小鼠骨髓细胞染色体制备与观察

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腹腔内注射秋水仙素2~3小时后,颈椎脱臼
处死小鼠。
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小白鼠骨骼标本
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取出小鼠的后肢股骨,注意不要将股骨剪断, 否则容易造成骨髓细胞的流失。
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9ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
用纱布擦股骨上的肌肉组织,清除干净
注射器抽取生理盐水冲洗骨髓
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收集细胞:
➢ 暴露骨髓腔,
➢ 反复冲洗骨髓腔获得 骨髓细胞,
➢ 收集到离心管中,
3、简述实验中应注意那些关键问题?
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(二)染色体标本片观察 1.标本片质量评价 (1)细胞密度合适、均匀; (2)背景干净,细胞核和染色体清晰; (3)有较多的分裂相; (4)染色体分散较好。
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细胞密度
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染色体 分散度
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2.染色体形态特征观察
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3.染色体计数
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2.了解小鼠染色体核型。
3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。
器材与试剂
内容与方法
(一)小鼠骨髓细胞染色体制备
预处理
取材,收集细胞
低渗
染色
滴片
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固定、再固定
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❖取材前2~3h,向腹腔 内注射秋水仙素。注射 浓度随动物种类不同而 异。秋水仙素的主要作 用是使分裂细胞阻断在 有丝分裂中期,增加中 期分裂相的比例。
实验二 小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
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实验原理
➢ 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性,且细胞 数量较多。
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➢ 秋水仙素,可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成,使处于 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内,可以 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。
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实验目的与要求:
1.熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
22+8+10=40
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(100×10)
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9+16+15=40
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4.细胞增殖指数统计
细胞增殖指数=
分裂细胞数
×100%
分裂细胞数+间期细胞数
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实验三 细胞器的观察
一、中心体 二、高尔基体
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一、中心体(4×10)
马蛔虫子宫横切片全貌
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中心体(10×10)
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中心体(40×10)
➢ 定容至6ml.
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滴片:
➢滴2~3滴于玻片上,吹气, ➢在酒精灯火焰过火8次, ➢做记号,凉干,染色
滴片后,将片子侵入Giemsa染液缸中,10~15分 钟,弃去染液,水洗,晾干,镜检。
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作业与思考题
1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染 色体中期分裂相。
2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各 起什么作用?
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二、高尔基体(4×10)
脊神经节切片
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高尔基体(10×10)
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高尔基体(40×10)
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高尔基体(40×10)
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