小鼠染色体的制备观察、染色
实验6小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察
内容与方法
1、动物预处理：取材前 3~4小时，腹腔注射 0.01%的秋水仙素。
2、取材：处死小白鼠，剥取股 骨，暴露骨髓腔，用4~5ml KCl 冲洗骨髓腔获得骨髓细胞，定容 至6ml。
4、预固定：加1mlCarnoy 固定液混匀，配平，离心 1000rpm/8分钟。
3、低渗：37度恒温水浴30分钟 ➢在酒精灯火焰过火2~3次， ➢做记号，凉干，染色
作业与思考题
1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞 染色体中期分裂相。
2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液 各起什么作用？
3、简述实验中应注意那些关键问题？
目的与要求
1、掌握脊椎动物骨髓细胞染色体标本制备的 方法；
2、了解小鼠骨髓细胞染色体的形态和数目。
实验原理
➢ 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞 数量较多。
➢ 秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。
5、固定：弃上清，再加 Carnoy 固定液至6ml刻度， 悬浮，静置20分钟，离心 同上。
6、制片：去上清液,加少量固定液， 混匀，滴片，
7、染色：Giemsa染色10分钟
取材：椎脱臼处死小白鼠，剥取股骨。
小白鼠骨骼标本
收集细胞：
➢ 暴露骨髓腔，
➢ 反复冲洗骨髓腔获得 骨髓细胞，
➢ 收集到离心管中,
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作和观察-医学资料
可见中西医学，一个是以“功能人” 为概念 的独特 的哲学 医学理 论体系 ，一个 是以“ 解剖人 、肉体 人”为 概念的 新兴的 现代医 学科学 理论体 系，二 者都不 是以完 整人为 研究对 象的科 学，从 理论讲 二者都 不是科 学的， 势必影 响各自 发展。 事实也 证明这 一切， 中医长 期停滞 不前、 疗效也 不确实 。西医 尽管发 展到目 前的基 因分子 层次， 但疾病 发病率 居高不 下，对 绝大部 分疾病 发病原 因认识 不清、 发病机 理弄不 明白， 治疗受 到制约 ，在小 小SAR S、禽 流感面 前竟束 手无策 ，在糖 尿病、 癌症、 心脑血 管疾病 、尿毒 症等相 当多疾 病面前 更是不 得不求 助或借 助中医 治疗。 一个是 疗效不 确实， 一个是 有些甚 至相当 多疾病 无法治 疗，这 就是中 西医学 结合的 缘由。 然而， 由于二 者是两 套理论 、两股 道上跑 的车， 风马牛 不相及 ，从理 论上讲 就没有 结合的 可能， 只是形 式上的 融合罢 了。故 出现西 医对治 疗不了 的疾病 只好求 助中医 ，而中 医则往 往采用 西医诊 断中医 治疗， 以及中 西治疗 法一块 用的局 面。
遗传学实验
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验目的 实验原理 实验用品 实验步骤 绘图 思考题
实验目的
掌握动物骨髓染色体标本制备基 本程，了解操作步骤的原理
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是 生成各种血细胞和原始细胞，具有高 度的分裂能力，本实验采用这一材料， 通过前处理，低渗，固定，制片，染 色等步骤制得染色体标本，可观察到 许多处于分裂中期的染色体，可以进 行染色体组型分析。
实验用品
1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子
染色体标本制作和观察实验报告
【实验题目】染色体标本制作与观察【实验目的】1、掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。
2、了解常用实验动物染色体的数目及特点。
3、认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。
【实验材料与用品】1.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯等2.材料：小鼠3. 试剂：蒸馏水、0.9%NaCl溶液、0.3%KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素【实验原理】一、制作染色体标本的先决条件①细胞具有旺盛的分裂能力：选择活跃的组织，如胸腺、骨髓、睾丸、小肠；或施加药物使细胞分裂（PHA）②设法得到大量的分裂中期细胞：利用秋水仙素二、染色体染色体是基因的载体。
