单增李斯特菌使用说明
单增李斯特菌PFGE快速分子分型实验室标准操作程序
单增李斯特菌PFGE分型实验室标准操作程序生物安全警示：目前李斯特菌感染剂量尚不确定，取决于宿主的易感性。
高风险感染群体为孕妇、婴儿、免疫力低下病人和老人。
所以，接触李斯特菌的实验人员必须意识到潜在的风险并且注意相关的建议。
Day 0受试培养物单菌落划线于脑心浸液平板，于37℃培养14-18 h。
建议利用螺口管保存菌种一支，并且用同一接种环划线平板。
确保需要时可以对同一培养物进行试验。
Day 11.开启水浴摇床（54-55℃）、水浴箱（55-60℃）和分光光度计。
2.准备TE buffer（10 mM Tris:1 mM EDTA，pH 8.0），配方如下：10 ml 1 M Tris，pH 8.0，2 mL 0.5 M EDTA，pH 8.0，稀释于1000 mL无菌超纯水（临床实验室试剂用水）。
注意：TE buffer用于SeaKem 琼脂糖胶栓制备、悬浮细胞和洗涤裂解的PFGE胶栓。
3.准备溶菌酶（sigma L7651）母液（20 mg/mL），配方如下：a.称量100 mg溶菌酶（器皿放置于冰上保持低温）b.加入5 mL TE buffer，涡旋混合。
c.分装（250 μL）于eppendorf管中，冷冻备用。
4.TE buffer (10 mM Tris:1 mM EDTA，pH 8.0)制备1% SeaKem 金琼脂糖+1%SDS，配方如下：a.20% SDS储液置于55-60℃水浴箱预热；b.称取0.25 g SeaKem 金琼脂糖，加入25 ml TE buffer，温和混匀，微波加热至完全溶解；c.加入2.5 ml 10% SDS，混匀，置于55-60℃水浴箱中备用。
5.将培养物编号标记于Falcon2054管，吸取2 mL TE buffer于管中，用灭菌棉签或接种环刮去培养物，轻轻转动接种环（棉签）将培养物悬浮于TE buffer 中，尽量避免产生气泡。
注意：细胞悬浮液体积大小取决于细胞浊度测定仪的使用体积。
单核细胞增生李斯特氏菌检验操作规程
单核细胞增生李斯特氏菌测定1 提示1.1 注意无菌操作。
2目的用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）的测定3检测依据《食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌测定（GB 4789.30-2016）》。
4适用范围本法适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的测定。
5试验材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：5.1冰箱。
5.2 恒温培养箱。
5.3 均质器。
5.4 显微镜。
5.5 电子天平。
5.6 锥形瓶。
5.7 无菌吸管、微量移液器及吸头。
5.8 无菌平皿。
5.9 无菌试管。
5.10 离心管。
5.11 无菌注射器。
5.12 单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)ATCC19111或CMCC54004,或其他等效标准菌株。
5.13 英诺克李斯特氏菌(Listeriainnocua)ATCC33090,或其他等效标准菌株。
5.14 伊氏李斯特氏菌(Listeriaivanovii)ATCC19119,或其他等效标准菌株。
5.15 斯氏李斯特氏菌(Listeriaseeligeri)ATCC35967,或其他等效标准菌株。
5.16 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)ATCC25923或其他产β-溶血环金5.17 马红球菌(Rhodococcusequi)ATCC6939或NCTC1621,或其他等效标准菌株。
5.18 小白鼠:ICR体重18g～22g。
5.19 全自动微生物生化鉴定系统。
6.培养基和试剂6.1 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤(TSB-YE):。
6.2 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂(TSA-YE):。
6.3 李氏增菌肉汤LB(LB1,LB2):。
6.4 1%盐酸吖啶黄(acriflavineHCl)溶液:。
6.5 1%萘啶酮酸钠盐(naladixicacid)溶液:。
