菌种冷冻保藏
几种食用菌菌种保藏方法
几种食用菌菌种保藏方法食用菌菌种是指用于食用或驯化培养的真菌种类。
在保藏食用菌菌种时，主要有以下几种方法：1.冷冻保藏：将菌种置于-80℃的低温环境中。
首先，将菌种种植在琼脂平板上的单独菌落。
然后，将单独的菌落切下并置于含有30%甘油的琼脂平板上。
最后将含有菌落的琼脂平板置于-80℃的低温冷冻库中进行保存。
这种方法适合于长时间保存，但对设备和电力有一定需求。
2.雪贮法：将菌种置于冷藏室的冷湿源物质上。
首先，将菌种培养在含有菌落的琼脂平板上。
然后，将菌落保留在琼脂平板上并将其置于冷藏室中。
这种方法适用于一般食用菌的保存，在适宜的湿度和温度下，可以保存数月至一年。
3.干燥保藏：将菌种置于干燥环境中。
首先，将菌种培养在含有菌落的琼脂平板上。
然后将菌落切下并置于无菌的滤纸或多孔塑料袋中。
最后将菌种放置于干燥通风良好的地方，等待其自然干燥。
这种方法适用于一些干货类食用菌种，如香菇、平菇等。
4.培养罐保藏：将菌种保藏于培养罐中。
首先，将菌种培养在含有菌落的琼脂平板上。
然后将菌落切下并置于无菌培养罐中，加入适宜的培养基，并密封培养罐。
最后将培养罐保存在适宜的温度和湿度下。
这种方法适用于菌种的短期保藏。
5.低温干燥保藏：将菌种保藏于低温干燥器中。
首先，将菌种培养在含有菌落的琼脂平板上。
然后将菌落切下并置于低温干燥器中，通过低温干燥将其保存起来。
这种方法适用于一些低温耐受性较强的食用菌。
总结起来，以上是几种食用菌菌种保藏的方法。
选择合适的方法可根据菌种的特性、用途和预期保藏时间来确定。
在进行菌种保藏时，要注意无菌操作，避免菌种的污染或变异，并在适宜的环境条件下保存。
这将有助于保持菌种的营养价值和生物特性，以及保证其在后续使用中的质量。
微生物菌种保藏方法
微生物菌种保藏方法微生物菌种保藏方法主要包括冷冻保存、冷冻干燥保存和鉴定保存等多种方式。
以下将逐一介绍这些方法。
冷冻保存是一种常用的微生物菌种保藏方法，它的原理是通过将菌种置于低温环境中，减缓细胞新陈代谢和繁殖，使菌株处于休眠状态，从而达到长期保藏的目的。
冷冻保存的步骤包括：培养优良菌株、制备菌种冻存液、冻存及复苏。
制备冻存液时，通常使用亲水性保护剂如甘油、乳糖等，以及抗冻剂如酪蛋白、卵黄等，混合菌株培养物与冻存液，并移液到冻存管中，放置于低温冷冻器中迅速冷冻。
复苏时，将冻存液迅速复苏并接种于适宜的培养基上，培养条件要注意逐步恢复菌株的新陈代谢活力，以避免菌株死亡。
冷冻干燥保存是一种将菌种置于低温和低压条件下脱水处理的保存方法。
冷冻干燥保存的原理是通过脱水将菌株处于休眠状态，并使用适当的干燥保护剂，如蛋白质、糖类等，保护菌株的细胞结构和功能。
制备冷冻干燥菌种的步骤包括：菌株预处理、菌株悬浮液制备、脱水处理、真空干燥、密封保存等。
制备菌株悬浮液时，通常使用含有保护剂的培养基，将菌株培养到对数期，制备含有菌株的悬浮液。
脱水处理时，将菌株悬浮液置于脱水试剂中，使其渐渐减少，最终减至约1%的含水量。
真空干燥时，将脱水后的菌株置于真空干燥器中，利用低温低压的条件下，使菌株中的水分转化为气态水分，实现菌株的干燥。
最后，将干燥的菌株装入密封容器中保存。
鉴定保存是一种将微生物菌株保藏在鉴定标本库中的方法。
该方法适用于那些已经得到准确鉴定和分类的菌株。
鉴定保存的步骤包括：菌株鉴定、鉴定数据记录、鉴定标本制备及识别、存储方法选择和管理等。
菌株鉴定时，通常使用形态学观察、生理生化特性分析以及16S rRNA序列分析等方法，确保菌株的准确性和可重复性。
鉴定数据记录时，要详细记录菌株的相关数据，如菌株来源、鉴定结果、鉴定依据等。
鉴定标本制备及识别时，可以通过制备菌株培养物、制备冻存液等方式保存菌株，并制备鉴定标本。
存储方法选择和管理时，要根据菌株类型和特性选择适当的保存方法，同时要做好菌株信息的管理和查询。
论述菌种的保藏方法
论述菌种的保藏方法菌种的保藏是指将某一种菌株保存在适宜的条件下，以确保其长期存活和保持其遗传特性的一种操作。
菌种的保藏对于科学研究和应用具有重要意义，因为菌株的失活或突变可能导致实验结果的不准确性或应用价值的丧失。
本文将介绍几种常见的菌种保藏方法。
一、冷冻保藏法冷冻保藏法是将菌株保存在低温条件下，以减缓菌株的代谢和生长速率，达到延长其存活时间的目的。
常见的冷冻保藏方法有两种：液氮冷冻和低温冷冻。
1. 液氮冷冻：将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的甘油或乙二醇等保护剂，然后分装至冷冻管中，迅速将冷冻管浸入液氮中进行冷冻保存。
液氮的温度极低，可以有效地抑制菌株的代谢活动，保证其长期存活。
2. 低温冷冻：将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的甘油或乙二醇等保护剂，然后分装至冷冻管中，置于-80℃的低温冰箱中保存。
相比于液氮冷冻，低温冷冻的操作更加简便，且可以在普通实验室条件下进行。
二、干燥保藏法干燥保藏法是将菌株保存在无水条件下，通过降低菌株周围环境的水分含量，抑制菌株的代谢活动，并防止细胞内酶的活性。
常见的干燥保藏方法有两种：冷冻干燥和真空干燥。
