小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
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小鼠骨髓细胞染色体
实验步骤
预处理——取股骨——冲洗骨髓——离 心——低渗——离心——固定——离心——
滴片——染色——观察
1. 取材及前处理：取健康小白鼠（约65-90天龄）， 腹腔注射0.1%秋水仙素溶液0.1ml，剂量为 4ml/Kg动物体重 2. 取骨髓：将已用秋水仙素前处理的小白鼠，经过 2-3小时后，用损伤脊椎法处死小白鼠，立即取出 两侧股骨，把肌肉刮净，然后从骨股两端关节处 剪下，用2%柠蒙酸钠溶液洗净骨股上的血污及肌 肉残渣，剪去骨股两端膨大的关节头，使其露出 骨髓，然后用吸有3-5ml2%柠檬酸钠溶液的注射 器，从股骨的一端插入针头，往骨髓内冲洗多次， 直至股骨断面变成粉白色为止，可多剪几个断面 反复冲洗，这样制备了骨髓细胞悬浮液，也可用 眼科镊子小心地取出骨髓，置于有少量柠檬酸钠 溶液培养皿中捣碎，然后再加入2%柠檬酸钠溶液 适量，制成3-5ml骨髓细胞悬液
骨髓细胞染色体的制备与观察
2010级生物技术专业——冯德
实验目的 实验原理
实验用品 实验方法
实验目的
初步掌握小白鼠骨随细胞染色体的制 备方法，计算骨髓细胞分裂中期的分裂相 的染色体数目并观察端着丝点的形态特 点．
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞能生成 各种血细胞和原始细胞，具有较高的分裂 能力。本实验采用这一材料，通过前处理， 低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色 体标本，可观察到许多处于分裂中期的染 色体
3.
பைடு நூலகம்1.
低渗处理：用吸管将骨髓细胞悬液移入带刻度离心管 内，1000rpm离心10分钟，吸去上清液。加入0.075M氯 化钾溶液5ml立即将细胞团吹打均匀，置37℃水浴25-30 分钟 4. 预固定、固定：经低渗处理后的细胞，加入卡诺氏 固定液5-6滴搅拌均匀进行预固定10分钟，然后以 1000rpm离心10分钟，此为第一次固定然后以同法离心， 弃上清液，仅留约0.2-0.3ml的细胞团与部分上清液，吹 均匀制成细胞悬浮液涂片观察。如果细胞分散的不好， 可再按上述方法再固定1-2次，使染色体进一步分散 气干法制片：取预先冰冻的载玻片，滴2-3滴细胞 悬浮液于其上，立即吹气均匀打散、过火、置室温中自 然干燥
小鼠骨髓染色体标本的制备(共5张PPT)
三、实验步骤：
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦去附 着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注射器吸取 KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗，用离心管接收 冲洗液。
2、低渗处理：加KCL至2/3管，用吸管打匀使细胞悬浮于低渗液中，放入
4．离3心：72℃000恒转/分温，离水心5浴min锅，弃中上清，液，静留下置沉淀2物5。min。（吹打不宜过猛） 345678．．、、、、预离固再再制固 心 定 固离片定：：定心：：沿：2：用0加离再02滴00入心加转0管固管入0/吸转分定壁固细/，液加定分胞离入 液5，滴心悬固2离－吹5定液心m3打液，滴i5混n5m，从，m匀打i2弃nl。打0匀，上－匀。弃清3，上0液室c清，m温液留高下，下度固沉留定滴淀下1在物0沉冰m。淀i水n物。预。浸泡的 548394043335130230581168331093091477777、 ． 、 ． 、 ． ． ． ． ． 、 、 ． 、 、 、 、 、 、 ． ． 、 、 ． 、 、 ．