Transwell 使用介绍
transwell共培养原理
一、Transwell共培养介绍Transwell共培养是一种常用的体外细胞培养技术，通过使用Transwell孔膜插入式细胞培养皿，可以模拟细胞间相互影响的情况，从而更好地研究细胞间信号传导、细胞迁移和细胞间相互作用等生物学过程。
本文将结合Transwell共培养的原理、应用和操作步骤，对该技术进行详细介绍。
二、Transwell共培养的原理Transwell共培养的原理是利用Transwell孔膜插入式细胞培养皿，使得上下室中的细胞可以通过孔膜进行相互作用。
孔膜的直径通常在3-12微米之间，可以根据实验需要选择不同直径的孔膜。
上下室中的细胞可以分别种植在孔膜的两侧，从而实现细胞间的共培养。
三、Transwell共培养的应用1. 模拟体内细胞间相互作用：Transwell共培养可以实现不同类型细胞之间的相互作用，如免疫细胞与肿瘤细胞、上皮细胞与间质细胞等，从而更好地模拟体内情况。
2. 研究细胞迁移和浸润：通过在孔膜上涂覆ECM或采用Transwell迁移实验可以模拟细胞的迁移和浸润过程，对细胞迁移机制进行研究。
3. 评价药物渗透性：可用于评价药物在肠道、肾小球等组织中的渗透性，以预测其在体内的分布和代谢情况。
四、Transwell共培养的操作步骤1. 准备Transwell孔膜：选择合适直径的Transwell孔膜，并在使用前进行灭菌处理。
2. 细胞培养：分别将上下室的细胞分别种植在Transwell孔膜的两侧。
3. 培养条件：放置Transwell共培养皿于细胞培养箱中，保持适宜的pH值和温度，并定期更换培养基。
4. 实验操作：根据实验的目的，可进行细胞迁移实验、信号传导实验等操作。
5. 结果分析：对实验结果进行统计分析，观察上下室细胞的形态及细胞指标的变化。
五、Transwell共培养技术的发展趋势随着生物医学研究的不断深入，Transwell共培养技术也在不断发展。
未来，Transwell共培养技术有望应用于疾病模型的构建、靶向药物筛选等领域。
Transwell 说明书
总览
0.4 μm孔径聚碳酯膜的扫描电镜
PTFE膜的扫描电镜，显示孔径结构
在6孔板中的聚酯Transwell透明 嵌套显示膜的清晰度
12mm直径的Transwell嵌套带有 聚碳酯膜 02
细胞和组织培养技术在基础和应用生命科学领域的重要性日益提高。为尽可能的模拟体内 环境以培养某些特殊的细胞系，新的培养容器和细胞贴附的表面不断涌现。顺理成章的， 使用带有多微孔膜的通透性支持物培养这些细胞成为基本的方法。通透性支持物可以有效 改善极性细胞的培养，因为这些支持物允许细胞从其基底面和顶面分泌和吸收分子，从而 以更为自然的方式进行代谢。
无 1 x 105孔/cm2
*数据为额定值，可能有生产流程误差有所不同，为保证实验成功，我们推荐研究者确立自己的实验方法。
表4. Transwell 通透性支持物生长面积
嵌套直径
多孔板和培养皿类型
嵌套膜生长面积
4.26mm
96 well
0.143 cm2
6.5mm
24well
0.33 cm2
12mm
Transwell® 通透性支持物的 选择和使用手册
目录
contents
02 总览 02 选择合适的Transwell膜和合适的孔径 03 选择合适的Transwell 系统 06 如何使用Transwell通透性支持物 06 使用提示 06 常规使用指南 07 技术支持 08 订购信息 08 聚酯（PET）Tranwell 嵌套 08 胶原包被的Tranwell-COL嵌套 09 聚碳酯Transwell嵌套 10 Snapwell 嵌套 10 高通量筛选HTS Transwell-24系统 11 6，12和24孔细胞培养板 12 HTS Transwell-96系统
transwell小体原理 -回复
transwell小体原理-回复transwell，也称为转移百分率孔板（Transwell Permeable Supports），是一种常用于研究细胞迁移、侵袭和转移的实验方法。
它通过模拟生理条件下的细胞迁移情况，提供了一种方便、可靠的实验平台。
本文将详细介绍transwell小体的工作原理和使用方法。
第一步：理解transwell小体的基本原理transwell小体由上下两个隔离的室组成，上室为细胞培养室，下室为培养液室。
两者之间分隔着一块孔径合适的膜片。
通常，膜片选择多孔性聚碳酸酯或胶原膜，其孔径大小可根据具体实验需求进行选择。
细胞可以通过膜孔迁移到下室中，从而模拟细胞在体内穿越生理屏障的过程。
第二步：制备transwell小体实验装置1. 准备上下室：选择适当容量的上下室，通常上室较小，下室较大，确保两个室都可以容纳足够的培养液和细胞。
2. 安装膜片：将膜片放入上室中，确保膜片放置平整，没有明显的气泡或污染物。
3. 连接上下室：使用连接管将上室与下室连接起来，并确保连接部分密封良好，以防止液体泄漏。
第三步：培养细胞1. 处理膜片：在实验前，先对膜片进行处理。
对于多孔性膜片，可以先进行预涂或预培养，以增加细胞附着和生长的效率。
2. 细胞培养：将需要进行迁移实验的细胞悬浮液加入上室中，并注意控制细胞密度，避免过高或过低的细胞数目。
3. 培养液添加：在上室中添加适当的培养液，以满足细胞的生长和迁移需求。
同时，在下室中加入相应的培养液，以提供适当的环境和条件。
第四步：进行实验1. 实验前处理：在进行实验前，可以对细胞进行预处理，例如添加化学物质或进行基因操作，以模拟特定的生理或病理状态。