微生物检验实验室李斯特菌属标准操作规程
微生物检验实验室李斯特菌属标准操作规程1.概述李斯特菌属包括产单核细胞李斯特菌、伊氏李斯特菌、斯氏李斯特菌等菌种，其中产单核细胞李斯特菌对人和动物致病。
2.标本类型血液、脑脊液、尿液、痰、穿刺液、脓液标本。
3.鉴定3.1形态与染色：革兰阳性小杆菌，大小为（0.4~0.5um）×(1~2um),直或微弯，常呈V字形成对排列，偶尔可见双球状；无芽胞，无荚膜，在22~25℃形成周鞭毛，有动力，37℃时鞭毛很少或无。
3.2培养特性：在血琼脂平板上形成较小、圆形、光滑而有狭窄β溶血环的菌落；在液体培养基中呈均匀浑浊生长；在半固体培养基中，动力自穿刺线向四周蔓延生长，呈倒伞状。
3.3生化反应：触酶试验阳性；分解葡萄糖、鼠李糖、水杨苷，不分解蔗糖、木糖、甘露醇；吲哚、尿素酶和硝酸盐还原试验阴性，甲基红、VP和CAMP试验阳性。
3.4鉴别要点：3.4.1本菌特征：革兰阳性短杆菌，菌落较小，有狭窄的℃时无动力；触酶试验阳性，37℃时有动力，25溶血环；β．分解葡萄糖、水杨苷，不分解甘露醇。
3.4.2 与肠球菌的鉴别本菌具有耐盐、耐碱、耐胆汁等特点，易误为粪肠球菌，两者可用触酶试验加以鉴别。
3.4.3 与无乳链球菌的鉴别本菌也可能因培养条件不同而呈链状，37℃培养往往无动力，CAMP试验阳性，常误为B 群链球菌；链球菌触酶试验阴性可与之鉴别。
3.5 操作步骤3.5.1 涂片染色观察菌落特征，在血平板上挑取可以菌落，涂片染色镜检。
3.5.2 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》3.5.3 鉴定从血平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。
4.药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件.5.质量控制参见《质量控制程序》6.检验结果解释与分析本菌容易被认为是污染的杂菌（类白喉杆菌）而丢弃。
幼龄培养呈革兰阳性，48h后多转为革兰阴性。
因此当遇到25℃培养有动力的杆菌，而按照革兰阴性杆菌鉴定不符时，应考虑到李斯特菌的可能。
(十)-单核细胞增生李斯特氏菌检验标准操作程序
DBS22 DBS22/019—2012吉林省食品安全地方标准食品中单核细胞增生李斯特菌的定量检测2013年发布 2013年实施吉林省卫生厅发布前言本标准根据GB/T1。
1—2000《标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写规则》的要求编写.本标准分为两种检测方法：第一法:单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法；第二法：MPN计数法。
其中第一法适用于污染较严重的食品，第二法适用于单核细胞增生李斯特氏菌含量较低而杂菌含量较高的食品。
本标准负责起草单位：吉林省疾病预防控制中心、长春市疾病预防控制中心.本标准负责起草人:刘桂华、龚云伟、李月婷、赵薇吉林省食品安全地方标准食品中单核细胞增生李斯特菌的定量检测1 范围本操作程序规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)的定量检验方法.本操作程序适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量检验。
2 设备和材料除微生物实验室常规无菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2。
1 冰箱：2℃～5℃和—18℃.2.2 恒温培养箱：30℃±1℃、36℃±1℃.2.3 均质器。
2.4 显微镜:10×～100×.2。
5 电子天平:感量0。
1 g。
2.6 锥形瓶:100 mL、500 mL。
2。
7 无菌吸管:1 mL（具0。
01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）。
2.8 无菌平皿:直径90 mm。
2。
9 无菌试管：16 mm×160 mm.。
2。
10 离心管:30 mm×100 mm.2。
11 无菌注射器:1 mL。
2。
12 金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）。
2.13 马红球菌（Rhodococcus equi）。
2。
14 全自动微生物生化鉴定系统。
3 培养基和试剂3。
1 含0。
