苦丁茶有效成分的分离纯化、结构鉴定及生物活性评价
苦丁茶有效成分及药理活性的研究进展
苦丁茶有效成分及药理活性的研究进展苦丁茶是我国民间的一种传统用药，富含三萜类、黄酮类、多酚类、挥发油以及多糖等多种有效物质成分，具有防治心血管疾病、抗氧化、降血脂以及抗病毒等保健及药用功效。
为更好地开发和利用其药用价值，本文综述了近年来苦丁茶主要化学有效成分及其药理活性的研究进展，以期为进一步研究和开发苦丁茶提供参考。
[Abstract] Ilex kudingcha C.J. Tseng is widely used as a traditional pharmacy in our country，which is rich in triterpenes，flavonoids，polyphenolic，volatile oil，polysaccharide and many other effective constituents，with the health-care and medicinal effects of prevention and treatment of cardiovascular disease，antioxidation，reducing blood fat and anti-virus. In order to develop and utilize its medicinal value，this paper presents a review of the recent progress in chemical constituents and pharmacological activities to provide references for the development and further study of Ilex kudingcha C.J. Tseng.[Key words] Ilex kudingcha C.J. Tseng；Effective constituents；Pharmacological activities苦丁茶（Ilex kudingcha C.J. Tseng）[1]屬于冬青科冬青属苦丁茶种常绿乔木，俗名菠萝树、大叶茶和茶丁等，主要分布在两广地区和福建等地。
苦丁茶的化学成分及产品研究进展
苦丁茶的化学成分及产品研究进展摘要：苦丁茶属冬青科，别名菠萝树、大苦酊、宽叶冬青。
分布于长江下游各省及福建，是我国一种传统的纯天然保健饮料。
茶中含有多酚类、黄酮类、氨基酸、苦丁皂甙、维生素Ｃ、咖啡碱、蛋白质等200多种成分。
其成品茶清香有味苦、尔后甘凉，具有清热消暑、明目益智、生津止渴、利尿强心、润喉止咳、降压减肥、抑癌防癌、抗衰老、活血脉等多种功效，素有“保健茶”“美容茶”“减肥茶”“降压茶”“益寿茶”等美称。
近年来有很多关于苦丁茶成分的研究，还有不少苦丁茶的产品的开发，但目前还未有苦丁茶颗粒这种产品，通过这一新产品的开发，可以拓宽产品销售渠道。
颗粒剂是对传统产品型的一种补充，该剂型具有易保存、运输、使用方便、起效迅速等优点，具有一定的研究价值。
关键词:苦丁茶；成分；功效；开发；价值苦丁茶属冬青科，别名菠萝树、大苦酊、宽叶冬青。
分布于长江下游各省及福建，在海南苦丁茶主要产地有澄迈、五指山，澄迈苦丁茶已成为中国国家地理标志产品。
海南野生苦丁茶主要分布于海南五指山区热带丛林中，五指山地区常年云雾缭绕、雨水充沛，气候湿润，土质疏松肥沃，澄迈则有土质肥沃的火山岩，正因为这两个地区的土壤条件优越，生产出来的苦丁茶品质优良，名扬四海。
海南苦丁茶的制作过程相对复杂，需要先将苦丁茶叶进行烘焙、揉捻、发酵等处理，然后再加入其他草药如菊花、金银花、茉莉花等进行熬制。
这样制作出来的海南苦丁茶味道苦涩，但喝起来却有清爽口感和芳香味道。
近年来有很多关于苦丁茶成分的研究，有彭关银等对苦丁茶儿茶素提取及活性的研究；有刘贞秀等对苦丁茶黄酮加工工艺及药理作用等的研究；有尹国利等对苦丁茶多酚类及抗氧化等研究；有时庆欣等对苦丁茶皂苷及降血糖研究等。
还有现在市场新有的苦丁茶的产品种类，苦丁茶茶包：将苦丁茶制成茶包状，便于冲泡；苦丁茶片：将苦丁茶制成片状，方便食用；川贝苦丁茶：在苦丁茶中加入川贝母，具有更好的咳嗽止咳功效；蒸馏苦丁茶水：将苦丁茶制成蒸馏水，方便直接饮用；苦丁茶口服液：将苦丁茶提取液制成口服液，用于治疗感冒、头痛等疾病；苦丁茶提取物：将苦丁茶提取出有效成分，制成方便口服的药物。
海南苦丁茶几种活性成分测定与比较分析
海南苦丁茶几种活性成分测定与比较分析樊伟伟;何进武;陈冬梅;侯萍;李铭【摘要】对海南苦丁茶中的几种活性成分进行了测定,并在查阅文献的基础上,将测定结果与贵州苦丁茶、四川苦丁茶中成分进行了对比分析,结果表明,海南苦丁茶营养丰富,含有三萜类、黄酮类、Vc、、VE等活性成分,还含16种氨基酸,其中黄酮、VE、水解氨基酸含量均高于贵州苦丁茶及四川苦丁茶中含量,具有广阔的应用价值.【期刊名称】《食品工程》【年(卷),期】2017(000)003【总页数】3页(P62-64)【关键词】苦丁茶;营养成分;对比分析【作者】樊伟伟;何进武;陈冬梅;侯萍;李铭【作者单位】三亚航空旅游职业学院,海南三亚572000;三亚航空旅游职业学院,海南三亚572000;三亚航空旅游职业学院,海南三亚572000;三亚航空旅游职业学院,海南三亚572000;三亚航空旅游职业学院,海南三亚572000【正文语种】中文【中图分类】TS272.7苦丁茶主要是冬青科冬青属苦丁茶种常绿乔木，主要分布在西南地区（四川、重庆、贵州、湖南、湖北）及华南地区（江西、云南、广东、福建、海南），俗称茶丁、富丁茶、皋卢茶，是我国一种传统的纯天然保健饮品。
根据文献及研究报道，苦丁茶含有苦丁皂甙、氨基酸、VC、黄酮类、咖啡碱、蛋白质等200多种成分，具有抗氧化、抑菌、降压降脂、调节血糖、清热解毒、抑癌防癌、抗衰老等多种功效。
海南是苦丁茶的重要产地，目前全岛已查清的野生苦丁茶树大约500株左右，是目前国内发现野生苦丁茶树数量最多的地区。