真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传特性之一。
制备染色体标本是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。
染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞、、和组织培养的细胞中制备染色体。
本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。
染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断的运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体形态最典型、最易辨认和区分。
因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。
染色体特征：数目、长度（绝对长度、相对长度）、着丝粒位置（M/SM/ST/T)、随体与次缢痕的数目大小和位置、带型分析描述染色体的四个参数：①相对长度=（每条染色体的长度）/（单倍常染色体之和+X染色体）*100，相对长度可以用来表示每条染色体的长度。
②臂指数=（长臂的长度）/(短臂的长度)，臂指数可以用来确定臂的长度。
③着丝粒指数=（断臂长度）/（染色体全长）*100，着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位置。
④染色体臂数（NF），根据着丝粒的位置来确定。
三、操作原理小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织（由于分裂活动旺盛，睾丸也可）利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但基本程序并不复杂。
小白鼠染色体标本的制作染色与观察
小白鼠染色体标本的制作染色与观察染色体是生物体内的遗传物质DNA和蛋白质的组合体，通过对染色体的观察可以了解生物种群的遗传信息和进化变化。
染色体观察在遗传学、病理学等领域具有重要的应用价值。
本文将介绍小白鼠染色体标本的制作方法以及染色和观察的步骤。
1.小白鼠染色体标本的制作方法制作小白鼠染色体标本的过程主要包括取材、处理和固定等步骤。
（1）取材选择健康的小白鼠，尤其是发育期的小白鼠，取得其骨髓或肝脏等组织。
取材时要注意卫生和无菌操作，以保证样品的质量。
（2）处理将取得的骨髓或肝脏等组织放入离心管中，加入等体积的生理盐水悬浮液，并在其中加入适量的KCl溶液进行渗透，使细胞膜变得脆弱，易于裂解释放染色体。
（3）固定将处理后的细胞悬浮液滴到已经消毒的玻璃片上，然后迅速将玻璃片倾斜，让细胞悬浮液自然扩散开来。
待其固定后，用甲醛进行固定处理，固定时间一般为5-10分钟。
2.小白鼠染色体染色的步骤（1）裂解将固定的标本玻璃片在室温下迅速加热至约60℃的热板上，使染色体细胞裂解释放出染色体。
裂解时间一般为5-10分钟。
（2）染色将裂解后的细胞标本浸泡在浓度适当的染色液中，常用的染色液有乔治染色液、甲酸-吡啶染色液和乙酸酒精染色液等。
对于小白鼠染色体标本的染色，乔治染色液是较为常用的选择。
（3）洗涤染色后的标本需要进行洗涤步骤以去除多余的染色液和固定剂。
使用生理盐水或磷酸缓冲液进行反复洗涤，直到洗涤液清澈。
3.小白鼠染色体观察的步骤在染色体标本制作和染色之后，我们可以通过显微镜进行小白鼠染色体的观察，并对染色体进行测量和特征描述。
（1）显微镜观察将染色后的标本玻璃片固定在显微镜载玻片上，使用显微镜进行观察。
观察过程中可以选择不同倍数的镜头以获得更详细的图像。
（2）测量和特征描述通过观察染色体在显微镜下的形态和结构，我们可以测量染色体的长度、形状等参数，并对染色体的特征进行描述，如染色体数量、着丝点的位置等。
总结：小白鼠染色体标本的制作染色与观察是一项重要的生物实验技术，可以帮助我们了解生物的遗传特征和疾病的发生机制。
小鼠染色体染色观察
题目：小鼠细胞染色体染色观察一．O bjectives:1.Learn the method of preparation of mouse chromosome frommarrow.学习制备从骨髓中制备小鼠染色体的方法。
2.Understand the morphology and amount of mouse mitotic.了解小鼠有丝分裂期细胞染色体的形态和数量。
二．实验原理1.秋水仙碱，一种生物碱，因最初从百合科植物秋水仙中提取出来，故名，也称秋水仙素。
纯秋水仙碱呈黄色针状结晶，熔点157℃。
易溶于水、乙醇和氯仿。