6％酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤（TSB-YE)：见附录A中A。
1.3。
2 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂（TSA-YE）：见附录A中A.2。
单增李斯特氏菌说明书安全操作及保养规程
单增李斯特氏菌说明书安全操作及保养规程一、引言单增李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是一种常见的食品中毒病原菌，可引起人类严重的感染。
为了确保操作过程的安全性和实验结果的准确性，本文档将介绍单增李斯特氏菌的安全操作和保养规程。
二、实验前准备1.工作区域：选择干净整洁、通风良好的实验室，并确保无人员流动和非实验人员进入实验区域。
2.实验器材：准备好需要使用的培养皿、试管、移液器、离心机等实验器具，并进行消毒处理。
3.个人防护措施：穿戴实验服、手套、护目镜等个人防护装备，避免直接接触菌株。
三、操作步骤1.培养基准备：根据实验需求，制备适当培养基，并严格按照配方进行配置、混合和消毒。
2.菌株接种：取一支保存有单增李斯特氏菌的细菌种子液，并使用无菌的移液器将其接种到培养基中。
3.培养条件：将接种好的培养基置于恒温培养箱中，以适当的温度和湿度进行培养。
根据具体需要，可以选择不同的培养条件。
4.培养时间：根据菌株的生长特性和实验目的，设定适当的培养时间。
在培养过程中，定期观察培养基的变化情况。
四、实验后处理1.菌株保存：实验结束后，将培养好的菌株进行分装并保存。
使用无菌的容器和保护液，防止菌株失活或变异。
2.器材清洗：实验器材需要彻底清洗，以防止交叉污染。
使用适当的消毒剂和清洁剂，对实验教具进行彻底清洁和消毒处理。
3.工作区清理：清理工作区域，包括实验台面、废弃物和其他杂物的清理。
确保实验室的环境整洁，以减少潜在的污染风险。
五、安全注意事项1.个人防护：在实验操作过程中，要正确佩戴实验服、手套、护目镜等个人防护装备，避免直接接触菌株。
2.实验环境：选择合适的实验环境，保持实验室的通风良好，并避免非实验人员进入实验区域。
3.消毒处理：在实验前后对实验器材、工作区域进行彻底的消毒处理，以减少交叉污染的风险。
4.废弃物处理：将实验中产生的废弃物，如培养基、菌株等，正确处理和清理，并根据实验室的要求进行垃圾分类处理。
单增李斯特菌
市场情况
1999年底，美国发生了历史上因食用带有李斯特菌的食 品而引发的最严重的食物中毒事件，据美国疾病控制和防 治中心资料显示，在美国密歇根州有14人因食用被该菌污 染的“热狗”和熟肉而死亡，在另外22个州97人患此病，6 名妇女流产。1992～1995年法国出产的奶酪及猪肉中发现 李斯特菌。2001—2009年以来，我国质检部门多次从美国、 加拿大、法国、爱尔兰、比利时、丹麦等20多家肉类加工 厂进口的猪腰、猪肚、猪耳、小排等30多批近千吨猪副产 品中检出单增李斯特菌、沙门氏菌等致病菌。为了解北京 市食品受单核细胞增生性李斯特菌污染状况，2004—2005 年间，崔京辉等从北京市几个市场及宾馆饭店共采集了270 份熟食、生肉制品、水产品等8类食品进行检测LM。
（4） PCR试剂盒
1）北京吉诺思科贸公司：美国伯乐iQ-Check单增李斯特 菌的检测：iQ-Check系统采用了所有的实时荧光PCR方法 的优点为食品中病原微生物提供快速和可靠地检测解决方 案。iQ-Check试剂盒为食品和环境样品中的单增李斯特菌 (Listeria monocytogenes)定性检测试剂盒。 2）陆桥： 单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）荧 光定量PCR检测试剂盒 报价：1680 48T 3）索奥： 单增李斯特菌(LM)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 报价：2800 40T
在美国LM被列为7种主要的食源性致死病菌之一,已经被 WHO食品安全工作计划列为重点检测的食源性病原菌之一。
二、单增李斯特菌的检测方法
（1）食品安全国家标准：单核细胞增生李斯特氏菌 检验 （2010年最新）平板培养法
2007年食品中单增李斯特菌国 家标准检验方法实验 室验证及结果分析：用不同浓度的沙门菌菌悬液人 工染菌二类食品各40份，用增菌液两步增菌，两种 分离培养基分离，对比检出率及分离效果。检出率 62．5％，最低检出限为0.5cfu/25g-13cfu/25g。
单增李斯特菌的检验方法