经过多年的精心培育，苦丁茶在海南岛内进行了大规模推广种植，已经成为海南靓丽的特产名片。
海南苦丁茶的种植、加工、销售和出口贸易已发展成为一个庞大的产业和产业链。
据统计，目前海南苦丁茶种植面积已超过667 hm2，年产值达3亿多元，相关企业有100多家，从业人员近万人，不仅是海南主要的旅游特色农产品之一，更在推动农业产业调整、促进农民增收上发挥着重要作用。
大叶冬青苦丁茶多糖提取、纯化与抗氧化活性研究
大 叶冬 青 苦 丁 茶是 我 国 民 间 传统 的“ 用 茶 ” 代 品
种 ， 由 大 叶 冬 青 （ ｌｘ ｌｔ ｏｉ ｕ ｂ 叶 加 工 而 系 Ｉｅ ａｉ ｌ Ｔｈ ｎ ） ｆ ａ 成 。据 报道 ， 叶冬 青苦 丁 茶 富含 多 酚类 、 类 、 大 萜 氨基
酸 、 苷和 多糖 等生 物活 性 成分 ， 有 清热 解 毒 、 皂 具 杀菌 消 炎 、 胃消积 、 咳化 痰 、 津止 渴 、 健 止 生 提神 醒 脑 、 目 明
ｒ ｓ ｌｓ ｉ ｄ ｃ ｔ ｄ ｔ ａ ＬＰ ｘ ｂ ｔ ｄ ｓ ｒ ｎ ｎ ｉｘ ｄ ｎ ｃ ｉｉｙ，ａ ｄ ｔ ｅ ａ ｔ ｘ ｄ ｎ ｃ ｉ ｉ ｓ ｓｇ ｉｉａ ｔｙ ｃ ｒ ｅａ ｅ ｅ ｕ ｔ ｎ ｉａ ｅ ｈ ｔＩ Ｓ ｅ ｈｉｉｅ ｔｏ ｇ ａ ｔｏ ｉ ａ ｔａ ｔ ｔ ｖ ｎ ｈ ｎ ｉ ｉａ ｔ ａ ｔ ｔ ｗａ ｉ ｎ ｆ ｎ ｌ ｏ ｒ ｌ ｔｄ ｏ ｖ ｙ ｃ
ｐ ｒｆ ｄ ｐ ｌ ｓ ｃ ｈ ｒｄ ｓ ＬＰ 一 ，Ｉ Ｓ ２ ＬＰＳ ３ ａ ｄ Ｉ ＰＳ ４， ｒ ａｎ ｄ ｆ ｏ ｃ ｕ ｅ Ｉ Ｓ ｂ ｕ ｉｉ ｏ ｙ ａ ｃ ａ ｉ ｅ ，Ｉ Ｓ １ ＬＰ 一 ，Ｉ ｅ 一 ｎ Ｌ 一 ｗｅ ｅｇ ｉ ｅ ｒ ｍ ｒ ｄ ＬＰ ｙ ＤＥＡＥ－ ２ ａ ｉ ｎ ｅ ｃ ａ ｇ ５ ｎｏ —ｘ ｈ ｎ ｅ
１ ２ 方 法 ． １ ２ １ 多糖 提 取 ． ．
溶 液 ， 空 白实验 调零 用 。清除效 果依下 面公 式计 算 ： 作 清 除率 （ ） 一 二 二 － 二 ×１ ０ ０
Ｚ１０
大 叶 冬青 苦 丁 茶 多 糖 的提 取 参 照 何 玲 玲 等ｎ］ ０ 报
ｄ ｃ ｌ ｒ ｄ ｂ － ｃ ｏ ｏ ｏ ｓ ｅ ｉ ｐ ｅ ｉ ｉ ｔ ｄ ｙ ｅ ｈ ｎ ｌ ｎ ｒｅ ｏ ａ ｆ ｒ ｒ ｄ ｏ ｙ ａ ｃ ａ ｉ ｅ （ Ｌ ｅ ｏｏ ｅ ｙ Ｓ ８ ｍａ ｒ ｐ ｒ ｕ ｒ ｓｎ， ｒ ｃｐ ｔ ｅ ｂ ｔ ａ ｏ ，ａ ｄ ｄ ｉｄ ｔ ｆｏ ｄ ｃ ｕ ｅ ｐ ｌ ｓ ｃ ｈ ｒ ａ ｄ Ｉ ＰＳ） ． ｏ ｒ Ｆ ｕ
苦丁茶中熊果酸的大孔树脂分离纯化工艺研究
摘要：以苦丁茶为研究对象，采用大孔吸附树脂对苦丁茶中熊果酸的粗提取物进行分离纯化。
对4种不同型号的大孔吸附树脂进行静态实验考察，筛选出最佳树脂，并以该树脂对苦丁茶中的熊果酸进行动态吸附及洗脱性能的研究，优化大孔树脂分离熊果酸的工艺参数。
实验筛选出了以HZ-816型树脂为上样树脂，该树脂纯化熊果酸的优化工艺条件为：吸附流速4BV∕h,上样浓度1.40mg∕m1.,上样体积225m1.,树脂吸附量可达18.697mg/g；以90%乙醇为洗脱剂，洗脱流速4BV∕h,洗脱剂用量10BV,解吸率可达58.57%,再减压浓缩解吸液得干膏，纯度为48.26%o关键词：苦丁茶；熊果酸；大孔树脂；分离纯化；吸附；解吸0引言苦丁茶，别称茶丁、富丁茶。
苦丁茶中含有多种活性成分，如维生素、氨基酸、挥发油、黄酮类化合物、微量元素以及多酚类物质等。
其味苦、性凉，具有生津止渴、清热消暑、抑癌防癌、活化血脉等多种生物学效应。
熊果酸(UA),又名乌苏酸，属于五环三菇类化合物。
在自然界中分布较广，如在女贞、熊果、枇杷和毛泡桐等天然植物中均有一定含量存在。
熊果酸纯品为白色或类白色针状晶体或结晶粉末。
熊果酸本身具有多种很强的开发价值，比如具备抑制肿瘤、抗炎镇静、保护肝脏损伤、抗糖尿病、抑制细菌活性、抗病毒传播等药理作用。
目前，广泛应用于熊果酸分离纯化的方法有：硅胶柱色谱吸附及分步洗脱法和有机溶剂萃取法。
然而，上述方法均存在工艺流程复杂、收率低，且使用的有机溶剂有毒有害等问题。
大孔树脂分离技术，具有工作效率高、吸附容量大、可再生等诸多优点，且采用乙醇作为溶剂进行梯度洗脱，所得产物绿色环保，安全性高，已逐步在中药制药工艺中得到应用。
1 材料与方法1.1实验材料与试剂实验材料与试剂如表1所示。
«1实验材料后试名称，奴格•生产厂家。
苦丁茶药材50“袋•，产自海南五指山，黑果酸标唐品标准品（98%>P上海同田生物技术有限公司。
•—AR（分析凭）“国药具团化学试用有限公司。
苦丁茶冬青叶多糖的分离纯化及其对羟自由基的清除作用
收稿日期：２００７－０６－２８ 作者简介：王新（１９７６－），男，讲师，硕士，主要从事天然产物活性成分研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｘｉｎｌｎｕ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ ＊ 通讯作者：刘彬（１９７０－），女，副教授，博士研究生，主要从事天然生物活性成分研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｕｂｉｎｚｅｈａｏ＠１６３．ｃｏｍ
苦丁茶冬青（Ｉｌｅｘ ｋｕｄｉｎｃｈａ Ｃ． Ｊ． Ｔｓｅｎｇ）是冬青科 （Ａｑｕｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）冬青属乔木植物，主产于湖南、湖北、 广东、广西、海南等省。叶（ 苦丁茶） 苦、甘、凉， 能清热解毒、祛暑，主要用于治疗头痛、齿痛、目
赤、热病烦渴、痢疾等症［ １ ］ 。近年来，已有人对苦丁 茶冬青叶（苦丁茶）的化学成分和药理作用作了一些研究， 为其临床应用提供了一定的理论依据［ ２ ］ 。本实验在前期 工作［３－５］的基础上，研究苦丁茶冬青叶多糖的部分理化性
