实验一细菌形态学检查ppt课件
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微生物形态学检验-PPT
➢ 培养特性：在沙氏培养基或营养琼脂上培养5-7日 可见菌落，菌落表面有皱折、呈颗粒状、黄色或深 橙色；在血琼脂平板上菌落较小、凸起、呈白色
肠杆菌科 Enterobacteriaceae
➢ 基本特征：在血琼脂平板上生长，在麦康凯、伊红 亚甲蓝、中国蓝琼脂平板上形成发酵和不发酵乳糖 的菌落；在三糖铁或克氏双糖底层、上层产酸、产 气、氧化酶试验阴性
伤寒沙门氏菌 S.typhi
➢ 形态与染色：革兰阴性杆菌，菌体细长，有周鞭毛
➢ 培养特性：在麦康凯上形成无色、透明菌落，SS平 板上呈无色、透明菌落、但大部分菌落中央呈黑色
肺炎克雷伯氏菌K.pneumoniae
➢ 形态与染色：革兰阴性杆菌，单个、成双或短链排 列，荚膜染色可见外周有透明、环状荚膜
细菌分离培养及鉴定
➢ 细菌分离培养：使细菌在平板上分散生长，便 于观察菌落特征，也易于挑取单个菌落进行生 化鉴定或血清学试验
➢ 细菌鉴定：形态与培养特性：形态、染色、培 养特性和菌落特征是鉴定细菌的初步依据
细菌形态与染色特点
➢ 染色性：革兰阳性、阴性，抗酸染色阳性、阴性等 ➢ 形状、大小和排列：球菌、杆菌、螺形菌，菌体大小、
荧光假单胞菌 P.fluorescens
➢ 形态与染色：阴性杆菌、无芽孢、无荚膜、端鞭毛 ➢ 培养特性：在麦康凯上呈无色半透明菌落，在营养
琼脂上形成荧光色的菌落
恶臭假单胞菌 P.putida
➢ 形态与染色：阴性杆菌、无芽孢、无荚膜、极端鞭毛 ➢ 培养特性：在麦康凯上呈较大无色、湿润菌落，在营
养琼脂上形成黄绿色菌落，紫外线下可见荧光
炭疽芽孢杆菌 B.anthracis
➢ 形态与染色：为致病细菌中最大的革兰阳性杆菌， 两端截平，体外培养后形成长链，排列呈竹节形。 在体内常单个存在或短链，有荚膜，在人工培养基 上可见芽孢，卵圆形并位于菌体中央，菌体不膨大
实验一细菌形态学检查
实验一 细菌形态学检查
生物安全
1、进入实验室必须穿白大褂，离室时脱下反折；无菌操作时必须戴口 罩。
2、不必要物品勿带入实验室，必要的文具、实验指导和笔记本应放在 指定的操作区。
3、实验室内禁止带入饮食，抽烟，不得高声谈笑或随便走动。 4、需培养的物品应做好标记放在指定地点。用过的有菌器材必须放在
鞭毛染色-涂片的制备
将菌种接种在肉汤管中，经24 h 37℃孵育后离心， 倒掉上清液，用接种环沾取沉淀物一环置于玻片的一 端，并将玻片倾斜，使菌液自然流动至玻片的另一端， 室温下自然干燥
鞭毛染色-操作方法
滴加工作液于玻片上，染色10~15 min 将玻片微倾斜，用蒸馏水一滴滴冲洗干净 将玻片直立使水分流尽，自然晾干，镜检 结果：菌体及鞭毛均为红色
消毒缸内，小心处理传染材料、培养物和污染的物品。
5、避免任何有菌材料的溅出，若不甚污染工作台、手、眼、衣服和地 面等处，应立即报告老师及时适当处理。
6、实验完毕后物归原处，并清洁桌面；肥皂洗手、消毒液浸泡洗净后， 关闭水、电、煤气和门窗方可离开实验室。
【实验目的】
1． 掌握临床微生物实验室规则，生物安全及其它注 意事项。
品红 鞣酸 钾明矾
鞭毛染色-工作液配制
根据使用量将A液、B液、C液等比例混合，并置于工 作液过滤瓶内，混合均匀静置2 h 后方可使用
工作液2~8 ℃ 约可保存2~3天
鞭毛染色-玻片的处理
鞭毛染色成功与否，与玻片的洁净度有非常密切的关 系
取新的载玻片，先用洗洁精清洗干净后，再浸泡在 3%盐酸酒精2天以上，使用时从酸性酒精中取出，并 用纯水冲洗干净，再以干净纱布擦干或自然干燥后使 用
实验操作
每组一套菌种： 葡萄球菌：革兰阳性球菌 大肠埃希菌：革兰阴性杆菌 真菌：孢子 变形杆菌：鞭毛染色（示教） 枯草杆菌：芽胞染色（示教）
生物安全
1、进入实验室必须穿白大褂，离室时脱下反折；无菌操作时必须戴口 罩。
2、不必要物品勿带入实验室，必要的文具、实验指导和笔记本应放在 指定的操作区。