2. 实验操作：将设备放置在恒温培养箱中，以保证适宜的温度和环境条件。
根据实验需要，可以对不同的上下室中的条件进行调控，例如填充不同的培养液、添加特定的化学物质等。
3. 实验时间：根据具体实验要求和细胞特性，确定合适的实验时间。
transwell小室实验原理
Transwell小室实验是一种常用于细胞学研究中的实验方法，主要用于研究细胞迁移、侵袭、成血管和细胞-细胞相互作用等细胞生物学现象。
本文将详细介绍Transwell小室实验的原理及其在细胞学研究中的应用。
一、Transwell小室实验原理Transwell小室实验是通过一种特殊的小室装置进行的，该装置由两个分隔的小室组成，上下两个小室之间通过一片具有微孔的多孔膜相连。
这片多孔膜的孔径可以根据实验需要进行选择，常见的孔径有3um、8um等。
在实验过程中，我们将需要观察的细胞或细胞外基质放置在上小室中，而下小室中则向其添加一定浓度的化学物质或药物。
待实验进行一定时间后，我们可以通过上下小室之间的多孔膜来观察细胞的迁移、侵袭或是其他相关现象。
在Transwell小室实验中，我们可以根据实验需要对多孔膜进行功能修饰，比如涂覆胶原蛋白、基质蛋白等物质，或是加入不同浓度的化学刺激物质，以模拟细胞在不同生理环境下的行为。
这种设置能够更真实地反映细胞在体内的生理活动，进一步帮助我们理解细胞的生理与病理过程。
二、Transwell小室实验在细胞学研究中的应用1.细胞迁移和侵袭研究Transwell小室实验广泛应用于细胞迁移和侵袭研究中。
我们可以将需要研究的细胞悬浮在上小室中，然后在下小室中添加诱导因子，比如趋化因子、血浆成分等，通过多孔膜对细胞进行筛选，并观察细胞在多孔膜上迁移扩散的情况。
这种实验能够模拟体内细胞在不同环境中的迁移和侵袭过程，帮助我们更好地理解细胞在肿瘤转移、炎症反应等生理和病理过程中的行为。
2.成血管研究Transwell小室实验也常用于细胞成血管相关的研究。
我们可以在上小室中培养内皮细胞或其他与血管生成相关的细胞，然后在下小室中添加适当的生长因子或细胞因子，观察细胞在多孔膜上形成管状结构。
这种实验方法有助于我们深入了解血管生成的分子机制，并为相关疾病的治疗提供新的思路。
3.细胞-细胞相互作用研究在细胞-细胞相互作用研究中，Transwell小室实验也具有重要的应用价值。
细胞内吞实验操作步骤 (Transwell)
细胞内吞实验操作步骤 (Transwell)细胞内吞实验是一种常用的实验方法，用于研究细胞对外界物质的摄取过程。
Transwell是一种常用的实验仪器，用于模拟细胞内吞的过程。
以下是细胞内吞实验操作步骤的简要介绍：1. 准备细胞培养物- 从细胞库中选取需要进行实验的细胞系，并进行细胞培养。
- 在适当的培养基中培养细胞，使其达到合适的密度。
2. 准备Transwell装置- 取出Transwell装置，检查是否完好无损。
- 将适当的培养基添加到Transwell的上室和下室中。
3. 细胞接种- 将预先培养好的细胞通过传代方法收集。
- 计算细胞的浓度，根据实验需要进行稀释。
- 将适当浓度的细胞悬液加入Transwell的上室中。
- 将上室和下室之间的孔隙区域密封，避免交叉污染。
4. 培养细胞- 将装有细胞的Transwell装置放入孵化箱中。
- 设置适当的温度、湿度和气体组成以提供最佳的细胞生长条件。
- 将细胞培养在孵化箱中的适当时间，以确保细胞内吞的进行。
5. 固定和染色- 取出细胞培养装置，并将培养液倒掉。
- 用适当的缓冲液进行细胞固定。
- 根据需要选择适当的染色方法，如普鲁士蓝染色、荧光染色等。
6. 观察和分析- 使用显微镜观察固定并染色的细胞。
- 记录细胞内吞的现象和观察到的细胞形态等。
- 根据需要使用图像分析软件对细胞进行图像处理和数据分析。
注意事项：- 在操作过程中，注意细胞的无菌处理，避免细菌或其它污染物的引入。
- 每个步骤都应该严格按照实验室的操作规范进行操作。
- 根据实验需要，可以根据具体情况进行适当的调整和优化。
以上是细胞内吞实验操作步骤的简要介绍，希望能对您的实验有所帮助。
(完整版)Transwell实验原理与操作步骤
Transwell实验原理与操作步骤Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell 小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。
常用0.4、3.0µm。
我们实验室用的是0.4µm。
transwell英语方法学
transwell英语方法学全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：Transwell方法学是一种常用的实验技术，用于研究细胞迁移和侵袭的过程。
该技术通过Transwell孔板的使用，可以模拟细胞在体内穿过基底膜向远离原始生长处的方向迁移的过程。
通过调整不同的实验条件，可以研究细胞迁移的机制、影响因素以及药物对迁移的影响等内容。
Transwell方法学的基本原理是在Transwell孔板上设置两个细胞培养室，分别为上室和下室。
上室中加入待测试的细胞悬液，下室中加入细胞培养基或药物，上下室之间通过具有不同大小的孔的膜隔开。
细胞悬液被加入到上室后，细胞便会通过孔板的膜向下室迁移，最终在下室中集聚或附着。
通过对下室中细胞数量或细胞可能产生的代谢产物进行检测，可以获得细胞迁移或侵袭的相关数据。