取 １．０ｇ ＫＰＳ Ⅱ溶解后上样，去离子水洗脱后分别用 ０．１、０．３、０．５ｍｏｌ／Ｌ 氯化钠溶液梯度洗脱，洗脱液流速 为 ６０ｍｌ／ｈ，分部收集，每管 １０ｍｌ，隔管取 ０．２ｍｌ 洗脱 液用苯酚 － 硫酸法检测洗脱液中多糖的含量，以 ４８２ｎｍ 处吸光度为纵坐标，分部收集的管数为横坐标，作出 多糖的洗脱曲线。将柱层析分出的各个组分分别合并收 集，浓缩，自来水流水透析 ４ ８ ｈ ，去离子水透析 ２ ４ ｈ ， 每 ４ ～６ｈ 换一次水。离心除去不溶性杂质后，用 ４ 倍体 积的 ９５％ 乙醇进行沉淀，固体部分用少量无水乙醇洗涤 ２ 次，再用无水乙醚洗涤 ２ 次，自然晾干后放入真空干 燥箱干燥 ４ｈ（５０ ℃，－ ０．０９６ＭＰａ），得苦丁茶冬青叶纯 化多糖（ Ｋ Ｐ Ｓ Ⅲ ａ 、Ｋ Ｐ Ｓ Ⅲ ｂ ） 。
※基础研究
食品科学
苦丁茶多糖研究进展_陈亚静
苦丁茶多糖研究进展陈亚静，王维民*（广东海洋大学食品科技学院，湛江524025)摘要：苦丁茶作为一种传统的纯天然保健饮料佳品具有丰富的活性成分及多种生理功能。
本文对苦丁茶多糖的提取、分离纯化、理化性质、一级结构及生理活性等方面的研究进展进行了综述，并对苦丁茶多糖研究方向和应用前景进行了展望，这对于苦丁茶多糖的深入研究和应用以及苦丁茶资源综合开发利用具有重要的指导意义。
关键词：苦丁茶，多糖，分离纯化，化学结构，生理活性Progresses and perspectives on the polysaccharides from ilex kudincha Chen Yajing, Wang Weimin*(College of Food Science and Technology ，Guangdong Ocean University ，Zhanjiang 524025,China)Abstract ：Ilex kudincha is as a traditional type of healthy drink with rich bioactive substances and various biologic functions. In this thesis, the recent progresses in the research on the extraction, separation, purification, primary structure, some physicochemical properties and some biological activities of the polysaccharides from Ilex kudincha were summarized; its research direction and application prospects were described, which will offer practical guidance for further processing of polysaccharides and comprehensive development and utilization of Ilex kudincha.Kay words ：Ilex kudingcha ；Polysaccharides ；Extraction, Separation ；chemical structure ；Biological Activity 中图分类号：TS272.5 文献标识码：A 文章编号：苦丁茶(Ilex kudincha )原产于我国，在古代曾被称为皋卢、瓜卢等，是一类具有相同或相近感官风味及营养特性植物的总称。
苦丁茶中黄酮的提取分离纯化及鉴定
苦丁茶黄酮的提取、分离纯化及鉴定一、提取：超声波提取法1.原料20g粉碎2.70%的乙醇，乙醇：苦丁茶=10:1，提取30min。
3.抽滤2次。
二、分离纯化1.减压蒸馏掉原体积的2/3。
2.活性炭（1.5g）脱色，抽滤。
3.离心分离：4000r/min,10min。
4.大孔吸附树脂：①树脂预处理取定量大孔吸附树脂，先用乙醇或双蒸水冲洗一遍即可。
②装柱：用95%乙醇湿法装柱，继续用乙醇在柱上流动清洗至流出液与水混合（1:5）不呈白色为止，然后用蒸馏水洗至无醇味，备用。
③上样、洗脱以1ml/min的流速加入一定浓度的样品供试液，吸附饱和后，用3BV蒸馏水洗脱，去掉杂质。
然后用依次提高乙醇浓度的乙醇溶液分段洗脱，洗脱流速为1ml/min，分段收集洗脱液（每管10ml），用定性方法测定其化学成分，合并有相同化学成分的试管。
得粗制品。
5.减压蒸馏、浓缩。
4.真空干燥。
三、定性测定：薄层层析法将黄酮粗品制成1mg/mL的甲醇溶液，按浓度梯度（3次重复）点样于硅胶GF254薄板上，展开剂为CHCL3：MeOH=5:1，在紫外分析仪（254nm）上显色定位，计算斑点的Rf值，与标准品的Rf值比较，初步判断黄酮类化合物的结构类型。
四、定量测定：比色法1.芦丁标准曲线的制作准确称取干燥恒重的芦丁标准品20mg置于100mL的容量瓶中，加60%的乙醇适量，在水浴上微热溶解，再用60%的乙醇定容至刻度，摇匀得到0.2mg/mL的芦丁储备液，置于冰箱中保存。
再从中吸取25mL置于50mL的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，课得到0.1mg/mL的芦丁标准溶液。
精密吸取芦丁标准溶液0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL 于10mL的容量瓶中，分别加入30%的乙醇，使之成为5mL，再分别加入5%亚硝酸钠0.3mL，摇匀，静置10min，再分别加入10%硝酸铝溶液0.3mL，摇匀，静置10min，再分别加入4%氢氧化钠溶液4mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静置15min，用试剂作空白对照，于510nm处测定吸光度，再以浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