1. 冷冻干燥：将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的保护剂，然后在真空下进行冷冻干燥。
冷冻干燥的过程中，通过降低温度和压力，使水分直接从固态转变为气态，从而达到保护菌株的目的。
2. 真空干燥：将培养基中的菌株悬浮液均匀涂布在无菌的滤纸或硅胶膜上，然后将其置于真空干燥器中进行真空干燥。
真空干燥的过程中，通过降低压力，将水分从菌株周围环境中蒸发掉，使菌株处于无水状态。
三、液氮冷冻法液氮冷冻法是将菌株保存在液氮中的一种方法。
液氮的温度极低，可以有效地抑制菌株的代谢活动，保证其长期存活。
该方法适用于多种菌株的保藏，包括细菌、真菌和酵母等。
液氮冷冻法的操作步骤如下：1. 将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的甘油或乙二醇等保护剂，以增加菌株的抗冻性。
2. 将菌株悬浮液分装至冷冻管中，每支约0.5-1.0 mL，然后封闭冷冻管。
菌种保藏方法
菌种保藏方法菌种保藏方法菌种保藏是指将某一种菌株或菌种保存在一定的条件下，以便长期保存并用于研究或应用。
菌种保藏的目的是为了防止菌株的变异和降低其性状的丧失，以便在需要的时候能够重新培养出相同或相似的菌株。
下面将介绍几种常见的菌种保藏方法。
一、冷冻保藏法冷冻保藏法是将菌种保存在低温条件下，一般为-80℃或液氮温度。
这种方法比较简单，操作方便，且保存效果较好。
首先，将菌株从培养基上接种到含有10%-15%甘油的液体培养基中，然后用无菌冻存管将菌液分装好，经过冷冻机或液氮罐进行冷冻保存。
在需要使用菌株时，只需将冻存管快速解冻并转移到新的培养基上即可。
二、真菌分生孢子的枯燥保存法真菌的分生孢子经过枯燥保存后，能够在相对湿度较低的条件下长期保存。
这种保存方法主要适用于真菌，特别是产生分生孢子的真菌。
首先，从培养基上接种分生孢子，培养出菌丝后进行枯燥处理。
一般采用短暂的枯燥处理，依靠菌丝中的水分进行干燥。
然后将枯燥的菌丝放置在无菌瓶中密封保存，放在相对湿度低于30%、温度介于10℃和25℃之间的干燥环境中。
三、气干法气干法是将菌株保存在干燥剂中，以保持菌株的活力。
这种方法适用于较短时间的菌种保存。
首先，将菌株从培养基上接种到含有干燥剂的培养基中，待培养基中的水分被干燥剂吸收后，将菌株封存在密封袋或密封瓶中。
干燥剂一般选择无水硅胶或干燥剂片，确保环境的干燥程度。
四、冷藏法冷藏法是将菌株保存在低温条件下，一般为4℃至10℃之间。
这种方法适用于细菌、酵母和一些真菌的保存。
菌株保存在含有15%-30%甘油的稀释培养基中，然后在低温条件下保存。
需要使用时，只需从低温保存中取出，接种到新的培养基中即可。
总结起来，菌种保藏是一项重要的科研工作，不同的菌种可以采用不同的保藏方法。
冷冻保藏法适用于大部分微生物的保存，真菌的分生孢子的枯燥保存法适用于真菌的保存，气干法适用于较短时间的保存，冷藏法适用于细菌、酵母和一些真菌的保存。
食用菌菌种保藏的方法
食用菌菌种保藏的方法
食用菌是一种广泛使用的食品，如何保存食用菌的菌种是非常重要的。
下面介绍几种常用的菌种保藏方法。
一、冷冻法
冷冻法是将菌种置于低温下，使其处于冷冻状态以达到保藏的目的。
将菌丝均匀地涂于平板上，置于-80℃的低温冷冻柜中冷冻，或将菌丝混入15%甘油溶液中，用液氮冷冻保存。
这种方法保存的菌种质量较好，保藏时间较长。
二、干燥法
将菌丝培养在无菌环境下，培养到菌丝生长至顶部时，用无菌石英砂或无菌滤纸吸干培养皿内的水分，再将石英砂或滤纸中的菌种置于无菌条件下进行干燥，然后密封保存。
这种方法使用简单，保存时间较长，但保存的菌种易受到氧气、温度和湿度等因素的影响。
三、冷藏法
冷藏法是将培养好的菌种置于低温环境下进行保存。
将培养好的菌种涂于平板上，进行初步培养，再将平板用无菌纸包好，置于4℃的冰箱中保存。
这种方法保存的菌种质量较好，但保存时间较短。
四、液氮保存法
将培养好的菌种混入15%甘油溶液中，用液氮冷冻保存。
这种方法保存的菌种质量较好，保存时间长达数年，但需要液氮存储设备。
五、糖分保藏法
将培养好的菌种混入10%蔗糖水溶液中，用常温保存。
这种方法保存的菌种质量较好，保存时间长达数年，但需要注意保藏容器的密封性。
不同的菌种保藏方法适用于不同的情况，我们需要根据实际情况选择合适的方法。
同时，在进行菌种保藏时，需要注意保藏容器的密封性、温度、湿度等因素，以确保保存的菌种质量。
菌种保藏的名词解释
菌种保藏的名词解释引言：菌种保藏是一项重要的生物学技术，它的目的是为了长期保存和保护各种菌种资源，以便于在科学研究、工业应用和环境监测等领域发挥作用。
本文将对菌种保藏的概念、历史、分类方法和意义等方面进行解释。
一、菌种保藏的概念：菌种保藏是通过特定方法将菌种存放在适宜的条件下，以确保其生物特性和遗传信息的原始性、稳定性和可重复性的过程。
这一过程通过冷冻、低温冻干、冷冻真空蒸发等方式实现。
二、菌种保藏的历史：菌种保藏的历史可以追溯到19世纪，当时学者们开始意识到保存珍贵的微生物资源的重要性。
最早的菌种保存方法是在培养基中加入糖、甘油等物质，然后将其冷冻保存。
20世纪初期，科学家们开始探索新的保存方法，如液氮冷冻保存和冷冻干燥技术，这些方法大大提高了菌种的保存效果。
