中药化学第五章 色谱法---吸附色谱
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洗脱检查： 洗脱剂的选用通过薄层色谱筛选，一般比移值为0.2 ～ 0.3的溶 剂系统为最佳洗脱系统，采用梯度法洗脱； 收集洗脱液； 合并同类项。
吸附柱色谱（Column Chromatography CC）
（3）色谱行为的分析（成分谱带洗脱出柱先后顺序的 判断） ①硅胶（氧化铝）CC：成分的极性↗ 被吸附能力↗ 越后出柱 ②聚酰胺CC：成分被吸附能力↗ 越后出柱（影响被 吸附能力的因素见前述，注意：只考虑酚羟基的存在 情况）
1. 填空题： ①常用有机溶剂中 石油醚（环己烷） 极性最小， 甲醇 极性最大。 ②铅盐沉淀法一般在 乙醇或水 溶液中，先加 中性醋酸铅 ，后加 碱式醋酸铅。
2. 选择题
①中药成分最节省的提取方法是
A.回流法 B.渗漉法 C.连续回流法 D.浸渍法
②常用溶剂中不能与水完全混溶的溶剂是
A.乙醇
B.丙酮
C.乙醚 D.正丁醇
3. 判断题
①色谱法是分离中药成分单体最有效的方法。 对
②铅盐沉淀法常用于中药生产中除去杂质。 错
E.氯仿
4. 问答题: ①常用提取方法有哪些？各有何优、缺点或适用情况？
②pH梯度萃取法分离中药成分的根据是什么？主要用于哪类成分分离？
吸附薄层色谱（Thin Layer Chromatography TLC） （1）定义 在吸附剂形成的薄层上进行分离分析的色谱方法称之。
该法在药品检验中得到广泛的应用。 （2）操作步骤 制板→点样→展开→显色→ 计算比移值
①制板 软板（干法铺板）：不加黏合剂、简便、快速、不牢固、
不易保存 硬板（湿法铺板）：加黏合剂、牢固、易保存、操作复杂。
硅胶G板，耐腐蚀性好，机械强度差；硅胶CMC-Na板，机械强度 好，耐腐蚀性差。
吸附薄层色谱（Thin Layer Chromatography TLC）
色谱法（Chromatography）
目前最常用的现代高效的分离方法，亦可用于化合物的定性定量分 析。
概念：利用混合物中不同组分在两相中的分配差异进行分离的方法。
分类：
按原理分类 谱
吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶过滤色
按操作形式分类 平面色谱：薄层色谱（TLC thin layer
chromatography ）纸色谱（PC）、柱色谱（CC）
（2）操作步骤 装柱→上样→洗脱→分部收集 吸附柱色谱的制备： ①干法装柱： ②湿法装柱：
CC操作图
高效液相色谱仪
经典柱色谱
吸附柱色谱（Column Chromatography CC）
上样： 操作要点： 将样品溶于少量的洗脱剂中制成体积小、浓度高的溶液； 上样时要沿着柱内壁缓缓加入，始终保持吸附剂上表面平整； 上样量为吸附剂的1/60～1/30。
中药化学
Chemistry of Chinese Traditional Medicin
2009.6
第五章 色谱法
Review 1.两相溶剂萃取法的原理。 2.醇沉淀与水沉淀各自的沉淀范围是什么。 3.铅盐沉淀法后，如何脱铅。 4.结晶溶剂如何选择。 5.如何判断结晶的纯度？ 6.结晶溶剂如何选择？
5.碱性氧化铝能否用于酸性成分的分离?为什么?
6.在吸附层析(氧化铝,硅胶)中怎样选择吸附剂、洗脱剂?
7.在硅胶薄层析分离生物碱时,展开剂中常含有二乙胺,是何原因?
8.为什么要求薄层层析中原点小而圆?