3、实验室内禁止带入饮食，抽烟，不得高声谈笑或随便走动。 4、需培养的物品应做好标记放在指定地点。用过的有菌器材必须放在
鞭毛染色-涂片的制备
将菌种接种在肉汤管中，经24 h 37℃孵育后离心， 倒掉上清液，用接种环沾取沉淀物一环置于玻片的一 端，并将玻片倾斜，使菌液自然流动至玻片的另一端， 室温下自然干燥
鞭毛染色-操作方法
滴加工作液于玻片上，染色10~15 min 将玻片微倾斜，用蒸馏水一滴滴冲洗干净 将玻片直立使水分流尽，自然晾干，镜检 结果：菌体及鞭毛均为红色
消毒缸内，小心处理传染材料、培养物和污染的物品。
5、避免任何有菌材料的溅出，若不甚污染工作台、手、眼、衣服和地 面等处，应立即报告老师及时适当处理。
6、实验完毕后物归原处，并清洁桌面；肥皂洗手、消毒液浸泡洗净后， 关闭水、电、煤气和门窗方可离开实验室。
【实验目的】
1． 掌握临床微生物实验室规则，生物安全及其它注 意事项。
品红 鞣酸 钾明矾
鞭毛染色-工作液配制
根据使用量将A液、B液、C液等比例混合，并置于工 作液过滤瓶内，混合均匀静置2 h 后方可使用
工作液2~8 ℃ 约可保存2~3天
鞭毛染色-玻片的处理
鞭毛染色成功与否，与玻片的洁净度有非常密切的关 系
取新的载玻片，先用洗洁精清洗干净后，再浸泡在 3%盐酸酒精2天以上，使用时从酸性酒精中取出，并 用纯水冲洗干净，再以干净纱布擦干或自然干燥后使 用
实验操作
每组一套菌种： 葡萄球菌：革兰阳性球菌 大肠埃希菌：革兰阴性杆菌 真菌：孢子 变形杆菌：鞭毛染色（示教） 枯草杆菌：芽胞染色（示教）
微生物实验本科实验一细菌形态学PPT课件
第7页/共39页
金黄色葡萄球菌血涂片
第8页/共39页
葡 萄 球 菌
第9页/共39页
肺炎球菌 第10页/共39页
肺 炎 球 菌
第11页/共39页
链 球 菌 第12页/共39页
链球菌
第13页/共39页
2．杆菌： 如大肠杆菌经番红染色后
呈淡红色杆状，两端钝圆， 散在排列。
第14页/共39页
大肠杆菌 第15页/共39页
2．干燥：
涂片置室温自然干燥，必要 时可将标本面朝上，放在离火 焰较高处微微烘干，但切勿在 火焰上直烤。
第25页/共39页
3．固定： 标本面朝上，用钟摆
样速度来回通过火焰三次。
第26页/共39页
（二）革兰染色法步骤 1．初染：在上述已固定的涂片 上，
滴加结晶紫染液，染色1分钟，水洗。 2．媒染：滴加革兰碘液，作用1—
本次实验内容
一、实验室规则 二、细菌的基本形态和特殊
结构的观察 三、革兰染色法 四、油镜的使用
第1页/共39页
一、实 验 室 规 则
（一）实验前要做好实验预习， 进实验室只带必要的文具、讲义， 并穿工作服。
（二）实验室内应保持清洁、安 静，实验时要认真严肃，禁止抽烟、 饮食和开玩笑。
第2页/共39页
化学组成：
鞭毛蛋白
功能：
运动器官 与致病有关 鉴定分类细菌
第19页/共39页
变形杆菌（鞭毛）
第20页/共39页
荚 膜 Capsule
化学组成：
多糖或多肽
功能：
抗吞噬作用 粘附作用 抗有害物质损伤作用
第21页/共39页
芽 胞 Spore
功能与医学上意义：
对外界的抵抗力增加 可发芽成繁殖体有致病性 有鉴别作用 应以杀死芽胞为灭菌效果的指标
金黄色葡萄球菌血涂片
第8页/共39页
葡 萄 球 菌
第9页/共39页
肺炎球菌 第10页/共39页
肺 炎 球 菌
第11页/共39页
链 球 菌 第12页/共39页
链球菌
第13页/共39页
2．杆菌： 如大肠杆菌经番红染色后
呈淡红色杆状，两端钝圆， 散在排列。
第14页/共39页
大肠杆菌 第15页/共39页
2．干燥：
涂片置室温自然干燥，必要 时可将标本面朝上，放在离火 焰较高处微微烘干，但切勿在 火焰上直烤。
第25页/共39页
3．固定： 标本面朝上，用钟摆
样速度来回通过火焰三次。
第26页/共39页
（二）革兰染色法步骤 1．初染：在上述已固定的涂片 上，
滴加结晶紫染液，染色1分钟，水洗。 2．媒染：滴加革兰碘液，作用1—
本次实验内容
