小鼠染色体的制备观察染色
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作和观察-医学资料
可见中西医学，一个是以“功能人” 为概念 的独特 的哲学 医学理 论体系 ，一个 是以“ 解剖人 、肉体 人”为 概念的 新兴的 现代医 学科学 理论体 系，二 者都不 是以完 整人为 研究对 象的科 学，从 理论讲 二者都 不是科 学的， 势必影 响各自 发展。 事实也 证明这 一切， 中医长 期停滞 不前、 疗效也 不确实 。西医 尽管发 展到目 前的基 因分子 层次， 但疾病 发病率 居高不 下，对 绝大部 分疾病 发病原 因认识 不清、 发病机 理弄不 明白， 治疗受 到制约 ，在小 小SAR S、禽 流感面 前竟束 手无策 ，在糖 尿病、 癌症、 心脑血 管疾病 、尿毒 症等相 当多疾 病面前 更是不 得不求 助或借 助中医 治疗。 一个是 疗效不 确实， 一个是 有些甚 至相当 多疾病 无法治 疗，这 就是中 西医学 结合的 缘由。 然而， 由于二 者是两 套理论 、两股 道上跑 的车， 风马牛 不相及 ，从理 论上讲 就没有 结合的 可能， 只是形 式上的 融合罢 了。故 出现西 医对治 疗不了 的疾病 只好求 助中医 ，而中 医则往 往采用 西医诊 断中医 治疗， 以及中 西治疗 法一块 用的局 面。
遗传学实验
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验目的 实验原理 实验用品 实验步骤 绘图 思考题
实验目的
掌握动物骨髓染色体标本制备基 本程，了解操作步骤的原理
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是 生成各种血细胞和原始细胞，具有高 度的分裂能力，本实验采用这一材料， 通过前处理，低渗，固定，制片，染 色等步骤制得染色体标本，可观察到 许多处于分裂中期的染色体，可以进 行染色体组型分析。
实验用品
1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子
小鼠染色体标本制作、染色及观察
科目细胞生物学实验题目小鼠染色体标本的制作、染色与观察姓名***系年级2011级生物基地学号*** 同组者***日期2013/05/23、302013/05/30小鼠染色体标本的制作、染色与观察【实验目的】1.初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。
2.了解常用实验动物染色体的数目及特点。
3.认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组形图。
【实验原理】凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各种处理后，任何动物组织的细胞就可进入分裂，均可用于染色体分析。
在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。
给动物注射一定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。
本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。
骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。
但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实验选用小鼠的精巢为实验材料。
对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点: 1.用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处; 2.用低渗法使细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上; 3.空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平,经Giemsa 染色后便可观察到染色体的显微图象。
Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。
主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。
【实验材料】1.试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的NaCl溶液）、0.3%KCl低渗溶液、固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液。
2.器具：解剖盘、镊子、眼科剪、小烧杯（×2）、吸管、玻璃刻度离心管、恒温水浴锅、离心机、铜网、预冷载玻片、记号笔、普通光学显微镜、玻璃等。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
实验目的：