大叶冬青苦丁茶多糖提取、纯化与抗氧化活性研究
大叶冬青苦丁茶多糖提取、纯化与抗氧化活性研究赵天湖;范嘉龙;闫冬;徐人杰;郎昌野;孙怡;曾晓雄【摘要】Kudingcha made from Ilex latifolia Thunb was defatted with 85％ethanol, and then extracted with hot water,decolored by S-8 macroporous resin, precipitated by ethanol, and dried to afford crude polysaccharide (ILPS). Four purified polysaccharides, ILPS-1, ILPS-2, ILPS-3 and ILPS-4, were gained from crude ILPS by DEAE-52 anion-exchange chromatography. Furthermore. the antioxidant activities in vitro of the crude ILPS and its purified fractions were evaluated by determinations of scavenging activities on 1. 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) free radicals, superoxide anion radicals (O2· - ), hydroxyl radicals (·OH) , ferric reducing-antioxidant power (FRAP) and chelating capacity to Fe2+. The results indicated that ILPS exhibited strong antioxidant activity, and the antioxidant activity was significantly correlated with its concentration.%大叶冬青苦丁茶经85%乙醇溶液脱脂、热水提取、S-8大孔树脂脱色、醇沉、干燥,得到大叶冬青苦丁茶粗多糖.粗ILPS经DEAE-52纤维素阴离子交换层析柱分离,得到4个多糖组分ILPS-1,ILPS-2,ILPS-3和ILPS-4.采用化学法分别测定了粗多糖及其纯化组分的体外清除自由基(DPPH·自由基,O2-·自由基,·OH自由基)能力、还原能力以及螯合金属离子能力.结果表明,大叶冬青苦丁茶多糖具有较强的体外抗氧化活性,并且抗氧化能力与多糖浓度之间存在良好的相关性.【期刊名称】《作物研究》【年(卷),期】2011(025)001【总页数】5页(P56-60)【关键词】大叶冬青苦丁茶;多糖;提取;纯化;抗氧化活性【作者】赵天湖;范嘉龙;闫冬;徐人杰;郎昌野;孙怡;曾晓雄【作者单位】南京农业大学食品科技学院,江苏南京,210095;南京农业大学食品科技学院,江苏南京,210095;南京农业大学食品科技学院,江苏南京,210095;南京农业大学食品科技学院,江苏南京,210095;南京农业大学食品科技学院,江苏南京,210095;南京农业大学食品科技学院,江苏南京,210095;南京农业大学食品科技学院,江苏南京,210095【正文语种】中文【中图分类】R284.1大叶冬青苦丁茶是我国民间传统的“代用茶”品种,系由大叶冬青(Ilex latif olia Thunb)叶加工而成。
苦丁茶不同提取物抗氧化活性比较及其GC-MS分析
苦丁茶不同提取物抗氧化活性比较及其GC-MS分析
近年来，许多研究已经发现苦丁茶具有很好的保健作用，其中的抗氧化能力被认为是
其最重要的功效之一。
事实上，苦丁茶中的多种成分，如茶多酚、黄酮类、生物碱等都具
有一定的抗氧化活性。
这些成分对于保护人体细胞免受自由基的损伤有着非常重要的作用。
为了进一步探究苦丁茶的抗氧化活性，本实验采用了不同提取物来进行比较研究。
首先，我们采取了水提取和乙醇提取的方法来制备苦丁茶的不同提取物，并进一步进行了DPPH自由基清除试验来评估其抗氧化能力。
结果表明，苦丁茶的乙醇提取物在不同浓度下均表现出了更强的DPPH自由基清除活性，其IC50值为3.82 mg/mL，而水提取物的IC50
值为9.81 mg/mL。
此外，为了进一步探索苦丁茶提取物中的成分，我们采用了GC-MS技术进行了分析。
结果表明，苦丁茶中含有多种化学成分，如苯乙醇、咖啡因、橙皮苷、山柰酚等。
其中，
咖啡因和橙皮苷是具有较高抗氧化活性的化合物，这也与前面DPPH自由基清除试验的结
果相符合。
综合以上结果，可以得出结论：苦丁茶中的乙醇提取物表现出较强的抗氧化活性，其
中咖啡因和橙皮苷可能是其主要的抗氧化成分。
这些结果有助于更深入地了解苦丁茶对人
体健康的保护作用，并为其开发更具有价值的保健食品提供了重要的参考。
苦丁茶不同提取物抗氧化活性比较及其GC-MS分析
苦丁茶不同提取物抗氧化活性比较及其GC-MS分析
随着现代化生活的快节奏和压力的增加，人们越来越关注保健和健康。
苦丁茶是一种传统的草药饮料，广泛应用于民间医疗领域。
苦丁茶不仅可以帮助人们增强免疫力、降低血糖、抗炎抗菌，还可以提高人们的抗氧化能力，抵御自由基的侵害。
因此，本研究旨在比较苦丁茶不同提取物的抗氧化活性，分析苦丁茶的化学成分。
实验步骤：
1. 实验材料和仪器：苦丁茶、甲醇、水、二氧化硅胶、十六烷基三甲基溴化铵、硫酸铜、明胶试剂、2,2-二苯基-1-苦肽自由基、硝酸铁、吸光度计、气相色谱-质谱联用仪。
2. 实验设计：将苦丁茶粉末分别用甲醇和水提取，得到甲醇提取物和水提取物。