一、实验室规则 二、细菌的基本形态和特殊
结构的观察 三、革兰染色法 四、油镜的使用
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一、实 验 室 规 则
（一）实验前要做好实验预习， 进实验室只带必要的文具、讲义， 并穿工作服。
（二）实验室内应保持清洁、安 静，实验时要认真严肃，禁止抽烟、 饮食和开玩笑。
第2页/共39页
化学组成：
鞭毛蛋白
功能：
运动器官 与致病有关 鉴定分类细菌
第19页/共39页
变形杆菌（鞭毛）
第20页/共39页
荚 膜 Capsule
化学组成：
多糖或多肽
功能：
抗吞噬作用 粘附作用 抗有害物质损伤作用
第21页/共39页
芽 胞 Spore
功能与医学上意义：
对外界的抵抗力增加 可发芽成繁殖体有致病性 有鉴别作用 应以杀死芽胞为灭菌效果的指标
细菌的形态学检查法.ppt
显微镜是人类各个时期最伟大的发明物之一。在它发明出来之前，人类关于周围世界的 观念局限在用肉眼，或者靠手持透镜帮助肉眼所看到的东西。
显微镜把一个全新的世界展现在人类的视野里。人们第一次看到了数以百计的“新的” 微小动物和植物，以及从人体到植物纤维等各种东西的内部构造。显微镜还有助于科学家发 现新物种，有助于医生治疗疾病。上图：这是17世纪英国科学家罗伯特·胡克的显微镜。它有 一根内装透镜的简易皮管，安放在一个可调整的架子上。灌满水的玻璃球用来把光聚焦到物 体上。
1665年前后，英国的胡克在显微镜中加入粗动和 微动调焦机构、照明系统和承载标本片的工作台。 1673～1677年期间，荷兰的列文胡克制成单组元放大 镜式的高倍显微镜。
19世纪，高质量消色差浸液物镜的出现，使显微 镜观察微细结构的能力大为提高。1827年阿米奇第一 个采用了浸液物镜。19世纪70年代，德国人阿贝奠定 了显微镜成像的古典理论基础。
古典的光学显微镜只是光学元件和精密机械元件的组 合，它以人眼作为接收器来观察放大的像。后来在显微镜 中加入了摄影装置，以感光胶片作为可以记录和存储的接 收器。现代又普遍采用光电元件、电视摄像管和电荷耦合 器等作为显微镜的接收器，配以微型电子计算机后构成完 整的图像信息采集和处理系统。
第二节 显微镜原理
Numerical Aperature
Resolution
Rayleigh Criterion
; www.imb-jena.de See more interactive tutorials at
镜的性能
透镜是组成显微镜光学系统的最基本的光学元件，物镜 目镜及聚光镜等部件均由单个和多个透镜组成。依其外形的 不同，可分为凸透镜(正透镜)和凹透镜(负透镜)两大类。
实验一细菌形态与结构观察PPT课件
选择适当的培养基配方，按照 规定的比例混合，加热溶解后 灭菌，待冷却后用于细菌培养
。
接种细菌
将细菌接种到培养基上，放置 在恒温培养箱中培养，使细菌 生长繁殖。
细菌培养
在适宜的温度和湿度条件下， 细菌会在培养基上生长繁殖， 形成可见的菌落。
菌落挑取
用无菌接种环从菌落边缘挑取 少量细菌，用于显微镜观察。
显微镜观察
显微镜调试
调整显微镜的焦距和光源， 确保视野清晰。
样本放置
将挑取的细菌样本放置在 显微镜的载玻片上，盖上 盖玻片。
观察记录
通过显微镜观察细菌的形 态和结构，记录观察结果。
染色与观察
染色处理
根据需要选择合适的染色剂，如革兰 氏染色或瑞氏染色，对细菌进行染色 处理。
脱水与透明
再次观察
将处理后的样本放回显微镜下观察， 记录染色后的细菌形态和结构特点。
选择不同的细菌样本，如大肠杆 菌、金黄色葡萄球菌等，确保样 本具有代表性。
细菌样本的保存
将采集的细菌样本妥善保存，以 备后续实验使用。
显微镜
显微镜的选择
选择适合观察细菌的显微镜，如光学显微镜或电子显微镜。
显微镜的操作
掌握显微镜的操作方法，包括调节焦距、照明等，以确保观 察效果清晰。
染色液
染色液的种类
实验一细菌形态与结构观察ppt课 件
目录
• 实验目的 • 实验材料 • 实验步骤 • 实验结果 • 实验总结
