美天旎临床产品解决方案
蛋白A免疫吸附的原理以及在肾病风湿性疾病的临床应用
系统性红斑狼疮/狼疮肾炎
✓ 典型的自身免疫性疾病，多种自身抗体明确具有致病性。
研究发现多种 自身抗体具有
致病性
[1]Rahman A and Isenber DA. N Engl J Med. 2008;
358(9):929-39. 精品课件
[2] Hohenstein B, et al. Atheroscler Suppl. 2013 Jan;14(1):185-9.
生物亲和吸附
- 基于分子的化学 和生物化学特征
- 亲和层析原理
- 免疫吸附 - 内毒素吸附等
精品课件
免疫吸附的定义
ASFA（American Society for Apheresis，美国血液净化协会）的 定义：
免疫吸附：将患者血浆分离后流经一种器械， 通过该器械的活性配基 （如蛋白A）的特异性结合去除免疫球蛋白的血液净化疗法。
系统性红斑狼疮/狼疮肾炎
✓ 清除血浆中的大量自身抗体，有利于迅速控制和缓解病情。
✓ 免疫吸附（IA）与血浆置换（PE）比较，治疗SLE/LN的疗效和安全性如何？
2016年发表于Autoimmunity Reviews的一篇系统性综述。 - 检索并筛选的文献：PE，15篇，10例以上/篇，共270例（1981-2011年）； IA，14篇，5例以上/篇，共158例（1990-2013年）。 - 高亲和力免疫吸附柱：蛋白A免疫吸附柱，Ig-Therasorb，Globaffin
精品课件
蛋白A免疫吸附的临床应用范围
◆ 自身免疫性疾病
◆ 器官移植
- 术前脱敏（PRA高， ABO不相容等）
- 术后抑制急性排斥反应
- 移植围手术期
（根据文献资料和临床实践）
美天旎公司磁珠分选产品
美天旎公司磁珠分选产品标准化管理处编码[BBX968T-XBB8968-NNJ668-MM9N]美天旎公司MACS(磁珠分选)相关产品一、MACS微珠（MicroBeads）MACS微珠是一种与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒，用于目的细胞或者去除细胞的磁性标记。
微珠直径约有50nm，比细胞小200多倍，体积为细胞的百万分之一，光学显微镜下不可见。
微珠由多聚糖和氧化铁组成，无毒性，对细胞无损伤，可以生物降解。
MACS微珠与流式细胞仪兼容，不会影响细胞的光散射特性；磁性标记只占用2 0－30％的结合位点，不影响细胞的荧光抗体标记。
此外，MACS微珠可以最大限度地避免细胞活化；无需解离磁珠，可以直接进行后续实验：如流式细胞仪分析或分选、细胞培养、分子生物学研究、回输给人或者动物。
MACS微珠主要有三种：直标微珠、间标微珠、多选微珠。
其中间标微珠有抗免疫球蛋白微珠、抗生物素微珠或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠。
多选微珠是专门为分选细胞亚群而研制的一种微珠。
这种微珠通过特殊的方式与抗体偶联，在第一次阳性分选完成后，与细胞结合的多选微珠可以被解离试剂剪切下来，阳性分选的细胞可以进行再次阳性分选或者去除分选。
MACS技术分选的CD8阳性T细胞（箭头所示为磁性结合在细胞表面的微珠）二、MACS分选柱（Separation Column）MACS分选柱是一类填充有不同规格铁珠的塑料容器，铁珠表面有亲水包被，因此不会损伤细胞。
在磁场外MACS分选柱不带有磁性，但是当置于一个永久性磁场—MACS分选器中时，分选柱内的铁珠可以使分选器的磁场增强1000倍，足以滞留仅标记有极少量微珠的目的细胞；磁性标记细胞从分选柱中通过时可以受到均匀的磁力作用，从而提高分选纯度和回收率。
手动操作在30分钟内可完成，自动分选仅需分钟，得到的细胞可立即用于后续实验。
此外，大多数MACS分选柱都是无菌包装，一次性使用，可以满足细胞培养所需的无菌条件。
miltenyi biotec(德国美天旎生物公司)CD133相关专利产品
CD133是近年在干细胞领域研究较为活跃的细胞膜糖蛋白之一,常表达于未成熟的造血干细胞或祖细胞,新近有报道认为它在脑肿瘤、前列腺癌、小鼠的Lewis肺癌、B16黑色素瘤的干细胞中均有表达,已被认为是这些肿瘤干细胞的标志之一。
miltenyi biotec（德国美天旎）拥有CD133全系列的全球专利。
美天旎部分CD133：一.CD133的分子结构人CD133抗原为5次跨膜糖蛋白，目前发现的同源性抗原有CD133_1和CD133_2，其基因分别定位在人类的4号和2号染色体上，分析CD133的基因结构发现，CD133_1基因至少含有27个外显子，CD133_2基因比CD133_1基因少1个27 bp的4号外显子。
CD133_1抗原cDNA全长为3 794 bp，其中5′端有37 bp的非翻译区，3′端有1 159 bp的UTR，中间为2 598 bp的开放阅读框，编码865个氨基酸的蛋白。