在进行Transwell实验时，需注意以下几点：1. 细胞选用：选择适当的细胞系进行实验，不同类型的细胞具有不同的迁移能力和侵袭能力，需要根据实验目的和研究对象来选择合适的细胞系。
2. 孵育时间：适当的孵育时间是保证实验结果准确性的关键。
孵育时间过短可能导致细胞未完全迁移或侵袭，孵育时间过长则可能导致细胞产生过多的迁移或侵袭，影响数据的解释。
3. 孔板处理：在使用Transwell孔板前需要进行处理，如预润滑、杀菌等步骤。
孔板的处理应该严格按照生产商的说明进行，避免处理不当导致实验结果的干扰。
4. 控制实验：在进行实验时需要设置对照组，如阴性对照组和阳性对照组。
通过对照组的设置，可以更准确地评价实验结果，排除外界因素的干扰。
Transwell方法学在肿瘤学、生物学、药理学等领域均有广泛的应用。
通过该技术，可以研究肿瘤细胞的侵袭和转移机制、药物对癌细胞迁移的影响、神经元的迁移等方面。
随着技术的不断完善和发展，Transwell方法学在相关研究领域中将发挥越来越重要的作用。
Transwell方法学是一种简单、经济且有效的实验技术，广泛应用于细胞迁移和侵袭相关研究领域。
Transwell是检测细胞侵袭能力的检测方法
Transwell是检测细胞侵袭能力的检测方法Transwell是检测细胞侵袭能力的检测方法我们所使用的是Chemicon公司的ECM554，基质胶已经包被好了，买来就可以用，很方便，而且我们算过，跟自己买胶来包被价格相差不大。
这种胶4度下很软，37度则变得比较坚硬，因此用前应先放在培养箱中10分钟作用，使胶完全凝固。
该试剂盒对穿过膜的细胞进行荧光染色，再用裂解液裂解细胞后检测荧光值。
我们在实际使用的时候对穿过膜的细胞采用1％结晶紫染色，镜下计数细胞数目。
结晶紫也可以用33%醋酸溶解，再用酶标仪570nm检测，同样可以反应穿过细胞数因为基质胶的厚度直接影响穿过膜的细胞数，因此建议有条件的话还是买这类已经铺好胶的试剂盒，比较可靠。
说明书该公司网上可以下载，对原理也有比较详细的阐述，可以去查一下。
我们做的时候，上室用0.5%BSA的培养液，下室用5%血清的培养液，下室血清的浓度可根据细胞类型的不同进行调整，如果细胞侵袭能力强，可适当降低血清浓度，否则可适当提高血清浓度。
需要注意的是：1。
上室内的细胞数目要适当，过多，穿过膜的细胞会过多过快，如果用计数法的话将难以计数；最少也要保证在收样的时候，上室内还要有细胞存在。
具体细胞密度需要自己摸索。
2。
细胞计数的准确性对结果影响很大，各组间最好不要分开计数。
尽量用同一密度的细胞悬液给予不同处理，保证各组细胞量一致3。
对细胞的处理不可影响细胞生存。
否则难以肯定是细胞量的改变还是侵袭能力改变侵袭小室其实不止是transwell的，其它像Boyden chamber、Thincert也挺好用的。
我用过Thincert，个人感觉不错，而且价格便宜，是grelner的，孔径8微米用于24孔板的一个才45块人民币，而且可以零买，不想transwell，总是一箱一箱的卖，实在是太贵了！侵袭实验要结合实验目的，不一定非要包被的。
下面奉上用Thincert做侵袭实验的步骤（摘自《A quantitative cell migration assay using ThinCert? cell culture inserts》，大家如需要，可用google搜之）：1. Prepare cell cultures according to standard cell culture procedures2. Starve cells overnight in serum-free medium with 0.2 % BSA3. Harvest cells and wash them twice in PBS4. Resuspend cells in serum-free medium with 0.2 % BSA to an appropriate final cell concentration (e.g. 106/ml)5. Place 24 well ThinCertTM cell culture inserts in the wells ofa CELLSTAR? 24 well cell culture plate6. Add 600 μl culture medium with or without chemoattractant to each well of the cell culture plate7. Add 200 μl cell suspension t o each cell culture insert8. Incubate the cell culture plate for 3-24 h in a cell culture incubator at 37°C and 5 % CO29. Remove the cell culture medium from each well of the cell culture plate and replace it by 450 μl serum-free culture medium with 8 μM Calcein-AM10. Incubate for 45 min in a cell culture incubator at 37°C and 5 % CO211. Remove the culture medium from the cell culture inserts12. Transfer the cell culture