三、菌种保藏的分类方法：菌种保藏按照不同的原理和方法可以分为多种类型，常见的分类方法有以下几种：1. 冷冻保存：将菌种置于低温下，利用温度的作用阻止微生物的生长和代谢，从而实现保藏的目的。
冷冻保存是目前最常见和可行的保存方式，常用的冷冻保存温度为-80°C或液氮温度。
2. 冷冻真空蒸发：将菌种浸入保护剂中，通过真空蒸发的方式去除溶剂，然后将干燥的样品在低温下保存。
冷冻真空蒸发相比于冷冻保存具有更好的质量，但技术和设备要求较高。
3. 冷冻干燥：将菌种在负压条件下冷冻，在低温下使水分转移到固态，然后通过升温让水分升华脱离菌种，最终得到冷冻干燥菌种的产物。
此方法可以减小菌种在保存过程中可能出现的损伤。
四、菌种保藏的意义：菌种保藏对于微生物资源的保护和利用具有重要意义，其主要体现在以下几个方面：1. 保护遗传多样性：菌种保藏可以有效地保存各个菌种的原始特性和遗传信息，防止因自然灾害、环境变化或人类活动等原因而导致的遗传多样性的丧失。
2. 支持科学研究：保存菌种为科学研究提供了便利和资源，研究人员可以随时获取并使用特定的菌种进行研究，推动学术进展。
菌种保藏的原理
菌种保藏的原理菌种保藏是指将微生物菌株进行冷冻或干燥等处理，以延长其保存时间和保持其遗传特性的一种方法。
菌种保藏的原理主要包括以下几个方面：一、低温保存原理。
低温保存是目前最常用的菌种保藏方法之一。
通过将微生物菌株置于低温环境中，可以减缓细胞代谢速率，降低细胞内的化学反应速率，从而延长菌株的保存时间。
在低温条件下，微生物细胞内的代谢活动减缓，细胞内的酶活性降低，细胞膜和细胞壁的破坏减少，从而减少了微生物的死亡率，延长了菌株的保存时间。
二、干燥保存原理。
干燥保存是另一种常用的菌种保藏方法。
通过将微生物菌株置于干燥环境中，可以去除细胞内的水分，使细胞处于休眠状态，从而延长菌株的保存时间。
在干燥条件下，微生物细胞内的水分被大大减少，细胞内的生化反应受到抑制，细胞代谢活动减缓，从而延长了菌株的保存时间。
三、冷冻干燥保存原理。
冷冻干燥保存是将微生物菌株先冷冻，然后在真空条件下进行干燥处理的一种保存方法。
冷冻干燥保存结合了低温保存和干燥保存的优点，能够更好地保持菌株的遗传特性和保存时间。
四、液氮保存原理。
液氮保存是将微生物菌株置于液氮中进行保存的一种极低温保存方法。
在液氮的极低温条件下，微生物细胞内的代谢活动几乎停止，细胞内的化学反应速率大大降低，从而极大地延长了菌株的保存时间。
五、保存原理的应用。
菌种保藏的原理在微生物资源的长期保存和利用中起着非常重要的作用。
通过合理选择保存方法，可以有效地延长菌株的保存时间，保持菌株的遗传特性，为微生物资源的研究和应用提供了可靠的保障。
综上所述，菌种保藏的原理主要包括低温保存、干燥保存、冷冻干燥保存和液氮保存等方法。
这些方法通过降低微生物细胞的代谢活动，延缓细胞内的化学反应速率，有效地延长了菌株的保存时间，保持了菌株的遗传特性，为微生物资源的研究和应用提供了重要的支持。
菌种冷冻保藏
7.4采用酒精喷灯进行封管时，烧的温度要适宜。封管后不要立即放在台面上，以防受冷撕裂。
附图：泪滴型安瓿管长颈毛细玻璃管
多头岐管
附：1、冷冻保藏改进方法（一）
因真空冷冻干燥器价格比较昂贵，通常抗生素生产厂都采用自制的简单易行办法，可达到同样的目的。即：
6.2制备脱脂乳
取市售新鲜、清洁、无抗生素污染的原牛奶300ml煮沸，在5000 r/min下离心10分钟，除去上层奶皮、油脂，吸取下层奶液，经脱脂棉过滤，如此反复3次脱去脂肪，然后分装入两个250 ml三角瓶中，加棉塞并用牛皮纸包头、扎牢，在115℃25min高压蒸汽灭菌，冷却后做无菌试验，4℃冰箱保存备用。
6.6预冻
因为迅速超低温预冻可保持菌体细胞结构成份原状，利于细菌存活。故将分装好的冷冻管及指示管置于低温冰箱冷冻室-70℃下快速冷冻过夜。无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。也可用液氮。将冷冻管插入冷冻剂，只需冷冻4—5分钟，即可使悬液结冰。也可用液氮预冻。还可用低温冰箱-80℃预冻1～2小时后转入冷冻真空干燥。
由于同时满足菌种保藏三要素，使微生物始终处在低温、干燥、缺氧的条件下，能克服传代、沙土管简单保藏方法的不足，保藏菌种范围广、时间长（保藏期可达数年至十数年）、存活率高、保存过程不易失活和退化等。
3、主要步骤为：
3.1将待保藏菌种的细胞或孢子悬浮于保护剂（如脱脂牛奶）中；
3.2在低温（-45℃以下）下使微生物细胞快速冷冻；
6.7冷冻真空干燥
真空冷冻干燥器有成套的装置出售（长药厂新近成立菌种中心，购有该机）。按其方法操作。冷冻干燥机要先开机预冷30分钟以上，再根据冷冻干燥机的水分蒸发能力，确定一次放入的冷冻管数量。将预冻好的冷冻管及指示管于次日取出迅速放入已预冷的冷冻干燥机的干燥箱内，开动真空泵进行一级真空抽干，待指示管出现由粉红色变全兰色时，再进行二级抽干12h。二级真空干燥既保持菌体细胞干燥度，又避免细胞反复冻结造成保存中菌体死亡，因而能更长期保存菌种，并能提高其存活率，又不会发生菌株的变异
简述菌种保藏的几种方法及条件。
简述菌种保藏的几种方法及条件。
菌种保藏是重要的生物资源的保护和利用过程，其主要方法有：
一、冷冻法。