01
实验目的
了解细菌的形态与结构
了解细菌的基本形态
球菌、杆菌、螺旋菌等。
掌握细菌的基本结构
细胞壁、细胞膜、细胞质、核区等。
学习使用显微镜观察细菌
掌握显微镜的基本操 作：调节焦距、对光、 移动载玻片等。
。
接种细菌
将细菌接种到培养基上，放置 在恒温培养箱中培养，使细菌 生长繁殖。
细菌培养
在适宜的温度和湿度条件下， 细菌会在培养基上生长繁殖， 形成可见的菌落。
菌落挑取
用无菌接种环从菌落边缘挑取 少量细菌，用于显微镜观察。
显微镜观察
显微镜调试
调整显微镜的焦距和光源， 确保视野清晰。
样本放置
将挑取的细菌样本放置在 显微镜的载玻片上，盖上 盖玻片。
观察记录
通过显微镜观察细菌的形 态和结构，记录观察结果。
染色与观察
染色处理
根据需要选择合适的染色剂，如革兰 氏染色或瑞氏染色，对细菌进行染色 处理。
脱水与透明
再次观察
将处理后的样本放回显微镜下观察， 记录染色后的细菌形态和结构特点。
选择不同的细菌样本，如大肠杆 菌、金黄色葡萄球菌等，确保样 本具有代表性。
细菌样本的保存
将采集的细菌样本妥善保存，以 备后续实验使用。
显微镜
显微镜的选择
选择适合观察细菌的显微镜，如光学显微镜或电子显微镜。
显微镜的操作
掌握显微镜的操作方法，包括调节焦距、照明等，以确保观 察效果清晰。
染色液
染色液的种类
实验一细菌形态与结构观察ppt课 件
目录
• 实验目的 • 实验材料 • 实验步骤 • 实验结果 • 实验总结
01
实验目的
了解细菌的形态与结构
了解细菌的基本形态
球菌、杆菌、螺旋菌等。
掌握细菌的基本结构
细胞壁、细胞膜、细胞质、核区等。
学习使用显微镜观察细菌
掌握显微镜的基本操 作：调节焦距、对光、 移动载玻片等。
细菌形态学检查汇总PPT课件
显微镜在从木箱中取出或装箱时，右手紧握镜 臂，左手稳托镜座，轻轻取出。不要只用一只 手提取，以防显微镜坠落，然后轻轻放在实习 台上或装入木箱内。
显微镜放到实习台上时，先放镜座的一端，再 将镜座全部放稳，切不可使镜座全面同时与台 面接触，这样震动过大，透镜和微调节器的装 置易损坏。
11
显微镜的保护(二)
热固定，将已干燥的 涂片在火焰中迅速通 过3次，以手背皮肤接 触玻片不烫为佳。
17
制备涂片标本→染色
涂片
干燥
固定
水洗、吸干
镜检
染色
18
（二）革兰染色
最经典、最常用的染色方法。 通过革兰染色将所有细菌分为G+菌和
G-菌两大类。
19
1、染色原理
细胞壁通性学说：与肽聚糖结构有关。 化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁
5
实验工作台应每日清理，若有污染发生应立即 进行消毒；所有设备在使用后均必须及时清理 和处理，以保持无污染状态。
所有污染物－玻璃器皿、动物笼、实验装置等， 必须先经过消毒处理 (如：高压蒸气灭菌或化 学杀菌处理)，再行清洗或重复使用。废弃物 需经适当之废弃物处理流程处置。
6
在接触传染性物质、化学物质和动物后脱掉手 套，切记洗手。
显微镜须经常保持清洁，勿使油污和灰尘附着。 如透镜部分不洁时，用擦镜纸轻擦，如有油污， 先将擦镜纸蘸少许二甲苯拭去。
显微镜用完后，取下标本片，经聚光器降下， 再将物镜转成“八”字形，转动粗调节器使镜 筒下降，以免接物镜与聚光器相碰。
12
三、不染色标本检查
应用：主要用于观察活菌的动力和运动 方式。
8பைடு நூலகம்
显微镜油镜的使用(一)
显微镜放到实习台上时，先放镜座的一端，再 将镜座全部放稳，切不可使镜座全面同时与台 面接触，这样震动过大，透镜和微调节器的装 置易损坏。
11
显微镜的保护(二)
热固定，将已干燥的 涂片在火焰中迅速通 过3次，以手背皮肤接 触玻片不烫为佳。
17
制备涂片标本→染色
涂片
干燥
固定
水洗、吸干
镜检
染色
18
（二）革兰染色
最经典、最常用的染色方法。 通过革兰染色将所有细菌分为G+菌和
G-菌两大类。
19
1、染色原理