inserts into a freshly prepared 24 well cell culture plate containing 500 μl prewa rmed Trypsin-EDTA per well13. Incubate for 10 min in a cell culture incubator at 37°C and 5 % CO2, agitate the plate from time to time14. Discard the cell culture inserts and transfer 200 μl of theTrypsin-EDTA solution (now containing the migratory cells) from each well into a black flat bottom 96 well plate15. Read fluorescence in a fluorescence plate reader at an excitation wavelength of 485 nm and an emission wavelength of 520 nm从第9步开始计数侵袭细胞时，这份说明书用的是荧光标记，但这种方法成本高而且繁琐。
Transwell实验原理与操作步骤
Transwell实验原理与操作步骤Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell 小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。
常用0.4、3.0µm。
我们实验室用的是0.4µm。
transwell方法
transwell方法Transwell方法是一种常用的细胞迁移和侵袭性研究技术，也称为Boyden室或Boyden腔。
该技术利用了细胞在特定条件下通过孔隙的能力，可以模拟细胞在体内穿越基底膜的过程。
本文将从Transwell 方法的原理、应用、优缺点等方面进行介绍。
一、Transwell方法的原理Transwell方法是利用Transwell腔的特殊结构，将上下两个室隔离开来，上室放置细胞悬液，下室放置培养基和化合物，通过孔隙模拟细胞穿越基底膜的过程。
Transwell腔通常由两个部分组成，上部为细胞培养室，下部为底部过滤膜室。
过滤膜通常为聚碳酸酯或聚酰胺材料，可以选择不同的孔径大小和孔隙度，以适应不同类型的细胞。
Transwell方法的操作流程如下：1. 准备Transwell腔和底部过滤膜。
2. 在上室中加入细胞悬液。
3. 在下室中加入培养基和化合物。
4. 将Transwell腔放入细胞培养箱中培养。
5. 取出Transwell腔，将上室中的细胞悬液倒掉，用PBS或其他缓冲液洗涤。
6. 取出底部过滤膜，用甲醇或其他固定液固定细胞。
7. 进行免疫染色或其他检测。
二、Transwell方法的应用Transwell方法主要用于细胞迁移和侵袭性研究，可以模拟细胞穿越基底膜的过程，评估细胞侵袭性、迁移能力和转移能力，同时也可以研究细胞与化合物之间的相互作用。
具体应用包括：1. 细胞迁移和侵袭性研究。
可以用于研究肿瘤细胞的侵袭和转移能力，评估药物对细胞迁移和侵袭性的影响。
2. 细胞与化合物相互作用研究。
可以用于筛选化合物的抑制作用，评估化合物对细胞迁移和侵袭性的影响。
3. 细胞-细胞相互作用研究。
可以用于研究细胞-细胞相互作用对细胞迁移和侵袭性的影响，评估细胞间信号转导通路。
4. 细胞与基质相互作用研究。
可以用于研究细胞与基质之间相互作用的过程，评估细胞与基质之间的黏附和迁移能力。
三、Transwell方法的优缺点Transwell方法具有一定的优点和缺点：1. 优点：Transwell方法操作简单，可以模拟细胞穿越基底膜的过程，评估细胞侵袭性、迁移能力和转移能力，同时也可以研究细胞与化合物之间的相互作用。
transwell原理和技术
Transwell实验原理与操作步骤Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。
常用0.4、3.0µm。
我们实验室用的是0.4µm。
Transwell实验原理与操作步骤
Transwell实验原理与操作步骤Transwell实验，也被称为细胞侵袭实验，是一种研究细胞迁移和侵袭能力的实验方法。
其基本原理是将小室放入培养板中，小室内称为上室，培养板内称为下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
上室内添加上层培养液，下室内添加下层培养液，并将研究的细胞种在上室内。
由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞生长、运动等。
在进行不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜的实验时，可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
在肿瘤细胞侵袭实验中，需在聚碳酸酯膜上侧铺一层基质胶，用以模仿细胞外基质。
肿瘤细胞必须分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质消化了才能进入下室（这与体内情况较为相似）。
最后通过计算进入下室的细胞量即可反应细胞的侵袭能力。
有侵袭能力的细胞才可用于Transwell侵袭实验。