冰冻法是最常用的保藏菌株的方法，也是目前最理想的保藏方法之一，其主要原理是将活菌体放入冰冻室，温度由常温降至-80℃，使得菌种活动受到抑制，在-80℃的状态下可以长期保存。
二、液氮法。
液氮法是一种依靠低温和高压技术保存菌种的方法，主要是将活菌体置入液氮容器中，使其处于-195℃的极低温状态。
三、干燥法。
干燥法是将活菌体及高浓度营养培养基同时干燥，使其中的水份完全蒸发而获得半干燥的状态，这种状态下可以防止菌种的增殖。
四、水银法。
水银法是一种利用活菌体对水银的耐受性，将活的菌体悬浮在7%的水银中的保存方法。
保藏菌种的条件：
1、环境温度应该控制在0~4℃，并保持温度稳定。
2、控制保藏过程中的湿度，干燥法中的湿度应在10%～15%之间，而冷冻、液氮保藏则要求保证容器中有足够多的液氮，避免菌种因温度过高而复苏。
3、控制光照，避免菌株遭受接触紫外线的伤害、褪色、衰退和增强其致病性等。
4、控制空气中的致病因子；
5、定期检测样品的质量，确保其始终处于较好的保藏状态。
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发酵菌种的保藏方法
发酵菌种的保藏方法发酵菌种是用于生产发酵食品和其他生物工艺的重要微生物资源，对于其保藏和长期保存非常关键。
下面将介绍几种常见的发酵菌种保藏方法。
一、冷冻保存法冷冻保存法是最常用的发酵菌种保存方法之一、其步骤如下：1.选择菌种：选择菌种时应选择生长良好、菌落形态规整、功效明确的优良菌株。
2.培养菌种：将菌种接种到合适的培养基上，培养到适宜的生长期（一般是最佳菌落时期）。
3. 制作菌种原液：从菌落上取一些脓样物质，加入到保存管中，并加入10%的甘油做菌种的保护剂。
每管约用1-2ml。
4.冷冻保存：菌种原液在-80℃低温冰箱中冷冻保存，也可以使用液氮保存。
冷冻保存法虽然简单易行，但由于菌种原液在冷冻解冻过程中易遭受冻害，导致菌数下降，因此冷冻保存时间一般不宜超过1年。
二、干燥保存法干燥保存法通过将发酵菌种完全干燥保存，以能有效地延长菌种的保存时间。
其步骤如下：1.选择菌种：选择生长良好、菌落形态规整、功效明确的优良菌株。
2.培养菌种：将菌种接种到合适的培养基上，培养到适宜的生长期。
3.干燥处理：将菌落用无菌胶片照射，然后在无菌条件下放置在干燥器中进行干燥处理。
也可以使用无菌纸片将菌落移至无菌试管中干燥。
4.包装保存：将干燥的菌片或菌落保存在无菌试管中或铝箔袋中，密封保存在低温、干燥的地方。
干燥保存法可以保持菌种的长时间活力，但其干燥环境要求较高，一般适用于较耐干燥的菌种。
三、液氮冷冻保存法液氮冷冻保存法是一种极低温保存法。
其步骤如下：1.选择菌种：选择生长良好、菌落形态规整、功效明确的优良菌株。
2.培养菌种：将菌种接种到合适的培养基上，培养到适宜的生长期。
3.菌种分装：将菌液均匀取出，分装到无菌的小试管或容器中，并加入保存剂如甘油等。
4.冷冻保存：将分装好的菌种置于液氮中快速冷冻，用罐盖密封好，存放在液氮罐中进行长期保存。
液氮冷冻保存法是最理想的保存方法之一，菌种可以保存数十年，但存储设备要求较高。
除了以上几种方法，还有其他一些较特殊的保存方法，如低温冷冻干燥保存法、制备本源菌种保存法等，具体选择方法应根据菌种特性和保存目的而定。
菌种保藏的方法
菌种保藏的方法菌种保藏是一种重要的微生物资源保护方式，对于研究、应用和开发微生物具有重要意义。
以下是几种常见的菌种保藏方法及其操作步骤。
一、低温冷冻保藏法低温冷冻是一种常用的微生物保藏方法，适用于大多数真菌、细菌和酵母菌。
其主要原理是将菌株保存在低温下，使其生理活动缓慢，以延长菌种的保藏时间。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备保存液：根据不同菌株的需要，制备适宜的保存液，常用的保存液有甘油、甘露醇等。
4. 菌种保存：将菌株用保鲜膜包裹，放入保存管中，加入保存液，密封保存管。
5. 冷冻保存：将保存管放入低温冰箱或液氮罐中进行冷冻保存。
二、干燥保藏法干燥保藏法是一种简便、经济的保藏方法，适用于真菌、细菌、放线菌等微生物。
其基本原理是将菌种与干燥剂混合，使其水分含量降低，从而实现微生物的休眠状态。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备干燥剂：根据不同菌株的需要，选择合适的干燥剂，如硅胶、氧化钙等。
4. 菌种混合：将菌株与干燥剂按照一定比例混合均匀。
5. 干燥保存：将混合物均匀地散布在无菌培养基上，置于通风干燥的环境中进行保存。
三、冷冻冻干保存法冷冻冻干保存法是一种较为复杂的菌株保藏方法，适用于难保存的微生物，如厌氧菌、放线菌等。
其主要原理是将菌株在低温下冻结干燥，从而保护微生物的活力。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备保存液：根据不同菌株的需要，制备适宜的保存液，如甘油、甘露醇等。
4. 冷冻过程：将菌株加入保存液中，放入冷冻机冷冻至低温（通常为-80℃）。
5. 冻干过程：将冷冻的菌株经过真空排气、结冰降温等步骤进行冻干处理。
保藏菌种的方法
保藏菌种的方法
在微生物研究中，保藏菌种是非常重要的一环。
保藏菌种可以保证菌种的纯度和活力，并且方便长期保存和传递。