细胞壁通性学说：与肽聚糖结构有关。 化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁
5
实验工作台应每日清理，若有污染发生应立即 进行消毒；所有设备在使用后均必须及时清理 和处理，以保持无污染状态。
所有污染物－玻璃器皿、动物笼、实验装置等， 必须先经过消毒处理 (如：高压蒸气灭菌或化 学杀菌处理)，再行清洗或重复使用。废弃物 需经适当之废弃物处理流程处置。
6
在接触传染性物质、化学物质和动物后脱掉手 套，切记洗手。
显微镜须经常保持清洁，勿使油污和灰尘附着。 如透镜部分不洁时，用擦镜纸轻擦，如有油污， 先将擦镜纸蘸少许二甲苯拭去。
显微镜用完后，取下标本片，经聚光器降下， 再将物镜转成“八”字形，转动粗调节器使镜 筒下降，以免接物镜与聚光器相碰。
12
三、不染色标本检查
应用：主要用于观察活菌的动力和运动 方式。
8பைடு நூலகம்
显微镜油镜的使用(一)
细菌学检验ppt课件
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8
二、染色标本
（一）常用染料 1．碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等 2．酸性染料：有伊红、刚果红等 3．复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有
瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青） 等；荧光染料有荧光标记的抗体
11.12.2020
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9
革兰染色（gram stain） 方法：
（二）常用的染色方法
1、结晶紫初染
1 min
2、卢戈氏碘液媒染 1 min
革兰阳性球菌
3、95％酒精脱色 30sec～1 min
4、稀释石炭酸复红复染 1 min
原理：
G+等电点低，带正电荷的碱性燃 料作色牢固
G+细胞壁肽聚糖层多，G-细胞壁 脂质含量高
G+含有多量核糖核酸镁盐与结晶 紫、碘结合成大分子复合物
革兰阴性杆菌
11.12.2020
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(一)培养基的组成成分
1．营养物质 蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、醇类、血液、 无机盐类、鸡蛋和动物血清生长因子
2．凝固物质 琼脂、明胶、卵白
3．抑制剂和指示剂 胆盐、蔷薇酸等，酚红、中性红、溴甲酚紫等
11.12.2020
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（二）培养基种类
1．基础培养基（based medium） 2．营养培养基（nutrient medium） 3．鉴别培养基（differential medium） 4．选择培养基（selective medium） 5．特殊培养基（special medium）
11.12.2020
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18
1．基础培养基（based medium）
含有大所属细菌生长所需 的基本营养成分，最常用的是 肉浸液，俗称肉汤（broth）， 主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。 用于培养一般细菌
细菌形态和生理课件-PPT
主动运输：低浓度 高浓度，载体蛋白参与
普通菌毛：细菌的粘附结构，与宿主细胞表面特异性受体结合，与致病性密切相关
革兰阴性菌肽聚糖组成
1、聚糖骨架
①对氧气要求：专性需氧菌
五肽交联桥
N-乙酰葡糖胺(G)
N-乙酰胞壁酸(M)
2、四肽侧链（L-丙、D-谷、M-二氨基庚二酸DAP、D-丙）