③展开 容器——层析缸或层析槽 操作要点： 盛展开剂的容器密闭一段时间再放入薄层板（饱和）； 一端浸入展开剂中，不能浸没原点； 溶剂展开至薄层板的3/4高度即要取出； 标记溶剂前沿，挥掉溶剂； 展开方式：上行、下行、径向
吸附薄层色谱（Thin Layer Chromatography TLC）
④显色 有色成分——目测
解吸附能力的判断：
流动相的极性越大，其解吸附能力（展开或洗脱能力）越强； 反之则越弱。
③被分离成分 成分的极性越大，其被吸附能力越强；反之则越弱。
④选择合适吸附剂和流动相的原则
被分离成分
吸附剂
极性↗
活性↘
流动相 极性↗
极性↘
活性↗
极性↘
具体选择
未知物--------小量摸索。
已知物--------查文献。
剂。
无色成分——紫外灯或荧光灯照射或喷显色
已知类型的成分可选择专属性显色剂，
未知成分一般可选用碘蒸汽熏或喷5%浓硫酸-乙醇 液显色；喷显色剂要细而均匀；具腐蚀性的显色剂只 能用在硅胶-G板上。
吸附薄层色谱（Thin Layer Chromatography TLC）
⑤计算Rf值
斑点中心至起始线的距离 Rf（比移值）＝
吸附色谱操作形式
吸附薄层色谱
吸附柱色谱
吸附剂的基本要求： 1.较大的表面积和适宜的活性 2.与移动相溶剂及被分离成分不发生化学反
应 3.颗粒均匀 4.在所用各溶剂中不溶解
种类： 亲水性吸附剂：氧化铝、硅胶、聚酰胺、氧化镁、硅酸
镁、碳酸钙、硅藻土等 亲脂性吸附剂：活性炭 最常用吸附剂：氧化铝、硅胶、聚酰胺 吸附能力:
溶剂前沿至起始线的距离
B
补充：共薄层法 将标准品与待测样品在同一薄层板 A
上展开，使比移值具有可比性。
O
（3）化合物极性大小的判断
①基团（官能团）的极性越大，化合物的极性越大。 常见取代基极性大小顺序：
-COOH﹥Ar-OH﹥R-OH﹥-NH2﹥-CHO﹥-CO﹥-OCO-﹥-O-﹥C＝C﹥-CH2-CH2-
1.现代高效的分离方法是（ ）
A 萃取法 B 色谱法 C 沉淀法 D 结晶法
2.纸色谱的缩写符号为（ ）
A PC
B TLC C CC D HPLC
3.利用分子筛作用进行分离的色谱是（ ）
A 硅胶柱色谱 B 离子交换色谱 C纸色谱 D凝胶过滤色谱
4.硅胶活化的温度为什么不能太高?一般在什么温度下进行?
常用吸附剂:
1.硅胶（硬板多用）
极性吸附剂。极易吸水，含水量在17%以下才能作为吸附剂。
活化温度一般在100℃～120℃。硅胶显弱酸性，适用于中性或
酸性成分的分离。
HO--Si-0-Si--OH
00
HO--Si-0-Si—OH 硅醇基，含水越多，硅醇基又可与
-OH形成氢键，使吸附能力减弱。
②极性基团越多，化合物的极性越大。 ③母核的芳香化程度越高，化合物的极性越大。 ④分子的对称性越高， 化合物的极性越小。 ⑤分子量越大，化合物的极性越小。
苍术的薄层色谱图
吸附柱色谱（Column Chromatography CC）
（1）定义 将吸附剂（100目左右）装入色谱柱中用于分 离化合物的操作技术。经典柱色谱主要用于制备性分 离，现代柱色谱主要用于分析。
的分离； 碱性氧化铝（pH9.0） 适用于碱性和中性成分的分离。 （3）聚酰胺 是由酰胺聚合而成的一类高分子物质。不溶于水
及常用的有机溶剂，对酸稳定性差，对碱较稳定。吸附机理是与化 合物形成氢键。
Fra Baidu bibliotek
②流动相（分析纯） 在TLC、PC中称展开剂，在CC中称洗脱剂。
是由一种溶剂或两种以上的溶剂组成的溶剂系统（混合溶剂 的使用是为了有更好的解吸附能力，形成较好的斑点）。
