酰胺处理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。
【实验用品】1．器材：解剖刀、剪刀、镊子、注射器、离心机、离心管、恒温水浴箱、冰冷载玻片、酒精灯、大培养皿、显微镜、纱布,标签纸，记号笔等；2．试剂0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa 染液等。
3．材料：65-90天健康小鼠（生技09级72人，新华09生物技术36人，生科08级75人，生技08级70人，共253人，需购小鼠110只）【方法与步骤】1．前处理取材前3～4 h，向腹腔内注射秋水仙素。
注射浓度随动物种类不同而异，一般每克体重注射2～6μg，注射总量不宜超过2 ml（例如一只体重50 g的蟾蜍，若按4μg / g注射，需注射浓度为0.1％的秋水仙素溶液0.2 ml ）。
秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。
2．取骨髓细胞处死动物，用装有生理盐水的注射器反复冲洗出骨髓细胞，并用注射器筒轻轻吹打，使细胞团块分散，静置片刻、待大组织团块沉淀后，用吸管将骨髓细胞悬浮液移至离心管中，以1000 r / min 离心5~10 min，弃去上清液。
3．低渗根据骨髓细胞液的多少，加0.075 mol / L的KCI液5～6 ml，在37℃水浴箱中或室温下低渗20～30 min。
低渗时间过长，易造成细胞破裂；时间过短，则染色体难以分散。
4．预固定低渗完毕，立即加入1 ml 新配制的预冷Carnoy’s固定液，用吸管将细胞轻轻吹打均匀，进行预固定。
小鼠骨髓染色体制备及观察
小鼠骨髓染色体制备及观察许多化学毒物具有遗传毒性基因突变：碱基置换和移码突变。
染色体畸变（structural chromosome aberration)：是指由于染色体或染色单体断裂，造成染色体或染色单体缺失或引起各种重排，从而出现染色体结构异常颜色体数目异常：整倍性和非整倍性改变。
染色体损伤的类型：☐染色体数目的改变①非整倍体：亚二倍体或超二倍体。
②整倍性改变：染色体成倍增加。
☐染色体结构的改变1.断裂和裂隙：2.微小体；较断片小而呈圆形。
3.有着丝点环：带有着丝点部分，两端形成环状结构并伴有一双无着丝点断片。
4.无着丝点环：成环状结构。
5.插入/重复8 非特定性型变化：如粉碎化、着丝点细长化、粘着等整倍性畸变非整倍性畸变如何评价化合物的遗传毒性？鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）：是最常用的检查基因突变的方法。
检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型(his+)的能力☐评价染色体损伤的试验方法包括：常用啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE) 微核试验 体外培养细胞或者体内染色体畸变试验2、实验原理☐有丝分裂：真核细胞的染色质凝集成染色体，复制的姐妹染色单体在纺锤丝的牵拉下分向细胞的两极，从而产生两个染色体数目和遗传性相同的子细胞的一种细胞分裂的类型。
☐细胞周期：从一次有丝分裂完成时开始，到下一次有丝分裂结束时为止，成为一个细胞周期。
G1：从有丝分裂结束到DNA 复制之前；S: DNA 合成；G2：DNA 复制结束到有丝分裂开始；M ：有丝分裂期✓增殖群细胞，细胞始终保持分裂能力，持续进入分裂循环；✓不再增殖细胞，比如神经细胞；✓暂不增殖细胞，比如肝脏细胞。
端着丝粒染色体。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
细胞培养：在适宜的条件下将细胞从体内分离出来进行体外培养 传代：将培养的细胞按照一定的比例进行分装使细胞能够继续生长
制备前的准备：选 择合适的细胞培养 并维持细胞生长。
细胞固定：使用固 定剂将细胞固定在 一定位置防止细胞 移动。
细胞染色：根据实 验需求选择合适的 染色剂进行染色。
观察与拍照：使用 显微镜观察染色后 的细胞并记录照片 。
小鼠骨髓细胞染色体 制备与观察
汇报人：
目录
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实验准备
染色体制备
观察和分析
实验结论
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实验准备
小鼠骨髓细胞
培养基
胰蛋白酶
秋水仙碱
实验仪器：显微镜、离心机、细胞培养皿、细胞 刮刀等
实验试剂：生理盐水、胰蛋白酶、甲醇、冰醋酸、 Giems染料等
准备实验器材：显微镜、染色剂、 细胞培养皿等
染色体测量：使用显微测微尺等工具测量染色体的长度、宽度、着丝粒位置等特征有助于分析染色体的形态和结 构。
染色体组型分析：根据染色体的数目、形态和结构特征进行染色体组型分析有助于了解小鼠骨髓细胞的遗传特征 和变异情况。