缺乏五肽交链桥
对数期：细菌快速繁殖，数目呈几何级数增加；
化学结构： 由核糖醇和甘油残基经磷酸二酯键连接组成长链，穿插于肽 聚糖中 类别： 壁磷壁酸- 与细胞壁中肽聚糖中N-乙酰胞壁酸连接； 膜磷壁酸- 与细胞膜相连； 作用： 具有抗原性，储存磷元素；提高细胞膜酶的活性；有一定致 病作用
4革兰阴性菌细胞壁特殊组分——
外膜(outer membrane)又称外壁 层
青霉素、头孢菌素和溶菌酶的杀菌 壁磷壁酸- 与细胞壁中肽聚糖中N-乙酰胞壁酸连接；
普通菌毛 多，短而细
粘附，致病
主要用于细菌收集、获得发酵产物、菌种的鉴定等.
作用主要作用于Ｇ+菌。 细菌L型在高渗的含血清的培养基上生长后形成三种类型的菌落。
特殊结构：荚膜、鞭毛、菌毛、芽胞 形成条件：动物体内、营养丰富的培养基内（荚膜的形成与环境条件有密切关系。
第一节 细菌的形态、结构与分类
一、细菌的大小与形态
观察细菌常用光学显微镜，其大小用测微尺在 显微镜下进行测量，以微米(μm)为单位。不 同种类的细菌大小不一，同一种细菌也因菌龄 和环境因素的影响而有差异。
细菌按其外形，主要有
球菌（coccus） 杆菌（bacillus）
螺形菌（spiral bacterium）
形态与结构
（二）细胞膜 (cell membrane)
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品红 鞣酸 钾明矾
14
鞭毛染色-工作液配制
根据使用量将A液、B液、C液等比例混合，并置于工 作液过滤瓶内，混合均匀静置2 h 后方可使用
工作液2~8 ℃ 约可保存2~3天
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鞭毛染色-玻片的处理
鞭毛染色成功与否，与玻片的洁净度有非常密切的关 系
取新的载玻片，先用洗洁精清洗干净后，再浸泡在 3%盐酸酒精2天以上，使用时从酸性酒精中取出，并 用纯水冲洗干净，再以干净纱布擦干或自然干燥后使 用
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芽胞染色-染液规格
石碳酸复红液 脱色液 碱性美蓝液
20 ml 20 ml 20 ml
碱性品红 乙醇 亚甲蓝
19
芽胞染色-染色步骤与方法
将有芽胞细菌制成涂片，自然干燥后加热固定 滴加石碳酸复红液于涂片上，并弱火加热，使染液冒
蒸气约5 min，冷后水洗，并用脱色液脱色2 min，水 洗 碱性美蓝复染30 s，水洗，干后用油镜镜检 结果：芽胞呈红色，菌体呈蓝色
不染色标本检查法 染色标本检查法 特殊染色检查法
7
不染色标本检查法1
压片法（压滴法）
1. 用接种环分别取细菌2~3环，置于洁净载玻片中央 2. 轻轻覆上盖玻片 3. 油镜下观察
8
不染色标本检查法2
悬滴法
9
染色标本检查法
染色基本步骤：
✓ 涂片： ✓ 干燥：室温自然干燥 ✓ 固定：杀死细菌; 使菌体与玻片粘附; 菌体蛋白变性易着色 ✓ 染色：革兰染色 ✓ 镜检
脱色过度：革兰阳性菌 革兰阴性菌 18~24 h 菌龄最佳 已知金葡与大肠作为阳性和阴性对照
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特殊染色（示教）
鞭毛染色 芽胞染色 荚膜染色
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鞭毛染色-套组内容及规格
内容
复红酒精溶液(A液) 鞣酸水溶液(B液) 钾明矾溶液(C液) 工作液过滤瓶
规格
20 ml 20 ml 20 ml
主要成分
消毒缸内，小心处理传染材料、培养物和污染的物品。 5、避免任何有菌材料的溅出，若不甚污染工作台、手、眼、衣服和地
面等处，应立即报告老师及时适当处理。 6、实验完毕后物归原处，并清洁桌面；肥皂洗手、消毒液浸泡洗净后，
关闭水、电、煤气和门窗方可离开实验室。
2
【实验目的】
1． 掌握临床微生物实验室规则，生物安全及其它注 意事项。