本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本，并通过显微镜观察染色体的形态和数量，并了解染色体的组成和结构。
实验原理：
染色体是细胞核中最大的有组织结构，由DNA和蛋白质组成。
染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。
在有丝分裂过程中，染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。
为了制备染色体标本，需要通过细胞的裂解，释放和固定染色体，然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。
实验步骤：
1. 取出小鼠的股骨，并在无菌条件下对其进行消毒。
2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端，将骨髓剪下，加入RPMI-1640培养液中，使髓液悬浮，然后用细胞培养器将其孵育2-3天，使骨髓细胞增殖。
3. 用离心机将骨髓细胞离心，去除培养液，用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。
4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上，让其固定，然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。
5. 用显微镜观察染色体标本，记录染色体的数量和形态，并观察细胞的分裂状态。
实验结果：
制备的染色体标本在显微镜下观察。
通过对标本的观察，我们可以看到染色体形态和数量的变化，以及细胞分裂状态的变化。
同时，我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息，包括基因序列和调控因子等。
结论：
本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。
观察染色体形态和数量的变化，可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。
同时，该实验也展示了染色体的重要性和组成结构，加深了对细胞生物学的理解。
小鼠染色体染色观察
题目：小鼠细胞染色体染色观察一．O bjectives:1.Learn the method of preparation of mouse chromosome frommarrow.学习制备从骨髓中制备小鼠染色体的方法。
2.Understand the morphology and amount of mouse mitotic.了解小鼠有丝分裂期细胞染色体的形态和数量。
二．实验原理1.秋水仙碱，一种生物碱，因最初从百合科植物秋水仙中提取出来，故名，也称秋水仙素。
纯秋水仙碱呈黄色针状结晶，熔点157℃。
易溶于水、乙醇和氯仿。
味苦，有毒。
秋水仙碱能抑制有丝分裂，破坏纺锤体，使染色体停滞在分裂中期。
这种由秋水仙碱引起的不正常分裂，称为秋水仙碱有丝分裂。
在这样的有丝分裂中，染色体虽然纵裂，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，因而使染色体加倍。
2.现今微丝标记方法分为在细胞中标记微丝和活体细胞中标记微丝。
固定细胞中的微丝主要是用带荧光探针的抗体或鬼笔环肽标记，需要对样品进行化学固定和膜的通透。
活体标记常采用荧光类似物标记的方法和GFP标记方法。
三．实验材料及设备1.实验材料：a)秋水仙素稀释液b)小鼠一只c)75mM KCl低渗溶液d)固定液e)Giemas染液2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片若干，注射器。
c)酒精灯d)离心管若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四．实验方法及步骤1.提前3-4h向小鼠腹腔中注射秋水仙素，然后用引颈法处死小鼠。
2.完整取出小鼠股骨（胫骨），取出骨骼表面肌肉和其他结缔组织。
3.将胫骨两端剪开，用注射器吸取适量75mM KCI将骨髓冲洗到离心管中。
4.低渗处理：用约6ml的75mM KCI在37℃下低渗骨髓细胞20min。
5.预固定：加入1-2ml新配制的固定液，用吸管混合均匀，1000r/min离心8分钟6.固定：吸去上清液，沿离心管壁缓缓加入6ml固定液，立即用吸管吹打成细胞悬液，在室温下静置固定15min。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
滴片：
➢滴2~3滴于玻片上，吹气， ➢在酒精灯火焰过火8次， ➢做记号，凉干，染色
滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，10~15分 钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。
作业与思考题
• 1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染 色体中期分裂相。