转录起始密码子ATG位于38bp 处，ATG之后还有一编码19个氨基酸的信号肽序列,终止密码子位于第2 763位,第3 906核苷酸处有一长20 bp的polyA序列。
CD133_1与CD133_2的相对分子质量分别为120 KD 和112 KD，CD133_2由含856个氨基酸的肽链组成，比CD133_1少9个位于E1区的氨基酸[2]。
在发现人CD133的同年，在小鼠中也发现了CD133_1的同源性抗原并命名为Prominin_1，二者具有60％的相似结构，之后，成功克隆出Prominin_2，与Prominin_1和人CD133分别有29％和26％的相似结构，认为是Prominin_1的同源性抗原。
CD133的功能目前尚不清楚，存在于C端的酪氨酸暗示它可能是通过酪氨酸残基磷酸化作用而发挥级联效应的生长因子受体。
二. CD133阳性的肿瘤干细胞利用某些干细胞标志物与肿瘤细胞标志物相结合的方法确定肿瘤干细胞特异性的标志物，是当前肿瘤干细胞筛选的主要手段。
美天旎临床产品解决方案
造血和内皮干细胞
心脏疾病-CD133
心脏疾病全球死亡第一原因，在US，CVD死亡率比癌症高 35%。主要是冠状动脉疾病。
起源于造血/肿瘤，作为CD34的替代品，许多研究人员证明 CD133有显著的分化潜力，使CD133产品成为组织再生的基本 产品。 在心脏疾病领域使用自体骨髓CD133进行治疗有很大的潜力。 产品： CD133试剂， tubing set LS，CD133 complete LS kit 骨髓体积大于100ml推荐使用Prodigy。 全球细胞治疗中，MSC是心脏疾病首选干细胞来源
Bags, Medium
Vaccination
Patient
Cryopreservation
DC疫苗
CD14系统从2000年开始已有25篇文献，可行性和安全度得到很 好的验证，2011年继续以试剂折扣支持感兴趣的客户。 一个循环同时获得PDC和MDC 还可结合DendricMACS GMP Medium，GMP细胞因子（ IL4,GM-CSF,IL1,IL6,TNF）,GMP抗原，细胞分化袋等 CD1不需要细胞因子，CD304需要IL3
CliniMACS 管道 150* 167-01
20x109
10x109
MACS技术－从实验室到临床
与科研产品的差异： • 欧共体CE认证，SFDA认证 • 全自动免疫磁性细胞分选系统 • 密闭、无菌管道系统（一次性使用） • 分选后的细胞可直接用于临床治疗 • 样本处理极为安全 • 标准化的、可控的、可靠的分选过程
MACS分选原理
• MACS磁珠标记细胞
• 混和细胞通过分选柱
• 去除磁铁
• 阳性细胞洗脱
去除成分
富集成分
美天旎流式
流式细胞仪 Flow Cytometer
流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是以流式细胞仪为检 测手段的一项能快速、精确的对单个细胞(或生物学颗粒)的 理化特性进行多参数定量分析和分选的技术。
流式细胞仪是集细胞与分子生物学、流体力学、激光技术、 光电子技术、计算机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体 技术为一体的一种高科技仪器。
流式细胞仪的发展及商品化
1934 Moldavanl: First try ( 固定式细胞分析-流动式)； 1953 Crosland-Taylor: 鞘流系统(解决难题)； 1956 Coulter原理(血细胞计数器)； 1965 Kamentsky: 分光光度计定量细胞成分和散射光应用； 1967 Kamentsky等设计了细胞分选的装置； 1969 Vandilla等: 第一台荧光检测细胞计(鞘流聚焦、激光)； 1972 斯坦福大学: 研制出荧光激活细胞分选仪(FACS)； 1973 BD公司与斯坦福大学合作，研制生产第一台商用流 式细胞仪-FACS Ⅰ。 1975 Kohler和Milstein: 单克隆抗体技术(促进流式发展)。
如：Annexin V； 如：BudU掺入染色； 如：CFSE； 如：aldefluor；
流式细胞术临床应用（主要血液科、检验科）
淋巴细胞亚型分析(CD3/CD4/CD8/CD19/CD16CD56)； 白血病免疫分型； 白血病微小残留病灶MRD检测； 多发性骨髓瘤MM的检测； 骨髓增生异常综合征MDS的检测； 血红蛋白尿PNH的检测； 造血干细胞移植CD34干细胞检测； 强直性脊柱炎HLA-B27的检测； „„
一、流式细胞术基本原理
流式细胞术（flow cytometry，FCM）： ―细胞在流动的过程中检测细胞的各项指标。
德国美天妮磁珠分选
MACS® 细胞分选策略
• 阳性分选