②点样 将样品溶于少量溶剂中，用毛细管点样（定性分析）； 用微量注射器点样（定量分析）。 操作要点： 溶解样品的溶剂最好与展开剂极性相近，易挥发； 吸取样液的毛细管管口要平整； 点样点距离薄层板底1～1.5cm处，斑点直径不超过2～3mm； 点样量要适度。
吸附薄层色谱（Thin Layer Chromatography TLC）
亲脂性吸附剂对极性小的化合物吸附能力强；亲水性吸 附剂的吸附能力与含水量有关。
活化：在一定温度下加热去除吸附剂中水分，提高其吸 附能力，使其活性增高。
脱活化：在吸附剂中加入一定量的水分，降低其活性。 活性级别：Ⅰ级、Ⅱ级、 Ⅲ级、 Ⅳ级、 Ⅴ级。
级别越大，含水量越多，吸附能力越弱；级别越小， 含水量越少，吸附能力越强。
按流动相状态分类 液相色谱、气相色谱和超临界流体色谱
1.吸附色谱
（1）原理 利用吸附剂对被分离成分吸附能力的不同进 行分离的。
（2）分类 硅胶色谱、氧化铝色谱、聚酰胺色谱和活性 炭色谱等
（3）吸附色谱三要素 ①吸附剂 吸附机理属于物理吸附，即吸附剂通过
范德华力（固体表面的作用力、氢键络合、静电引力） 吸附成分。
硅胶H（不含黏合剂）、硅胶G（含有黏合剂煅石膏）、硅胶 GF254（含煅石膏和无机荧光剂，在254nm紫外光下呈强烈黄 绿色荧光背景）
（2）氧化铝（软板多用）为极性吸附剂，吸附能力比硅胶稍强。 中性氧化铝(pH7.5) 使用最广泛，适用于中性或对酸碱不稳定
成分的分离； 酸性氧化铝(pH4.0) 适用于酸性成分以及对酸稳定的中性成分
吸附柱色谱（Column Chromatography CC）
（3）色谱行为的分析（成分谱带洗脱出柱先后顺序的 判断） ①硅胶（氧化铝）CC：成分的极性↗ 被吸附能力↗ 越后出柱 ②聚酰胺CC：成分被吸附能力↗ 越后出柱（影响被 吸附能力的因素见前述，注意：只考虑酚羟基的存在 情况）
1. 填空题： ①常用有机溶剂中 石油醚（环己烷） 极性最小， 甲醇 极性最大。 ②铅盐沉淀法一般在 乙醇或水 溶液中，先加 中性醋酸铅 ，后加 碱式醋酸铅。
2. 选择题
①中药成分最节省的提取方法是
A.回流法 B.渗漉法 C.连续回流法 D.浸渍法
②常用溶剂中不能与水完全混溶的溶剂是
A.乙醇
B.丙酮
C.乙醚 D.正丁醇
3. 判断题
①色谱法是分离中药成分单体最有效的方法。 对
②铅盐沉淀法常用于中药生产中除去杂质。 错
E.氯仿
4. 问答题: ①常用提取方法有哪些？各有何优、缺点或适用情况？
②pH梯度萃取法分离中药成分的根据是什么？主要用于哪类成分分离？
吸附薄层色谱（Thin Layer Chromatography TLC） （1）定义 在吸附剂形成的薄层上进行分离分析的色谱方法称之。
该法在药品检验中得到广泛的应用。 （2）操作步骤 制板→点样→展开→显色→ 计算比移值
①制板 软板（干法铺板）：不加黏合剂、简便、快速、不牢固、
不易保存 硬板（湿法铺板）：加黏合剂、牢固、易保存、操作复杂。
硅胶G板，耐腐蚀性好，机械强度差；硅胶CMC-Na板，机械强度 好，耐腐蚀性差。
吸附薄层色谱（Thin Layer Chromatography TLC）
色谱法（Chromatography）
目前最常用的现代高效的分离方法，亦可用于化合物的定性定量分 析。
概念：利用混合物中不同组分在两相中的分配差异进行分离的方法。
分类：
按原理分类 谱
吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶过滤色