• 2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各 起什么作用？
15
9+16+15=40
4.细胞增殖指数统计
细胞增殖指数=
分裂细胞数
×100%
分裂细胞数+间期细胞数
实验三 细胞器的观察
一、中心体 二、高尔基体
一、中心体（4×10）
• 马蛔虫子宫横切片全貌
中心体（10×10）
中心体（40×10）
二、高尔基体（4×10）
脊神经节切片
高尔基体（10×10）
2.了解小鼠染色体核型。
3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。
• 器材与试剂
• 内容与方法
（一）小鼠骨髓细胞染色体制备
预处理
取材，收集细胞
低渗
染色
滴片
固定、再固定
❖取材前2～3h，向腹腔 内注射秋水仙素。注射 浓度随动物种类不同而 异。秋水仙素的主要作 用是使分裂细胞阻断在 有丝分裂中期，增加中 期分裂相的比例。
• 3、简述实验中应注意那些关键问题？
（二）染色体标本片观察 1.标本片质量评价 （1）细胞密度合适、均匀； （2）背景干净，细胞核和染色体清晰； （3）有较多的分裂相； （4）染色体分散较好。
细胞密度
染色体 分散度
2.染色体形态特征观察
3.染色体计数
40
10
（100×10）
高尔基体（40×10）
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察ppt课件
9．在干净、湿冷的载玻片上以高距离滴2～3 滴上层细胞悬液，气干或在酒精灯上文火 烘干。注意在滴片时要有一定的高度（大 于40cm），使细胞膜破裂后易于使染色体 散开，并尽量使滴片上的细胞分布均匀， 不要重叠。
10．气干，染色。 在一块洁净的玻板上，将玻片标本有细胞的一面 朝下用牙签架空于玻板上。 11．用滴管将配好的染液充满于玻板与载玻片之间 的空隙中，注意载片上有细胞面的进行染色并在 滴加染液时注意排除气泡。视室温而定，染色15 分钟。 12．染色后，轻轻揭起玻片，倾斜玻片在自来水管 下细水流冲洗数秒，冲掉染液，擦干玻片标本底 面和四周，显微镜观察和分析。注意不要搞错沾 有细胞的一面。选择染色较好、较分散、形态清 晰的细胞分裂相，进行显微观察。
小鼠骨髓细胞染色体 标本的制备与观察
实验目的：
1．初步掌握动物骨髓细胞染色体的制备方法。 2．了解小鼠骨髓细胞染色体的形态特点。Fra bibliotek实验原理：
染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定 形式，是染色质紧密包装的结果。染色体 是有机体遗传信息的载体，对染色体的研 究在生物进化、发育、遗传和变异中有十 分重要的作用。
谢 谢 大 家
核型分析均是以中期染色体为标准，对制 作出的染色体标本进行照相以获得染色体 的显微图像，并将其剪裁排列即成，或用 专用软件进行分析排列。 凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各 种处理后，细胞就可进入分裂期此时均可 用于染色体分析。
在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的 组织之一。此时给动物注射一定剂量的秋 水仙素可使许多处于分裂的细胞停滞于中 期（ 秋水仙素可阻断纺锤丝微管的组装）， 然后采用常规空气干燥法制备染色体，即 可得到大量可供分析的染色体标本。本方 法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌 操作。
实验五：小鼠骨髓染色体的制备与C带染色
一.小鼠骨髓染色体的制备
【实验目的】 n 学会小鼠骨髓染色体标本的制备
【实验原理】
n 处于分裂期的细胞经秋水仙素处理,由于阻断了 纺锤丝微管的组装,使细胞分裂停止于中期,此 时染色体达到最大收缩,具有典型的形态。
n 本实验所用的小鼠骨髓细胞具有高度的分裂活 性并且数量非常多,经秋水仙素处理后,可使分 裂的细胞阻断在有丝分裂中期,再经低渗、固定、 滴片染色等处理,便可制作较好的小鼠骨髓细胞 染色体标本。
【仪器、材料和试剂】
n （一）仪器 光学显微镜,冰箱,恒温水浴锅。
n （二）材料 n 已制备好的小鼠骨髓染色体载玻片,染色缸,烧杯,镊子
等。 n （三）试剂 n 盐酸(0.2mol/l),5％Ba(OH)2(50℃预热),2×SSC溶液
(60-65℃预热),Giemsa染液
【实验步骤】
1.按上述小鼠骨髓染色体的制备步骤制备染色体
二.染色体C带的制备
【实验目的】 学会小鼠骨髓染色体C带的制备
【实验原理】
n 借助特殊的燃料及染色程序,使染色体的一定部 位呈现深浅不同的带纹,可用来鉴别染色体组, 单个染色体以及深入认识染色体的结构和功能。
n C带可使着丝粒区,端粒区的异染色质及其他染 色体区段的异染色质部分呈Giemsa深染,其他 部分呈淡染。
（三）试剂
n 1．秋水仙素:以1mg/mL的浓度溶于0.85％ 生理盐水中。
n 2．低渗液: 0.075mol/lKCl取5.59gKCl加 到1000mL蒸馏水中,在37℃下预热。
n 3．固定液:甲醇:冰醋酸以3:1配制(新鲜的)
【实验步骤】