55555固离制预染离离预预预固取预低预固制取取再制预预取染预染取离mmmmmooooo定心片固色心心固固固定材固渗固定片材材离片固固材色固色材心lllll/////：：：定：：：定定定：定处定：：：：心：定定：：定：：：LLLLL)))))溶溶溶溶溶沿2用：G22：：：沿以：理：沿用以以：用：：以G：G以20000iii液 液液液液离滴加加加加离颈加：加离滴颈颈滴加加颈加颈2eee0000mmm00000， ，，，，心管入入入入心椎入加入心管椎椎管入入椎入椎0转转转转sss0将 将将将将aaa管吸固固固固管脱固固管吸脱脱吸固固脱固脱K///转/染染染分分分分C针 针针针针壁细定定定定壁臼定定壁细臼臼细定定臼定臼/L液液液，，，分，头 头头头头至加 胞 液 液 液 液 加 法 液 液 加 胞 法 法 胞 液 液 法 液 法染染染离离离，离插 插插插插2入悬入处入悬处处悬处处555555555色色色/心心心离心滴滴滴滴滴滴滴滴滴3入 入入入入固液固死固液死死液死死管777555心5吹吹吹吹吹吹吹吹吹骨 骨骨骨骨定，定小定，小小，小小mmmmmmm，5打打打打打打打打打iiii髓 髓髓髓髓液从液鼠液从鼠鼠从鼠鼠miiinnnnnnn用混混混混混混混混混，，，，、、、i腔 腔腔腔腔，，，，，525522n吸mmm0匀匀匀匀匀匀00匀匀匀弃弃弃，弃细细细上 上上上上取取取取取－－－管lll。。。。。。。。。打打打上上上弃上水水水段 段段段段两两两两两333打匀匀匀清清清上清000冲冲冲冲 冲冲冲冲腿腿腿腿腿ccc匀，，，液液液清液mmm洗洗洗洗 洗洗洗洗股股股股股使高高高室室室，，，液，、、、， ，，，，骨骨骨骨骨细度度度温温温留留留，留晾晾晾用用 用 用 用，，，，，胞滴滴滴下下下下下下留下干干干离 离离离离剔剔剔剔剔悬在在在固固固沉沉沉下沉。。。心 心心心心净净净净净浮冰冰冰定定定淀淀淀沉淀管 管管管管肌肌肌肌肌于水水水111物物物淀物接 接接接接肉肉肉肉肉000低预预预。。。物。mmm收 收收收收，，，，，渗iii浸浸浸。nnn冲 冲冲冲冲擦擦擦擦擦。。。液泡泡泡洗 洗洗洗洗去去去去去中的的的液 液液液液附附附附附，洁洁洁。 。。。。着着着着着放净净净在在在在在入载载载上上上上上3玻玻玻7面面面面面℃片片片的的的的的恒上上上血血血血血温，，，污污污污污水立立立，，，，，浴即即即剪剪剪剪剪锅用用用取取取取取中口口口两两两两两，吹吹吹端端端端端静散 散 散股 股 股 股 股置，，，骨骨骨骨骨2在在在头头头头头5m酒酒酒，，，，，i精精精n暴暴暴暴暴。灯灯灯露露露露露上上上骨骨骨骨骨过过过髓髓髓髓髓几几几腔腔腔腔腔次次次，，，，，或或或用用用用用吹吹吹注注注注注风风风射射射射射机机机器器器器器吹吹吹吸吸吸吸吸干干干取取取取取。。。KKKKKCCCCCLLLLL(((((00000..... 洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风机吹干。 5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦去附 着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注射器吸取 KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗，用离心管接收 冲洗液。
2、低渗处理：加KCL至2/3管，用吸管打匀使细胞悬浮于低渗液中，放入
4．离3心：72℃000恒转/分温，离水心5浴min锅，弃中上清，液，静留下置沉淀2物5。min。（吹打不宜过猛） 345678．．、、、、预离固再再制固 心 定 固离片定：：定心：：沿：2：用0加离再02滴00入心加转0管固管入0/吸转分定壁固细/，液加定分胞离入 液5，滴心悬固2离－吹5定液心m3打液，滴i5混n5m，从，m匀打i2弃nl。打0匀，上－匀。弃清3，上0液室c清，m温液留高下，下度固沉留定滴淀下1在物0沉冰m。淀i水n物。预。浸泡的 548394043335130230581168331093091477777、 ． 、 ． 、 ． ． ． ． ． 、 、 ． 、 、 、 、 、 、 ． ． 、 、 ． 、 、 ．