单增李斯特菌的检验方法
一.增菌：
1.EB肉汤
2.LB肉汤（根据我的实验结果和请教其他老师的说法，LB增菌
效果优于EB）
LB分为LB1和LB2，两者基础培养基相同，区别在于添加辅助试剂丫啶黄、萘啶酮酸的量（基础培养基--杭州天河生物试剂公司；丫、萘—上海疾控中心。
上海的辅助试剂已按一定浓度配置成溶液，使用起来比较方便）
25g样品加入到225mlLB1增菌液中，30℃培养24h，吸0.1mlLB1增菌液到LB2增菌液中，30℃培养24h。
二.选择分离
挑一环LB2增菌液划线接种到科玛嘉选择性培养基上，37℃培养24h，观察现象，可疑菌落在此培养基上为兰色，周围有白晕的菌落。
（国标上使用的选择性培养基是MMA，但是其选择性不强，科玛嘉选择性培养基是法国制造，选择性比MMA强的多，而且现象明显，许多发达国家使用。
此培养基是国标编委白萍女士向我推荐的）三.生化实验
挑可疑菌落穿刺接种到SIM，25℃培养3---5d，观察伞状生长情况、TSI（三糖铁）斜面30℃培养24h—48h，观察，单增李斯特菌在TSI上应该是底面、斜面均产酸，不产H2S，不产气的培养物.
这是单增李斯特菌落在SIM动力培养基上的伞状情形再挑取TSI上培养物接种其他生化管。
七叶苷鼠李糖木糖甘露醇尿
素
硝
酸
盐
还
原
VP MR H2O2
++----+++。
FSIS 即食肉类和家禽制品中单核细胞增多性李斯特菌控制指南说明书
美国食品安全检验局（FSIS）合规指南：控制灭菌后暴露的即食肉类和家禽产品内单核细胞增多性李斯特菌2014年1月目的本合规指南向生产灭菌后会暴露于环境的即食（RTE）肉类和家禽制品的企业，提供关于如何满足美国联邦法规第9篇第430部分——《李斯特菌规则》的特定建议。
另外，也提供关于灭菌后会暴露于环境的即食肉类和家禽制品的卫生、单核细胞增多性李斯特菌（Lm）检测及交叉污染预防方面的信息。
本文件取代《FSIS 李斯特菌指南及问答》的之前版本。
为回应对2012年9月发布的草版的评论，FSIS 修订了此终版指南。
本指南还提供了关于“按照FSIS的政策及程序，如产品尚未获得特定检测结果，则不予贴上检验标志”的新信息。
FSIS 还修订了本指南，明确规定，除了满足《李斯特菌规则》的要求外，企业还必须满足9 CFR 416 卫生、9 CFR 417, HACCP 系统及其他使用法规之要求。
FSIS 还修订了本指南，以提供关于即食产品贴标签的补充信息，并对标签指引（附件 1.1：资源1）做了澄清说明。
另外，FSIS 还修订了本指南，以提供关于多个加工步骤（栅栏效应）对控制李斯特菌生长的影响的更新信息，以及关于返工产品控制的新信息。
更新的指南还提供关于在实验室内合成食品接触面样本的优缺点。
另外，FSIS 更新了本指南，以说明当企业选择除食品接触面外（第3.6节），还额外进行产品抽样，却出现李斯特菌属检测阳性结果时，应该采取的行动。
更多信息也见《FSIS 即食产品抽样程序》。
本文件提供指引，协助企业满足 FSIS 法规。
本指南阐明了 FSIS 的最佳实践建议，具有最高的科学性和实践性，但不代表企业必须满足的要求。
企业可选择采用本指南概述之外的其他程序，但需要说明认为其能有效控制灭菌后暴露于环境的即食产品危害的原因。
如使用本指南中的建议，企业不需要就其程序提供进一步依据。
修改概述第 1 章：修订本章旨在提供关于《李斯特菌规则》要求的更清晰、更容易理解的信息。
FSIS 控制零售熟食店内单核细胞增多性李斯特氏菌 (Lm) 的最佳实践指南说明书
FSIS控制零售熟食店内单核细胞增多性李斯特氏菌(Lm) 的最佳实践指南2015 年 6 月本指南为零售店提供了具体的措施，用于降低熟食区单核细胞增多性李斯特氏菌(Lm) 生长或交叉污染的可能性。
本指南尤其涵盖：∙机构间零售产品Lm 风险评估（参见第 3 页）确定的措施，其可降低熟食产品李斯特氏菌病污染的预期风险；∙美国食品药品管理局(FDA) 食品法典、科学文献、其他指导文件以及肉类和家禽产品生产企业吸取的教训，零售商可借以控制Lm；∙零售商可用以帮助确保熟食产品在卫生条件下保存，并且使得产品不受Lm 污染的步骤；以及∙零售商可用以确定当前做法，以及为控制Lm而采取什么新做法的自我评估工具。
目的 1 简介1零售肉类和家禽产品的法规 2 机构间零售Lm 风险评估发现3如何使用本指南 6 产品处理7 清洁和消毒9 设施和设备控制11 员工操作12熟食产品自我评估工具14 参考文件和资源15）可存活和生长。
由于其生长和存活特性，Lm 通常在环境中持续藏匿有机体（即，可在环境中形成生态位和生成大量病菌；生态位为Lm 定殖和繁殖提供了理想场所）。