建议实验前先用明胶酶谱法检测MMPs的表达，特别是MMP-2的表达。
Transwell实验的具体操作步骤如下：1.实验前的准备工作：需要提前一天将Matrigel胶（一种人工合成的细胞外基质）从冰箱中取出，放置在冰盒上融化。
同时，将24孔板、枪头、离心管等实验器材也放置在冰盒中预冷。
2.基质胶铺板：将融化好的Matrigel胶与无血清培养基按照1:8的比例混合，然后用预冷的枪头将混合液均匀铺设在Transwell小室的上室底部，注意要避免产生气泡。
铺好后将小室放入37℃的培养箱中孵育30分钟，使Matrigel胶凝固。
3.细胞处理：将需要研究的细胞进行传代或复苏，并用无血清培养基洗涤两次，然后用胰酶消化并计数。
4.接种细胞：将计数好的细胞用无血清培养基重悬，然后取适量细胞悬液加入到Transwell小室的上室中，注意要保证每个小室的细胞数量一致。
5.添加培养液：在上室和下室中分别添加适量的含血清培养基，上室的培养基中可以含有研究药物或其他处理因素。
6.培养细胞：将Transwell小室放入37℃的培养箱中培养24-48小时，具体时间可以根据研究目的和细胞类型进行调整。
Transwell
Transwell实验：小室，24孔板，基质胶，无血清培养基，有血清培养基，单独的细胞，黄枪头，蓝枪头，大枪头
1.取出基质胶置于冰上，待其融化（时间较长）。
2.每个小室内加50ul基质胶，但领的胶是5*的，铺在小室内的是1*的，所以要用无血清培养基稀释，即10ul胶+40ul无血清培养基，提前在EP管中配好，稍多配点，加入小室，注意胶是否铺满小室底部，注意不要戳破小室膜，加完后置于37℃培养箱2h，待胶凝固。
3.2h后将无血清培养基加热，吸200ul无血清培养基加入小室，水化基质胶，置于37℃培养箱30min,其间消化细胞，用无血清培养基吹打，计数，准备每个小室加10的5次方个细胞。
4.30min后将小室中的培养基吸出，将细胞加入小室，总量200ul，不足量用无血清培养基补齐，如果量太大则只能加200ul，（细胞数计好后，少加20-50ul左右）。
5.加完后，从小室的侧孔加500ul有血清培养基，加入下室。
加完后置于37℃培养箱24-36h 后处理。
6.约30h后，将小室取出用PBS洗2遍，放入干净孔中，再用4%多聚甲醛（上室加100ul,下室加500ul）固定1h。
7.1h后用PBS洗涤2遍，再放入孔中，加结晶紫染色90min（上室加100ul,下室加500ul）。
8.90min后，取出用PBS洗涤，再用显微镜拍照，用棉签将上室膜轻轻拭去，拍出的照片即为侵袭过去的细胞。
Transwell实验原理与操作步骤
T r a n s w e l l实验原理与操作步骤Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998Transwell实验原理与操作步骤Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membranefilters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有－μm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择μm以下孔径。
Transwell 说明书
Transwell-COL嵌套湿润时透明的，胶原包被的PTFE膜，使得细胞更易贴附和伸展，同 时在培养的过程中可以观察。Transwell-COL含有牛胎盘中提取的等摩尔数混合I型和III 型胶原。不同于传统包被技术会形成密封的膜层，康宁专利包被技术使具有生物稳定 性的胶原包裹住滤膜的每一根纤维，从而保持了膜的多孔性。
HTS-96 系统是高通量药物转导 研究的理想工具
HTS Transwell系统为机械操作 而设计
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如何使用Transwell® 通透性支持物
使用提示
1. 通透性支持物上的细胞形态和密度受滤膜孔径的影响。 2. 一些孔径大的膜可以容许细胞穿过。 3. 在通透性支持物上生长的细胞的贴附对于起始接种密度很敏感。初次使用应接种不同密
滤膜作为细胞培养介质来源于Grobstein (Nature, 172:860-872; 1953)关于后肾滤膜诱导的研 究。经过长年对不同种类细胞的无数次应用，利用通透性支持物进行细胞培养被认为明显 优于坚固的，不可透过的细胞生长界面。对于表皮细胞和其他种类的细胞，利用通透性支 持物在体外培养使得细胞可以在更为自然的极性条件下生长和研究。同时提高了细胞的分 化水平，使得体外生长的细胞在形态和功能上更为接近体内的细胞。还可以进行运输，吸 收和分泌等细胞功能的研究，因为在通透性支持物上生长的细胞可以很方便且无干扰的接 近其基底面和顶面的细胞膜结构。使用通透性支持物进行细胞培养对于实验细胞学研究是 一个无可比拟的工具。
SnapwellTM嵌套
Snapwell嵌套 (U.S. Patent No. 5,272,083) 是经过改良的Transwell嵌套，包括12mm 的经组织 培养处理的聚碳酯膜或透明的聚酯膜，以及一个分离环。这些嵌套主要用于运输和电生理 研究。一旦细胞长满，分离环固定的膜可以拆卸，并垂直或水平放置，或置于Ussing培养 室中。Ussing培养室可以通过哈佛仪器公司购买：
transwell实验原理与步骤
transwell实验原理与步骤Transwell实验是一种常见的细胞迁移和侵袭性研究的方法。