按操作形式分类 平面色谱：薄层色谱（TLC thin layer
chromatography ）纸色谱（PC）、柱色谱（CC）
（2）操作步骤 装柱→上样→洗脱→分部收集 吸附柱色谱的制备： ①干法装柱： ②湿法装柱：
CC操作图
高效液相色谱仪
经典柱色谱
吸附柱色谱（Column Chromatography CC）
上样： 操作要点： 将样品溶于少量的洗脱剂中制成体积小、浓度高的溶液； 上样时要沿着柱内壁缓缓加入，始终保持吸附剂上表面平整； 上样量为吸附剂的1/60～1/30。
中药化学
Chemistry of Chinese Traditional Medicin
2009.6
第五章 色谱法
Review 1.两相溶剂萃取法的原理。 2.醇沉淀与水沉淀各自的沉淀范围是什么。 3.铅盐沉淀法后，如何脱铅。 4.结晶溶剂如何选择。 5.如何判断结晶的纯度？ 6.结晶溶剂如何选择？
5.碱性氧化铝能否用于酸性成分的分离?为什么?
6.在吸附层析(氧化铝,硅胶)中怎样选择吸附剂、洗脱剂?
7.在硅胶薄层析分离生物碱时,展开剂中常含有二乙胺,是何原因?
8.为什么要求薄层层析中原点小而圆?
③展开 容器——层析缸或层析槽 操作要点： 盛展开剂的容器密闭一段时间再放入薄层板（饱和）； 一端浸入展开剂中，不能浸没原点； 溶剂展开至薄层板的3/4高度即要取出； 标记溶剂前沿，挥掉溶剂； 展开方式：上行、下行、径向
吸附薄层色谱（Thin Layer Chromatography TLC）
④显色 有色成分——目测
解吸附能力的判断：
流动相的极性越大，其解吸附能力（展开或洗脱能力）越强； 反之则越弱。
③被分离成分 成分的极性越大，其被吸附能力越强；反之则越弱。
④选择合适吸附剂和流动相的原则
被分离成分
吸附剂
极性↗
活性↘
流动相 极性↗
极性↘
活性↗
极性↘
具体选择
未知物--------小量摸索。
已知物--------查文献。
剂。
无色成分——紫外灯或荧光灯照射或喷显色
已知类型的成分可选择专属性显色剂，
未知成分一般可选用碘蒸汽熏或喷5%浓硫酸-乙醇 液显色；喷显色剂要细而均匀；具腐蚀性的显色剂只 能用在硅胶-G板上。
吸附薄层色谱（Thin Layer Chromatography TLC）
⑤计算Rf值
斑点中心至起始线的距离 Rf（比移值）＝
吸附色谱操作形式
吸附薄层色谱
吸附柱色谱
吸附剂的基本要求： 1.较大的表面积和适宜的活性 2.与移动相溶剂及被分离成分不发生化学反
应 3.颗粒均匀 4.在所用各溶剂中不溶解
种类： 亲水性吸附剂：氧化铝、硅胶、聚酰胺、氧化镁、硅酸
镁、碳酸钙、硅藻土等 亲脂性吸附剂：活性炭 最常用吸附剂：氧化铝、硅胶、聚酰胺 吸附能力:
溶剂前沿至起始线的距离
B
补充：共薄层法 将标准品与待测样品在同一薄层板 A
上展开，使比移值具有可比性。
O
（3）化合物极性大小的判断
①基团（官能团）的极性越大，化合物的极性越大。 常见取代基极性大小顺序：
-COOH﹥Ar-OH﹥R-OH﹥-NH2﹥-CHO﹥-CO﹥-OCO-﹥-O-﹥C＝C﹥-CH2-CH2-
1.现代高效的分离方法是（ ）
A 萃取法 B 色谱法 C 沉淀法 D 结晶法
2.纸色谱的缩写符号为（ ）
A PC
B TLC C CC D HPLC
3.利用分子筛作用进行分离的色谱是（ ）
A 硅胶柱色谱 B 离子交换色谱 C纸色谱 D凝胶过滤色谱
4.硅胶活化的温度为什么不能太高?一般在什么温度下进行?