• 去除分选 • 去除分选后再阳性分选
• 多重分选
MD0044.02
MACS细胞分选策略
1、阳性分选：
• 根据特异性标志分选细胞: 阳性分选是指目的细胞磁性标记
后，作为阳性的标记组分直接分选出来。
• 优点：
》高纯度，尤其是富集稀有的细胞 》高回收率 》操作简便、迅速
MD0044.02
识别DC和DC亚群 New
DC 亚群特异性标志: Blood Dendritic Cell Antigens
Lineage- (CD3, CD14, CD16, CD19, CD20, CD56) HLA-DR+ CD11c+ CD123low/-
BDCA-2/4+ BDCA-1+ BDCA-3+
MD0044.02
MACS® 技术分选与分析功能性T细胞
T细胞分选
T细胞亚群
T细胞功能亚群
抗原特异性 T细胞
Th细胞（ CD4） Tc细胞（ CD8） 调节性 T细胞 (CD4+CD25+) TCRr/d 细胞 (TCRr/d微珠 ) NK/T细胞 (CD56多选微珠＋ CD3微珠 )
NaiveT细胞 (CD45RO阴选 ) 活化 T细胞（ CD69、 CD25、 CD30） 效应 T细胞（ CD27） 记忆 T细胞（ CD45RA阴选、 CD45RO阳选） Th2细胞 (anti-CRTH2)
IFN-r IL-2 IL-4 IL-10 TNF-a
MD0044.02
MACS® 细胞因子分泌细胞分析与分选 New
Catch Reagent
德国美天妮磁珠分选
MACS技术 技术
设备与试剂
• MACS分选器
autoMACS分选仪 分选仪
• 9种程序，一机完成所有细胞分选 种程序， 种程序 • 成本低，两个可重复使用的分选 成本低， 周内100次 柱（2周内 次） 周内 • 快速（3－10分钟） 快速（ － 分钟 分钟） •重复性好 重复性好 • 全自动分选，仪器操作简单 全自动分选， • 适用范围广：从少量标本（105） 适用范围广：从少量标本（ 到大量标本（ ），进样量 到大量标本（4X109），进样量 0.5ml-50ml • 8种全血微珠，可以做常见细胞的 种全血微珠， 种全血微珠 全血分选， 全血分选，省去了费时的提取单个 核细胞过程
• 去除分选是磁性标记非目的细胞，并将其从细胞混合物中去 去除分选是磁性标记非目的细胞，
除，即未磁性标记的细胞为目的细胞。 即未磁性标记的细胞为目的细胞。
• 去除分选策略适用范围： 去除分选策略适用范围：
》去除不需要的细胞 缺乏针对目的细胞的特异性抗体（如肿瘤细胞） 》缺乏针对目的细胞的特异性抗体（如肿瘤细胞） 》不需要抗体和目的细胞结合 》需进一步通过阳性选择分选细胞亚群
MD0347.01
MACS® 磁性分选
MACS微珠进行 微珠进行 磁性标记
洗脱阳性分 选的细胞
未标记的细胞 先行流出
MD0651.01
分选前标本制备： 分选前标本制备：过滤
.02
MACS 技术
设备与试剂
» MACS微珠 微珠 » MACS分选柱 MACS分选柱 » MACS 分选器 » 详细分选方案 详细分选方案*
MD0197.02
MACS技术 技术
设备与试剂
• MACS微珠： 微珠： 微珠
MACS 微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺 磁化微粒，可用于目的细胞的磁性标记。 磁化微粒，可用于目的细胞的磁性标记。
美天旎细胞治疗全线-130723
细胞特异性的免 疫磁性标记试剂
管道
Mo-DC culture
5~7 ds
2 ds
美天旎DC细胞治疗方案
GM-CSF 1000 IU/mL IL-4 1000 IU/mL
流式细胞检测CD11c， CD40 ，CD80，CD83，CD86
IL-6 1000 IU/mL TNFα 1100 IU/mL IL-1β 1900 IU/mL PGE2 1 µg/mL
某些不适合手术、不能耐受放化疗的中晚期癌症
非T细胞相关的白血病和淋巴瘤
乙型肝炎，丙型肝炎，慢性寄生虫感染等
对于手术、放化疗或造血干细胞移植后患者体内微小残留病灶的清除， 防止癌细胞扩散和复发
T细胞相关淋巴瘤和白血病；器官移植后，长期使用免疫抑制药物或正 在使用免疫抑制药物的患者；自身免疫病患者
美天旎产品在CIK细胞治疗中的应用
NK治疗简介 NK（Natural Killer）来源尚不清楚，体外实验
表明，胸腺细胞在体外IL-2、 IL-12、IL-15、 IFN-α、TNF-α等细胞因子存在条件下培养也可 诱导出NK细胞。
NK细胞表面标记物为：CD3- CD56+
NK 细胞杀死肿瘤细胞特点
广泛识别肿瘤细胞，自然杀伤活性无MHC限制 分泌穿孔素及肿瘤坏死因子 起效快、杀伤能力强
重悬NK细胞 ，调整 浓度2×10e6
过夜培养(1000 U/ml IL-2)。用 5% HSA溶液洗