它广泛用于评估细胞的迁移能力、侵袭能力以及药物对这些能力的影响。
Transwell实验基于孔板中半透膜的整体设计，使得细胞可以在孔板上的上下两侧进行迁移和侵袭。
下面将详细介绍Transwell实验的原理和步骤。
1. Transwell实验的原理Transwell实验中使用的是Transwell孔板，该孔板由上下两个室组成，通过半透膜分隔开。
半透膜通常由聚碳酸酯或聚膠（polyethylene terephthalate）制成，具有特定的孔径。
孔板上室称为上室，下室称为下室。
上室用于装载待测的细胞，下室则添加诱导迁移或侵袭的化学物质。
Transwell实验的原理是利用孔板的半透膜，使得细胞可以通过孔板上下两侧进行迁移和侵袭。
细胞在上室中培养，通过半透膜向下室中迁移和侵袭。
迁移和侵袭的细胞数量可以通过染色或其他方法来定量。
同时，可以添加不同的化学物质于上室或下室，以评估这些化学物质对细胞迁移和侵袭能力的影响。
2. Transwell实验的步骤Transwell实验的步骤主要包括预处理Transwell孔板、细胞培养、细胞处理、迁移或侵袭实验、染色和结果分析。
(1) 预处理Transwell孔板将Transwell孔板放入含有适当的细胞培养基的无菌培养皿中，在37℃的恒温培养箱中预温30分钟。
然后，将细胞培养基完全移除并在烘箱中干燥。
(2)细胞培养将需要进行迁移和侵袭实验的细胞培养至合适的数量和状态。
注意要保持细胞处于对下一步实验的最佳状态，例如在对照组、实验组之间生长均匀。
(3)细胞处理将预处理后的Transwell孔板放入一个无菌培养皿中。
然后，向上室中加入适当数量的细胞悬液。
根据实验要求，可以在上室中添加不同浓度的细胞。
(4)迁移或侵袭实验在下室中加入化学物质，例如诱导剂或特定药物。
这些化学物质可以模拟体内环境，刺激细胞的迁移或侵袭能力。
细胞迁移侵袭实验操作步骤(Transwell)
细胞迁移侵袭实验操作步骤(Transwell)迁移实验（cellmigrationassay）实验介绍细胞迁移与侵袭实验将transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
实验步骤：1材料准备：摄影显微镜，Transwell细胞，孔径8μm。
Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板未涂有胶水（Coster和Corning也常用）。
细胞培养板应与购买的Transwell培养箱相匹配。
基质凝胶，无血清DMEM，（1%胎牛血清）DMEM和1640培养基，DMEM完全培养基，1640完全培养基（也可添加20%血清），无菌PBS，棉签，胰蛋白酶，4%聚甲醛固定溶液或甲醇，结晶紫染料（0.1%（g/ml）PBS结晶紫）2步骤和过程2.1基质铺胶板：用bd公司的matrigel1：8（根据细胞产生mmp的量来决定）稀释，包被transwell 小室底部膜的上室面，置37℃30min使matrigel聚合成凝胶。
使用前进行基底膜水化。
2.2制备细胞悬液① 在制备细胞悬浮液之前，可将细胞从血清饥饿状态下移除12-24小时，以进一步消除血清的影响。
但这一步并不是必须的。
②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用pbs洗1－2遍），用含bsa的无血清培养基重悬。
调整细胞密度至5×105/ml。
2.3接种细胞① 取细胞悬液100μL加入Transwell培养箱。
②24孔板下室一般加入600μl含20?s的培养基，特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。
transwell英语方法学
transwell英语方法学
Transwell是一种用于细胞培养和细胞迁移研究的常用实验装置。
它通常由上下两个隔离的室组成，上下室之间通过一个多孔的膜连接。
下面我将从多个角度来介绍Transwell的英语方法学。
首先，Transwell的使用方法。
在进行细胞培养实验时，首先需要在上室中加入细胞悬液，然后将Transwell装置放入含有培养基的培养皿中。
接着，细胞会沉积在膜的上表面。
在细胞迁移实验中，需要在下室中加入诱导迁移的化学物质，细胞会穿过膜向化学物质的梯度进行迁移。
这样就可以通过Transwell装置研究细胞的迁移能力。
其次，Transwell的细胞迁移实验方法。
在进行细胞迁移实验时，需要首先在膜的上表面涂覆一层基底膜，然后加入细胞悬液到上室中。
在下室中加入化学诱导物质，并且让细胞在一定的时间内进行迁移。
随后，取出Transwell装置，将上室的细胞去除，用甲醇固定下室的细胞，然后染色并观察细胞迁移情况。
最后，Transwell的数据分析方法。
在细胞迁移实验后，需要对下室中的细胞进行计数或图像分析，以确定细胞迁移的数量和程
度。
通常可以使用显微镜观察细胞迁移情况，或者将膜切下来进行染色后进行图像分析。
通过对细胞数量或图像特征的分析，可以得出关于细胞迁移能力的定量数据。
总的来说，Transwell的英语方法学涉及到细胞培养实验、细胞迁移实验和数据分析方法。
通过这些方法，可以研究细胞的迁移能力和相关的生物学过程。
希望以上介绍能够对你有所帮助。
Transwell侵袭实验操作步骤
Transwell侵袭实验操作步骤
1、实验前一天，将已经分装后的一管Matrigel基质胶从-20℃提前放入4℃冰箱过夜，Matrigel胶即从固体状态融化为液体状态。