染色体核型分析：通过观察染色体的数目、形态和排列方式分析染色体的核型有助于了解小鼠骨髓细胞的染色体 异常和遗传疾病。
实验前要洗手戴手套避免手上的杂 菌污染细胞。
染色体制备过程中要控制好温度和 时间避免温度过高或时间过长导致 细胞死亡。
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染色体制备过程中要保持细胞活性 避免细胞死亡。
染色体制备过程中要选择适当的染 色剂避免使用过多的染色剂导致细 胞死亡。
观察和分析
观察步骤：将制备好的小鼠骨髓细胞染色体放在显微镜下调整焦距观察染色体的形态和分布
小鼠骨髓染色体制备及观察
02
2%柠檬酸钠溶液：：称2.28克柠檬酸钠溶于100ml蒸馏水中。
03
Giemsa溶液
04
溶液配制：
3、实验材料
主要实验步骤
4、实验方法
方法与步骤
取材前3～4 h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。
腹腔内注射秋水仙素3~4小时后， 断头处死小鼠。
取出小鼠的后肢骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造成骨髓细胞的流失。
滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将皮肤、肌肉等组织清除干净。
加入适量低渗液，用剪刀将骨充分剪碎，并用吸管吹打，使骨髓细胞全部释放出来。
亦可用注射器抽取柠檬酸铵溶液冲洗骨髓，效果佳
将获得的液体收集到离心管中，离心后去上清液，加低渗液至8ml左右，室温下静置20~30分钟，进行低渗。低渗结束后，加入1ml左右的Carnoy’s固定液进行预固定，轻轻混匀后，离心。
实验动物
试剂
3、实验材料
恒温培养箱、普通离心机、显微镜、分析天平、离心管(5～10 mL)、吸管注射器(5 mL)、100 mL烧杯、
载玻片 （冰片）
实验器材
3、实验材料
0.01％秋水仙素：称10 mg秋水仙素，溶于100 mL生理盐水中。
01
低渗溶液：称5.59克KCl溶于1,000 mL蒸馏水中，其浓度为0.075M。
实验三 小白鼠骨髓染色体制备及观察
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小鼠骨髓细胞
01
秋水仙素可破坏骨髓细胞分裂过程中纺锤体的形成，把分裂细胞阻截在中期。
02
通过对小鼠骨髓细胞的低渗、固定、滴片、染色等处理，可观察到小鼠染色体。
实验三、小鼠骨髓染色体制备与观察PPT课件
染色体观察的原理
染色体观察
通过显微镜观察染色体制片，可以观察到染色体的形态、 数目和结构等信息。观察时需要选择适当的显微镜倍数和 焦距，以便清晰地看到染色体。
显微镜倍数选择
根据实验需求选择适当的显微镜倍数。高倍镜下可以观察 到更加细致的染色体结构，但视野较小；低倍镜下可以观 察到更多的染色体，但分辨率较低。
选择合适的区域，使用高倍镜观察染 色体的形态和数目。
低倍镜观察
使用低倍镜观察载玻片上的细胞分布 情况。
数据分析与处理
数据记录
详细记录每个细胞的染色体数目 和形态。
数据整理
将记录的数据进行整理，统计染色 体异常的比例。
结果分析
根据数据结果分析染色体异常与疾 病之间的关系。
04
结果分析
正常染色体特征分析
THANKS
感谢观看
染色体结构异常特征
染色体结构异常是指染色体内部结构的改变，包括易位、倒位、缺失和重复等。这类异常 可能导致遗传性疾病如唐氏综合征、威廉姆斯综合征等，以及生长发育异常、智力障碍和 生育障碍等症状。
03
实验步骤
小鼠骨髓细胞的采集
麻醉小鼠
脱臼处死
切开皮肤和骨骼
抽取骨髓
使用麻醉剂将小鼠麻醉， 确保其在整个实验过程
疾病易感性增加
某些染色体异常可能导致小鼠对某些疾病或药物的易感性增加，如 肿瘤、感染等。
05
结论与讨论
实验结论总结
实验成功制备了小鼠 骨髓染色体，观察到 了清晰的染色体形态 和结构。
实验结果支持了前期 理论分析，验证了实 验方法的可行性和准 确性。
实验结果表明，小鼠 骨髓染色体数目正常， 未发现染色体异常现 象。
中保持安静。
实验六小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
实验六 小鼠骨髓细胞染色体ห้องสมุดไป่ตู้本的制备
杭州师范大学 刘姬艳
一、实验目的
1. 通过小白鼠骨髓细胞染色体的制备，初 步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体 的方法 2.熟悉染色体的形态、种类及小白鼠等动 物染色体的数目及特点
二、实验原理
骨髓细胞是具有旺盛分裂能力的细胞，从这些分裂细胞 中，可观察到处于分裂中期的染色体，能对一种动物染色体 的形态特征、数目进行准确的观察和分析。
四、实验步骤
1.预处理：实验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml， 给小白鼠腹腔注射秋水仙素。
2.断颈处死动物.