涤两次，重悬浮 细胞
NK细胞终产品 ，调整 细胞浓度2×10e7，回输人 体, 注射Hi-Cy/Flu，连续14
天注射IL-21 （1.75*10e6 IU/m2）
流式鉴定表型（CD3,CD4,CD8,CD56，CD25）
如何处理成理想的单细胞悬液
有了美天旎，我反手就是一批理想的单细胞悬液！对大家来说，实体组织处理成单细胞悬液最难的是什么？目前，把实体组织样本处理成单细胞悬液，最长用的两大方法：物理法：简单粗暴！可以用剪刀剪、昂贵的研磨器磨，但是在实际工作过程中，我们会发现这种方法目前并不是万能的，有些组织（比如：骨骼神经皮肤等）还是需要配合酶消化。
酶消化法：就涉及到选择什么酶，用多少浓度，消化多少时间，如何中止等等细节，考虑这些问题也耗费了我们大量的时间和精力。
但是有了美天旎全自动组织处理器，情况就不一样了！仪器全称是：GentleMACS Octo Dissociator with Heaters中文名称是：全自动八通道加热组织处理器使用Gentle能够能够温和、高效的解离实体组织，如肝脏、肺脏、脑、肿瘤、拟胚体、骨骼肌、神经组织、脐带、皮肤等，得到完美的单细胞悬液！50多种程序供您选择！#样本制备#小助手一：组织解离试剂盒预先滴定好浓度的酶溶液及酶解时间，即用型组织解离试剂盒让您的实验更高效、可重复性更高；同时，酶溶液已经实验验证，可以很好地保护细胞表面抗原，因此得到的单细胞活力高、表位完整，不影响下游流式等实验。
现有肿瘤组织解离试剂盒、新生鼠心脏解离试剂盒、骨骼肌、皮肤、脑、神经球等近30种组织解离试剂盒，常见组织均可找到相应的解离试剂盒。
#样本制备#小助手二：细胞滤器用于去除组织解离后的细胞团块和碎片；三种规格（30µm，70µm和100µm）；有排气槽的设计，因此不会出现液体俘获和溢出，适用于不同规格的试管和分选柱。
#样本制备#小助手三：混悬仪✧自带充电电池，运行不依附电源插头，能独立的运行于各种环境中：既能使用在普通的实验台上，也能穿梭于冰箱与孵箱之间（2 –42℃）！✧使用灵活：配有不同的试管架，可放置不同规格的管子：0.5 –50 mL。
✧转速可调：机器自设三种旋转速度，间隔时间亦可调，可以温和、缓慢的旋转，有利于脆弱样本的混悬。
世界著名抗体公司
世界著名抗体公司Santa公司是世界上最大的抗体生产厂家，目前可提供的抗体种类多达两万多种，几乎覆盖了目前生命科学研究的各个最新领域，其每种抗体又有多个克隆可以选择，还提供一些对应蛋白标准品及相关产品，如ABC试剂盒，各种标记二抗，Western试剂盒，蛋白分子量Marker，核抽提物等，为免疫学研究工作提供了极大的方便。
Abcam公司是世界有名的抗体王国，以优质、齐全的产品、完善的网络支持功能和强大的技术支持队伍得到全球客户的认可和赞誉。
并在2004年获得了对于生物界公司不可多得的英女王奖，拥有很好的知名度和口碑。
AbMART全球抗体生产行业的新贵，在全球首推低价格“保证使用成功”的抗体定制服务，保证定制的抗体能在ELISA, Western, IP, IF/ICC等各种实验中成功使用。
建立抗体研发和生产流水线，实现低价格和高速度提供各种抗体，做抗体行业的沃尔玛。
AbMART（艾比玛特）致力于抗体的工业化，目标是设立抗体定制服务的行业标准，是目前全球最大的抗体制备公司之一。
R&D公司于1976年成立于美国，一直致力于各种细胞因子及其相关分子的生产研发，其生产的各种ELISA试剂盒、重组因子及抗体以其卓越的品质赢得了世界各国科研及临床诊断机构的青睐。
是全世界最大的细胞因子公司。
该公司产品丰富涵盖了百余种细胞因子类ELISA试剂盒, 重组细胞因子类蛋白（209种之多）及相关的多达250余种单克隆、多克隆抗体；细胞凋亡、Caspase及胶原酶系列以及细胞因子类等热点领域。
Proteintech GroupProteintech Group, Inc(武汉三鹰生物技术有限公司)是一家由留学人员和专业管理人员组成的新型生物技术外资企业，成立于2000年11月，2002年5月被认定为高新技术企业，目前是中国大陆最大的抗体公司。
公司总部和实验室设在武汉东湖新技术开发区关东科技园内，在美国和英国拥有自己的销售网络和网站（w ）。
从人组织样本制备单细胞悬液文献美天旎官方网站客户反馈
h_tumor_01；
Demo 反馈：每个 C 管最多处理 4g 组织（解离前先剪成小块）； 运行程序 m_lung_01；胶原酶 II 消 化 45 分 钟 ； 运 行 程 序 m_lung_02。 Demo 反 馈 ： 运 行 程 序 m_spleen_02；0.1%胰酶消化 30 分钟。 Demo 反馈：5 ml 缓冲液；500 mg 组织；运行 2 次 program C
and without cystic fibrosis. (2011)
J.Cyst. Fibros.