2、包被基底膜：Matrigel基质胶以1：8稀释后包被transwell 小室底部膜的上室面(整个过程注意冰上操作，否则Matrigel在10℃以上即会凝固)，3小时风干。
3、水化基底膜：吸出培养板中残余液体，每孔加入50μL 10g/LBSA的无血清培养液，37 ℃，30min。
4、常规胰酶消化细胞，PBS洗1-2遍去除血清的影响，用无血清培养基重悬细胞，调整细胞密度为5*105个/mL。
5、取200μL细胞悬液加入Transwell小室上室，24孔培养板下室内加入600μL 含10% FBS培养基。
注意下层培养液与小室之间不要产生气泡。
6、培养板置于37℃的CO2培养箱中，依据肿瘤细胞侵袭能力而定培养12-48h。
7、取出小室，PBS淋洗2遍，用棉签小心擦去小室微孔膜上层内的细胞，在24孔板内4%多聚甲醛(或95%酒精)固定20 min，结晶紫溶液染色15 min。
8、倒置显微镜下拍照，每个样本随机计数10个视野，取平均值，统计分析。
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1. Transwell关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（perme able supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
下图是一个Transwell装置的纵切面将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。
常用0.4、3.0µm。
我们实验室用的是0.4µm。
将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。
（2）趋化性实验可用5.0、8.0、12.0µm膜，上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室，计数进入下室的细胞量可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。
①细胞B对细胞A的趋化作用：将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的趋化作用。
②趋化因子对细胞的趋化作用：将细胞种于上室，下室加入某种趋化因子，可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。
（3）肿瘤细胞迁移实验常用8.0、12.0µm膜，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。
（4）肿瘤细胞侵袭实验常用8.0、12.0µm膜，原理与肿瘤细胞迁移实验类似。
上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，但与肿瘤细胞迁移实验不同的是，聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶，用以模仿体内细胞外基质，细胞欲进入下室，先要分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质胶降解，方可通过聚碳酸酯膜。
计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。
2.肿瘤细胞侵袭模型用于研究肿瘤细胞侵袭能力的肿瘤细胞侵袭模型有如下几种（引自司徒镇强《细胞培养》）：2.1 体内癌细胞侵袭模型2.1.1 皮下移植侵袭模型2.1.2 肌肉内移植侵袭模型2.1.3 腹腔内移植侵袭模型2.1.4 小鼠肾包膜下移植侵袭模型2.1.5 鼠睾丸包膜下移植侵袭模型2.1.6 小鼠耳廓皮下移植侵袭模型2.1.7 鼠爪垫皮下移植侵袭模型2.1.8 视网内界膜侵袭模型2.2 体外癌细胞侵袭模型2.2.1 体外静止器官培养法2.2.1.1 半固体培养基单细胞器官培养法2.2.1.2 液体培养基单细胞器官培养法2.2.2 半体外半体内器官培养法2.2.3 单层细胞器官培养法2.2.4 瘤细胞球体器官培养法2.2.4.1 静止球体器官培养法2.2.4.2 旋转摇动球体器官培养法2.2.5 单层细胞侵袭实验模型2.2.6 Transwell侵袭小室测定法可见，Transwell与侵袭实验之间并不能划等号，Transwell有多种应用，侵袭实验也有多种方法。
所谓Transwell侵袭实验，其实是指将Transwell这一技术应用于肿瘤细胞侵袭研究的一种实验。
由于其简单易行、重复性好，因而得到了越来越广泛的应用，但不能认为研究肿瘤侵袭只有Transwell一种方法。
第二节Transwell侵袭实验我的课题涉及Transwell侵袭实验和Transwell迁移实验，其他方面的Transwell应用我不太清楚，因此这里主要谈谈Transwell侵袭实验。
1.实验用品：①Transwell小室：多种厂家可提供，论坛里常用的是Costar、Corning、BD生产的小室，我们实验室用的是Chemicon公司的ECM550系列，另有Boyden chamber、Millipore公司的millicell 和雕弓满月射天狼战友介绍的Thincert。
这些厂家提供的小室，有的已铺好基质胶，买来就可以用，很方便，但也比较贵，我们实验室用的Chemicon公司的ECM550系列是已经铺好胶的，质量很好，但是非常贵，2 4孔板配套的小室，每个价格约130元，不推荐给大家。