然后，将不同提取物分别用2,2-二苯基-1-苦肽自由基法测定其抗氧化能力，并用硝酸铁法检测其还原力；最后，用气相色谱-质谱联用仪分析其化学成分。
3. 结果与分析：经过实验测定，苦丁茶甲醇提取物和水提取物均表现出较强的抗氧化能力和还原能力，其中甲醇提取物的抗氧化能力和还原能力优于水提取物。
同时，气相色谱-质谱联用仪的分析结果表明，苦丁茶中含有多种化合物，如咖啡因、黄酮类、酚类等，这些化合物具有强大的抗氧化作用。
苦丁茶中黄酮的提取纯化方法简介
苦丁茶中黄酮的提取纯化方法简介姓名：王静班级：生研1004班学号：2010001206摘要综述了苦丁茶中黄酮的提取方法（乙醇提取法，超声波提取法，微波提取法），纯化方法（大孔树脂吸附法）。
关键词苦丁茶；黄酮类化合物；提取；纯化Abstract Extraction methods for flavonoids (solvent method with ethanol , microwave method, ultrasonic extraction method) were summarized, as well as isolation-purification method for flavonoids(macroporous resin adsorption method) Key words Kudingcha;Flavonoids; Extraction;Purification1前沿苦丁茶是冬青科冬青属苦丁茶种常绿乔木，俗称茶丁、富丁茶、皋卢茶，主要分布在广东、福建等地，是我国一种传统的纯天然保健饮料佳品。
苦丁茶中含有苦丁皂甙、氨基酸、维生素C、多酚类、黄酮类、咖啡碱、蛋白质等200多种成分。
其所含主要生理活性物质为黄酮类化合物。
黄酮类化合物具有抗氧化、消炎、改变体内酶活性、改善微循环、解痉、抑菌、抗肝炎病毒、抗肿瘤等多种生理保健作用。
因此，苦丁茶作为一种极具开发潜力的天然产物资源而倍受人们的关注[1]。
本文对提取苦丁茶中黄酮的方法进行了综述。
2苦丁茶中黄酮的提取方法2.1乙醇提取法乙醇为有机溶剂,溶解性能比较好,对中草药细胞的穿透能力较强，虽易燃，但毒性小，价廉，来源方便，有一定设备即可回收反复使用，而且乙醇的提取液不易发霉变质。
由于上述原因，乙醇提取是最常用的方法之一。
甲醇的性质和乙醇相似，沸点较低(64 ℃) ，但有毒性，使用时应注意[2]。
李建法[3]等人采用不同乙醇浓度进行提取，得出当乙醇溶液的浓度为70%~80%时，提取效果较好；罗伟强[4]等人研究了苦丁茶叶中黄酮类化合物的提取条件，并通过正交实验确定了最佳提取工艺条件为用6倍量的70％乙醇溶液加热提取3次，每次提取时间为40 min，提取温度为70 ℃，总黄酮提取率为2.640％；毛丽娟[5]等人根据已有的资料介绍及实际情况，确定以乙醇浓度、浸提时间、乙醇用量和浸提温度四种因素进行正交试验设计，最佳工艺为乙醇浓度为70%，乙醇体积为10倍于苦丁茶质量，浸提时间为4 h，提取温度为70-75 ℃,得到的总黄酮含量最高；何翔[6]等人考虑到乙醇浓度过高，不太适合对苦丁茶中亲水性黄酮成分的提取，采用了50%乙醇和95%乙醇各回流提取一次作为苦丁茶总黄酮的提取方法，提取效果较好。
苦丁茶多糖的提取工艺研究
苦丁茶多糖的提取工艺研究
苦丁茶是一种常见的中药材，具有清热解毒、祛湿消肿等功效。
苦丁茶多糖是苦丁茶中的一种重要成分，具有抗氧化、降血糖、降血脂等多种生物活性。
因此，苦丁茶多糖的提取工艺研究备受关注。
苦丁茶多糖的提取方法有很多种，其中常用的包括水提法、酸提法、碱提法、超声波提法等。
下面我们就来介绍一下这些方法的优缺点及适用范围。
1. 水提法
水提法是苦丁茶多糖提取的常用方法之一。
其优点是简单易行，成本低廉，不会对多糖的结构造成破坏。
但是，水提法提取的多糖含量较低，需要大量的时间和水量来提高多糖的得率。
2. 酸提法
酸提法是通过酸性介质将苦丁茶中的多糖分离出来。
其优点是提取效率高，得到的多糖含量较高。
但是，酸性介质会对多糖结构造成一定的破坏，可能会影响多糖的生物活性。
3. 碱提法
碱提法是通过碱性介质将苦丁茶中的多糖分离出来。
其优点是提取效率高，得到的多糖含量较高。
但是，碱性介质也会对多糖结构造成一定的破坏，可能会影响多糖的生物活性。
4. 超声波提法
超声波提法是利用超声波的作用将苦丁茶中的多糖分离出来。
其优点是提取效率高，得到的多糖含量较高。
而且，超声波对多糖结构的影响较小，可以保留多糖的生物活性。
但是，超声波设备价格较高，需要一定的技术支持。
综上所述，不同的苦丁茶多糖提取方法各有优缺点，在实际应用中需要根据具体情况选择合适的方法。
同时，在提取过程中还需要注意保持多糖的结构完整性，以保证其生物活性和药效。
苦丁茶提取物多酚含量与抗氧化活性的测定
收稿日期：2008-01-09
修订日期：2008-05-18
基金项目：国家高技术研究发展计划(2007AA10Z351)和南京农业大学高层次人才引进基金(804066)资助
作者简介：刘丽香(1983— )，女，江苏徐州人，硕士研究生，从事食品生物技术研究。*通讯作者: zengxx@
Fe3+能力。结果表明，苦丁茶提取物具有较高的多酚含量和较强的抗氧化能力；DPPH 法和 FRAP 法测定各提
取物抗氧化能力的结果为乙酸乙酯萃取物＞正丁醇萃取物＞粗提物＞萃取剩余物＞氯仿萃取物，TEAC 法测定
结果为乙酸乙酯萃取物＞正丁醇萃取物＞粗提物＞氯仿萃取物＞萃取剩余物；多酚含量与抗氧化能力之间、所
图 1 苦丁茶粗提物和各提取物的多酚含量 Fig. 1 The total polyphenol contents in crude
extract and its four fractions of Kudingcha
4期
刘丽香，等：苦丁茶提取物多酚含量与抗氧化活性的测定
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采用 Folin-Ciocalteu 比色法测定苦丁茶粗 提物和各萃取物的多酚含量。结果如图 1 所 示，多酚含量由高到低为：乙酸乙酯萃取物＞ 正丁醇萃取物＞粗提物＞氯仿萃取物＞萃取 剩余物。
