小鼠骨髓染色体制备及观察
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作和观察-医学资料
可见中西医学，一个是以“功能人” 为概念 的独特 的哲学 医学理 论体系 ，一个 是以“ 解剖人 、肉体 人”为 概念的 新兴的 现代医 学科学 理论体 系，二 者都不 是以完 整人为 研究对 象的科 学，从 理论讲 二者都 不是科 学的， 势必影 响各自 发展。 事实也 证明这 一切， 中医长 期停滞 不前、 疗效也 不确实 。西医 尽管发 展到目 前的基 因分子 层次， 但疾病 发病率 居高不 下，对 绝大部 分疾病 发病原 因认识 不清、 发病机 理弄不 明白， 治疗受 到制约 ，在小 小SAR S、禽 流感面 前竟束 手无策 ，在糖 尿病、 癌症、 心脑血 管疾病 、尿毒 症等相 当多疾 病面前 更是不 得不求 助或借 助中医 治疗。 一个是 疗效不 确实， 一个是 有些甚 至相当 多疾病 无法治 疗，这 就是中 西医学 结合的 缘由。 然而， 由于二 者是两 套理论 、两股 道上跑 的车， 风马牛 不相及 ，从理 论上讲 就没有 结合的 可能， 只是形 式上的 融合罢 了。故 出现西 医对治 疗不了 的疾病 只好求 助中医 ，而中 医则往 往采用 西医诊 断中医 治疗， 以及中 西治疗 法一块 用的局 面。
遗传学实验
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验目的 实验原理 实验用品 实验步骤 绘图 思考题
实验目的
掌握动物骨髓染色体标本制备基 本程，了解操作步骤的原理
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是 生成各种血细胞和原始细胞，具有高 度的分裂能力，本实验采用这一材料， 通过前处理，低渗，固定，制片，染 色等步骤制得染色体标本，可观察到 许多处于分裂中期的染色体，可以进 行染色体组型分析。
实验用品
1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
旋化程度或染色体长短大致一样。在所观察细胞 周围，没有离散单个或多个染色体存在，以免影 响计数。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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四、试验步骤(continued)
6.离心：1200rpm离心5分钟后弃去上清液， 7.固定：加8ml固定液并用吸管轻轻吹匀，室温下静 置20分钟，每10分钟时吹打一次。 8.离心：1200rpm离心6分钟，弃上清液。
9.离心：加1.5mL固定液，吸管吹打成细胞悬液。
一、试验目标
1. 经过小白鼠骨髓细胞染色体制备，初 步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体 方法 2.熟悉染色体形态、种类及小白鼠等动 物染色体数目及特点
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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二、试验原理
骨髓细胞是含有旺盛分裂能力细胞，从这些分裂细胞 中，可观察处处于分裂中期染色体，能对一个动物染色体 形态特征、数目进行准确观察和分析。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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几个动物染色体形态特征
动物名称 染色体数
染色体类型
x染色体形态
y染色体形态
青蛙 小白鼠
பைடு நூலகம்
26
中央、亚中央着丝粒染色 中央着丝粒染色体 中央着丝粒染色体
体
，介于6～7号
，介于8～9号
40
全部为近端着丝粒染色体 大小介于5～6号 大小介于19～20号
大白鼠
42
中央、亚中央近端着丝粒 近端着丝粒染色体 近端着丝粒染色体
10.滴片：用吸管吸收细胞悬液，滴在预冷载玻 片上，室温晾干
11.染色：10% Giemsa染液染色30分钟
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察ppt课件