1.取雌雄小鼠各一只,注射秋水仙素0。1mL于腹腔中,经3。54h后拉颈椎处死。 2.剪开腹腔,剥离出两条后肢,由股骨关节处剪断,取下后肢(注 意不要将股骨剪断)。 3.将骨骼外面的肌肉尽可能剪掉,剩下附着在骨骼上的少许肌 肉,用棉花或 纱布蘸75％酒精来回搓,直到骨骼外面不带任何肌肉为止。 4.剥离股骨,并将股骨头的两端减去少许,然后用4号针头插入 骨髓腔内,将股骨穿通(注意:不要用力过大,以防骨骼破裂)。
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察试验目的把握动物骨髓染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理试验原理小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂力量，本试验采纳这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观看到很多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。
试验原理制备方法包括以下几个要点:1. 用肯定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观看到染色体的显微图象试验用品1．材料：小白鼠2．器具：注射器（1ml,5ml）剪刀镊子玻璃吸管10ml刻度的离心管离心机载玻片盖玻片显微镜滤纸擦镜纸纱布恒温水浴锅3．药品：0.01%秋水仙素0.075MKCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）2%柠檬酸钠改良石炭酸品红试验步骤预处理取股骨冲洗骨髓离心低渗离心固定离心滴片染色观看1．预处理：试验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙素。
2．取股骨：断颈处死小鼠后，剔去肌肉组织，洗净3．冲洗骨髓：剪去两端的股骨头，吸取10ml 2%柠檬酸钠，注射器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨，洗液收集到10ml的离心管中4 ．离心：1000r/min 离心10 min ,弃上清5 ．低渗：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低渗30 min ，中间（约15 min ）再吹散一次，使细胞分散，悬浮于溶液中6．离心：1000r/min离心10 min，弃上清7．固定：沉淀加8ml固定液，并用吸管轻轻吹匀，进行固定，中间（约15 min ）再吹散一次试验步骤8. 离心：1000r/min 离心10 min ,留1 ml 左右上清，轻轻吹打成细胞悬液9. 滴片：用吸管吸取细胞悬液，高度30-40 cm，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干10. 染色：改良石炭酸品红染色10-20 min11. 观看：低倍高倍。
简述小鼠染色体制备的流程
简述小鼠染色体制备的流程小鼠染色体制备。
选只小鼠，得挑健康的，不能是病怏怏的那种。
然后，得给它打麻药，让它舒舒服服地睡一觉。
这样咱们就能轻松取得细胞了。
取细胞这活儿，得迅速。
从骨髓或者脾脏里取，这得看实验需求。
取出来后，咱们得让细胞在低渗环境里待会儿，这样染色体就能胀大，看得更清楚。
然后，用固定液固定一下，这样细胞形态就稳定了。
接下来，就是染色和观察了。
用专门的染料给染色体上色，让它们变得五彩斑斓的。
然后，在显微镜下瞅瞅，看看这些染色体长啥样，数数有多少个。
这可得细心点，不能漏看了。
说起来，小鼠染色体制备这事儿，看着简单，其实挺考验技术的。
得选对小鼠，还得会取细胞、染色、观察。
不过，只要技术到位，就能得到清晰的染色体，为后面的研究打好基础。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备【目的要求】1.掌握小鼠细胞染色体标本制备方法。
2.计数并观察小鼠骨髓细胞分裂中期染色体的数目及特点【基本原理】在骨髓细胞中，有丝分裂旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到中期细胞。
骨髓细胞具有高度的分裂活性，经秋水仙素或秋水酰胺处理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。
【实验用品】1．器材：解剖刀、剪刀、镊子、注射器、离心机、离心管、恒温水浴箱、冰冷载玻片、酒精灯、大培养皿、显微镜、纱布,标签纸，记号笔等；2．试剂0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa 染液等。
3．材料：65-90天健康小鼠（生技09级72人，新华09生物技术36人，生科08级75人，生技08级70人，共253人，需购小鼠110只）【方法与步骤】1．前处理取材前3～4 h，向腹腔内注射秋水仙素。
注射浓度随动物种类不同而异，一般每克体重注射2～6μg，注射总量不宜超过2 ml（例如一只体重50 g的蟾蜍，若按4μg / g注射，需注射浓度为0.1％的秋水仙素溶液0.2 ml ）。
秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。
2．取骨髓细胞处死动物，用装有生理盐水的注射器反复冲洗出骨髓细胞，并用注射器筒轻轻吹打，使细胞团块分散，静置片刻、待大组织团块沉淀后，用吸管将骨髓细胞悬浮液移至离心管中，以1000 r / min 离心5~10 min，弃去上清液。
3．低渗根据骨髓细胞液的多少，加0.075 mol / L的KCI液5～6 ml，在37℃水浴箱中或室温下低渗20～30 min。
低渗时间过长，易造成细胞破裂；时间过短，则染色体难以分散。
4．预固定低渗完毕，立即加入1 ml 新配制的预冷Carnoy’s固定液，用吸管将细胞轻轻吹打均匀，进行预固定。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
细胞培养：在适宜的条件下将细胞从体内分离出来进行体外培养 传代：将培养的细胞按照一定的比例进行分装使细胞能够继续生长
制备前的准备：选 择合适的细胞培养 并维持细胞生长。
细胞固定：使用固 定剂将细胞固定在 一定位置防止细胞 移动。
细胞染色：根据实 验需求选择合适的 染色剂进行染色。
观察与拍照：使用 显微镜观察染色后 的细胞并记录照片 。
小鼠骨髓细胞染色体 制备与观察
汇报人：
目录
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实验准备
染色体制备
观察和分析
实验结论
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实验准备
小鼠骨髓细胞
培养基
胰蛋白酶
秋水仙碱
实验仪器：显微镜、离心机、细胞培养皿、细胞 刮刀等
实验试剂：生理盐水、胰蛋白酶、甲醇、冰醋酸、 Giems染料等
准备实验器材：显微镜、染色剂、 细胞培养皿等
染色体测量：使用显微测微尺等工具测量染色体的长度、宽度、着丝粒位置等特征有助于分析染色体的形态和结 构。
染色体组型分析：根据染色体的数目、形态和结构特征进行染色体组型分析有助于了解小鼠骨髓细胞的遗传特征 和变异情况。
染色体核型分析：通过观察染色体的数目、形态和排列方式分析染色体的核型有助于了解小鼠骨髓细胞的染色体 异常和遗传疾病。
实验前要洗手戴手套避免手上的杂 菌污染细胞。
染色体制备过程中要控制好温度和 时间避免温度过高或时间过长导致 细胞死亡。
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染色体制备过程中要保持细胞活性 避免细胞死亡。
染色体制备过程中要选择适当的染 色剂避免使用过多的染色剂导致细 胞死亡。
观察和分析
观察步骤：将制备好的小鼠骨髓细胞染色体放在显微镜下调整焦距观察染色体的形态和分布
染色体标本制作与观察实验报告
【实验题目】染色体标本制作与察看【实验目的】1、掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，认识各操作步骤的原理。
2、认识常用实验动物染色体的数目及特色。
3、认识不一样生物染色体的特色，学会做染色体组型图。
【实验资料与用品】器械：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心计、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯等资料：小鼠试剂：蒸馏水、%NaCl溶液、%KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素【实验原理】一、制作染色体标本的先决条件细胞拥有旺盛的分裂能力：选择活跃的组织，如胸腺、骨髓、睾丸、小肠；或施加药物使细胞分裂（PHA）想法获得大批的分裂中期细胞：利用秋水仙素二、染色体染色体是基因的载体。
真核细胞染色体的数目和构造是重要的遗传特征之一。
制备染色体标本是细胞学最基本的技术之一，优秀的染色体系片是进行染色体显带、组型剖析、原位杂交等的先决条件。
染色体的制备在原则上能够从全部发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中获得。
最常用的门路是从骨髓细胞、血淋巴细胞、、和组织培育的细胞中制备染色体。
本实验采纳的方法是从小鼠的睾丸细胞中获得。
染色体的形态构造在细胞增殖周期中是不停的运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体形态最典型、最易辨识和划分。
所以，制备染色体标本获得的是中期细胞。
染色体特色：数目、长度（绝对长度、相对长度）、着丝粒地点（M/SM/ST/T)、随体与次缢痕的数目大小和地点、带型剖析描绘染色体的四个参数：①相对长度=（每条染色体的长度）/（单倍常染色体之和+X染色体）*100，相对长度可以用来表示每条染色体的长度。
②臂指数=（长臂的长度）/(短臂的长度)，臂指数能够用来确立臂的长度。
③着丝粒指数=（断臂长度）/（染色体全长）*100，着丝粒指数能够决定着丝粒的相对位置。
④染色体臂数（NF），依据着丝粒的地点来确立。