美天旎官方网站：客户反馈方案
颈部组织
鼻息肉和鼻甲 胎盘 视网膜 唾液腺 皮肤
脾脏 滑膜 胸腺
颈部组织
鼻息肉和鼻甲 胎盘
Demo 反馈：采用“人肿瘤解离试 剂盒”的标准方案 2.2.3 部分-包 括 gentleMACS 程 序 及顺 序 ： h_tumor_01 ； h_tumor_01 ； h_tumor_01；
参考科学海报：分离与冻存人脐 带 Wharton’s Jelly 单个核细胞的 新方法，其中含有间充质干细胞 和脐带血管细胞，还包括内皮前 体细胞，用于细胞治疗 产品说明书：人肿瘤解离试剂盒
应用说明：从人乳腺肿瘤中分离 肿瘤干细胞
产品说明书：人肿瘤解离试剂盒
客户报告：从移植的结肠肿瘤组 织中分离肿瘤细胞
DC 细胞 白细胞，成纤维 细胞
Demo 反馈：1 个胸腺加入 3 ml 分 选 CD22+ 细
RPMI 1640 + 1% FCS ； 运 行 胞（EBV 诱导的
m_spleen_01 程序，胎盘蓝染色 B 淋巴瘤细胞
检测细胞活性。
白血病病人）
Demo 反馈：Program C；胶原酶 pTEC
全自动温和组织处理器 美天旎 工作原理
全自动温和组织处理器美天旎工作原理The automatic gentle tissue processor by Meitianyi utilizes advanced technology to efficiently process tissue samples for research and medical purposes. 这款美天旎的全自动温和组织处理器利用先进技术，高效地处理组织样本，用于研究和医疗目的。
This innovative machine is designed to streamline the tissue handling process, reducing the risk of contamination and human error. 这台创新型机器旨在简化组织处理过程，降低污染和人为错误的风险。
With its precision and reliability, the Meitianyi automatic gentle tissue processor is an essential tool for laboratories and medical facilities. 凭借其精准性和可靠性，美天旎全自动温和组织处理器是实验室和医疗机构的必备工具。
One of the key features of the automatic gentle tissue processor is its ability to handle multiple samples simultaneously, increasing efficiency and productivity. 全自动温和组织处理器的一个关键特性是它可以同时处理多个样本，提高了效率和生产力。
This is particularly beneficial for laboratories that deal with high volumes of tissue samples on a regular basis. 这对那些需要定期处理大量组织样本的实验室尤其有益。
MACS技术介绍
高功率，水 冷
需要调整 488nm、 633nm、 407nm 模拟 否 7
数据处理模 式 脱机补偿 最多检测FL
分选速度
300/sec
no
70000/sec
10000/sec
MACS分选与 FACS分选比较 MACS优势1
• 快速 》FACS分选时间: 》MACS® 分选时间: （FACS Aria） (autoMACS™ 分选仪) 每秒钟获取70 000 细胞 平均每秒钟处理107 细胞 108 cells => 2 3 min 108 cells => 5 min 109 cells => 4 h 109 cells => 5 min （没有包括操作人员调节 （无需调节机器） 机器时间） • 操作简单、无需专人操作，可随时使用 • 分选后细胞活性好 • 无菌分选：仪器小巧，可以进操净台，耐受紫外线照射， 消毒方便，耗材为无菌性包装
• 在没有直接标记微珠可选时
• 使用自备抗体或配体的磁性分选中
• 分选或去除用多个抗体混合物标记的多种细胞
• 分选稀有细胞和抗原弱表达的细胞
• 分选标记蛋白质
MACS分选柱
填充有磁性铁珠，有亲水 包被，对细胞柔和。
在分选器中产生高梯度 磁场，滞留带有微珠磁 性标记的细胞
MACS分选柱
• 能进行完全的清洗 • 单独无菌包装，便于 无菌条件使用 • 可用于分选多种细胞 及亚细胞物质、 细菌、病毒、mRNA 和蛋白质
美天旎中国
• 2001年设立中国代表处，目前美天旎中国总部位于上海， 在北京、广州设有办事处。 • 美天旎中国目前有近15名员工，分属销售与产品推广部， 市场与技术服务部，客服与物流部。 • 美天旎中国合作伙伴 总进口商:中仪英斯泰克进出口公司 代理商： 上海强智生物技术有限公司 上海优宁维生物科技有限公司 北京利文商贸有限公司
CliniMACS介绍
美天旎细胞治疗平台CliniMACS系统简介第一部分、德国美天旎生物技术有限公司及MACS细胞分离技术介绍第二部分、CliniMACS系统在临床细胞治疗中的应用一、CliniMACS细胞分选仪及其配件介绍二、CliniMACS CD34系统的安全性德国美天旎生物技术有限公司上海市仙霞路319号远东国际广场A栋2301室200051电话：（86 21）62351005传真：（86 21）62350953服务热线：800 820 2606北京市东城区朝阳门内大街银河SOHO D座50723室100010电话：（86 10）64107101传真：（86 10）64100990第一部分德国美天旎生物技术有限公司及MACS细胞分离技术介绍德国美天旎生物技术有限公司（Miltenyi Biotec GmbH）是一个以细胞分选技术为主、拥有多样化产品的生物技术公司。
开发研制并销售世界上最先进的细胞分选、细胞生物学、相关分子生物学产品和技术，尤其在干细胞分选、DC细胞分选与分析、细胞因子分泌细胞分选与分析、免疫治疗、再生医学方面占有极大的优势，CD133、BDCA-2（CD303）、BDCA-4（CD304）单抗为我公司专利产品。
我公司总部位于德国科隆，在科隆和德国北部罗斯托克均有cGMP生产机构。
我们的产品有免疫磁珠、特异性细胞及蛋白质或者DNA/RNA分选用的MACS分选设备、单克隆抗体、无菌溶液、基础和特殊培养基、血液/血浆治疗用的生物学吸附剂、LIFE18血浆分离机、流式细胞仪及相关耗材。
MACS技术已成为细胞分选的标准方法，从实验室到临床，从小规模到大规模，从常见细胞到稀有细胞和复杂的细胞亚群，从人类和小鼠细胞到其它种系的细胞，MACS技术提供了可在每个实验室进行高品质细胞分选的方法。
MACS技术原理MACS技术为德国美天旎生物技术有限公司的专利产品，是一种集合了免疫学、细胞生物学、磁力学等知识于一体的高度特异性细胞分选技术，其高度特异性来自抗体对抗原的特异性识别。
德国美天旎
MACS® MACS® Cell Separation Columns
根据不同的分选策略、细胞的大小和多少等条件， 选择不同的柱柱子。 如适合Positive selection的有MS 如适合Positive selection的有MS Columns, LS Columns, and XS Columns ;MScapacity:2×108 ，LS的 ;MScapacity:2× LS的 capacity:2× capacity:2×109, XS的capacity:2×1010；sparate rare cells XS的capacity:2× by using two columns；Large Cell Columns were designed columns； for positive selection of large human or animal cells Depletion，根据你是用kits 还是用Microbeads，抗原 Depletion，根据你是用kits 还是用Microbeads，抗原 表达水平，细胞多少等选择。
MACS® MACS® Separators
MACS® Separators are designed for fast and easy cell separation in combination with MACS Columns and MACS MicroBeads. They contain strong permanent magnets to induce a highhighgradient magnetic field within the MACS Columns – strong enough to retain cells labeled with minimal amounts of MACS MicroBeads.