3.剥取股骨和胫骨，剔去肌肉组织，剪去两端的股 骨头 4.冲洗骨髓：吸取2%柠檬酸钠,注射器针头插入骨 一端,反复冲洗骨髓,取8ml至离心管中.1200rpm 离心5min,弃上清. 5.低渗：加入8mL 0.4% KCl溶液,37oC低渗20分钟， 中间（约10分钟）用吸管吹打二次，使细胞分 散，悬浮于溶液中。
三、实验用品
1.材料：小白鼠 2.试剂：0.01﹪秋水仙素,0.4%氯化钾 (KCl), Carnoy固定液(甲醇:冰醋酸=3:1),Giemsa 染 液，0.01M磷酸缓冲液(pH 6.8)，2%柠檬酸钠。 3.器材：离心机、显微镜、剪刀、解剖刀、小镊 子、注射器及针头、刻度离心管、吸管、载玻 片和盖玻片、染色缸、玻片盒
x染色体形态
y染色体形态
青蛙 小白鼠
26
中央、亚中央着丝粒染色 中央着丝粒染色体 中央着丝粒染色体
体
，介于6～7号
，介于8～9号
40
全部为近端着丝粒染色体 大小介于5～6号 大小介于19～20号
大白鼠
42
中央、亚中央近端着丝粒 近端着丝粒染色体 近端着丝粒染色体
实验二小鼠骨髓细胞染色体标本制备
实验二小鼠骨髓细胞染色体标本制备实验目的：通过制备小鼠骨髓细胞染色体标本，了解染色体结构、形态和变异等方面的知识，为后续核型分析、染色体异常检测等实验打下基础。
实验原理：小鼠骨髓细胞染色体标本制备是指将小鼠骨髓组织中的细胞进行处理后制备成适合观察的染色体标本。
该标本制备方法包括细胞处理，染色体制备和染色体观察等环节。
1.小鼠骨髓细胞处理将小鼠放入固定夹，使用无菌注射器向小鼠腹腔注入适量的钾盐缓冲液（KCl，0.074mol/L）。
钾盐缓冲液的功能是使细胞发生肿胀，探头区别正常细胞和异常细胞。
此外，钾盐缓冲液也有不利的作用，可以导致一些染色体脱落或断裂。
接下来，在小鼠固定夹上进行剖腹，取出骨髓。
骨髓组织放置在一滴含有10%甘露醇的氯仿中进行易位。
在显微镜下观察细胞的形态结构，进行可行性检测。
2.染色体制备取干净的药片，滴入细胞悬液，热外片变性塔。
药片的材料使用高价值玻璃药片，这样可以保证药片平整和染色体不能和药片表面黏附。
加入甘醇一定要多加就能快速促进水分的蒸发，避免液体反应产生气泡而影响结果。
不需要太用力，在药片的表面轻轻涂抹，使液体均匀分布。
接下来，将药片吸入液、95%甲醇，以及3%乙酸中每个5分钟，直到药片完全干燥。
3.染色体观察将药片上的细胞标本置于显微镜上，根据染色体数目和形态等信息进行染色体分析。
在显微镜下观察染色体的特征，包括染色体数量、形态、大小、位置以及异常情况等。
对观察到的染色体进行记录和描述。
实验结果：通过对小鼠骨髓细胞进行染色体制备和检测，我们可以观察到染色体的结构、形态等方面的特征。
此外，通过对染色体的数量和形态进行观察，还可以发现染色体的变异情况，进一步了解染色体的异常情况。
在实际操作过程中，需要注意细胞处理和染色体制备的每一个环节，以保证实验的准确性和可靠性。
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察一、实验目的了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法，掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。
观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。
利用显微照相技术对所得切片进行照相。
二、实验原理染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。
因此通过染色体分析，可以了解某一物种最基本的遗传指标。
进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织，如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。
如将秋水仙素注射到动物的腹腔内，经肠系膜吸收并可转运到骨髓，结果使正在分裂的细胞不能形成纺锤体，使得染色体停在中期状态，经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。
这种制片方法是属于侵害性的，因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。
对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓，在临床上用于一些血液疾病的研究分析。
对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片，方法基本一样。