以下是一些常见的保藏菌种的方法：
1. 冷冻保藏法
将菌株培养在适宜的培养基上，待生长到适当的生长期后，用生理盐水或甘油溶液混合菌体，制成菌悬液，然后用干燥冰或液氮冷冻保存。
2. 真空干燥法
将菌株培养在适宜的培养基上，待生长到适当的生长期后，用无菌水将菌体洗净，然后在真空条件下干燥保存。
3. 常温干燥法
将菌株培养在适宜的培养基上，待生长到适当的生长期后，用无菌纸片或无菌土壤将菌体均匀涂抹在上面，然后在阴凉通风处晾干保存。
4. 液氮保藏法
将菌株培养在适宜的培养基上，待生长到适当的生长期后，用无菌水将菌体洗净，然后用液氮冷冻保存。
在保藏菌种过程中，需要注意以下几点：
1. 保证菌株的纯度和活力，避免杂菌和死菌的混入。
2. 在保存菌种前，要对菌株进行鉴定和存档。
3. 在保存过程中，要保证温度、湿度、氧气和光照等环境条件
的稳定和适宜。
4. 定期检查保存的菌种，确保其纯度和活力。
综上所述，保藏菌种是微生物研究中不可或缺的一环。
通过选择合适的保藏方法和严格的管理，可以确保菌种的纯度和活力，方便长期保存和传递。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
在现代生物学研究和生物技术应用中，菌种保藏是至关重要的环节。
恰当的菌种保藏方法能够确保菌种的活性、遗传稳定性和可用性，为科学研究的持续开展以及相关产业的发展提供坚实的基础。
本文将重点介绍实验室中最常用的五种菌种保藏方法，深入探讨它们各自的特点、适用范围以及操作要点。
一、低温冷冻保藏法低温冷冻保藏法是目前最为广泛应用且效果较为可靠的菌种保藏方法之一。
其基本原理是将菌种置于超低温环境（通常为液氮温度，即-196℃）下，使菌种细胞处于极度冷冻的状态，从而抑制其代谢活动，达到长期保存的目的。
该方法具有诸多显著优点。
低温能够极大地减缓细胞的生理活动，几乎使其处于完全停滞状态，从而有效地延长菌种的存活时间。
低温冷冻保藏对菌种的遗传稳定性影响较小，经过长期保存后，菌种的特性通常能够较好地保持。
操作相对简单，只需将菌种制备成适宜的冷冻保存液，然后置于液氮罐中即可。
在具体操作时，首先要选择合适的冷冻保存液。
常用的冷冻保存液一般含有一定比例的保护剂，如甘油、二甲基亚砜等，它们能够降低细胞内冰晶的形成对细胞的损伤。
制备好冷冻保存液后，将菌种接种到冷冻保存液中，制成菌悬液。
将菌悬液分装到合适的冷冻管中，迅速放入液氮罐中进行保存。
在液氮罐中，要定期检查液氮的液位，确保菌种始终处于适宜的低温环境中。
低温冷冻保藏法适用于大多数微生物菌种的长期保存，尤其对于那些对温度敏感、容易变异的菌种，如细菌中的一些致病菌、真菌中的丝状真菌等，具有良好的保藏效果。
然而，该方法也存在一些不足之处，例如液氮的成本较高，液氮罐的储存空间有限，以及在取出菌种进行复苏时可能存在一定的风险等。
二、干燥保藏法干燥保藏法是利用菌种在干燥环境下代谢活动受到抑制的原理来实现保藏的方法。
常见的干燥保藏法包括沙土管保藏法、滤纸保藏法等。
沙土管保藏法是将菌种接种到无菌的沙土中，然后将沙土管置于干燥器中进行干燥保存。
该方法具有操作简便、成本低廉的特点。
在干燥过程中，菌种细胞内的水分逐渐散失，代谢活动减缓，从而达到保藏的目的。
简述真空冷冻干燥法保藏菌种的一般流程
真空冷冻干燥法是一种常用的菌种保藏方法，它通过将菌种在低温下冷冻、然后在真空条件下干燥的方式，实现了长期保存菌种的目的。
以下是真空冷冻干燥法保藏菌种的一般流程：一、菌种准备1. 选择合适的菌株：在进行菌种保藏前，首先需要选择适合的菌株。
通常应选择生长良好、代谢活跃的菌种进行保藏。
2. 菌种培养：将选好的菌株进行培养，培养条件需严格控制，保证菌种的纯度和活力。
二、预处理1. 预冷冻处理：将培养好的菌种进行预冷冻处理，将其置于低温环境中进行预冷冻，通常温度为-80℃以下，以减慢菌种的新附粘聚和氧化。
2. 冷冻保存：将预处理好的菌种转移到常规保存的冷冻设备中，将温度进一步调节至-196℃以下，以实现菌种的长期冷冻保存。
三、真空干燥1. 复苏：当需要使用保存好的菌种时，首先需要将其从冷冻状态中复苏出来，将其放置在适宜的培养基中进行复苏培养。
2. 真空干燥：在菌种复苏成功后，使用真空冷冻干燥设备进行干燥处理。
将菌种在低温下，通过升高温度并施加真空条件，使得菌种的水分逐渐蒸发，最终实现了菌种的干燥保存。
四、包装1. 包装材料：选择合适的包装材料，通常为玻璃瓶或者高密度聚乙烯瓶等耐高温、耐压、密封性好的材料。
2. 包装方法：将经过真空冷冻干燥处理的菌种装入包装容器中，并采用干燥消毒的方式，保证包装容器和菌种的无菌状态。
3. 封口保存：对包装容器进行封口处理，保证菌种在包装容器中的密封保存。
五、贮存1. 温度控制：将经过包装的菌种存放在恒温设备中，控制温度在-20℃至-80℃之间，以保证菌种的长期保存。
2. 防潮措施：在存放的过程中，采取适当的防潮措施，避免包装容器内部产生凝结水、霉菌和细菌。
3. 定期检测：定期对存放的菌种进行检测，观察其存活情况和纯度，必要时进行复苏培养。
通过以上流程，真空冷冻干燥法可以实现菌种的长期保存，确保菌种的活力和纯度，为科研工作提供了重要的技术保障。
在菌种保藏的过程中，真空冷冻干燥法作为一种常用的方法，具有许多优势。