其可交叉污染食品接触表面和食品。
不正确的卫生操作、产品处理和员工做法可导致传播Lm 到供零售的 RTE 肉类和家禽产品中，从而导致受到污染（参见下列有关零售肉类和家禽产品的法规）。
RTE 肉类和家禽产品在食用前不需要烹煮，且通常在冰箱中保存。
一旦受到Lm污染，RTE 食物产品可能为有害细菌提供理想的生长环境。
各种熟食肉类的零售调查和多项针对切片熟食和预包装熟肉开展的Lm 风险评估对与熟制肉类和家禽产品有关的李斯特氏菌病风险进行了分析。
FSIS在即食熟肉和熟家禽肉中进行的Lm 对比风险评估（2010 年 5 月）估计，在因熟肉引起的李斯特氏菌病中，83% 与零售的切片熟肉和包装熟肉有关（Endrikat 等人，2010）。
安全食品处理操作、全面清洁和卫生程序、设施和设备维护和良好员工操作规范是预防零售熟食店的 RTE 食物受污染或降低污染可能性的重要组成部分。
FDA食品中单增李斯特氏菌的检测与计数方法
FDA食品中单增李斯特氏菌的检测与计数方法食品中单增李斯特氏菌的检测与计数李斯特有6种菌种：L.innocua , L.seeligcri , L.welshimeri , L.ivanovii , L.grayi、L.grayi和L.ivanovii含有2个亚种，这里不作明确分析。
Rocourt最新的细菌分类法代替了以前的分类法。
L.ivanovii与单增李斯特氏菌是老鼠和其他动物的致病菌，然而，只有单增李斯特氏菌是人类致病菌，L.ivanoviij与L.seeligeri在人类中很少见。
近来，我们充分讨论了食品中单增李斯特氏菌的存在性，及其传染性详细资料。
因而本篇重点介绍单增李斯特氏菌的鉴定与计数。
食品加工过程中，例如食品接触表面及加工工具的致病原检测就不作介绍了。
分离与检测单增李斯特氏菌快速有效的方法如下：以污染的食品为样品，通常据FDA实验规则，样品是混合物。
待分析的部分样品放入BLEB（奶制品放入AOAC或IDF）中，30℃培养4h，进行李斯特菌选择性增菌。
在第四个小时加入选择剂：acriflavin（10mg/L），sodium nalidixate（40mg/L），optional antifungal，cycloheximide（50mg/L）。
然后继续培养48h，在24h和48h时，将培养物划线接种于不同的选择性培养基来分离李斯特菌。
有些快速检测到李斯特菌的存在。
先在标准增菌液或呈现阳性的增菌液中进行李斯特菌增菌，之后划线到选择培养基上进行纯化，然后在非选择培养基上纯化，最后通过常规检测实验或一系列生化实验来确定是否为单增李斯特氏菌。
利用具体实验，分离物会快速地被鉴定是否为单增李斯特氏菌。
FDA规则中，必须依照血清类型`PFGE及核糖类型分类。
利用选择性培养基的菌落计数及MPN计数法可以对单李进行计数。
（MPN计数法是先用BLEB选择性增菌，再涂布于ALOA或BCM选择性培养基上）主要内容如下：1．增菌液及快速检测实验是可以选择的2．可用任一种选择分离培养基（OXA 、PALLCAM 、添加七叶苷和三价铁的LPM 、MOX）来代替两种选择性培养基。
单增李斯特氏菌及其检测方法
单增李斯特氏菌及其检测方法一、单增李斯特氏菌单增李斯特氏菌，学名Listeria monocytogenes，一种革兰氏阳性菌，是李斯特菌属。
李斯特菌属(Listeria)共分为2个群，7个种：第一群包括单核细胞增生性李斯特菌(L monocytogenes，LM)(亦称产单核细胞李斯特菌)、伊氏李斯特菌(L ivanovii)(亦称绵羊李斯特菌)、英诺克李斯特菌(L innocua)(亦称无害李斯特菌)、韦氏李斯特菌(L welshimei)、塞氏李斯特菌(L seeligeri)，第二群包括格氏李斯特菌(L grayi)和莫氏李斯特菌(L mulTayi)。
其中，单增李斯特菌是唯一能引起疾病的人畜共患病的病原菌。
它能引起人、畜的李氏特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。
二、单增李斯特氏菌检测方法1.细菌培养法该菌营养要求不高，兼性厌氧，最适在含有CO2的微需氧环境中生长，生长温度范围-1.5℃-45℃，最适温度为30℃-37℃，能在普通冰箱冷藏室生长，是一种典型的耐冷性细菌，同时还具有耐盐性。
LM在普通琼脂平板上呈细小直径约0.2-0.4μm、半透明露水样菌落。
在血琼脂平板上有β溶血环。
在显色培养基上呈蓝绿色。