9．在干净、湿冷的载玻片上以高距离滴2～3 滴上层细胞悬液，气干或在酒精灯上文火 烘干。注意在滴片时要有一定的高度（大 于40cm），使细胞膜破裂后易于使染色体 散开，并尽量使滴片上的细胞分布均匀， 不要重叠。
10．气干，染色。 在一块洁净的玻板上，将玻片标本有细胞的一面 朝下用牙签架空于玻板上。 11．用滴管将配好的染液充满于玻板与载玻片之间 的空隙中，注意载片上有细胞面的进行染色并在 滴加染液时注意排除气泡。视室温而定，染色15 分钟。 12．染色后，轻轻揭起玻片，倾斜玻片在自来水管 下细水流冲洗数秒，冲掉染液，擦干玻片标本底 面和四周，显微镜观察和分析。注意不要搞错沾 有细胞的一面。选择染色较好、较分散、形态清 晰的细胞分裂相，进行显微观察。
小鼠骨髓细胞染色体 标本的制备与观察
实验目的：
1．初步掌握动物骨髓细胞染色体的制备方法。 2．了解小鼠骨髓细胞染色体的形态特点。Fra bibliotek实验原理：
染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定 形式，是染色质紧密包装的结果。染色体 是有机体遗传信息的载体，对染色体的研 究在生物进化、发育、遗传和变异中有十 分重要的作用。
谢 谢 大 家
核型分析均是以中期染色体为标准，对制 作出的染色体标本进行照相以获得染色体 的显微图像，并将其剪裁排列即成，或用 专用软件进行分析排列。 凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各 种处理后，细胞就可进入分裂期此时均可 用于染色体分析。
在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的 组织之一。此时给动物注射一定剂量的秋 水仙素可使许多处于分裂的细胞停滞于中 期（ 秋水仙素可阻断纺锤丝微管的组装）， 然后采用常规空气干燥法制备染色体，即 可得到大量可供分析的染色体标本。本方 法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌 操作。
试验六 小白鼠骨髓细胞染色体制备及观察
小白鼠的保定和注射
五．结果与讨论
1．结果： （1）．选取分散良好的染色体绘实物图，上 传图片1幅）。 （2）．染色体计数（2n=40）。 2．讨论： （1）．实验前注射秋水仙素的作用？不作此 步会怎样？ （2）．为何要用冷冻片？烘烤片的作用？
小鼠骨髓细胞染色体
试验六 小白鼠骨髓细胞染色 体制备及观察
一．实验目的：
1．学习小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
2．观察骨髓细胞染色体，计数染色体。
二．原理：
活跃增值的组织细胞内染色体可用于制片分 析，秋水仙素（或以对二氯苯代之）可使 细胞分裂停滞于分裂中期，经染色处理， 可得到清晰的中期染色体标本。
三．材料试剂
1．材料：小白鼠；ห้องสมุดไป่ตู้
2．试剂：Giemsa染色液，0.4％KCl，2％柠 檬酸钠，固定液（甲醇：冰乙酸＝3：1）。
四．操作步骤
1．实验前4－8h小鼠腹腔注射秋水仙素1ml （0.14mg/ml）,(据小鼠体重用量调整)或1ml饱和 对二氯苯。 • 2．脱臼处死小鼠，取后肢胫骨和股骨，去两端。 用细针头注射器吸取2％柠檬酸钠1ml，反复冲洗 骨髓腔5次，将冲洗液（离心管中）加入0.4%KCl 低渗10min（8ml,37℃）。
• 3．离心（1000rpm，8min）,去上清液，加固定 液5ml（注意缓慢加入）。充分吹打，使沉淀块 分散，静置10min，再离心10min，弃上清液， 重复一次。
4．用约2ml固定液悬浮骨髓细胞成悬液（依 沉淀量定）。
5．取冷冻载片，距载片15cm高度滴下悬液 （取悬液前吸打均匀），单向吹气展开， 酒精灯上文火烘干。
实验九小鼠骨髓细胞染色体标本制备
四、实验步骤
1、预处理：实验 。作用：
2、处死动物：断颈处死小白鼠， 解剖小鼠内生殖器官，鉴别雌雄性别
3、取股骨：剥取股骨，剔去肌肉 组织，剪去两端的股骨头。
11、滴片：用吸管吸取细胞悬液， 滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰 上微微加热，室温晾干。预冷载玻片 的作用：
12、染色：10% Giemsa染液染色30分 钟。
13、镜检：低倍———高倍 。
五、作业
1、选择染色体清晰，分散好的 中期分裂相，计数染色体，显微摄影、 并打印出照片。
2、分析成功或失败的原因。