菌种保藏方法范文
菌种保藏方法范文菌种保藏是指将具有特定遗传性状的菌种保持在一定的条件下存活和保存，以便于后续的研究和利用。
菌种保藏的目的是保持菌种的稳定性、纯度和活力。
下面将对常见的菌种保藏方法进行详细介绍。
1.冷冻保藏法：冷冻保藏法是最常见和常用的菌种保存方法之一、该方法是将菌种在适宜的培养基上生长至适宜的阶段，然后通过添加甘油或其他保护剂来增加菌种的耐冻存活力，并放入低温环境下冷冻保存。
通常使用-20℃或更低的温度进行保存。
这种方法简单易行，成本较低，在短时间内能够保持菌株的复原性很好。
2.干燥保藏法：干燥保藏法又称为脱水保藏法，是将菌种长时间保存于干燥状态中。
先将菌种培养至适宜的生长阶段，然后用无菌方法将菌种制成干燥菌粉，放入干燥瓶中密封保存。
常见的干燥剂有二氧化硅凝胶、无水CaCl2等。
干燥保藏法保存的菌种潜伏期长，比较安全可靠，但复苏的条件较为苛刻。
3.液氮保藏法：液氮保藏法又称为低温保存方法，是将菌种保存在液态氮中。
通过将菌种培养至适宜生长阶段后，将其转接入试管中，用无菌方法加入等体积的冷冻保护剂（例如甘油），放入液氮中保存。
液氮的温度达到-196℃，在这种环境下菌种可以长时间保存，但需要特殊的设备和条件。
4.胶体保藏法：胶体保藏法是将菌种培养至适宜生长阶段，然后将其与无菌明胶混合均匀，制成菌胶球，通过培养基中的各种成分供应菌种的生长和维持菌株的复原性。
这种保藏方法具有较长的复苏潜伏期，并且易于携带和传递，是一种较为理想的保存方法。
5.冷冻干燥保藏法：冷冻干燥保藏法是将菌种通过冷冻干燥的方法进行保存。
首先将菌种培养至适宜生长阶段，然后用无菌方法将菌种在-40℃或更低温度下冷冻干燥，形成冷冻干燥粉末。
这种方法保存的菌种潜伏期长，但复苏条件较为苛刻。
除了以上的常见保存方法，还有一些新兴的菌种保藏方法，例如微柱保存法、冷冻解冻保存法等。
这些方法在不同的实验室和研究领域可能有着不同的适用性和优势。
综上所述，菌种保藏方法有多种多样，每一种方法都有其自身的特点和适用范围。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
实验室最常用的五种菌种保藏方法一、冷冻保存在实验室中，冷冻保存是最常用的菌种保藏方法之一。
这种方法利用低温的环境，将菌种置于-70°C以下的冰柜或液氮罐中进行保存，以减缓菌种的新陈代谢过程，从而延长其保存时间。
冷冻保存不仅适用于常见的细菌菌种，对真菌、酵母菌等微生物也同样适用。
在冷冻保存的过程中，需要注意样品容器的密封性和防潮性，以避免保存过程中的交叉污染和冻结损伤。
二、干燥保存干燥保存是另一种常见的菌种保藏方法。
这种方法通过将菌种置于低温低湿环境中，使其水分蒸发，使菌种变得干燥并进入休眠状态，从而延长其保存时间。
常见的干燥保存方式包括真空冷冻干燥、干燥剂吸附法等。
干燥保存尤其适用于灵敏对湿度敏感的菌种，以及一些难以存活在液体培养基中的微生物。
三、低温保存除了冷冻保存外，低温保存也是常见的菌种保藏方式之一。
在这种方法中，菌种通常被保存在4°C左右的冰箱中，通过控制温度和湿度，延缓菌种的新陈代谢，并保持其生长状态。
这种保存方式不仅适用于微生物的短期保存，也可以用于长期保存对保存温度敏感的微生物。
四、液氮保存液氮保存是一种极低温的保存方式，通过将微生物样品浸没在液氮中进行保存。
这种方法不仅可以有效地防止菌种的新陈代谢和变异，还能够保持菌种的生物特性和遗传信息。
液氮保存适用于需要长期保存的珍贵菌株和难培养的微生物，如土壤中的特殊嗜冷菌和特殊嗜热菌等。
五、冻干保存冻干保存是将微生物样品在冷冻的条件下先冻结，然后通过真空干燥的方式将水分蒸发，最终将样品转变成固态的干燥状态。
这种方法既能保留微生物的生物特性，又能有效地延长样品的保存时间，适用于需要长时间运输和保存的微生物。
总结回顾通过冷冻保存、干燥保存、低温保存、液氮保存和冻干保存等五种菌种保藏方法，可以满足实验室对于微生物样品保存的不同需求。
不同的菌种和实验目的，需要选择合适的保存方式，以确保微生物的品质和可用性。
在进行菌种保存的过程中，需要注意样品的密封性、温度和湿度的控制，以及保存设备的维护和管理。
简述菌种冷冻干燥保藏法的流程
简述菌种冷冻干燥保藏法的流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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发酵菌种的保藏方法
发酵菌种的保藏方法
一、长期保藏方法：
1.冷冻保藏：将菌种培养物接种在培养基上，培养至菌液平台期，然
后将菌液搅拌均匀后，加入等体积的甘油或酵母浸渣，混匀后分装至无菌
冻结管中，用-80℃冷冻保存。
2.干燥保藏：将菌种培养物接种在培养基上，培养至菌液平台期，用
无菌纱布将菌液吸干，然后将纱布放入无菌干燥器中进行干燥，干燥至完
全失去水分后，将纱布收入无菌试管中，封口后保存于冰箱中。
3.液态氮保藏：将菌种培养物接种在培养基上，培养至菌液平台期，
然后用冷冻管将菌液分装好，将冷冻管插入液态氮中保藏。
二、短期保藏方法：
1.酸性保藏：将菌种接种在适宜培养基上，培养至平台期，然后加入
适量的无菌稀盐酸，使培养液酸化到pH2-3左右，保存于冰箱中。