55555固离制预染离离预预预固取预低预固制取取再制预预取染预染取离mmmmmooooo定心片固色心心固固固定材固渗固定片材材离片固固材色固色材心lllll/////：：：定：：：定定定：定处定：：：：心：定定：：定：：：LLLLL)))))溶溶溶溶溶沿2用：G22：：：沿以：理：沿用以以：用：：以G：G以20000iii液 液液液液离滴加加加加离颈加：加离滴颈颈滴加加颈加颈2eee0000mmm00000， ，，，，心管入入入入心椎入加入心管椎椎管入入椎入椎0转转转转sss0将 将将将将aaa管吸固固固固管脱固固管吸脱脱吸固固脱固脱K///转/染染染分分分分C针 针针针针壁细定定定定壁臼定定壁细臼臼细定定臼定臼/L液液液，，，分，头 头头头头至加 胞 液 液 液 液 加 法 液 液 加 胞 法 法 胞 液 液 法 液 法染染染离离离，离插 插插插插2入悬入处入悬处处悬处处555555555色色色/心心心离心滴滴滴滴滴滴滴滴滴3入 入入入入固液固死固液死死液死死管777555心5吹吹吹吹吹吹吹吹吹骨 骨骨骨骨定，定小定，小小，小小mmmmmmm，5打打打打打打打打打iiii髓 髓髓髓髓液从液鼠液从鼠鼠从鼠鼠miiinnnnnnn用混混混混混混混混混，，，，、、、i腔 腔腔腔腔，，，，，525522n吸mmm0匀匀匀匀匀匀00匀匀匀弃弃弃，弃细细细上 上上上上取取取取取－－－管lll。。。。。。。。。打打打上上上弃上水水水段 段段段段两两两两两333打匀匀匀清清清上清000冲冲冲冲 冲冲冲冲腿腿腿腿腿ccc匀，，，液液液清液mmm洗洗洗洗 洗洗洗洗股股股股股使高高高室室室，，，液，、、、， ，，，，骨骨骨骨骨细度度度温温温留留留，留晾晾晾用用 用 用 用，，，，，胞滴滴滴下下下下下下留下干干干离 离离离离剔剔剔剔剔悬在在在固固固沉沉沉下沉。。。心 心心心心净净净净净浮冰冰冰定定定淀淀淀沉淀管 管管管管肌肌肌肌肌于水水水111物物物淀物接 接接接接肉肉肉肉肉000低预预预。。。物。mmm收 收收收收，，，，，渗iii浸浸浸。nnn冲 冲冲冲冲擦擦擦擦擦。。。液泡泡泡洗 洗洗洗洗去去去去去中的的的液 液液液液附附附附附，洁洁洁。 。。。。着着着着着放净净净在在在在在入载载载上上上上上3玻玻玻7面面面面面℃片片片的的的的的恒上上上血血血血血温，，，污污污污污水立立立，，，，，浴即即即剪剪剪剪剪锅用用用取取取取取中口口口两两两两两，吹吹吹端端端端端静散 散 散股 股 股 股 股置，，，骨骨骨骨骨2在在在头头头头头5m酒酒酒，，，，，i精精精n暴暴暴暴暴。灯灯灯露露露露露上上上骨骨骨骨骨过过过髓髓髓髓髓几几几腔腔腔腔腔次次次，，，，，或或或用用用用用吹吹吹注注注注注风风风射射射射射机机机器器器器器吹吹吹吸吸吸吸吸干干干取取取取取。。。KKKKKCCCCCLLLLL(((((00000..... 洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风机吹干。 5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
滴片：
➢滴2~3滴于玻片上，吹气， ➢在酒精灯火焰过火8次， ➢做记号，凉干，染色
滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，10~15分 钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。
作业与思考题
• 1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染 色体中期分裂相。
• 2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各 起什么作用？
15
9+16+15=40
4.细胞增殖指数统计
细胞增殖指数=
分裂细胞数
×100%
分裂细胞数+间期细胞数
实验三 细胞器的观察
一、中心体 二、高尔基体
一、中心体（4×10）
• 马蛔虫子宫横切片全貌
中心体（10×10）
中心体（40×10）
二、高尔基体（4×10）
脊神经节切片
高尔基体（10×10）
2.了解小鼠染色体核型。