2.生化鉴定法该菌主要生化特性如下：①触酶阳性；②氧化酶阴性；③发酵多种糖类；④产酸不产气；⑤不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二塘；⑥不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解；⑦吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性；⑧VP、甲基红试验和精氨酸水解试验阳性；⑨对碱和盐抵抗力强，60-70℃经5-20分钟可杀死，70%酒精5min、2.5%石碳酸、2.5%氢氧化钠、2.5%福尔马林20min可杀死此菌。
⑩该菌对青霉素、氨苄青霉素、四环素、磺胺均敏感。
3.血清凝集法根据菌体抗原和鞭毛抗原，LM分为16个血清型：1／2a、1／2b、1／2c、3a、3b、3c、4a、4ab、4b、4c、4d、4e、5、6a、6b、7。
单增李斯特菌氧化应激机制_概述及解释说明
单增李斯特菌氧化应激机制概述及解释说明1. 引言1.1 概述单增李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种常见的食源性致病菌，可导致食物中毒和婴儿感染等疾病。
该细菌具有抵抗宿主免疫系统攻击的能力，其中一个重要的机制是其对氧化应激的响应和调控。
本文旨在介绍单增李斯特菌与氧化应激之间的关系，并解释其氧化应激机制。
1.2 文章结构本文包括引言、单增李斯特菌氧化应激机制概述、单增李斯特菌氧化应激机制解释说明和结论四个部分。
首先，在引言部分我们将对文章进行简要介绍，明确文章的目的与结构。
然后，在概述部分我们将定义和介绍单增李斯特菌及氧化应激，并探讨二者之间的联系。
接下来，在解释说明部分我们将详细阐述NADPH氧酶系统、抗氧化酶以及细胞信号传导途径在单增李斯特菌氧化应激中扮演的角色。
最后，在结论部分我们将总结研究结果和发现，并展望未来的研究方向。
1.3 目的本文旨在全面概述和解释单增李斯特菌氧化应激机制，揭示其对该致病菌生存、传播以及对宿主免疫系统的逃逸机制产生的影响。
通过深入探讨相关机制，我们可以增加对这种食源性致病菌的认识，并为进一步研究和开发抗击单增李斯特菌感染的治疗策略提供理论支持。
2. 单增李斯特菌氧化应激机制概述2.1 定义和背景介绍单增李斯特菌，又称为Listeria monocytogenes（简称LM），是一种革兰氏阳性、耐酸性的细菌。
它是一种常见的食源性病原菌，可以引起单增李斯特菌感染症，在严重情况下甚至导致败血症和脑膜炎等严重并发症。
单增李斯特菌对环境中的氧化应激具有一定的适应能力，这使得它能够在不利环境中存活并引发感染。
2.2 氧化应激的基本原理氧化应激是指细胞内外环境中存在过量活性氧物质，如超氧自由基（O2-）、过氧化氢（H2O2）和羟自由基（·OH）等，从而导致细胞内的氧化还原平衡被打破，进而引发一系列生物学效应的现象。
这些活性氧物质在正常情况下通过细胞内抗氧化系统迅速清除，以保持细胞内的氧化稳态。
食品微生物检验——单增李斯特菌
食品微生物检验——单增李斯特菌食品中单增李斯特检测技术李斯特氏菌属包括七个种：单核细胞增生李斯特氏菌绵羊李斯特氏菌英诺克李斯特氏菌威尔斯李斯特氏菌西尔李斯特氏菌格氏李斯特氏菌默氏李斯特氏菌其中单核细胞增生李斯特氏菌对人类致病性强，绵羊李斯特氏菌对人类也有一定的致病性，其余李斯特氏菌无致病性。
单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。
它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。
它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。
该菌为革兰氏阳性短杆菌，大小约为0.5μmх 1.0-2.0μm,直或稍弯，两端钝圆，常呈V字型排列，偶有球状、双球状。
兼性厌氧、无芽胞，一般不形成荚膜，但在营养丰富的环境中可形成荚膜，在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性。
该菌有4根周毛和1根端毛，但周毛易脱落。
该菌营养要求不高，在20--25℃培养有动力，穿刺培养2－5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。
该菌的生长范围为2--42℃（也有报道在0℃能缓慢生长），最适培养温度为35--37℃，在pH中性至弱碱性（pH9.6）、氧分压略低、二氧化碳张力略高的条件下该菌生长良好，在pH3.8－4.4能缓慢生长，在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。