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鞭毛染色-涂片的制备
将菌种接种在肉汤管中，经24 h 37℃孵育后离心， 倒掉上清液，用接种环沾取沉淀物一环置于玻片的一 端，并将玻片倾斜，使菌液自然流动至玻片的另一端， 室温下自然干燥
17
鞭毛染色-操作方法
滴加工作液于玻片上，染色10~15 min 将玻片微倾斜，用蒸馏水一滴滴冲洗干净 将玻片直立使水分流尽，自然晾干，镜检 结果：菌体及鞭毛均为红色
✓ 结核涂片 ✓ 淋球菌涂片
5
显微镜的使用
先用低倍镜找出标本位置，再转用油镜 粗调 + 微调 香柏油的作用：玻片和空气密度不同，使部分光线经
空气折射后不能进入透镜，而香柏油的折光率与玻璃 相近，可使进入油镜的光线增多，视野光度增强，物 像清晰 镜头要保持清洁（可用二甲苯擦拭镜头）
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形态学检查的方法
2． 掌握显微镜油镜的使用和保护。 3． 熟悉显微镜的结构和各部分的功能。 4． 不染色和各种染色标本的显微镜观察。 5． 细菌特殊结构的染色与观察。
3
【实验内容】
光学显微镜的使用 不染色标本的检查 革兰氏染色和细菌基本形态观察 细菌特殊结构染色和观察
4
形态学检查的意义
细菌鉴定的重要手段，有助于细菌的初步分群 是决定采用何种生化反应的重要提示 初步诊断
实验一 细菌形态学检查
1
生物安全
1、进入实验室必须穿白大褂，离室时脱下反折；无菌操作时必须戴口 罩。
2、不必要物品勿带入实验室，必要的文具、实验指导和笔记本应放在 指定的操作区。
3、实验室内禁止带入饮食，抽烟，不得高声谈笑或随便走动。 4、需培养的物品应做好标记放在指定地点。用过的有菌器材必须放在
10
革兰染色-基本步骤
a)初染：结晶紫 1 min； b)媒染：碘液 1 min； c)脱色：95%乙醇
至无紫色脱落为止； d)复染：石碳酸复红 30
s，自然干燥结果判断：紫色为革兰阳性菌、红色为革兰阴性菌 注意事项： 涂片不宜过厚 固定不宜过热 脱色是关键：脱色不够：革兰阴性菌 革兰阳性菌
20
实验操作
每组一套菌种： 葡萄球菌：革兰阳性球菌 大肠埃希菌：革兰阴性杆菌 真菌：孢子 变形杆菌：鞭毛染色（示教） 枯草杆菌：芽胞染色（示教）
革兰染色
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14
鞭毛染色-工作液配制
根据使用量将A液、B液、C液等比例混合，并置于工 作液过滤瓶内，混合均匀静置2 h 后方可使用
工作液2~8 ℃ 约可保存2~3天
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鞭毛染色-玻片的处理
鞭毛染色成功与否，与玻片的洁净度有非常密切的关 系
取新的载玻片，先用洗洁精清洗干净后，再浸泡在 3%盐酸酒精2天以上，使用时从酸性酒精中取出，并 用纯水冲洗干净，再以干净纱布擦干或自然干燥后使 用
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芽胞染色-染液规格
石碳酸复红液 脱色液 碱性美蓝液
20 ml 20 ml 20 ml
碱性品红 乙醇 亚甲蓝
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芽胞染色-染色步骤与方法
将有芽胞细菌制成涂片，自然干燥后加热固定 滴加石碳酸复红液于涂片上，并弱火加热，使染液冒
蒸气约5 min，冷后水洗，并用脱色液脱色2 min，水 洗 碱性美蓝复染30 s，水洗，干后用油镜镜检 结果：芽胞呈红色，菌体呈蓝色
不染色标本检查法 染色标本检查法 特殊染色检查法
7
不染色标本检查法1
压片法（压滴法）
1. 用接种环分别取细菌2~3环，置于洁净载玻片中央 2. 轻轻覆上盖玻片 3. 油镜下观察
8
不染色标本检查法2
悬滴法
9
染色标本检查法