味苦，有毒。
秋水仙碱能抑制有丝分裂，破坏纺锤体，使染色体停滞在分裂中期。
这种由秋水仙碱引起的不正常分裂，称为秋水仙碱有丝分裂。
在这样的有丝分裂中，染色体虽然纵裂，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，因而使染色体加倍。
2.现今微丝标记方法分为在细胞中标记微丝和活体细胞中标记微丝。
固定细胞中的微丝主要是用带荧光探针的抗体或鬼笔环肽标记，需要对样品进行化学固定和膜的通透。
活体标记常采用荧光类似物标记的方法和GFP标记方法。
三．实验材料及设备1.实验材料：a)秋水仙素稀释液b)小鼠一只c)75mM KCl低渗溶液d)固定液e)Giemas染液2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片若干，注射器。
c)酒精灯d)离心管若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四．实验方法及步骤1.提前3-4h向小鼠腹腔中注射秋水仙素，然后用引颈法处死小鼠。
2.完整取出小鼠股骨（胫骨），取出骨骼表面肌肉和其他结缔组织。
3.将胫骨两端剪开，用注射器吸取适量75mM KCI将骨髓冲洗到离心管中。
4.低渗处理：用约6ml的75mM KCI在37℃下低渗骨髓细胞20min。
5.预固定：加入1-2ml新配制的固定液，用吸管混合均匀，1000r/min离心8分钟6.固定：吸去上清液，沿离心管壁缓缓加入6ml固定液，立即用吸管吹打成细胞悬液，在室温下静置固定15min。
[计划]实验七小鼠染色体制备与观察
![[计划]实验七小鼠染色体制备与观察](https://img.taocdn.com/s3/m/ce5562fef71fb7360b4c2e3f5727a5e9856a27cc.png)
[计划]实验七小鼠染色体制备与观察小鼠染色体制备与观察【实验目的】1. 了解小白鼠睾丸细胞染色体的形态及数目。
2. 初步掌握小白鼠睾丸细胞染色体的玻片标本制作方法。
3. 观察动物细胞染色体的数目和形态。
【实验原理】染色体是遗传物质的载体，它具有种属特异性，通常不同物种以不同亚种的核型是不同的。
通过对各种动物染色体核型的研究可以丰富物种的信息系统，对了解物种的遗传变异进化以及物种的分类均有一定的意义。
真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。
制备染色体标本是细胞遗传学最基本的技术，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。
染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。
小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织。
骨髓细胞中，有丝分裂指数相当高，因此可以直接得到中期细胞而不必象淋巴细胞或、其它组织那样要经过体外培养;对大型动物通常采用对骨骼、脊或胸骨穿刺术吸取红骨髓，小型动物多采用剥离术取股骨以获得骨髓细胞。
对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点:1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处;2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上;3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。
制作染色体标本的先决条件1. 细胞具有旺盛的分裂能力选择活跃的组织:胸腺，骨髓，睾丸，小肠施加药物使细胞分裂:PHA2. 设法得到大量的中期细胞:秋水仙素A( PHA:粗细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞B( 秋水仙素:破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停止在分裂中期。
C( 低渗作用:水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体间的距离拉大，易于染色体展开D( 空气干燥:使细胞和染色体展开E(固定:用甲醇:冰醋酸=3:1作用使蛋白质变性，对染色体内的组蛋白讲，变性后硬度增加，保持了染色体的“及时形态”，对细胞膜蛋白讲，变性使细胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。
实验小鼠骨髓染色体制备和观察
8.小鼠染色体观察： 低倍镜、高倍镜下寻找染色体分散的中
期分裂相.