在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。
在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。
在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)和改良Mc Bride(MMA)琼脂上，用45度角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。
该菌触酶阳性，氧化酶阴性。
发酵多种糖类，产酸不产气。
如发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖。
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面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数
的增加，细菌的活力会逐渐下降。
2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆
菌落进行后续操作。
冷 冻 管 开 封 ：
用浸过 75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌 株 复 溶 ：
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取 1ml 左右复溶液，加入到冷冻
管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮：
用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培
养。细菌在 30-‐35℃培养箱中培养 24-‐48h，真菌在 23-‐28℃培养箱中培养 24-‐72h
储存温度：-‐80℃
基 因 组 ：
单增李斯特菌
简 介 ：
斯特菌（学名：Listeria monocytogenes），又名单核球增多性李斯特
菌、李氏菌，是一种兼性厌氧细菌，为李斯特菌症的病原体。李斯特菌是
革兰氏阳性菌，属厚壁菌门。它主要以食物为传染媒介，是最致命的食源
性 病 原 体 之 一 。
操 作 说 明 ：
1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表
（必要时，可适当延长培养时间）。
菌 株 传 代 ：
将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量
增大接种量：如用无菌吸管吸取≥50μl 新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓
慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。
单增李斯特菌
编号
名称
北京华越洋生物 NRR00470
单增李斯特菌
基 本 信 息 ：
名称：单增李斯特菌
规格：300ul 甘油菌
注 意 事 项 ：
1、菌种活化前，将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，长时间室温下放
置会导致菌种衰退；
பைடு நூலகம்
2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行；
3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能
正常生长； 4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来 电询问； 5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧 状态；培养过程中亦要保持厌氧状态； 6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要 5-‐10%CO2 促 进生长； 7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。 8、部分菌种有致病性、扩散性，请专业人员在专业环境下有保护性操作。 保 藏 条 件 ： -‐20℃保存（复溶液于 2-‐8℃保存） 保 藏 时 间 ： 2-‐10 年，应根据菌种状况及时转接