染色基本步骤：
✓ 涂片： ✓ 干燥：室温自然干燥 ✓ 固定：杀死细菌; 使菌体与玻片粘附; 菌体蛋白变性易着色 ✓ 染色：革兰染色 ✓ 镜检
脱色过度：革兰阳性菌 革兰阴性菌 18~24 h 菌龄最佳 已知金葡与大肠作为阳性和阴性对照
12
特殊染色（示教）
鞭毛染色 芽胞染色 荚膜染色
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鞭毛染色-套组内容及规格
内容
复红酒精溶液(A液) 鞣酸水溶液(B液) 钾明矾溶液(C液) 工作液过滤瓶
规格
20 ml 20 ml 20 ml
主要成分
消毒缸内，小心处理传染材料、培养物和污染的物品。 5、避免任何有菌材料的溅出，若不甚污染工作台、手、眼、衣服和地
面等处，应立即报告老师及时适当处理。 6、实验完毕后物归原处，并清洁桌面；肥皂洗手、消毒液浸泡洗净后，
关闭水、电、煤气和门窗方可离开实验室。
2
【实验目的】
1． 掌握临床微生物实验室规则，生物安全及其它注 意事项。
16
鞭毛染色-涂片的制备
将菌种接种在肉汤管中，经24 h 37℃孵育后离心， 倒掉上清液，用接种环沾取沉淀物一环置于玻片的一 端，并将玻片倾斜，使菌液自然流动至玻片的另一端， 室温下自然干燥
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鞭毛染色-操作方法
滴加工作液于玻片上，染色10~15 min 将玻片微倾斜，用蒸馏水一滴滴冲洗干净 将玻片直立使水分流尽，自然晾干，镜检 结果：菌体及鞭毛均为红色
✓ 结核涂片 ✓ 淋球菌涂片
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显微镜的使用
先用低倍镜找出标本位置，再转用油镜 粗调 + 微调 香柏油的作用：玻片和空气密度不同，使部分光线经
空气折射后不能进入透镜，而香柏油的折光率与玻璃 相近，可使进入油镜的光线增多，视野光度增强，物 像清晰 镜头要保持清洁（可用二甲苯擦拭镜头）
6
形态学检查的方法
2． 掌握显微镜油镜的使用和保护。 3． 熟悉显微镜的结构和各部分的功能。 4． 不染色和各种染色标本的显微镜观察。 5． 细菌特殊结构的染色与观察。
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【实验内容】
光学显微镜的使用 不染色标本的检查 革兰氏染色和细菌基本形态观察 细菌特殊结构染色和观察
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形态学检查的意义
细菌鉴定的重要手段，有助于细菌的初步分群 是决定采用何种生化反应的重要提示 初步诊断
实验一 细菌形态学检查
1
生物安全
1、进入实验室必须穿白大褂，离室时脱下反折；无菌操作时必须戴口 罩。
2、不必要物品勿带入实验室，必要的文具、实验指导和笔记本应放在 指定的操作区。
3、实验室内禁止带入饮食，抽烟，不得高声谈笑或随便走动。 4、需培养的物品应做好标记放在指定地点。用过的有菌器材必须放在
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革兰染色-基本步骤
a)初染：结晶紫 1 min； b)媒染：碘液 1 min； c)脱色：95%乙醇
至无紫色脱落为止； d)复染：石碳酸复红 30
s，自然干燥结果判断：紫色为革兰阳性菌、红色为革兰阴性菌 注意事项： 涂片不宜过厚 固定不宜过热 脱色是关键：脱色不够：革兰阴性菌 革兰阳性菌
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实验操作
每组一套菌种： 葡萄球菌：革兰阳性球菌 大肠埃希菌：革兰阴性杆菌 真菌：孢子 变形杆菌：鞭毛染色（示教） 枯草杆菌：芽胞染色（示教）
革兰染色
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