2.盐浸保藏：将菌种培养物接种在适宜培养基上，培养至菌液平台期，然后加入适量的无菌富含NaCl的液体培养基，浸泡菌种，保存于冰箱中。
3.生理盐水保藏：将菌种培养物接种在培养基上，培养至菌液平台期，然后加入生理盐水，将菌液稀释至适宜的浓度，保存于冰箱中。
无论何种保藏方法，都具备相应的优点和限制，具体应根据具体菌种
的特性和实验需求进行选择和调整。
同时，保藏前需确保菌种纯度高，无
杂菌污染，并进行相应的质量控制措施，以保证保藏的可行性和有效性。
菌种保藏的原理
菌种保藏的原理
菌种保藏是指将微生物菌种保存并保持其活性的一种方法。
其原理是通过合适的条件和技术手段，将菌种冻结或保存在特定的培养基中，使其能够在较长时间内存活和维持其基因特性。
首先，选择适当的保藏方法是关键。
常用的方法包括冷冻保藏和低温液氮冷冻保藏。
其中，冷冻保藏是将菌种在-70°C或更
低的温度下保存，通过降低温度来减缓细胞代谢和生长速度，从而延缓细胞死亡的过程。
而低温液氮冷冻保藏是将菌种保存在液氮温度下(-196°C)，这种极低温度可以更好地维持菌种的
稳定性和活性。
其次，要配制适当的保存液或培养基来维持菌种的生长和存活。
保存液中通常需要添加保护剂，如甘油、蔗糖、牛血清等，以防止菌株遭受冰冻或干燥引起的细胞损伤。
培养基的选择需要考虑到菌种的特性和需要，同时应注意维持适当的pH、温度
和氧气供应等环境条件。
最后，严格控制保存条件也是保藏菌种的重要因素之一。
保存菌种的环境应保持干燥、无菌和无污染，避免氧气和水分的进入。
同时，定期检查和维护保存设备的功能，如冰箱或液氮罐的温度稳定性和密封性。
总之，菌种保藏的原理是通过适当的保藏方法、保存液和保存条件来维持菌种的活性和稳定性，以便在需要时能够提取并进行后续研究或应用。
这种保藏方式可以有效地保存和保护珍贵的微生物资源，对于科研、生产和应用等领域有着重要的意义。
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该改良法优点有：
⑴操作过程简化，易于制备，塑料管口不需溶封，不单独抽真空，只需加盖。
⑵塑料管抗破损性极佳；
⑶塑料管体积超小，占用空间少。利于大量制备和保藏菌种；
⑷成本低廉，易于扩大保藏优质菌种，经常以此为生产原始出发菌株，有利控制传代，减少变异，稳定生产。
也可以购买袋装或盒装的超高温灭菌优质脱脂牛奶直接使用，无需再灭菌。还可将脱脂奶粉制成还原乳，配成20%乳液，同上灭菌后使用。
如灭菌后放置时间超过24小时，则应弃用。
6.3菌种准备
菌种要求为筛选得到的优质良种，生长良好的纯种，孢子新鲜，菌龄以处于稳定期或超过对数生长期为好，有利于延长冻干存活期。放线菌斜面种子培养7～10天，生长饱满，孢子丰富，且无菌检查合格。
⑸有利保藏菌种复苏操作。
目前，据说科研单位即大量采用此法保藏菌种，效果较好。但缺点是保藏菌种未处于真空缺氧环境。
2.封管：自制一个带多头的岐管，主管连接真空泵，每个岐管连接都采用可抽真空的耐压硅胶管，能装上多支冷冻管即可。
3.还可用自制简易的冷冻干燥机制备冷冻管：如图：
2、冷冻保藏改进方法（二）
冷冻管由传统的玻璃管改为0.5ml带盖塑料管（维奥即采用此法可保藏大量的锥形塑料管，其材质不详，能耐高温灭菌，盖为按压式）。方法：
菌种冷冻保藏
菌种保藏对于生物制药是一项重要的基础工作。要使菌种长期保藏，且其生物学性状和遗传性质不变，必须选择适宜的载体和更稳定的保藏方法。菌种保藏无论哪种方法，其原理都是创造一个抑制细胞代谢的环境，即低温、干燥、缺氧、缺乏营养，使新陈代谢活动处于高度静止状态。在众多的菌种保存方法中，相对所需保藏环境，冷冻真空干燥法（即冷冻管保藏）是目前保藏方法中应用最为广泛最为有效的一种。
6.7冷冻真空干燥
真空冷冻干燥器有成套的装置出售（长药厂新近成立菌种中心，购有该机）。按其方法操作。冷冻干燥机要先开机预冷30分钟以上，再根据冷冻干燥机的水分蒸发能力，确定一次放入的冷冻管数量。将预冻好的冷冻管及指示管于次日取出迅速放入已预冷的冷冻干燥机的干燥箱内，开动真空泵进行一级真空抽干，待指示管出现由粉红色变全兰色时，再进行二级抽干12h。二级真空干燥既保持菌体细胞干燥度，又避免细胞反复冻结造成保存中菌体死亡，因而能更长期保存菌种，并能提高其存活率，又不会发生菌株的变异
3.3在真空条件下使冰升华，以除去大部分的水分；
3.4封口使菌种始终处于真空缺氧状态；
3.5冷藏创造低温、干燥的保藏环境。
4、材料
菌株：筛选出具有优良性能的菌株。
试剂：2% HCl；脱脂牛奶（20%乳液）、
器具：培养皿、接种环、250 ml三角瓶、高压蒸汽灭菌锅、牛皮纸、酒精喷灯、恒温培养箱、酒精棉球、泪滴型安瓿管、标签、长颈毛细玻璃管、普通棉、冻干机。
6.4制菌悬液
形成孢子的链霉菌要尽可能保存孢子，避免基质菌丝体。每支长好的斜面加5～10ml脱脂牛乳，用接种环将孢子轻轻刮下(注意勿刮起培养基)，或震荡洗下孢子层，制成菌悬液。一般要求制成的孢子浓度达108~1010个，高浓度的菌悬液有利菌种保藏。多年后存活率仍高。
6.5分装
菌悬液制备完成后要尽快分装。分装冷冻管时用灭菌的长颈毛细吸管吸取菌悬液，插入预先的冷冻管球形底部，每支冷冻管分装量约0.2～0.5毫升，分装后向管颈部塞入无菌脱脂棉，以不紧为宜。并贴上标签，同时配制1支1%氯化钴牛奶溶液干燥指示管。分装时间要短，要尽快进入冻结。