人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。
三、实验用具及材料实验材料：体重20克左右的小鼠一只实验试剂：0.075mKCl低渗液、固定液（甲醇：醋酸＝3:1）、0.4%秋水仙素、改良苯酚品红溶液、二甲苯实验材料：恒温水浴槽、纱布、烧杯、离心管2支、刀片、镊子、解剖盘、解剖剪、镊子、注射器、离心机、镜头纸光学显微镜、带数码相机的光学显微镜四、实验步骤1腹腔注射秋水仙素溶液：在做实验前2~3小时，对实验用小鼠按0.1ml/20g小鼠的量对其进行0.4％的秋水仙素注射。
2取材：实验时，用断颈法迅速将小鼠处死，通过解剖取出股骨，用注射器吸取在37℃下保温的低渗液2毫升，将针头插入骨髓腔中冲洗骨髓，使冲洗液从股骨的另一端流出。
收集冲洗液到5ml刻度的离心管中。
3低渗：用吸管将冲洗液吹打几次，然后把离心管放在37℃恒温水浴槽内低渗20分钟。
4固定：之后取出并加1ml的固定液，吹打之后放入37℃恒温水浴槽内固定10分钟。
5离心：然后将1000rpm离心10分钟，弃去上清。
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2.了解小鼠染色体核型。
3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。
器材与试剂
内容与方法
（一）小鼠骨髓细胞染色体制备
预处理
取材，收集细胞
低渗
染色
滴片
a
固定、再固定
5
❖取材前2～3h，向腹腔 内注射秋水仙素。注射 浓度随动物种类不同而 异。秋水仙素的主要作 用是使分裂细胞阻断在 有丝分裂中期，增加中 期分裂相的比例。
3、简述实验中应注意那些关键问题？
a
15
（二）染色体标本片观察 1.标本片质量评价 （1）细胞密度合适、均匀； （2）背景干净，细胞核和染色体清晰； （3）有较多的分裂相； （4）染色体分散较好。
a
16
细胞密度
a
17
染色体 分散度
a
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2.染色体形态特征观察
a
19
3.染色体计数
16
8
9
22
腹腔内注射秋水仙素2~3小时后，颈椎脱臼
处死小鼠。
a
6
小白鼠骨骼标本
a
7
a
8
取出小鼠的后肢股骨，注意不要将股骨剪断， 否则容易造成骨髓细胞的流失。
a
9
用纱布擦股骨上的肌肉组织，清除干净
注射器抽取生理盐水冲洗骨髓
a
10
收集细胞：
➢ 暴露骨髓腔，
➢ 反复冲洗骨髓腔获得 骨髓细胞，
➢ 收集到离心管中,
实验二 小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
a
1
实验原理
➢ 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞 数量较多。
a
2
➢ 秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。
a
3
a
4
实验目的与要求：
1.熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
a
25
二、高尔基体（4×）
a
27
高尔基体（40×10）
a
28
高尔基体（40×10）
a
29
22+8+10=40
10
（100×10）
a
15
9+16+15=40
20
4.细胞增殖指数统计
细胞增殖指数=
分裂细胞数
×100%
分裂细胞数+间期细胞数
a
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实验三 细胞器的观察
一、中心体 二、高尔基体
a
22
一、中心体（4×10）
马蛔虫子宫横切片全貌
a
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中心体（10×10）
a
24
中心体（40×10）
➢ 定容至6ml.
a
11
滴片：
➢滴2~3滴于玻片上，吹气， ➢在酒精灯火焰过火8次， ➢做记号，凉干，染色
滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，10~15分 钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。
a
12
a
13
a
14
作业与思考题
1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染 色体中期分裂相。
2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各 起什么作用？