Abstract: The hot water extract (crude extract) of kudingcha made from Ilex kudincha C. J. Tseng and its four fractions of chloroform, ethyl acetate, n-butanol, and water were prepared. The total polyphenol contents and the antioxidant activity of the extracts were determined by Folin-Ciocalteu method and DPPH assay, FRAP assay, and TEAC assay, respectively. The results showed that kudingcha extracts contained high polyphenol content and showed potent antioxidant activity. The antioxidant activities of crude extract and its fractions decreased in the order of ethyl acetate fraction＞butanol fraction＞crude extract＞water fraction＞chloroform fraction according to the DPPH assay and FRAP assay, which were the same with the exception of the rank order of water fraction and chloroform fraction obtained from TEAC assay. Satisfactory correlations between the total polyphenol content and antioxidant activity and between measuring methods of antioxidant activity were observed. It suggests that the polyphenols in the extracts are largely responsible for the antioxidant activities. Keywords: kudingcha, polyphenol, antioxidant activity, colorimetry, correlation
苦丁茶冬青皂苷的生物转化及药理活性研究
苦丁茶冬青皂苷的生物转化及药理活性研究苦丁茶冬青Ilex kudincha C.J.Tseng是冬青科冬青属乔木植物,其叶作茶是苦丁茶主流商品之一。
苦丁茶冬青化学成分丰富,其中三萜皂苷类化合物是其主要的活性成分,如何提高苦丁茶冬青皂苷的含量是近年研究的热点。
本文利用生物转化的方法,筛选高效菌株,通过对生物转化的初始pH值、发酵温度、发酵时间、摇床转速等条件的研究,获得最佳发酵工艺条件,并对转化产物的抗氧化、抗肿瘤作用进行研究,为苦丁茶冬青皂苷的进一步开发应用提供实验数据。
本文选取四种微生物菌株分别为大肠埃希氏菌、凝结芽孢杆菌、黑根霉、黑曲霉发酵苦丁茶冬青总皂苷,HPLC系统分析比较转化前后化合物的含量变化。
结果表明,大肠埃希氏菌、凝结芽孢杆菌发酵后各个单体皂苷含量变化不明显,黑根霉发酵后各个单体皂苷含量显著降低,黑曲霉发酵后苦丁皂苷C、苦丁皂苷E含量显著降低,苦丁皂苷A、苦丁皂苷D含量显著提高。
本文以苦丁皂苷A、苦丁皂苷D的含量为指标,在单因素实验的基础上,采用正交实验设计优化黑曲霉转化苦丁茶冬青总皂苷生成苦丁皂苷A、苦丁皂苷D的条件,最佳工艺条件为:初始pH值6.0,发酵温度25℃,发酵时间7d,摇床转速120r/min。
通过硅胶柱色谱、ODS柱色谱对转化产物进行分离纯化,并利用HPLC、NMR 鉴定检识,确定转化产物结构,外标法显示纯度均≥95%。
本文对转化产物的抗氧化作用进行了系统的研究,包括还原能力、DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力、抑制脂质过氧化能力的测定。
结果表明,苦丁皂苷A的抑制脂质过氧化能力显著(P<0.05),苦丁皂苷D 的DPPH自由基清除能力显著(P<0.05),苦丁皂苷C的羟自由基和超氧阴离子自由基清除能力显著(P<0.05),苦丁皂苷E的抗氧化活性与苦丁皂苷C的抗氧化活性规律是一致的。
本文对转化产物的抗肿瘤作用也进行了系统的研究,包括人肺癌细胞NCI-H460、人肝癌细胞Bel-7402、人胃腺癌细胞SGC-7901、人结直肠腺癌细胞HCT116、人神经胶质细胞瘤细胞U251的抑制作用。
贵州苦丁茶显微鉴定及成分研究(二)
称作苦丁茶 ，经鉴定全国 目 前有
４科 １ 种 （ １ １ 含 变种 ）植物 的 叶
在不同地区作苦丁茶使用 ， 它们
多 以植 物 的嫩 叶或 叶入药 ，药 效 稍有 不同［ 。贵州 是一 个多 民族
１７ ７
科 、马鞭草科 ）１ ６种 １ 种变种 植物在不同地区作苦丁茶使用或
维普资讯
省份 ，苦 丁茶长 期 以来 在 当地少 数 民族 中作 药 品和饮 品使用 ，并
２ 显 微 鉴定
部有年 轮 ，内层木 质 部细胞 木 化 程度 比外 层 木质 部 细胞 明显 。 内 层木 质 部 导 管 直 径 小 ，数 量 较
２ １ 川 滇蜡树 茎 横切 ： ． 木栓 细胞 １ ，栓 内层 细胞 列 ３～４列 ，多 长 方 形 ，长 ３ ｏ～ ４ｔ１ ０ｍ ．内壁 和侧 壁木化 加 厚 ，木 栓形成 层 细胞 不 明显 。皮 层 薄壁 细 胞 ６～７列 ，类 长 圆形 ，长 ３ ０