CliniMACS临床
单核细胞来源的 DCs
CD14+ 单核细胞分选
富集前
23 %
富集后
99 %
CD15-PE
CD15-PE
DC的种类
• 单核细胞来源的DCs - MoDC (CD14)
PBMCs中的频度5－10％
• 髓血细胞来源的DCs – mDC1(BDCA-1)
PBMCs中的频度0.29％(0.09-0.42%)
CABG + TMLR + CD133+ 干细胞
手术干细胞操作流程
干细胞处理 Operating room I 外科手术 Operating room II
决定CD133+ 细胞灌注
骨髓采集Biblioteka 0 min胸阔切开术
收集、洗涤
孵育、洗涤 CliniMACS® 分选
60 min
移植物收集
ECC
90 min 心肌再灌注
CliniMACS 构造
• 2. 无菌管道系统: 一次性使用 滴流管 避免气体激活 液体感受器 预选柱 机械性过滤 非特异性的细胞 分选柱
CliniMACS管道系统
• CliniMACS TS: 60 x 109 （5min/ml) • CliniMACS LS TS: 120 x 109 （10min/ml) • DTS:120 x 109(标记40 x 109)
造血系统恶性肿瘤（自体、异体移植） 自身免疫性疾病 实体瘤 遗传、代谢性疾病
CliniMACS CD133试剂
• • • • 阳性分选CD133＋干细胞 一支试剂最多标记6 x 108 CD133+细胞 应用： 1.造血系统方面：
自体、异体干细胞移植（同CD34）
开始比拼免疫力-NK细胞体外培养
开始比拼免疫力|NK细胞体外培养这几年，随着疫情的逐渐进展，越来越多的人意识到了免疫力才是维持健康的最后秘诀。
进入到后疫情时代，大家开头要比拼免疫力了！而比拼免疫力，简洁来讲就是比拼“免疫细胞”。
目前全球各地免疫细胞治疗及干细胞治疗临床讨论如火如茶的进展，如CAR-T、CAR-NK、TIL、HSC、MSC等等，健康管理和科学讨论已经进入免疫细胞的时代。
人体内有大量免疫细胞存在，重要的免疫细胞有NK细胞、T细胞、B细胞、吞噬细胞等。
它们对细菌、病毒以及癌细胞具有强大的杀伤力，同时它们还奉行着“非我族类统统杀掉”的原则。
当免疫细胞毁灭入侵的有害物时(即排异反应)，人才会不生病。
当免疫细胞发挥爱护自身组织功能和结构稳定，清除年轻细胞，即可以达到抗年轻的目的。
NK细胞NK细胞又称自然杀伤细胞(natural killer cell，NK细胞)，是机体内紧要的免疫细胞。
NK细胞形态上属于大颗粒淋巴细胞，来源于骨髓，是除T细胞、B细胞之外的第三大类淋巴细胞，约占血液中全部免疫细胞(白细胞数量)的15%，属于自然免疫系统的核心细胞，重要分布于外周血、肝脏和脾脏。
NK细胞是体内负责杀伤老化、受病毒感染、肿瘤等特别细胞的最重要“战士”。
并且，在面对癌细胞时，NK细胞不需要其他细胞的激活与致敏，便能直接识别并杀死癌细胞，因此，也被称为人体抗癌第一道防线。
介绍完NK细胞的紧要性，接下来我们来聊聊，NK细胞疗法临床讨论中最紧要的步骤之一，NK细胞体外培育。
NK MACS Medium专为NK细胞的激活扩增而研发美天旎NK MACS培育基供应了从各种来源，包括外周血单个核细胞(PBMCs)或分别的NK细胞，激活和扩增人类自然杀伤（NK）细胞的解决方案。
配方成分明确的NK MACS 培育基能够体外培育扩增功能齐全的NK细胞，为任何下游应用做好筹备。
优越、高效的NK细胞扩增无异物添加(Xeno-Free)削减非NK细胞生长，如B有科研级和GMP级产品供选择01 从PBMC直接扩增NK细胞NK MACS Medium + 5%human AB serum+ IL-2 (500IU/ml)NK细胞扩增效率(from PBMCs)外周血单个核细胞 (PBMCs) (n=3)，辅以5%AB血清和500IU/mL 的IL-2，NK MACS02 分选后的NK细胞扩增NK MACS Medium + 5%human AB serum+ IL-2 (500IU/ml)NK细胞扩增效率分别的NK细胞 (n=3)，辅以5% AB血清和500 IU/mL的IL-2，NK MACS03 培育9天后NK细胞的细胞杀伤功能检测NK MACS Medium + 5%human AB serum+ IL-2 (500IU/ml)NK细胞从（A）PBMCs或（B）分别的NK细胞开头在NK MACS如需询问相关产品请联系东锐科技。
美天旎细胞因子分泌型细胞检测试剂盒
美天旎细胞因子分泌型细胞检测系列试剂盒采用独特的技术
设计，能检测分泌细胞因子的白细胞的比例，而且无需固定、破膜
的步骤，所以标记的细胞是活细胞，检测后的细胞仍可用于下游的
细胞分选和培养等实验。
原理及操作步骤示意图：
技术原理：
1、多克隆刺激剂刺激T细胞3-16h，T细胞活化后大量分泌细胞因子；