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
小鼠骨髓染色体 10 ×10
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小鼠骨髓染色体 10 ×40
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➢ 数目观察：小鼠2倍体细胞染色
体，数目2n=40条。其中19对为常染 色体，一对为性染色体，染色体的核 型分为4组。雄性 XY, 雌性XX,Y染 色体最小。
➢形态特征观察：端着丝粒染色体
“U”“V”。
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五、注意事项
1．掌握好秋水仙素的浓度和处理时间； 2．离心前需要配平； 3. 小鼠骨髓要冲洗干净，以收集足够的骨髓细胞； 3．低渗处理是实验成败的关键，注意低渗时间； 4．固定液要现配现用，固定要充分； 5．载玻片要洁净并预冷，滴片要有一定的高度； 6. 细胞悬液不能太稀，要呈乳白色； 7. 烤片时温度不能太高。 8. 冲洗染液时水流要缓慢，以免细胞流失过多。
放出来。
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秋水仙素处理：秋水仙素溶液可抑制纺锤体的形 成，使正在分裂的骨髓细胞停止在细胞分裂中期， 积累大量中期分裂相细胞。
低渗作用: 使细胞充分膨胀，减少染色体间的相互 缠绕和重叠。
预固定：终止低渗作用，使细胞离心时不易破裂 ，固定维持细胞形态结构。
高距离滴片：使细胞膜易于破裂，获得中期染色 体标本，在显微镜下观察染色体的结构和数量。
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三、实验器材和试剂
• 1.器材 蜡盘、手术剪、小镊子、平皿、注射
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察试验目的把握动物骨髓染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理试验原理小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂力量，本试验采纳这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观看到很多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。
试验原理制备方法包括以下几个要点:1. 用肯定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观看到染色体的显微图象试验用品1．材料：小白鼠2．器具：注射器（1ml,5ml）剪刀镊子玻璃吸管10ml刻度的离心管离心机载玻片盖玻片显微镜滤纸擦镜纸纱布恒温水浴锅3．药品：0.01%秋水仙素0.075MKCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）2%柠檬酸钠改良石炭酸品红试验步骤预处理取股骨冲洗骨髓离心低渗离心固定离心滴片染色观看1．预处理：试验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙素。
2．取股骨：断颈处死小鼠后，剔去肌肉组织，洗净3．冲洗骨髓：剪去两端的股骨头，吸取10ml 2%柠檬酸钠，注射器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨，洗液收集到10ml的离心管中4 ．离心：1000r/min 离心10 min ,弃上清5 ．低渗：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低渗30 min ，中间（约15 min ）再吹散一次，使细胞分散，悬浮于溶液中6．离心：1000r/min离心10 min，弃上清7．固定：沉淀加8ml固定液，并用吸管轻轻吹匀，进行固定，中间（约15 min ）再吹散一次试验步骤8. 离心：1000r/min 离心10 min ,留1 ml 左右上清，轻轻吹打成细胞悬液9. 滴片：用吸管吸取细胞悬液，高度30-40 cm，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干10. 染色：改良石炭酸品红染色10-20 min11. 观看：低倍高倍。
简述小鼠染色体制备的流程
简述小鼠染色体制备的流程小鼠染色体制备。
选只小鼠，得挑健康的，不能是病怏怏的那种。
然后，得给它打麻药，让它舒舒服服地睡一觉。
这样咱们就能轻松取得细胞了。
取细胞这活儿，得迅速。
从骨髓或者脾脏里取，这得看实验需求。
取出来后，咱们得让细胞在低渗环境里待会儿，这样染色体就能胀大，看得更清楚。
然后，用固定液固定一下，这样细胞形态就稳定了。
接下来，就是染色和观察了。
用专门的染料给染色体上色，让它们变得五彩斑斓的。
然后，在显微镜下瞅瞅，看看这些染色体长啥样，数数有多少个。
这可得细心点，不能漏看了。
说起来，小鼠染色体制备这事儿，看着简单，其实挺考验技术的。
得选对小鼠，还得会取细胞、染色、观察。
不过，只要技术到位，就能得到清晰的染色体，为后面的研究打好基础。
小鼠骨髓染色体制备及观察
小鼠骨髓染色体制备及观察许多化学毒物具有遗传毒性基因突变：碱基置换和移码突变。
染色体畸变（structural chromosome aberration)：是指由于染色体或染色单体断裂，造成染色体或染色单体缺失或引起各种重排，从而出现染色体结构异常颜色体数目异常：整倍性和非整倍性改变。
染色体损伤的类型：☐染色体数目的改变①非整倍体：亚二倍体或超二倍体。
②整倍性改变：染色体成倍增加。