—
形成商品。贵卅 苦丁茶主要来源 ｌ 木樨 科女 贞属植 物 经 文献 资料
考证 、资 源 调 查 、植 物 分 类 研 究 ，认 为贵州苦 丁茶 的来 源应定 为粗 壮 女 贞 Ｌ ｒ ｕｈＴ Ｂ 及 ． ｏ Ｓｌｔ １ ｂ ｉ 光 萼 小 蜡 Ｌ． ｓｅｓ Ｌｕ． 一 ｉ ｎ ｏｒ ｎ ｅ ．
州∞ｌ ＇ （ ｉ ｓ Ｈ ｆ．等 ｈ Ｄｅ ） ｌ ｋ
多 ， 管 多单 个，纵 向排 列 成 导 行。木纤维排列整齐。髓部整体 为方形 ，由薄 壁 细胞 构 成 ，薄壁
叶 中总黄 酮含量 ，见表 １ 。 ，２
表 １ 乌市不 同采摘期桑叶
中 总 黄酮 含量
３ ５ ６． ８
苦丁茶的生化成分与保健功能
苦丁茶的生化成分与保健功能摘要介绍了苦丁茶的生化成分以及其保健功能，以为促进苦丁茶的开发利用提供参考。
AbstractThe paper introduced the biochemical compounds and health care functions of Folium llicis Latifoliae，in order to promote the exploitation and utilization of Folium llius Latifoliae.Key wordsFolium llicis Latifoliae；biochemical compounds；health care functions苦丁茶在我国已有2 000多年的饮用历史，具有丰富的营养成分和功能活性成分，而且具有显著的保健功能。
纯天然、保健是21世纪食品发展的主流，发展苦丁茶在21世纪具有更广阔的前景。
1苦丁茶的生化成分1.1营养成分苦丁茶含有丰富的营养成分，水浸出物、黄酮物质含量较高，多酚类物质、游离氨基酸含量较低，而水溶性碳水化合物含量达6.99%左右。
但产地、嫩度等因素均对苦丁茶营养成分含量有影响，具体见表1。
1.2功能活性成分1.2.1皂甙。
皂甙是苦丁茶内含的主要活性成分之一，含量一般为18.82%～22.98%。
在苦丁茶中皂甙的种类较多，目前分离鉴定的有苦丁皂甙、苦丁皂元、苦丁茶甙甲、苦丁茶甙乙、苦丁茶甙丙、苦丁茶甙丁[2-4]。
1.2.2萜类物质。
在苦丁茶中含有丰富的萜类物质，目前已分离出29种三萜化合物，其中有α－香树醇－3β－棕榈酸酯、11－羟基－α－香树醇－β－棕榈酸酯、3β－羟基－羽扁－20（29）－烯－24－羧酸甲酯和羽扇－20（29）－烯－24－羧酸甲酯－3β－棕榈酸酯、β－谷甾醇、β－香树醇、羽扁豆醇、乌索酸、熊果醇和蛇麻酯醇，及α－苦丁内酯、β－苦丁内酯、γ－苦丁内酯等[2-6]。
余庆小叶苦丁茶营养成分及生物活性分析
余庆⼩叶苦丁茶营养成分及⽣物活性分析营养安全维⽣素A微胶囊在营养强化⾷品中的应⽤112111马志远，路旭辉，宫可⼼，韩张鹏，郝越，王向红1.河北农业⼤学⾷品科技学院（保定071001）；2.今麦郎⾯品有限公司（邢台054000）摘要试验以壳聚糖和阿拉伯胶为壁材,三聚磷酸钠为交联剂,通过复凝聚法对VA进⾏分⼦包埋,并以VA微胶囊为添加物强化主⾷⾷品,以保留率为参考,测定并观察微胶囊加⼊对主⾷粉外观及保⽔⼒影响,并在单因素试验基础上,研究蒸、煎、煮3个因素对VA保留率的影响。
结果表明,营养强化后的⼩麦粉、荞麦粉、燕麦粉及马铃薯全粉的感官品质受到影响,经包埋后的VA保留率为75%,⽽未经包埋的VA保留率为10%。
VA分⼦包埋技术为⾷品营养强化提供重要保障。
关键词维⽣素A;微胶囊;营养强化;保留率TheApplicationofVitaminAMicrocapsuleinNutrientFortifiedStapleFood112111MAZhiyuan,LUXuhui,GONGKexin,HANZhangpeng,HAOYue,WANGXianghong1.CollegeofFoodScienceandTechnology,HebeiAgriculturalUniversity(Baoding071001);2.JinmailangNoodleProductsCo.,Ltd.(Xingtai054000) AbstractWithchitosanandgumArabicaswallmaterial,sodiumtripolyphosphateascrosslinkingagent,throughthemethod ofcompoundcondensingVAmolecularembedding,andVAmicrocapsuleasstaplefoodadditivesaggrandizement,retention rateforreference,determineandobservetheinfluenceofadditionofmicrocapsuleonstaplefoodpowderappearanceand waterretention.Onthebasisofsinglefactorexperiment,studyinfluenceofthreefactorsofsteaming,fryingandboilingon VAretentionrate.TheresultsshowedthattheVAretentionrateofwheatflour,buckwheatflour,oatpowderandpotatowhole powderafternutritionenhancementwasaffected;TheVAretentionrateafterembeddingwas75%;TheVAretentionrate withoutembeddingwasonly10%.VAmolecularembeddingtechnologyprovidesanimportantguaranteeforfoodnutrition enhancement.vitaminA;microcapsules;nutrientenrichment;retentionKeywords居民的营养健康状况是衡量⼀个国家国民素质的推荐的⽇摄⼊量标准，但部分微量元素较为缺乏，如[1-2]标准之⼀，也是社会经济发展的基础和⽬标。