4、取骨髓：注射器吸取0.6ml生 理盐水, 针头插入股骨一端,反复冲 洗骨髓到10ml的离心管中。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻 管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用
6、离心：离心之前加1ml固定液 并用吸管轻轻吹匀，进行预固定；
同时秋水仙素作用能使染色体缩短、 变粗。
三、实验材料、器具和药品：
1、材料： 小白鼠 2、器具：
注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品： 0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨 髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造 血干细胞是生成各种血细胞的原始 细胞，具有高度的分裂增殖能力。
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察试验目的把握动物骨髓染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理试验原理小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂力量，本试验采纳这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观看到很多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。
试验原理制备方法包括以下几个要点:1. 用肯定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观看到染色体的显微图象试验用品1．材料：小白鼠2．器具：注射器（1ml,5ml）剪刀镊子玻璃吸管10ml刻度的离心管离心机载玻片盖玻片显微镜滤纸擦镜纸纱布恒温水浴锅3．药品：0.01%秋水仙素0.075MKCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）2%柠檬酸钠改良石炭酸品红试验步骤预处理取股骨冲洗骨髓离心低渗离心固定离心滴片染色观看1．预处理：试验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙素。
2．取股骨：断颈处死小鼠后，剔去肌肉组织，洗净3．冲洗骨髓：剪去两端的股骨头，吸取10ml 2%柠檬酸钠，注射器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨，洗液收集到10ml的离心管中4 ．离心：1000r/min 离心10 min ,弃上清5 ．低渗：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低渗30 min ，中间（约15 min ）再吹散一次，使细胞分散，悬浮于溶液中6．离心：1000r/min离心10 min，弃上清7．固定：沉淀加8ml固定液，并用吸管轻轻吹匀，进行固定，中间（约15 min ）再吹散一次试验步骤8. 离心：1000r/min 离心10 min ,留1 ml 左右上清，轻轻吹打成细胞悬液9. 滴片：用吸管吸取细胞悬液，高度30-40 cm，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干10. 染色：改良石炭酸品红染色10-20 min11. 观看：低倍高倍。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察PPT
结果分析
实验过程中，细胞培养和染色环节是关键，需要 严格控制实验条件，以保证染色体制备的质量。
染色体观察需要经验丰富的实验员，以确保准确 识别染色体的数目和结构。
实验结果与预期相符，证明了实验方法的可靠性 和准确性。
结果讨论与展望
本实验为小鼠骨髓细胞染色体制备与观察提供了有益 的参考，但仍需进一步优化实验条件和操作步骤，以
04
其他必要的缓冲液和盐溶液
实验仪器
显微镜
01
02
细胞培养箱
离心机
03
04
染色设备（染色缸、染色架等）
恒温水浴锅
05
06
吸管和移液器等定量工具
02
CATALOGUE
实验步骤
小鼠骨髓细胞的采集
01
02
03
麻醉小鼠
使用麻醉剂将小鼠麻醉， 确保其在整个采集过程中 保持安静。