2、捕获试剂与细胞共孵育，捕获试剂的一端耦联CD45抗体，因此，所有白细胞均能被捕获试剂标记，而捕获试剂另一端耦联细胞因子特异性抗体；
3、抗原特异性T细胞分泌的细胞因子被捕获试剂结合并捕获；
4、加入细胞因子特异性检测试剂，耦联荧光素的细胞因子抗体即可与细胞因子、捕获试剂形成带荧光的三明治复合物，即可用于流式检测。
技术优势：
1、无需固定破膜步骤，检测后的细胞为活细胞，可以用于细胞因子分泌型细胞的分选和培养。
2、美天旎专利技术，操作简单，可重复性好。
目前，美天旎已有多种细胞因子分泌型细胞检测试剂盒，如：
另有更多细胞因子分泌型细胞分选、检测试剂盒，您可以通过以下方式了解：上海优宁维生物科技有限公司
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德国美天旎临床解决方案
美天旎的完整解决平台–细胞治疗的首选工具
MACS GMP Antibodies CliniMACS and Reagents MACS GMP Antigens MACS GMP Cytokines MACS GMP Media MACS culture bag
细胞治疗领域介绍 3
自身免疫病 - 自体干细胞移植
主要适应症-CD34分选
1. 严重系统性硬化 2. 系统性红斑狼疮 3. 克隆氏病
严重的自身免疫病疾病用SCT治疗是必须的。
重要的临床试验 - ASTIS和ASSIST
ASTIS（系统性硬化）
入选150例患者已经完成，2010年10月完成最后一例入选 2011年发表安全性检测报告 2012年发表有效性报告
肿瘤，感染和耐受包括下列产品
细胞因子捕获系统（IFN-r）用于分离AgT CD8用于富集TIL
CD56,CD3,CD19用于富集NK细胞
CD14用于富集MoDC细胞 CD1c,CD304用于富集BDC，分别为MDC和PDC
CD25用于富集Treg细胞，有时也用CD8,CD19
预防复发，减轻感染，帮助抑制，支持免疫重建，从GVT中分离GvHD
CD45R去除系统：去除naiveT细胞，预防GvHD Treg细胞：CD25，减轻免疫耐受，预防GvHD，也可结合TexMACS GMP Treg
medium和GMP ExpAct Treg kit扩增Treg细胞。
DC疫苗和CCS：CD14，预防移植后的感染
CliniMACS® 富集管道系统
临床用
科研用（临床前期）
Key Features
管道 REF no. 标记细胞 总细胞数 (WBC)
CliniMACS 管道 161-01 0.6x109 60x109
CliniMACS LS管道 162-01 1.2x109 120x109
CliniMACS 管道 600* 166-01
恶性血液病的免疫治疗
NK细胞DLI：AML，CD3去除后CD56富集，非常有创新的概念，安全，直接。
作为移植物抗肿瘤（GVT）的方法进行推进
MSC：2011年新产品,CD271-microbeads,支持造血和免疫调节功能，结合CD34在
MSC-HSC共移植中的应用。
CD4 DLI/CD8 去除DLI
细胞治疗领域介绍
1，血液系统和移植工程 2，肿瘤 3，自身免疫病，SLE，系统性硬化 4，再生疾病，脊髓损伤，PAD等
细胞治疗领域介绍 --1
移植工程和血液
GE/血液 – 产品
移植物处理
CliniMACS CD34试剂
– 包括单一试剂和复合试剂
CliniMACS CD3/CD19试剂
平台也可用GMP产品：培养基，细胞因子，激活扩增 试剂和抗原，这些产品可以无缝结合prodigy可以优化 细胞治疗效果。
采用肿瘤抗原特异性T细胞治疗-CCS
分离和产生抗原特异性IFN-r细胞，用于异基因移植后处理病毒感染 ，同样的机理，也可用于产生肿瘤特异性T细胞，快速富集临床规模 的肿瘤特异性CD4和CD8。 CCS富集T细胞病毒抗原：针对病毒导致的肿瘤。使用pepTivator产 品 CCS富集T细胞肿瘤相关抗原（TAA），直接从病人分离或用供着来 源的naï ve T细胞，我们平台的第一个肿瘤抗原是WT1，在各种白血 病和实体瘤中都高表达。
AML病人进行TCD可以降低急慢性GVHD，提高 生存率，而且不会带来高复发率。
原理：相合供者移植中的TCD
半相合移植：TCD是必需的
预防GVHD和PTLD
异基因干细胞移植是AML的最佳选择
首次CR进行异基因干细胞移植可改善复发率和
总生存率（中、低危AML）
由于移植相关死亡率和GVHD，HSCT是受限的
Cell activation, expansion and differentiation
CryoMACS Freezing Bags and DMSO
Cryopreservation
Leukapheresis
Cell selection
Quality control
Administration to patient
磁性分选单位产生永久磁场