☐染色体结构的改变1.断裂和裂隙：2.微小体；较断片小而呈圆形。
3.有着丝点环：带有着丝点部分，两端形成环状结构并伴有一双无着丝点断片。
4.无着丝点环：成环状结构。
5.插入/重复8 非特定性型变化：如粉碎化、着丝点细长化、粘着等整倍性畸变非整倍性畸变如何评价化合物的遗传毒性？鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）：是最常用的检查基因突变的方法。
检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型(his+)的能力☐评价染色体损伤的试验方法包括：常用啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE) 微核试验 体外培养细胞或者体内染色体畸变试验2、实验原理☐有丝分裂：真核细胞的染色质凝集成染色体，复制的姐妹染色单体在纺锤丝的牵拉下分向细胞的两极，从而产生两个染色体数目和遗传性相同的子细胞的一种细胞分裂的类型。
☐细胞周期：从一次有丝分裂完成时开始，到下一次有丝分裂结束时为止，成为一个细胞周期。
G1：从有丝分裂结束到DNA 复制之前；S: DNA 合成；G2：DNA 复制结束到有丝分裂开始；M ：有丝分裂期✓增殖群细胞，细胞始终保持分裂能力，持续进入分裂循环；✓不再增殖细胞，比如神经细胞；✓暂不增殖细胞，比如肝脏细胞。
端着丝粒染色体。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
细胞培养：在适宜的条件下将细胞从体内分离出来进行体外培养 传代：将培养的细胞按照一定的比例进行分装使细胞能够继续生长
制备前的准备：选 择合适的细胞培养 并维持细胞生长。
细胞固定：使用固 定剂将细胞固定在 一定位置防止细胞 移动。
细胞染色：根据实 验需求选择合适的 染色剂进行染色。
观察与拍照：使用 显微镜观察染色后 的细胞并记录照片 。
小鼠骨髓细胞染色体 制备与观察
汇报人：
目录
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实验准备
染色体制备
观察和分析
实验结论
添加章节标题
实验准备
小鼠骨髓细胞
培养基
胰蛋白酶
秋水仙碱
实验仪器：显微镜、离心机、细胞培养皿、细胞 刮刀等
实验试剂：生理盐水、胰蛋白酶、甲醇、冰醋酸、 Giems染料等
准备实验器材：显微镜、染色剂、 细胞培养皿等
染色体测量：使用显微测微尺等工具测量染色体的长度、宽度、着丝粒位置等特征有助于分析染色体的形态和结 构。
染色体组型分析：根据染色体的数目、形态和结构特征进行染色体组型分析有助于了解小鼠骨髓细胞的遗传特征 和变异情况。
染色体核型分析：通过观察染色体的数目、形态和排列方式分析染色体的核型有助于了解小鼠骨髓细胞的染色体 异常和遗传疾病。
实验前要洗手戴手套避免手上的杂 菌污染细胞。
染色体制备过程中要控制好温度和 时间避免温度过高或时间过长导致 细胞死亡。
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染色体制备过程中要保持细胞活性 避免细胞死亡。
染色体制备过程中要选择适当的染 色剂避免使用过多的染色剂导致细 胞死亡。
观察和分析
观察步骤：将制备好的小鼠骨髓细胞染色体放在显微镜下调整焦距观察染色体的形态和分布
小鼠骨髓细胞染色体标本制备
三、实验材料、器具和药品：
1、材料： 小白鼠 2、器具： 注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品：
0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、 Giemsa染液、0.01M磷酸缓冲液 (PH6.8)，0.85%生理盐水。
实验九
小鼠骨髓
细胞染色体标本制备
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨
髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造
血干细胞是生成各种血细胞的原始 细胞，具有高度的分裂增殖能力。
2、适当浓度秋水仙素处理分裂 增殖的骨髓细胞，能抑制细胞分裂 时纺锤丝、纺锤体的形成，而染色 体不分裂成为子染色体，使细胞不 向后期过渡，从而收集到更多的中 期分裂相。 同时秋水仙素作用能使染色体缩短、 变粗。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻 管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用 6、离心：离心之前加1ml固定液 并用吸管轻轻吹匀，进行预固定； 1000rpm离心10分钟后，弃去上清液。
7、固定：沿管壁慢慢加入固定液 5ml，用吸管吹打成细胞悬液后，室 温下静置15分钟，5分钟时轻轻吹打， 使细胞充分固定。 8、离心：1000rpm离心10分钟， 弃上清液。 9、再固定：同固定I。 10、再离心：同8，离心后加 0.1ml固定液，吸管吹打成细胞悬液。
四倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=32）
二倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=16）
小鼠染色体标本制作、染色及观察
小鼠染色体标本制作、染色及观察小鼠是生产药物和进行基因研究的重要实验动物之一。
了解其染色体特征和行为对于生物学和医学研究非常重要。
本文将介绍如何制作小鼠染色体标本，以及染色和观察的步骤。
制作小鼠染色体标本需要使用小鼠肺部组织。
以下是制作步骤：1. 首先将小鼠处死，取出肺部组织并剪成小块。
2. 将肺组织移入一个离心管中，并添加10毫升10％KCl溶液。