确认干燥后，要先开启冷冻室的进气阀，让真空释放，然后停泵，打开冷冻室，将冷冻管取出。为了确保冷冻管内的菌粉不被污染，在冷冻室进气口应装有空气过滤器（如塞灭菌棉）。
6.9封管
将取出的冷冻管，装入抽真空的耐压橡皮歧管上抽气，待真空度抽至1.33Pa（0.01毫米汞拄）后，再采用酒精喷灯火焰于冷冻管颈部棉塞以下熔封处拉细熔封，封管好后，要用高频火花器检查各冷冻管的真空情况。如果冷冻管顶部呈现灰蓝色光，即证明保持着真空。检查时高频电火花器要射向冷冻管的上半部。
由于同时满足菌种保藏三要素，使微生物始终处在低温、干燥、缺氧的条件下，能克服传代、沙土管简单保藏方法的不足，保藏菌种范围广、时间长（保藏期可达数年至十数年）、存活率高、保存过程不易失活和退化等。
3、主要步骤为：
3.1将待保藏菌种的细胞或孢子悬浮于保护剂（如脱脂牛奶）中；
3.2在低温（-45℃以下）下使微生物细胞快速冷冻；
6.10冷冻保藏
封管合格的冷冻管置冰箱-20℃避光处作长期保存。较低的保藏温度(-20～-70℃)对于菌种的长期稳定更好。
7.注意事项
7.1泪滴型安瓿瓶不易进水，清洗时拿少量安瓿瓶慢慢倾斜，使其管内浸入盐酸；用蒸馏水洗时亦如此；塞棉花时注意松紧适宜，利于防止污染及抽真空。
7.2脱脂乳最好在使用头一天配制好灭菌；灭菌需注意温度不能过高，在115℃25min分钟即可；当压力降为0后，应尽快将其拿出，防止高温破坏其成分（灭菌后颜色发生变化的不可用）。
1.真空干燥:取出预冻好的冷冻管，置于如沙土管制备能抽真空的玻璃干燥器内（干燥器四周置冰块或无水乙醇、冰盐水放低温冰箱或普通冰箱冷冻室事先冷至-21℃±），迅速抽真空。其间不断更换冰块或冷冻液。能将该玻璃干燥器置于冰柜抽真空更好。连续抽气6～8h即可。(干燥器盖底接触处需事先均匀涂抹凡士林石腊,以防微小漏气。）
冷冻干燥，时间一般为8～20小时。
6.8干燥的确认和停机
终止干燥时间应根据下列情况判断：①冷冻管内菌悬液呈酥块状或松散片状；②真空度接近空载时的最高值；③选用1～2支对照管，其水份与菌悬液同量，其干燥后视为完结。
确认菌悬液是否已经干燥的另一方法是：一看真空度，二看冷冻室温度。当水分已经蒸发完，即水蒸汽分压接近零时，真空度将达到最高值而不再上升；由于蒸发是一个吸热过程，在整个冷冻干燥过程中冷冻室的温度会维持很低，使菌悬液一直处于冻结状态，当没有水分继续蒸发后，冷冻室不再吸热，温度开始自然上升。
1、冷冻真空干燥保藏Байду номын сангаас理
冷冻真空干燥保藏法可使细胞或孢子水分在冻结状态下直接升华而干燥。冷冻管保藏的三要素：真空——降低水的蒸汽压以加速水分的蒸发；冷冻——使水蒸气冷凝以减轻真空泵负荷，加速干燥；低温——达到进一步加速干燥的目的。
2、冷冻干燥的优点：
对微生物的生物活性影响小；所得干粉疏松，溶解性好；水分含量低。
6.6预冻
因为迅速超低温预冻可保持菌体细胞结构成份原状，利于细菌存活。故将分装好的冷冻管及指示管置于低温冰箱冷冻室-70℃下快速冷冻过夜。无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。也可用液氮。将冷冻管插入冷冻剂，只需冷冻4—5分钟，即可使悬液结冰。也可用液氮预冻。还可用低温冰箱-80℃预冻1～2小时后转入冷冻真空干燥。
6.2制备脱脂乳
取市售新鲜、清洁、无抗生素污染的原牛奶300ml煮沸，在5000 r/min下离心10分钟，除去上层奶皮、油脂，吸取下层奶液，经脱脂棉过滤，如此反复3次脱去脂肪，然后分装入两个250 ml三角瓶中，加棉塞并用牛皮纸包头、扎牢，在115℃25min高压蒸汽灭菌，冷却后做无菌试验，4℃冰箱保存备用。
培养：种子液体培养基、斜面或平板培养基。
5、主要流程
备泪滴型安瓿管→备脱脂乳→制菌悬液→分装→预冻→真空干燥→封管→保藏
6、操作方法
6.1准备安瓿管
选取质地均匀、无毛点、无气泡的中性硬质玻璃专用菌种冷冻管，形状为长颈球形底（亦称泪滴型安瓿管），规格约外径6～7.5mm，长105mm，球部直径9～11mm，壁厚0.6～1.2mm。先用2%盐酸浸泡8～10h，再经自来水冲洗多次，用蒸馏水涮洗2～3次，烘干；管口塞上棉花，用牛皮纸包扎，1.05kg/cm2，121℃灭菌30分钟，取出置37℃孵育24小时，重复灭菌一次，105~110℃烤干（有硅胶指示剂的要使硅胶达到深蓝色），置干燥器内备用。
⑴将塑料管置耐高压盒器内，用双层牛皮纸包好，高压蒸汽121℃20min消毒，放烤箱80℃烤干。
⑵在净化工作台内将脱脂牛奶洗下的孢子悬液用长颈毛细吸管加到塑料管的底部，每只0.2ml左右，切记不要将牛奶污染离心管口。
⑶将加好菌液的塑料管置于管架上放入盒器内置-20℃冰箱预冻，预冻好后将其放置到真空冷冻干燥机干燥箱内冻干。
7.3分装时，需三个人配合，一个吸菌液，另一个塞棉花，还有一个贴标签。
7.4采用酒精喷灯进行封管时，烧的温度要适宜。封管后不要立即放在台面上，以防受冷撕裂。
附图：泪滴型安瓿管长颈毛细玻璃管
多头岐管
附：1、冷冻保藏改进方法（一）
因真空冷冻干燥器价格比较昂贵，通常抗生素生产厂都采用自制的简单易行办法，可达到同样的目的。即：