小鼠骨髓染色体制备及观察

5、实验结果与分析讨论
❖ 绘制小鼠骨髓细胞染色体图 ❖ 统计小鼠染色体数目 ❖ 如果有条件时，要进行显微摄影，然后进行
组型分析
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使用柠檬酸钠的原因：
在临床上采取新鲜血液时,需要加入一些消毒 过的柠檬酸钠,就能起到防止血液凝固的作用,所 以柠檬酸钠被称为抗凝血剂。
枸橼酸根与血中钙离子形成难解离的络合物， 钙离子是凝血过程中所需的物质之一，血液中 钙离子减少，而使血液凝固受阻。
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思考题
❖ 1．KCl溶液低渗处理与滴片过程在染色体制 片中有何联系，对制片结果各有何影响？
❖ 2．骨髓细胞染色体标本制作时，为什么要采 用冰片滴片？冰片滴片时滴液高度有什么要 求？为什么滴片后要马上吹散？冰片温度为 什么越冰越好？
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➢ 2%柠檬酸钠溶液：：称2.28克柠檬酸钠溶于 100ml蒸馏水中。
➢ Giemsa溶液
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4、实验方法
❖ 主要实验步骤
⑴ 秋水仙素注射
⑵ 解剖小鼠
⑶ 离心
⑷ 低渗
⑸ 固定
⑹ 制备细胞悬浮液
⑺ 滴片
⑻ 空气干燥
⑼ 染色
⑽ 水洗
⑾ 显微镜观察结果
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方法与步骤
低渗。低渗结束后，加入1ml左右的Carnoy’s固定液
进行预固定，轻轻混匀后精选，ppt离心。
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1000转/分，离心10分钟，弃上清，加入固定液， 混匀后，室温放置25分钟，再次离心去上清，重 复固定一次，离心后，向沉淀中加入1ml固定液， 将细胞重悬。
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预冷的玻片
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滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将皮肤、 肌肉等组织清除干净。
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加入适量低渗液，用剪刀将骨充分剪碎，并 用吸管吹打，使骨髓细胞全部释放出来。
亦可用注射器抽取柠檬酸铵溶液冲洗骨髓，效果佳
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将获得的液体收集到离心管中，离心后去上清液，
加低渗液至8ml左右，室温下静置20~30分钟，进行
滴片后，将片子晾干，滴加适量Giemsa染液染色 10~15分钟，弃去染液，水洗，镜检。
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实验结果
苯酚品红染色效果
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结果显示
在显微镜寻找分散良好的 中期分裂相。小白鼠染色 体一般呈“U”形，都为近 端着丝粒染色体。染色体 数2n=40。 图示为吉姆萨染色效果
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❖取材前3～4 h，向腹 腔内注射秋水仙素。注 射浓度随动物种类不同 而异。秋水仙素的主要 作用是使分裂细胞阻断 在有丝分裂中期，增加 中期分裂相的比例。
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腹腔内注射秋水仙素3~4小时后， 断头处死小鼠。
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取出小鼠的后肢骨，注意不要将股骨剪断，否 则容易造成骨髓细胞的流失。
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低渗的作用：
低渗液是指渗透压和离子强度均低于正常细胞生理条件的 溶液，例如水、低渗的柠檬酸钠或氯化钠、甘油磷酸钾 （0.65M）、氯化钾（0.075M）等。低渗效来自百度文库取决于低 渗液的化学组成、低渗的温度和处理时间。低渗处理是凭 借反渗透作用使细胞膨胀染色体铺展，同时可使粘附于染 色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察所有染色 体形态。实验室中一般选用0.075M KCl为低渗液（具体情 况取决于实际操作），其优点有：①染色体轮廓清楚，可 染色性强，染色时间短，②用于显带染色时能充分显示带 型特点。低渗处理为37℃，15－25分钟，以预实验条件为 准。
染色等处理，可观察到小鼠染色体。 ❖ ⑷ 这种骨髓染色体制片方法简单，取材容易，
不需无菌条件，方便易行。
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3、实验材料
❖ 实验动物
健康小鼠(Mus musculus 2n=40)，体重约18～ 20g，雌雄不限。
❖ 试剂
甲醇、冰乙酸、石炭酸品红、秋水仙素、KCl、 生理盐水
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3、实验材料
实验三 小白鼠骨髓染色体制备及观察
❖ 1、实验目的与要求
⑴ 掌握动物骨髓细胞染色体制备技术 ⑵ 学会动物细胞的滴片方法 ⑶ 观察小白鼠染色体的形态特征和染色体数目
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2、实验原理
❖ ⑴ 小鼠骨髓细胞 ❖ ⑵ 秋水仙素可破坏骨髓细胞分裂过程中纺锤
体的形成，把分裂细胞阻截在中期。 ❖ ⑶ 通过对小鼠骨髓细胞的低渗、固定、滴片、
❖ 实验器材
恒温培养箱、普通离心机、显微镜、分析天平、 离心管(5～10 mL)、吸管注射器(5 mL)、100 mL 烧杯、
载玻片 （冰片）
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3、实验材料
❖ 溶液配制：
➢ (1)0.01％秋水仙素：称10 mg秋水仙素，溶于 100 mL生理盐水中。
➢ (2)低渗溶液：称5.59克KCl溶于1,000 mL蒸馏水 中，其浓度为0.075M。