3. 用注射器向管中注入溶液，轻轻摇动以使组织浸泡在KCl中。
4. 将溶液和组织离心5分钟，然后倒掉上层液体。
5. 用少量冰冷等渗氨水将沉淀悬浮并再次离心。
6. 倒掉上层液体，重复该步骤直到样品中不含有明显的碎片和其他杂质。
7. 最后，在离心管中滴加10毫升3：1（甲醇：冰醋酸）混合液，并轻轻混合。
8. 将混合液沿离心管壁滴加，使其缓慢地沉淀到底部。
变态反应需要放置在-20°C 的60分钟以上。
9. 滴掉液体，并用75％乙醇固定沉淀。
染色将固定的小鼠染色体标本染色需要的材料如下：1. 铬酸盐染液2. 蒸馏水3. 复方玫瑰红4. 静电纸和制作装置染色步骤如下：1. 将铬酸盐染液溶解在蒸馏水中（比例为1：3），搅拌混合。
2. 将小鼠染色体标本放在静电纸上，用制作装置连接到正离子极板上。
3. 用玫瑰红溶液覆盖标本，使其均匀覆盖。
4. 将正极板移动到离开标本1-2厘米的位置，并接通电源。
5. 在2-5分钟内，染色体将升起并接触到铬酸盐染液，染色体将呈现出不同的条纹状。
观察1. 显微镜2. 移相仪1. 将小鼠染色体标本放在显微镜上，并使用20倍至100倍的放大倍数进行观察。
2. 用相机或移相仪将图像捕捉下来以进行记录和分析。
总结小鼠染色体标本制作、染色和观察需要精细的技术和专业知识。
掌握这些技能对于研究小鼠染色体特征和行为非常重要。
希望本文的介绍有助于读者理解有关小鼠染色体标本制作、染色和观察的相关知识。
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察一、实验目的了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法，掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。
观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。
利用显微照相技术对所得切片进行照相。
二、实验原理染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。
因此通过染色体分析，可以了解某一物种最基本的遗传指标。
进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织，如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。
如将秋水仙素注射到动物的腹腔内，经肠系膜吸收并可转运到骨髓，结果使正在分裂的细胞不能形成纺锤体，使得染色体停在中期状态，经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。
这种制片方法是属于侵害性的，因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。
对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓，在临床上用于一些血液疾病的研究分析。
对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片，方法基本一样。
人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。
三、实验用具及材料实验材料：体重20克左右的小鼠一只实验试剂：0.075mKCl低渗液、固定液（甲醇：醋酸＝3:1）、0.4%秋水仙素、改良苯酚品红溶液、二甲苯实验材料：恒温水浴槽、纱布、烧杯、离心管2支、刀片、镊子、解剖盘、解剖剪、镊子、注射器、离心机、镜头纸光学显微镜、带数码相机的光学显微镜四、实验步骤1腹腔注射秋水仙素溶液：在做实验前2~3小时，对实验用小鼠按0.1ml/20g小鼠的量对其进行0.4％的秋水仙素注射。
2取材：实验时，用断颈法迅速将小鼠处死，通过解剖取出股骨，用注射器吸取在37℃下保温的低渗液2毫升，将针头插入骨髓腔中冲洗骨髓，使冲洗液从股骨的另一端流出。
收集冲洗液到5ml刻度的离心管中。
3低渗：用吸管将冲洗液吹打几次，然后把离心管放在37℃恒温水浴槽内低渗20分钟。
4固定：之后取出并加1ml的固定液，吹打之后放入37℃恒温水浴槽内固定10分钟。
5离心：然后将1000rpm离心10分钟，弃去上清。
小鼠染色体的制备观察染色
体的制备观察GE GROUP system office room [GEIHUA16H-GEIHUA GEIHUA8Q8-Life Science College实验报告姓名：柳伟雄学号：201300140062 班级：2013级生科一班 同组者：曾玮皤山东大学实验报告 2015年6月1日姓名：柳伟雄 系年级：生科一班2013级 同组者：曾玮墙 科目：细胞生物学实验 题目：小鼠染色体的制备、染色、观察 一、目的和要求1. 初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa 染色法，了解各操作步骤 的原理。
2. 了解常用实验动物染色体的数目及特点。
3. 认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组形图。
二、原理凡处于活跃増殖状态的细胞，或者经过各种处理后，任何动物组织的细胞就可进入分裂， 均可用于染色体分析。
在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。
给动物注射 —定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法 制备染色体，细胞生物学即可得到大量可分析的染色体标本。
本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。
骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。
但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实验选用小鼠的精巢为实验材料。
对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点：1.用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期，使中期染色体停留在赤道面处；2.用低渗法使细胞膨胀，以至于在滴片时细胞被胀破，使细胞的染色体铺展到载玻片上；3.空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平，经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。
Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。
主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。
三、试剂和器材1•试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的立C1溶液）、0.3WKC1低渗溶液、固定液（甲醇:冰醋酸二3 : 1）、Giemsa染液Giemsa染液的配制:吉姆萨粉（Giemsa stain）甘油（AR）甲醇（AR）将Giemsa粉放入研钵中，先加入少量甘油，研磨至无颗粒为止，然后再分批加入甘油，放56/温箱中2h后，分批加入甲醇，将配制好的染液密封保存棕色瓶内（最好于0~4C。
小鼠睾丸细胞染色体的制备与观察
姓名 ### 班级 生命基地班 学号 201000140### 同组者：#####科目 细胞生物学实验 题目 小鼠睾丸细胞染色体的制备与观察 组别 ###小鼠睾丸细胞染色体的制备与观察【实验目的】1. 掌握染色体的制备方法；2. 观察小鼠睾丸染色体的数目及其形态特征；【实验原理】A. 染色体染色体是基因的载体。
真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。
制备染色体标本无疑是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。
染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。
本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。
染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断地运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体的形态最典型、最易辨认和区分。
因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。
染色体特征：1. 数目（2n=？）2. 长度（绝对长度、相对长度）3. 着丝粒位置（M\SM\ST\T ）4. 随体与次溢痕的数目、大小和位置5. 带型分析B. 操作方法小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织（由于分裂活动旺盛，睾丸也可以）。
利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但其基本程序是简便的。
在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂图1染色体形态类型姓名 ### 班级生命基地班学号 201000140### 同组者：##### 科目细胞生物学实验题目小鼠睾丸细胞染色体的制备与观察组别 ###和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。
通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。
用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂。
由于小鼠睾丸细胞分裂活动旺盛，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。
小鼠细胞染色体的制备与观察
固定
配平，离心 配平，
1000r/min.10’
处死小鼠 取睾丸， 取睾丸，分 离曲细精管 第一次低渗
0.4%KCl.37˚C.10ml. 2’
吸弃上清液 第二次低渗
吸弃上清，软化 吸弃上清，
60%冰醋酸.3ml.3’ 60%冰醋酸.3ml.3’
制片( 制片(滴1滴于冰冻 0.4%KCl.37˚C.10ml.5’ 载片上，分散，烘干) 载片上，分散，烘干) 吸弃上清液 Giemsa染色 Giemsa染色
遗传学实验
吴辉文
实验一、小鼠睾丸细胞 实验一、 染色体的制备与观察
一、实验目的
1、了解快速制备动物染色体的方法； 了解快速制备动物染色体的方法； 2、观察小鼠染色体的数目及其形态特征。 观察小鼠染色体的数目及其形态特征。
二、实验内容
秋水仙素处理
室温.固定Hale Waihona Puke 8ml. 室温.固定液8ml. 15’
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生命科学学院
Life Science College
细
胞
生
物
学
实验报告
姓名：柳伟雄班级：2013级生科一班
学号：同组者：曾玮璠
山东大学实验报告2015年6月1日
姓名：柳伟雄系年级：生科一班2013级同组者：曾玮璠
科目：细胞生物学实验题目：小鼠染色体的制备、染色、观察
一、目的和要求