3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。
• 器材与试剂
• 内容与方法
（一）小鼠骨髓细胞染色体制备
预处理
取材，收集细胞
低渗
染色
滴片
固定、再固定
❖取材前2～3h，向腹腔 内注射秋水仙素。注射 浓度随动物种类不同而 异。秋水仙素的主要作 用是使分裂细胞阻断在 有丝分裂中期，增加中 期分裂相的比例。
• 3、简述实验中应注意那些关键问题？
（二）染色体标本片观察 1.标本片质量评价 （1）细胞密度合适、均匀； （2）背景干净，细胞核和染色体清晰； （3）有较多的分裂相； （4）染色体分散较好。
细胞密度
染色体 分散度
2.染色体形态特征观察
3.染色体计数
40
10
（100×10）
高尔基体（40×10）
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察ppt课件
9．在干净、湿冷的载玻片上以高距离滴2～3 滴上层细胞悬液，气干或在酒精灯上文火 烘干。注意在滴片时要有一定的高度（大 于40cm），使细胞膜破裂后易于使染色体 散开，并尽量使滴片上的细胞分布均匀， 不要重叠。
10．气干，染色。 在一块洁净的玻板上，将玻片标本有细胞的一面 朝下用牙签架空于玻板上。 11．用滴管将配好的染液充满于玻板与载玻片之间 的空隙中，注意载片上有细胞面的进行染色并在 滴加染液时注意排除气泡。视室温而定，染色15 分钟。 12．染色后，轻轻揭起玻片，倾斜玻片在自来水管 下细水流冲洗数秒，冲掉染液，擦干玻片标本底 面和四周，显微镜观察和分析。注意不要搞错沾 有细胞的一面。选择染色较好、较分散、形态清 晰的细胞分裂相，进行显微观察。
小鼠骨髓细胞染色体 标本的制备与观察
实验目的：
1．初步掌握动物骨髓细胞染色体的制备方法。 2．了解小鼠骨髓细胞染色体的形态特点。Fra bibliotek实验原理：
染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定 形式，是染色质紧密包装的结果。染色体 是有机体遗传信息的载体，对染色体的研 究在生物进化、发育、遗传和变异中有十 分重要的作用。
谢 谢 大 家
核型分析均是以中期染色体为标准，对制 作出的染色体标本进行照相以获得染色体 的显微图像，并将其剪裁排列即成，或用 专用软件进行分析排列。 凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各 种处理后，细胞就可进入分裂期此时均可 用于染色体分析。
在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的 组织之一。此时给动物注射一定剂量的秋 水仙素可使许多处于分裂的细胞停滞于中 期（ 秋水仙素可阻断纺锤丝微管的组装）， 然后采用常规空气干燥法制备染色体，即 可得到大量可供分析的染色体标本。本方 法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌 操作。
试验六 小白鼠骨髓细胞染色体制备及观察
6．加Giemsa染液染色8－10min，流水冲去 染液（注意水流不可急，细流冲去即可）， 干燥（晾干），观察，可见分散良好的染 色体。
小白鼠的保定和注射
五．结果与讨论
1．结果： （1）．选取分散良好的染色体绘实物图，上 传图片1幅）。 （2）．染色体计数（2n=40）。 2．讨论： （1）．实验前注射秋水仙素的作用？不作此 步会怎样？ （2）．为何要用冷冻片？烘烤片的作用？
小鼠骨髓细胞染色体
试验六 小白鼠骨髓细胞染色 体制备及观察
一．实验目的：
1．学习小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
2．观察骨髓细胞染色体，计数染色体。
二．原理：
活跃增值的组织细胞内染色体可用于制片分 析，秋水仙素（或以对二氯苯代之）可使 细胞分裂停滞于分裂中期，经染色处理， 可得到清晰的中期染色体标本。
三．材料试剂
1．材料：小白鼠；ห้องสมุดไป่ตู้