常用吸附剂:
1.硅胶（硬板多用）
极性吸附剂。极易吸水，含水量在17%以下才能作为吸附剂。
活化温度一般在100℃～120℃。硅胶显弱酸性，适用于中性或
酸性成分的分离。
HO--Si-0-Si--OH
00
HO--Si-0-Si—OH 硅醇基，含水越多，硅醇基又可与
-OH形成氢键，使吸附能力减弱。
②极性基团越多，化合物的极性越大。 ③母核的芳香化程度越高，化合物的极性越大。 ④分子的对称性越高， 化合物的极性越小。 ⑤分子量越大，化合物的极性越小。
苍术的薄层色谱图
吸附柱色谱（Column Chromatography CC）
（1）定义 将吸附剂（100目左右）装入色谱柱中用于分 离化合物的操作技术。经典柱色谱主要用于制备性分 离，现代柱色谱主要用于分析。
的分离； 碱性氧化铝（pH9.0） 适用于碱性和中性成分的分离。 （3）聚酰胺 是由酰胺聚合而成的一类高分子物质。不溶于水
及常用的有机溶剂，对酸稳定性差，对碱较稳定。吸附机理是与化 合物形成氢键。
Fra Baidu bibliotek
②流动相（分析纯） 在TLC、PC中称展开剂，在CC中称洗脱剂。
是由一种溶剂或两种以上的溶剂组成的溶剂系统（混合溶剂 的使用是为了有更好的解吸附能力，形成较好的斑点）。
②点样 将样品溶于少量溶剂中，用毛细管点样（定性分析）； 用微量注射器点样（定量分析）。 操作要点： 溶解样品的溶剂最好与展开剂极性相近，易挥发； 吸取样液的毛细管管口要平整； 点样点距离薄层板底1～1.5cm处，斑点直径不超过2～3mm； 点样量要适度。
吸附薄层色谱（Thin Layer Chromatography TLC）
亲脂性吸附剂对极性小的化合物吸附能力强；亲水性吸 附剂的吸附能力与含水量有关。
活化：在一定温度下加热去除吸附剂中水分，提高其吸 附能力，使其活性增高。
脱活化：在吸附剂中加入一定量的水分，降低其活性。 活性级别：Ⅰ级、Ⅱ级、 Ⅲ级、 Ⅳ级、 Ⅴ级。
级别越大，含水量越多，吸附能力越弱；级别越小， 含水量越少，吸附能力越强。
按流动相状态分类 液相色谱、气相色谱和超临界流体色谱
1.吸附色谱
（1）原理 利用吸附剂对被分离成分吸附能力的不同进 行分离的。
（2）分类 硅胶色谱、氧化铝色谱、聚酰胺色谱和活性 炭色谱等
（3）吸附色谱三要素 ①吸附剂 吸附机理属于物理吸附，即吸附剂通过
范德华力（固体表面的作用力、氢键络合、静电引力） 吸附成分。
硅胶H（不含黏合剂）、硅胶G（含有黏合剂煅石膏）、硅胶 GF254（含煅石膏和无机荧光剂，在254nm紫外光下呈强烈黄 绿色荧光背景）
（2）氧化铝（软板多用）为极性吸附剂，吸附能力比硅胶稍强。 中性氧化铝(pH7.5) 使用最广泛，适用于中性或对酸碱不稳定
成分的分离； 酸性氧化铝(pH4.0) 适用于酸性成分以及对酸稳定的中性成分