1.初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。
2.了解常用实验动物染色体的数目及特点。
3.认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组形图。
二、原理
凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各种处理后，任何动物组织的细胞就可进入分裂，均可用于染色体分析。
在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。
给动物注射一定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。
本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。
骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。
但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实验选用小鼠的精巢为实验材料。
对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处; 2. 用低渗法使细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上; 3. 空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平,经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。
Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。
主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。
三、试剂和器材
1.试剂：秋水仙素、生理盐水（%的NaCl溶液）、%KCl低渗溶液、固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa
染液
Giemsa染液的配制：
吉姆萨粉(Giemsa stain)
甘油(AR)
甲醇(AR)
将Giemsa粉放入研钵中，先加入少量甘油，研磨至无颗粒为止，然后再分批加入甘油，放56℃温箱中2h后，分批加入甲醇，将配制好的染液密封保存棕色瓶
内(最好于0~4℃保存)。
使用前，将母液用PBS稀释后使用。
2.器具：解剖盘、镊子、眼科剪、小烧杯（×2）、吸管、玻璃刻度离心管、离心机、铜网、预冷载玻
片、记号笔、普通光学显微镜、玻璃等
3.材料：小白鼠
四、实验步骤
制片
1.取雄性小鼠以每克体重4μg注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法杀死小鼠，取出睾丸用生理盐
水（%的NaCl溶液）洗去血污。
2.将睾丸放入装有1ml %KCl低渗溶液的小烧杯中剪碎至呈乳白色。
3.用铜网过滤到玻璃刻度离心管中，再加%KCl缓冲溶液至4ml。
4.静置30min，进行低渗处理。
5.以800～1000r/min的转速离心8min。
6.取出离心管，弃去上清液，加入2ml固定液（甲醇：冰醋酸=3：1），并用吸管
至管底吹气，轻轻打散细胞，固定8min。
7.再以800～1000r/min转速离心8min。
8.弃上清，加入1ml固定液，再制成细胞悬液，固定5min。
9.取洁净的低温预冷载片，距载片10～15cm高度滴下2～3滴细胞悬液，从载片一边向另一边轻轻吹
气，同时轻轻敲打载片，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。
10.用滤纸擦去载片上多余液体，空气干燥或成文火干燥。
染色
11.用Giemsa染色20～30min，细水冲洗玻片背面，去多余染液，气干。
本实验染色采用倒置染色法，具体方法如下：
在玻璃板上用废旧载玻片作支架，使标本载玻片的标本面向下放置到支架上，在玻璃板和标本载玻片之间滴加Giemsa染液，目的一可以节省染料，二可以避免染液快速挥发，三可以防止染液颗粒沉淀，影响观察。
在操作时应注意，多个样品同时染色应摆放紧密，不要有间隙；滴染液时应尽量慢，不要有气泡，以免部分染色体不被着色。
12.镜检：低倍镜下寻找分散良好、染色适中的分裂相，高倍镜或油镜下观察染色体形态并计数。
五、实验结果
本实验采用的是小鼠的精巢，部分细胞处于减数第一次分裂中期，这样的细胞是二倍体，应有40条染色体；有些处于减数第二次分裂中期，这样的细胞是单倍体，应有20条染色体。
还有一些细胞处于分裂期，但不是中期，这类细胞染色体的凝集程度不是很高。
经过仔细查找，最终找到处于减数分裂中期的染色体。
如图，处于减数分裂中期的染色体染色质凝缩程度达到最大。
小鼠的染色体多为端着丝粒染色体（17、18对染色体为亚端部），呈“V”字形或“U”字形。
由于重叠较多，数目难以数清。
六、注意事项
1.断头法处死小鼠后，血液要冲洗干净，以免影响之后的实验的进行。
2.从开始加入%KCl低渗溶液至37℃恒温水浴低渗处理结束，时间控制在50min以内。
3.两次离心的转速控制在800～1000转/分，不要太高，以免破碎细胞。
4.滴片时，使滴管与载玻片间的距离尽量远，这样细胞才能被“摔碎”，使眼睛、滴管、载玻片竖直成一条直线，保证细胞悬液能被滴在载玻片上。
5.滴完片之后，将载玻片的一端轻轻在试验台边缘敲打，使未破碎的细胞破碎。
6.多个样品同时进行染色时，载玻片应摆放紧密，不要有间隙；滴染液时应尽量慢，不要有气泡，以免
部分染色体不被着色。
七、结果分析
实验中发现，细胞分散比较均匀，但是染色体展开并不完全，这说明低渗这一步骤可能没有做好，使得染色体不能完全展开。