三、操作原理小型动物的染色体系片最好最有效的资料就是骨髓组织（因为分裂活动旺盛，睾丸也可）利用睾丸细胞的制片技术固然需要离心以及仔细的操作，但基本程序其实不复杂。
小鼠染色体标本制作、染色及观察
小鼠染色体标本制作、染色及观察小鼠是生产药物和进行基因研究的重要实验动物之一。
了解其染色体特征和行为对于生物学和医学研究非常重要。
本文将介绍如何制作小鼠染色体标本，以及染色和观察的步骤。
制作小鼠染色体标本需要使用小鼠肺部组织。
以下是制作步骤：1. 首先将小鼠处死，取出肺部组织并剪成小块。
2. 将肺组织移入一个离心管中，并添加10毫升10％KCl溶液。
3. 用注射器向管中注入溶液，轻轻摇动以使组织浸泡在KCl中。
4. 将溶液和组织离心5分钟，然后倒掉上层液体。
5. 用少量冰冷等渗氨水将沉淀悬浮并再次离心。
6. 倒掉上层液体，重复该步骤直到样品中不含有明显的碎片和其他杂质。
7. 最后，在离心管中滴加10毫升3：1（甲醇：冰醋酸）混合液，并轻轻混合。
8. 将混合液沿离心管壁滴加，使其缓慢地沉淀到底部。
变态反应需要放置在-20°C 的60分钟以上。
9. 滴掉液体，并用75％乙醇固定沉淀。
染色将固定的小鼠染色体标本染色需要的材料如下：1. 铬酸盐染液2. 蒸馏水3. 复方玫瑰红4. 静电纸和制作装置染色步骤如下：1. 将铬酸盐染液溶解在蒸馏水中（比例为1：3），搅拌混合。
2. 将小鼠染色体标本放在静电纸上，用制作装置连接到正离子极板上。
3. 用玫瑰红溶液覆盖标本，使其均匀覆盖。
4. 将正极板移动到离开标本1-2厘米的位置，并接通电源。
5. 在2-5分钟内，染色体将升起并接触到铬酸盐染液，染色体将呈现出不同的条纹状。
观察1. 显微镜2. 移相仪1. 将小鼠染色体标本放在显微镜上，并使用20倍至100倍的放大倍数进行观察。
2. 用相机或移相仪将图像捕捉下来以进行记录和分析。
总结小鼠染色体标本制作、染色和观察需要精细的技术和专业知识。
掌握这些技能对于研究小鼠染色体特征和行为非常重要。
希望本文的介绍有助于读者理解有关小鼠染色体标本制作、染色和观察的相关知识。
实验三、小鼠骨髓染色体制备与观察PPT课件
染色体观察的原理
染色体观察
通过显微镜观察染色体制片，可以观察到染色体的形态、 数目和结构等信息。观察时需要选择适当的显微镜倍数和 焦距，以便清晰地看到染色体。
显微镜倍数选择
根据实验需求选择适当的显微镜倍数。高倍镜下可以观察 到更加细致的染色体结构，但视野较小；低倍镜下可以观 察到更多的染色体，但分辨率较低。
选择合适的区域，使用高倍镜观察染 色体的形态和数目。
低倍镜观察
使用低倍镜观察载玻片上的细胞分布 情况。
数据分析与处理
数据记录
详细记录每个细胞的染色体数目 和形态。
数据整理
将记录的数据进行整理，统计染色 体异常的比例。
结果分析
根据数据结果分析染色体异常与疾 病之间的关系。
04
结果分析
正常染色体特征分析
THANKS
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染色体结构异常特征
染色体结构异常是指染色体内部结构的改变，包括易位、倒位、缺失和重复等。这类异常 可能导致遗传性疾病如唐氏综合征、威廉姆斯综合征等，以及生长发育异常、智力障碍和 生育障碍等症状。
03
实验步骤
小鼠骨髓细胞的采集
麻醉小鼠
脱臼处死
切开皮肤和骨骼
抽取骨髓
使用麻醉剂将小鼠麻醉， 确保其在整个实验过程
疾病易感性增加
某些染色体异常可能导致小鼠对某些疾病或药物的易感性增加，如 肿瘤、感染等。
05
结论与讨论
实验结论总结
实验成功制备了小鼠 骨髓染色体，观察到 了清晰的染色体形态 和结构。
实验结果支持了前期 理论分析，验证了实 验方法的可行性和准 确性。
实验结果表明，小鼠 骨髓染色体数目正常， 未发现染色体异常现 象。
中保持安静。
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生命科学学院
Life Science College
细
胞
生
物
学
实验报告
姓名：柳伟雄班级：2013级生科一班
学号：同组者：曾玮璠
山东大学实验报告2015年6月1日
姓名：柳伟雄系年级：生科一班2013级同组者：曾玮璠
科目：细胞生物学实验题目：小鼠染色体的制备、染色、观察
一、目的和要求
1.初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操
作步骤的原理。
2.了解常用实验动物染色体的数目及特点。
3.认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组形图。
二、原理
凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各种处理后，任何动物组织的细胞就可进入分裂，均可用于染色体分析。
在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。
给动物注射一定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。
本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。
骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。
但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实
验选用小鼠的精巢为实验材料。
对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处; 2. 用低渗法使细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上; 3. 空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平,经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。
Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。
主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。
三、试剂和器材
1.试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的NaCl溶液）、0.3%KCl低渗溶液、固定液（甲
醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液
Giemsa染液的配制：
吉姆萨粉(Giemsa stain)
甘油(AR)
甲醇(AR)
将Giemsa粉放入研钵中，先加入少量甘油，研磨至无颗
粒为止，然后再分批加入甘油，放56℃温箱中2h后，分批
加入甲醇，将配制好的染液密封保存棕色瓶内(最好于0~4℃
保存)。
使用前，将母液用PBS稀释后使用。
2.器具：解剖盘、镊子、眼科剪、小烧杯（×2）、吸管、玻璃刻度离心管、离心
机、铜网、预冷载玻片、记号笔、普通光学显微镜、玻璃等
3.材料：小白鼠
四、实验步骤
制片
1.取雄性小鼠以每克体重4μg注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法杀死小
鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9%的NaCl溶液）洗去血污。
2.将睾丸放入装有1ml 0.3%KCl低渗溶液的小烧杯中剪碎至呈乳白色。
3.用铜网过滤到玻璃刻度离心管中，再加0.3%KCl缓冲溶液至4ml。
4.静置30min，进行低渗处理。
5.以800～1000r/min的转速离心8min。
6.取出离心管，弃去上清液，加入2ml固定液（甲醇：冰醋酸=3：1），并用吸管
至管底吹气，轻轻打散细胞，固定8min。
7.再以800～1000r/min转速离心8min。
8.弃上清，加入1ml固定液，再制成细胞悬液，固定5min。
9.取洁净的低温预冷载片，距载片10～15cm高度滴下2～3滴细胞悬液，从载片
一边向另一边轻轻吹气，同时轻轻敲打载片，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。
10.用滤纸擦去载片上多余液体，空气干燥或成文火干燥。
染色
11.用Giemsa染色20～30min，细水冲洗玻片背面，去多余染液，气干。
本实验染色采用倒置染色法，具体方法如下：
在玻璃板上用废旧载玻片作支架，使标本载玻片的标本面向下放置到支架上，在玻璃板和标本载玻片之间滴加Giemsa染液，目的一可以节省染料，二可以避免染液快速挥发，三可以防止染液颗粒沉淀，影响观察。
在操作时应注意，多个样品同时染色应摆放紧密，不要有间隙；滴染液时应尽量慢，不要有气泡，以免部分染色体不被着色。
12.镜检：低倍镜下寻找分散良好、染色适中的分裂相，高倍镜或油镜下观察染色
体形态并计数。
五、实验结果
本实验采用的是小鼠的精巢，部分细胞处于减数第一次分裂中期，这样的细胞是二倍体，应有40条染色体；有些处于减数第二次分裂中期，这样的细胞是单倍体，应有20条染色体。
还有一些细胞处于分裂期，但不是中期，这类细胞染色体的凝集程度不是很高。
经过仔细查找，最终找到处于减数分裂中期的染色体。
如图，处于减数分裂中期的染色体染色质凝缩程度达到最大。
小鼠的染色体多为端着丝粒染色体（17、18对染色体为亚端部），呈“V”字形或“U”字形。
由于重叠较多，数目难以数清。
六、注意事项
1.断头法处死小鼠后，血液要冲洗干净，以免影响之后的实验的进行。
2.从开始加入0.3%KCl低渗溶液至37℃恒温水浴低渗处理结束，时间控制在50min 以内。
3.两次离心的转速控制在800～1000转/分，不要太高，以免破碎细胞。
4.滴片时，使滴管与载玻片间的距离尽量远，这样细胞才能被“摔碎”，使眼睛、滴管、载玻片竖直成一条直线，保证细胞悬液能被滴在载玻片上。
5.滴完片之后，将载玻片的一端轻轻在试验台边缘敲打，使未破碎的细胞破碎。
6.多个样品同时进行染色时，载玻片应摆放紧密，不要有间隙；滴染液时应尽量
慢，不要有气泡，以免部分染色体不被着色。
七、结果分析
实验中发现，细胞分散比较均匀，但是染色体展开并不完全，这说明低渗这一步骤可能没有做好，使得染色体不能完全展开。