2．试剂：Giemsa染色液，0.4％KCl，2％柠 檬酸钠，固定液（甲醇：冰乙酸＝3：1）。
四．操作步骤
1．实验前4－8h小鼠腹腔注射秋水仙素1ml （0.14mg/ml）,(据小鼠体重用量调整)或1ml饱和 对二氯苯。 • 2．脱臼处死小鼠，取后肢胫骨和股骨，去两端。 用细针头注射器吸取2％柠檬酸钠1ml，反复冲洗 骨髓腔5次，将冲洗液（离心管中）加入0.4%KCl 低渗10min（8ml,37℃）。
• 3．离心（1000rpm，8min）,去上清液，加固定 液5ml（注意缓慢加入）。充分吹打，使沉淀块 分散，静置10min，再离心10min，弃上清液， 重复一次。
4．用约2ml固定液悬浮骨髓细胞成悬液（依 沉淀量定）。
5．取冷冻载片，距载片15cm高度滴下悬液 （取悬液前吸打均匀），单向吹气展开， 酒精灯上文火烘干。
小白鼠的保定和注射
五．结果与讨论
1．结果： （1）．选取分散良好的染色体绘实物图，上 传图片1幅）。 （2）．染色体计数（2n=40）。 2．讨论： （1）．实验前注射秋水仙素的作用？不作此 步会怎样？ （2）．为何要用冷冻片？烘烤片的作用？
小鼠骨髓细胞染色体
试验六 小白鼠骨髓细胞染色 体制备及观察
一．实验目的：
1．学习小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
2．观察骨髓细胞染色体，计数染色体。
二．原理：
活跃增值的组织细胞内染色体可用于制片分 析，秋水仙素（或以对二氯苯代之）可使 细胞分裂停滞于分裂中期，经染色处理， 可得到清晰的中期染色体标本。
三．材料试剂
1．材料：小白鼠；ห้องสมุดไป่ตู้
2．试剂：Giemsa染色液，0.4％KCl，2％柠 檬酸钠，固定液（甲醇：冰乙酸＝3：1）。
四．操作步骤
1．实验前4－8h小鼠腹腔注射秋水仙素1ml （0.14mg/ml）,(据小鼠体重用量调整)或1ml饱和 对二氯苯。 • 2．脱臼处死小鼠，取后肢胫骨和股骨，去两端。 用细针头注射器吸取2％柠檬酸钠1ml，反复冲洗 骨髓腔5次，将冲洗液（离心管中）加入0.4%KCl 低渗10min（8ml,37℃）。
• 3．离心（1000rpm，8min）,去上清液，加固定 液5ml（注意缓慢加入）。充分吹打，使沉淀块 分散，静置10min，再离心10min，弃上清液， 重复一次。
4．用约2ml固定液悬浮骨髓细胞成悬液（依 沉淀量定）。
5．取冷冻载片，距载片15cm高度滴下悬液 （取悬液前吸打均匀），单向吹气展开， 酒精灯上文火烘干。
小鼠染色体
6.根据管底细胞量的多少，加入新配制的固定液0.3~ 0.8ml，用吸管打均匀，使其形成细胞悬液。
7.滴片：将预冷的载玻片（0℃冰浴），水平或倾斜45°角放置，用吸管吸取细胞悬液，从约0.5 -1m高处滴1~2滴到片子上，用口将其吹干，静置使其干燥。
8.染色：将干燥的玻片放入2ml吉姆萨原液加入40ml磷酸缓冲液（pH6.8）配成的染液中染色20min，用磷酸缓冲液（pH6.8）冲洗高倍镜和油镜观察染色体形态，统计染色体数目。可见小鼠的40条染色体呈紫红色。
三、实验小结
四、
（一）思考题
1、统计小鼠2N染色体数目，仔细观察其形态特征。
答：小鼠体内2n染色体数目为40条，形态上多为中部着丝粒染色体。
2.低渗液起什么作用，在使用过程中应注意什么问题？
答：低渗液的作用是使细胞充分吸水膨胀而不破裂，从而一直保持在胀得很大而又没有破裂的状态。进而使得细胞内的中期染色体就能够足够分散开来，从而使得经固定等步骤后仍然处于膨胀状态。之后经过滴片时的摔打和骤降温过程，使细胞及其核很快破碎，染色体进一步分散开。在滴片的时候就能够获得一团仅属于一个细胞的分散的中期染色体的片子，易于在显微镜下观察和对染色体进行计数。使用时应该十分注意适当的低渗时间和温度，以及低渗液的浓度。
（二）注意事项
1、处死小鼠的时候要果断。这次实验采用断颈法杀死小鼠，按住头部后要用力拉。出于人道主义和对实验对象的尊重，我们都应该让小鼠在最少的折磨中死去。
2、取骨后要清理干净。
3、注射低渗液的时候要注意看，如果液体从针头入口出来，说明头没有剪开，应该再剪一次。