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苦丁茶有效成分的分离纯化、结构鉴定及生物活性评价
苦丁茶是冬青科植物大叶冬青的叶,主要分布在华南地区和西南地区等地,
是中国一种传统的纯天然保健饮料佳品。
苦丁茶中含有苦丁皂甙、多酚类、黄酮类、咖啡碱、三萜类等多种成分。
其成品茶清香有苦味、而后甘凉,具有清热消暑、降压减肥、抑癌防癌、抗衰老、活血脉等多种功效。
近年来,国内外对苦丁茶化学成分研究日益增多,主要集中在加工成品茶和茶饮料等营养保健方面,但对苦丁茶的功能性成分的研究还有待进一步深入探讨,以促进苦丁茶资源的开发和利用。
本论文通过现代色谱及波谱技术分离和鉴定了苦丁茶中的小分子化合物；阐明了一种三萜类化合物对人乳腺癌细胞抑制增殖作用、诱导凋亡作用的作用机制；探讨了大孔吸附树脂对苦丁茶多酚类物质的吸附动力学与热力学；研究了苦丁茶多酚的抗炎作用机制；探索了苦丁茶多糖的提取纯化、理化性质、结构分析以及免疫活性评价。
(1)采用优选的提取和色谱方法,运用高效液相色谱(HPLC)对10
批苦丁茶原材料建立指纹图谱,利用“中药指纹图谱相似度评价系统”软件对10批样品的相似度进行评价,建立苦丁茶指纹图谱的共有模式,测得各批次样品与
共有模式的相似度,结果表明各批次中共有峰的相对保留时间基本一致,RSD均
小于1%,相似度均大于0.9,符合中药指纹图谱的技术要求,所建立的共有模式能较好的反映出苦丁茶化学成分质与量的分布情况。
(2)采用乙醇加热回流提取的方法提取苦丁茶中的有效成分,有机溶剂分级
萃取后得到石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相四个极性部位。
活性评价结果表明,苦丁茶乙酸乙酯部位不仅具有卓越的抗氧化活性和良好的抗补体活性,
还具有显著的抑制人乳腺癌细胞增殖活性,说明苦丁茶乙醇粗提物经过分级萃取
后,活性物质相对较多地集中在乙酸乙酯相。
利用柱色谱等分离纯化手段对乙酸乙酯相进行系统全面的分离纯化,得到
13个单体化合物。
借助核磁共振和质谱等波谱学手段鉴定了化合物的结构,分别为：咖啡酸乙酯、β-谷甾醇、熊果酸、绿原酸、β-胡萝卜苷、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、杨梅苷、19-羟基熊果酸(Pomdid acid)、EGCG、3,4-0-二咖啡酰基奎宁酸甲酯、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯。
其中,3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯和3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯为首
次从苦丁茶中分离得到。
(3)通过MTT实验,研究了从苦丁茶乙酸乙酯极性部位中分离纯化得到的单体化合物对2种肿瘤细胞和2种正常细胞增殖能力的影响,结果表明Pomdid acid对MCF-7细胞的抑制作用尤为明显,表现出较强的细胞选择性。
经流式细胞术检测分析,Pomdid acid抑制MCF-7细胞增殖是通过诱导细胞凋亡和G2/M期细胞周期阻滞实现的。
通过对细胞内ROS水平检测、JC-1染色检测、实时荧光定量PCR和western印迹技术,研究了Pomdid acid对MCF-7细胞的抑制增殖、诱导凋亡作用的作用机制。
结果表明：Pomdid acid通过提高细胞内ROS的含量,打破了细胞内氧的代谢平衡,降低MCF-7细胞内线粒体跨膜电位并造成线粒体功能紊乱,上调Bc1-2、CDK4、Cyclin D1基因和下调p53基因的mRNA表达,下调促细胞增殖蛋白p-ERK、p-p65的表达和上调促凋亡蛋白p-JNK、p-p38、p-p53的表达等途径来诱导MCF-7细胞的凋亡(4)研究并优化了苦丁茶多酚提取的最佳工艺。
全面评价了苦丁茶多酚的抗氧化能力(清除DPPH自由基、清除ABTS+自由基、总抗氧化能力、总还原力),实验结果表明苦丁茶多酚具有卓越的抗氧化活性。
通过对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶两种与消化相关的酶的抑制作用来评价苦丁茶多酚的酶活性抑制,初步研究发现苦丁茶多酚的酶活性抑制良好。
研究了AB-8和HP-20大孔吸附树脂对苦丁茶多酚类物质的静态吸附动力学及热力学；通过研究两种树脂对苦丁茶多酚的吸附量与温度的关系,发现AB-8和HP-20吸附苦丁茶多酚的最佳温度分别是35℃和30℃(5)研究了苦丁茶多酚的抗炎作用及作用机制,实验结果表明苦丁茶多酚可能是通过抑制LPS诱导的巨噬细胞
RAW264.7分泌NO、TNF-α、IL-6、IL-2β,抑制细胞内TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、COX-2 mRNA的表达,抑制MAPKs信号通路和NF-κB信号通路,调控炎症因子产生,从而起到抗炎作用。
(6)研究并优化了苦丁茶多糖的最佳提取工艺条件。
利用DEAE-52纤维素离子交换柱层析对苦丁茶粗多糖进行分级纯化和富集,得到三种纯化多糖,研究了纯化多糖的理化性质并对其结构进行初步表征。
免疫活性研究结果表明,苦丁茶多糖可能是通过上调巨噬细胞内TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS mRNA的表达,抑制NF-κB信号通路中p-p65蛋白的正常表达、上调MAPKs信号通路中p-ERK、p-JNK、p-p38蛋白的表达,进而促进NO、TNF-α、 IL-6等免疫活性因子的分泌,以活化巨噬细胞参与进行复杂的机体免疫活动,从而起到免疫的作用。