计算机软件系统 靶细胞收集袋 废液和非靶细胞袋容器仓
原理： MACS微珠
超顺磁葡聚糖微球 胶状基质 (d50nm) 特异性的鼠抗人 单克隆抗体共价 结合在磁珠上
MACS微珠
直接标记
细胞特异性抗原
生物素分子 右旋糖酐铁微粒直接 包被在抗体上
间接标记右旋糖酐铁微粒直接 包在抗体上Cell culture bags
Donor / patient
Cell differentiation bags
德国美天旎临床产品
CliniMACS仪器及配套试剂
冻存袋和冻存液
GMP级别产品：Ab，Ag，细胞因子，培养 基，培养袋
血浆置换系列 磁性细胞全自动化处理 CliniMACS Prodigy
细胞治疗领域介绍 2
肿瘤
肿瘤应用
终末期黑色素瘤，前列腺癌，肾细胞癌 大多数临床试验用的是MoDC 2010年5月DC疫苗作为第一个细胞治疗药被FDA 批准。
DC疫苗：调节病人自身免疫系统，可以调节 免疫反应和维持免疫记忆。
CD14用于富集MoDC细胞
CD1c,CD304用于富集BDC，分别为MDC和PDC
– 所有试验结果2012年发布
下一步：
– 安全性检测期间：20例临床机制研究
ASSIST（ＳＬＥ）：
2009年Q2开始
– 已入选1/30例患者
2013年Q1结束
自身免疫病 – 处理方法
克隆氏病：
皮质类固醇激素 免疫抑制剂 抗血清 TNF阻断剂
SLE
免疫抑制剂
CliniMACS 管道 150* 167-01
20x109
10x109
MACS技术－从实验室到临床
与科研产品的差异： • 欧共体CE认证，SFDA认证 • 全自动免疫磁性细胞分选系统 • 密闭、无菌管道系统（一次性使用） • 分选后的细胞可直接用于临床治疗 • 样本处理极为安全 • 标准化的、可控的、可靠的分选过程
系统性硬化
免疫抑制剂 细胞抑制剂
严重病例可能这些方法都会失败， 而SCT可能会延缓扩散或甚至治 愈，数据表明年轻的病人可能会 受益于自体SCT。
皮质醇
免疫球蛋白
细胞治疗领域介绍 4
组织再生
主要适应症CD34/CD133/CD271
神经再生 肝脏再生 外周动脉闭塞性疾病 SCI（脊髓损伤） 肌营养不良 中风 心脏病
造血和内皮干细胞
心脏疾病-CD133
心脏疾病全球死亡第一原因，在US，CVD死亡率比癌症高 35%。主要是冠状动脉疾病。
起源于造血/肿瘤，作为CD34的替代品，许多研究人员证明 CD133有显著的分化潜力，使CD133产品成为组织再生的基本 产品。 在心脏疾病领域使用自体骨髓CD133进行治疗有很大的潜力。 产品： CD133试剂， tubing set LS，CD133 complete LS kit 骨髓体积大于100ml推荐使用Prodigy。 全球细胞治疗中，MSC是心脏疾病首选干细胞来源
Bags, Medium
Vaccination
Patient
Cryopreservation
DC疫苗
CD14系统从2000年开始已有25篇文献，可行性和安全度得到很 好的验证，2011年继续以试剂折扣支持感兴趣的客户。 一个循环同时获得PDC和MDC 还可结合DendricMACS GMP Medium，GMP细胞因子（ IL4,GM-CSF,IL1,IL6,TNF）,GMP抗原，细胞分化袋等 CD1不需要细胞因子，CD304需要IL3
CliniMACS仪器及配套试剂
CliniMACS仪器及配套试剂介绍 细胞治疗领域介绍：
1，血液系统和移植工程 2，肿瘤 3，自身免疫病，SLE，系统性硬化 4，再生疾病，脊髓损伤，PAD等
CliniMACSplus 免疫磁性分选技术
缓冲液袋 细胞准备袋
挤压阀控制液体流动
蠕动泵控制管道中的液体流向
MACS分选原理
• MACS磁珠标记细胞
• 混和细胞通过分选柱
• 去除磁铁
• 阳性细胞洗脱
去除成分
富集成分
CliniMACS® 系统
CliniMACS Plus® 仪器 (含各种不同分选 程序的软件)
细胞特异性的免 疫磁性标记试剂
管道
Technology
Components MicroBeads Column Instrument Principle Tubing Sets Software Reagents
骨髓采集
髂后上棘抽取骨髓60－200ml
CABG + TMLR + CD133+ 细胞
激光打孔：心肌内 CD133+ 干细胞注射
肝脏疾病
对肝脏疾病的兴趣不断增加，移植用骨髓单核细胞，CD34阳选， MSCs，胚胎肝。。。大多数研究者感兴趣在肝硬化，少数在肝癌
有一些CD133治疗肝硬化的文献 此外CD133也用在肝癌
研究用产品
ISO13485质量体系 控制下生产
CE认证的临床产品 （CliniMACSplus）
Technology
Components MicroBeads Column Instrument Principle Tubing Sets Software Reagents