4、低渗液处理时间可以长一点。
5、第二次加固定液是1ml而不是书上写的5ml，实验结果，加1ml和加5ml区别不大，但从节约的角度，选取1ml。
7.滴片：将预冷的载玻片（0℃冰浴），水平或倾斜45°角放置，用吸管吸取细胞悬液，从约0.5 -1m高处滴1~2滴到片子上，用口将其吹干，静置使其干燥。
8.染色：将干燥的玻片放入2ml吉姆萨原液加入40ml磷酸缓冲液（pH6.8）配成的染液中染色20min，用磷酸缓冲液（pH6.8）冲洗高倍镜和油镜观察染色体形态，统计染色体数目。可见小鼠的40条染色体呈紫红色。
三、实验小结
四、
（一）思考题
1、统计小鼠2N染色体数目，仔细观察其形态特征。
答：小鼠体内2n染色体数目为40条，形态上多为中部着丝粒染色体。
2.低渗液起什么作用，在使用过程中应注意什么问题？
答：低渗液的作用是使细胞充分吸水膨胀而不破裂，从而一直保持在胀得很大而又没有破裂的状态。进而使得细胞内的中期染色体就能够足够分散开来，从而使得经固定等步骤后仍然处于膨胀状态。之后经过滴片时的摔打和骤降温过程，使细胞及其核很快破碎，染色体进一步分散开。在滴片的时候就能够获得一团仅属于一个细胞的分散的中期染色体的片子，易于在显微镜下观察和对染色体进行计数。使用时应该十分注意适当的低渗时间和温度，以及低渗液的浓度。
（二）注意事项
1、处死小鼠的时候要果断。这次实验采用断颈法杀死小鼠，按住头部后要用力拉。出于人道主义和对实验对象的尊重，我们都应该让小鼠在最少的折磨中死去。
2、取骨后要清理干净。
3、注射低渗液的时候要注意看，如果液体从针头入口出来，说明头没有剪开，应该再剪一次。
4、低渗液处理时间可以长一点。
5、第二次加固定液是1ml而不是书上写的5ml，实验结果，加1ml和加5ml区别不大，但从节约的角度，选取1ml。
实验小鼠骨髓染色体制备和观察
去染液，晾干。（染色盘中进行）
8.小鼠染色体观察： 低倍镜、高倍镜下寻找染色体分散的中
期分裂相.
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
小鼠骨髓染色体 10 ×10
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
小鼠骨髓染色体 10 ×40
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
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➢ 数目观察：小鼠2倍体细胞染色
体，数目2n=40条。其中19对为常染 色体，一对为性染色体，染色体的核 型分为4组。雄性 XY, 雌性XX,Y染 色体最小。
➢形态特征观察：端着丝粒染色体
“U”“V”。
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五、注意事项
1．掌握好秋水仙素的浓度和处理时间； 2．离心前需要配平； 3. 小鼠骨髓要冲洗干净，以收集足够的骨髓细胞； 3．低渗处理是实验成败的关键，注意低渗时间； 4．固定液要现配现用，固定要充分； 5．载玻片要洁净并预冷，滴片要有一定的高度； 6. 细胞悬液不能太稀，要呈乳白色； 7. 烤片时温度不能太高。 8. 冲洗染液时水流要缓慢，以免细胞流失过多。
放出来。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
秋水仙素处理：秋水仙素溶液可抑制纺锤体的形 成，使正在分裂的骨髓细胞停止在细胞分裂中期， 积累大量中期分裂相细胞。
低渗作用: 使细胞充分膨胀，减少染色体间的相互 缠绕和重叠。
预固定：终止低渗作用，使细胞离心时不易破裂 ，固定维持细胞形态结构。
高距离滴片：使细胞膜易于破裂，获得中期染色 体标本，在显微镜下观察染色体的结构和数量。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
三、实验器材和试剂
• 1.器材 蜡盘、手术剪、小镊子、平皿、注射
8.小鼠染色体观察： 低倍镜、高倍镜下寻找染色体分散的中
期分裂相.