采集骨髓
使用注射器抽取小鼠的骨 髓，注意抽取时要避免混 入其他组织或血液。
染色体组型分析
将染色体制成中期片，进行染色体组型分析，可以观察到染色体的配对情况、 排列顺序等特征，有助于判断染色体的结构异常。
染色体畸变分析
染色体结构畸变
观察染色体的结构畸变，如染色体断裂、倒位、缺失等， 可以分析出细胞在分裂过程中可能遇到的异常情况。
染色体数目畸变
分析染色体数目畸变，如非整倍体、多倍体等现象，有助 于了解细胞分裂过程中的异常变化。
小鼠骨髓细胞染色 体制备与观察
目录
• 实验准备 • 实验步骤 • 实验结果 • 结论与讨论
01
CATALOGUE
实验准备
实验材料
小鼠骨髓细பைடு நூலகம்胞样本
小鼠骨髓染色体制备与观察
u 高距离滴片：使细胞膜易于破裂，获得中期染色体 标本，在显微镜下观察染色体的结构和数量。
三、实验器材和试剂
1、器材 蜡盘、手术剪、小镊子、平皿、注射
器、10ml离心管、吸管、量筒、预冷载玻片、试 管架、离心机、恒温水浴锅、显微镜、香波油、 乙醚酒精、擦镜纸
滴1～2滴，用口顺着倾斜面吹散源自胞，迅速过火焰3-5次进行干燥。 注意：a. 温度、高度、倾斜度 b. 火焰干燥的目的：使固定液迅速挥发，产生四周张力加速
细胞破裂，使染色体更好地粘连在载玻片上；不可使载玻片烫手。
7.染色：在玻片上滴几滴Giemsa染液并铺匀，染色8～10min，倒去染
液，用自来水缓缓冲洗干净、晾干。（染色盘中进行） 注意：采用平铺的方法
21三体综合征； 18三体综合征、 猫叫综合征
18三体综合征
二、实验原理
染色体标本的观察广泛应用于一些疾病的临床诊 断中。例如白血病、恶性血液病等的诊断。
染色体是染色质在细胞分裂期的存在形式。 细胞分裂的中期，染色体在赤道板上排列清晰，
是染色体观察的最佳时期。
骨髓细胞 数量多且分裂旺盛，可直接进行染色体 标本的制备。取材方便，操作简单和无需体外培养 和无菌操作，是研究小型哺乳动物等染色体的常用 方法。
作用：终止低渗；维持细胞的膨胀状态；防止离心破裂
5. 固定、制细胞悬液：加固定液5ml 吹打混匀 固定15min 离心1500r/min，5min 弃上清，加固定液 0.2~0.4ml 吹打成细胞悬液，准备制片使用。
制备细胞悬液时，根据具体情况加固定液，以悬液呈现 乳白色为宜。
6. 滴片：冰片倾斜30°, 细胞悬液距离玻片15-30cm高，在不重叠位置
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小鼠骨髓染色体制备及观察
许多化学毒物具有遗传毒性
基因突变：碱基置换和移码突变。
染色体畸变（structural chromosome aberration)：是指由于染色体或染色单体断裂，造成染色体或染色单体缺失或引起各种重排，从而出现染色体结构异常
颜色体数目异常：整倍性和非整倍性改变。
染色体损伤的类型：
☐染色体数目的改变
①非整倍体：亚二倍体或超二倍体。
②整倍性改变：染色体成倍增加。
☐染色体结构的改变
1.断裂和裂隙：
2.微小体；较断片小而呈圆形。
3.有着丝点环：带有着丝点部分，两端形成环状结构并伴有一双无着丝
点断片。
4.无着丝点环：成环状结构。
5.插入/重复
8 非特定性型变化：如粉碎化、着丝点细长化、粘着等
整倍性畸变
非整倍性畸变
如何评价化合物的遗传毒性？
鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）：是最常用的检查基因突变的方法。
检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型(his+)的能力
☐评价染色体损伤的试验方法包括：
常用啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE) 微核试验 体外培养细胞或者体内染色体畸变试验
2、实验原理
☐有丝分裂：真核细胞的染色质凝集成染色体，复制的姐妹染色单体在纺锤丝的牵拉下分向细胞的两极，从而产生两个染色体数目和遗传性相同的子细胞的一种细胞分裂的类型。
☐细胞周期：从一次有丝分裂完成时开始，到下一次有丝分裂结束时为止，成为一个细胞周期。
G1：从有丝分裂结束到DNA 复制之前；
S: DNA 合成；
G2：DNA 复制结束到有丝分裂开始；
M ：有丝分裂期
✓增殖群细胞，细胞始终保持分裂能力，持续进入分裂循环；
✓不再增殖细胞，比如神经细胞；✓暂不增殖细胞，
比如肝脏细胞。
端着丝粒染色体。