BD也有已包被好的，价格不清楚。
Coster和Corning公司生产的小室，是论坛里比较常用的，好像是要自己铺胶，但据说每个小室成本只有40左右，应该比较适合中国国情。
下面是一些战友提供的价格，具体建议大家联系代理商咨询。
linanping1979战友提供的价格：coster的24孔板的transwell的价格是456元RMB,8µm，用于肿瘤的侵袭实验。
iceyxy战友提供的价格：Millipore的8µm的50个1760RMB,0.4µm的2000多,是一次性的。
梅林战友提供的BD价格：240RMB一块（6.5um,24孔,12instert），好像是没胶的。
liguofan说国产的boyden30块一个。
jjyy提供的价格是：corning cat No.3422. 6.5mm tr answell with 8.0um prore polycarbonate membrane insert, Qty 48,950人民币不到。
平均每个20元不到。
Transwell小室按照公司的要求，都是一次性使用的。
不过其实洗洗泡泡还是可以重复用的。
我用的Chemicon公司的ECM554，用完后擦去基质胶，再用胰酶和75%酒精泡，可以把膜洗得很干净，用前用紫外里外都照30min。
sword01战友提供的处理方法：用棉签轻轻擦去胶和反面细胞，清水冲洗，超声清洗，低挡，30min，清水3×5min，蒸馏水3×5 min，室温凉干，用前紫外线小室正面3h，反面6h，微波，低火10min×2。
因为我买的是铺好胶的，所以没买Matrigel，二次利用的小室只用来做不需要铺胶的迁移实验。
以前的Chemicon ECM550系列，膜很结实，擦不坏，可以反复用很多次，但现在的膜已经改用一种很薄很脆的材料，一般只能重复用一次，真黑啊！很多战友说Cost ar和Corning也是可以重复用的，大家可以试试。
另外，根据论坛战友提供的信息，osmonic公司有专用的膜出售，鼎国生物代理。
Tr answell小室用过后，可把原来的膜切下，贴上osmonic公司的膜，这样又可以用了，不过我没用过，有兴趣的可以试试。
maojianwen战友的使用方法：trasnwell小室做一次后，将原来的膜去掉，重新泡酸，泡酒精，使用前照紫外，然后用女士用指甲油（注意用无色较稀的）将osmonic公司的膜贴上，剪掉多余的边缘。
再照紫外。
②上层培养液：上层培养液采用无血清培养基，为维持渗透压，需加入0.05%-0.2% BSA。
③细胞：值得注意的是，有侵袭能力的细胞才可用于Transwell侵袭实验。
建议实验前先用酶谱法检测MMPs的表达，特别是MMP-2的表达。
如果不清楚细胞MMPs的表达情况，就盲目进行Transwell侵袭实验，可能会造成不必要的浪费，一次Transwell侵袭实验花钱少则数百，多则数千，并不是笔小数目，还是小心为妙。
另外，为了让实验结果更明显，可先撤血清让细胞饥饿12－24h，再进行实验。
④基质胶：常用的是人工重构基底膜材料Matrigel，主要成分为层黏连蛋白和Ⅳ型胶原，生产厂家有BD、美国Collaborative Rsearch公司等。
CaoY战友的帖这么说的：Matrigel是BD 公司生产的，是一种细胞外基质，4度时是液体，在37度会逐渐凝固成胶状，不可逆。
同样的东西在sigma叫ECM。
zhangyong1036战友提供的价格：BD公司的matrigel 1500左右。
如果购买的小室是已经铺好基质胶的，那么Matrigel就不需要购买了。
⑤下层培养液：下层常用含5%－10% FBS的培养基，具体浓度根据细胞侵袭力而定，侵袭力弱的细胞可适当提高FBS浓度。
下层也可用趋化因子，有战友将纤维粘连蛋白加入下层培养液作为趋化因子，但个人认为，FBS仍是最合适的。
⑥细胞培养板：常用于Transwell侵袭实验的细胞培养板有6孔板、12孔板、24孔板等，以24孔最常用。
细胞培养板没什么特殊要求，普通的细胞培养板就可以。
但要注意，细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套。
⑦此外，膜的下室面可涂上纤维粘连蛋白(fibronectin，FN，Sigma有售)，这样做的目的是使穿过膜的细胞更好地附着在膜上，也可用胶原（collagen）或明胶（gelatin）。
很多战友认为这不是必须的，而且我也是不涂的，细胞照样贴壁很好。
如果贴壁不好的话可以试试看。
linanping1979战友认为，如果培养时间很长（>24h），细胞还是会掉到下室里面去，所以有条件的话，最好还是在膜下层涂上FN。
另外，值得一提的是，膜下层涂上FN还有一定的趋化作用。
2．步骤2.1 Transwell小室制备2.1.1 无基质胶Transwell小室制备①包被基底膜：用50mg/LMatrigel 1:8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面，4℃风干。
如果需要在下室面铺FN的话，可将200ul枪头的尖端剪掉,吸取FN均匀涂抹在小室的下面。
用胶原（collagen）的话，一般配成0.5mg/ml，直接用枪吸了涂在膜上。
②水化基底膜：吸出培养板中残余液体，每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清培养液，37℃，30min。