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
小鼠骨髓染色体 10 ×10
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
小鼠骨髓染色体 10 ×40
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
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➢ 数目观察：小鼠2倍体细胞染色
体，数目2n=40条。其中19对为常染 色体，一对为性染色体，染色体的核 型分为4组。雄性 XY, 雌性XX,Y染 色体最小。
➢形态特征观察：端着丝粒染色体
“U”“V”。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
五、注意事项
1．掌握好秋水仙素的浓度和处理时间； 2．离心前需要配平； 3. 小鼠骨髓要冲洗干净，以收集足够的骨髓细胞； 3．低渗处理是实验成败的关键，注意低渗时间； 4．固定液要现配现用，固定要充分； 5．载玻片要洁净并预冷，滴片要有一定的高度； 6. 细胞悬液不能太稀，要呈乳白色； 7. 烤片时温度不能太高。 8. 冲洗染液时水流要缓慢，以免细胞流失过多。
放出来。
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秋水仙素处理：秋水仙素溶液可抑制纺锤体的形 成，使正在分裂的骨髓细胞停止在细胞分裂中期， 积累大量中期分裂相细胞。
低渗作用: 使细胞充分膨胀，减少染色体间的相互 缠绕和重叠。
预固定：终止低渗作用，使细胞离心时不易破裂 ，固定维持细胞形态结构。
高距离滴片：使细胞膜易于破裂，获得中期染色 体标本，在显微镜下观察染色体的结构和数量。
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三、实验器材和试剂
• 1.器材 蜡盘、手术剪、小镊子、平皿、注射
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察试验目的把握动物骨髓染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理试验原理小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂力量，本试验采纳这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观看到很多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。
试验原理制备方法包括以下几个要点:1. 用肯定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观看到染色体的显微图象试验用品1．材料：小白鼠2．器具：注射器（1ml,5ml）剪刀镊子玻璃吸管10ml刻度的离心管离心机载玻片盖玻片显微镜滤纸擦镜纸纱布恒温水浴锅3．药品：0.01%秋水仙素0.075MKCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）2%柠檬酸钠改良石炭酸品红试验步骤预处理取股骨冲洗骨髓离心低渗离心固定离心滴片染色观看1．预处理：试验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙素。
2．取股骨：断颈处死小鼠后，剔去肌肉组织，洗净3．冲洗骨髓：剪去两端的股骨头，吸取10ml 2%柠檬酸钠，注射器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨，洗液收集到10ml的离心管中4 ．离心：1000r/min 离心10 min ,弃上清5 ．低渗：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低渗30 min ，中间（约15 min ）再吹散一次，使细胞分散，悬浮于溶液中6．离心：1000r/min离心10 min，弃上清7．固定：沉淀加8ml固定液，并用吸管轻轻吹匀，进行固定，中间（约15 min ）再吹散一次试验步骤8. 离心：1000r/min 离心10 min ,留1 ml 左右上清，轻轻吹打成细胞悬液9. 滴片：用吸管吸取细胞悬液，高度30-40 cm，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干10. 染色：改良石炭酸品红染色10-20 min11. 观看：低倍高倍。
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2.了解小鼠染色体核型。
3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。
器材与试剂
内容与方法
（一）小鼠骨髓细胞染色体制备
预处理
取材，收集细胞
低渗
染色
滴片
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固定、再固定
5
❖取材前2～3h，向腹腔 内注射秋水仙素。注射 浓度随动物种类不同而 异。秋水仙素的主要作 用是使分裂细胞阻断在 有丝分裂中期，增加中 期分裂相的比例。
3、简述实验中应注意那些关键问题？
a
15
（二）染色体标本片观察 1.标本片质量评价 （1）细胞密度合适、均匀； （2）背景干净，细胞核和染色体清晰； （3）有较多的分裂相； （4）染色体分散较好。
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16
细胞密度
a
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染色体 分散度
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2.染色体形态特征观察
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19
3.染色体计数
16
8
9
22
腹腔内注射秋水仙素2~3小时后，颈椎脱臼
处死小鼠。
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6
小白鼠骨骼标本
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7
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8
取出小鼠的后肢股骨，注意不要将股骨剪断， 否则容易造成骨髓细胞的流失。
a
9
用纱布擦股骨上的肌肉组织，清除干净
注射器抽取生理盐水冲洗骨髓
a
10
收集细胞：
➢ 暴露骨髓腔，
➢ 反复冲洗骨髓腔获得 骨髓细胞，
➢ 收集到离心管中,
实验二 小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
a
1
实验原理
➢ 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞 数量较多。
a
2
➢ 秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。
a
3
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4
实验目的与要求：
1.熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
a
25
二、高尔基体（4×）
a
27
高尔基体（40×10）
a
28
高尔基体（40×10）
a
29
22+8+10=40
10
（100×10）
a
15
9+16+15=40
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4.细胞增殖指数统计
细胞增殖指数=
分裂细胞数
×100%
分裂细胞数+间期细胞数
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实验三 细胞器的观察
一、中心体 二、高尔基体
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一、中心体（4×10）
马蛔虫子宫横切片全貌
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中心体（10×10）
a
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中心体（40×10）
➢ 定容至6ml.
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滴片：
➢滴2~3滴于玻片上，吹气， ➢在酒精灯火焰过火8次， ➢做记号，凉干，染色
滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，10~15分 钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。
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a
13
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作业与思考题
1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染 色体中期分裂相。
2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各 起什么作用？