农科院暑期社会实践

暑期社会实践报告

学院：园艺学院班级：11园艺单招

学号：1109201034 姓名：肖莉

活动主题：创新创业实践

实习地点：江苏省农业科学院植物保护研究所

大学最后的一个暑假，我来到江苏省农业科学院实习。

听着江苏省农业科学院的名字就觉得这是一个科研氛围非常浓厚的地方，我对我的实习生活充满了期待。真正踏入我所实习的植保所时，有点胆怯。那边的很多仪器我都没有见过，试剂也没有听过。

去农科院实习的一共有四个同学，到了植保所，负责生物防治的郭老师给我四个人分别找了指导老师。

开始实习工作了，带我做实验的师兄，告诉了我暑假两个月需要做的工作，主要是研究灰飞虱四个品种不同色系的适应性：雌雄虫交尾后的寿命，若虫孵化时间，产卵量，后代的雌雄比以及雌虫的体色比例。除了这些工作，还帮助师兄做了部分生测和分子实验。

听着师兄跟我说着实验原理与方法，心里瞬间就没有了底。好多东西都没有听过，什么PCR、跑电泳、提DNA。这些东西，在学校从来没有听老师说过，更不要说知道怎么做了。好在师兄耐心教导，我才没有手足无措。慢慢的对实验有所期待。

第一天，师兄带我去养虫室，教我怎样识别灰飞虱和其他飞虱，灰飞虱的雌雄，以及若虫的龄期，还给了我一些论文，让我多了解灰飞虱。在充分了解灰飞虱的基础上，我就要真正开始我的实验了。第一步要做的就是，按1：1的比例选取两头灰飞虱成虫放入试管1内进行配对。第二步，一周后将雌雄虫转移到新的试管内2。第三步。每天观察试管1内的若虫，调查孵化时间。第四步，十七天调查试管1的差卵量。每一周都要将雌雄虫转移到新的试管里，每天都要观察雌雄虫的死亡数量，并做记录。每隔十七天数一次新试管的产卵量。待若虫长长成虫，就要开始调查成虫的雌雄比和雌虫体色分布。视苗的情况进行浇水。

研究昆虫最重要也最基础的工作就是养虫。所有的灰飞虱都是养在25*15cm

的白色收纳盒里，收纳盒的盖子被凿空便于通气，用网纱隔在盖子与盒子之间，让灰飞虱不易飞走。视情况进行浇水和换苗工作，一般浇水每两天一次，水分高度保持在2cm左右。浇水时要注意少量多次，避免因浇水量太大，水稻苗被淹死，浇水的方向也有讲究，不能将水撒到灰飞虱较多的苗上，防止灰飞虱被水击落，掉入水中淹死。换苗工作最好在养虫室外面换苗，防止因换苗工作灰飞虱飞出，侵染别的种群。换苗时，只需要将枯死的苗转移出去，若虫群密度不大，可亲拍枯死的苗，使卵落下，便于扩大繁殖。换好苗后，及时浇水。养虫室按照夏天的光周期对灰飞虱进行管理，一般是13:11（昼夜比）的比例，空气湿度保持在70%左右。

我的第二个实验是帮助师兄做生测。实验方法也很简单，用餐巾纸包十几株小苗放入一次性杯子中，餐巾纸一定要平铺在杯子底部，并将水稻苗包住。选三个杯子做空白对照（CK），其余8个杯子做沙雷氏菌，研究沙雷氏菌对灰飞虱的致死量。沙雷氏菌药液的配置：先从培养箱内取出沙雷氏菌，取4g溶于100ml 的去离子水中，配成4%的沙雷氏菌药液。对照杯中喷洒2ml的去离子水，沙雷氏菌的杯子里喷洒2ml的沙雷氏菌药液。然后将事先获得的15头灰飞虱（高龄若虫或成虫，不分长翅、短翅）放入杯子内。放入培养箱内，温度保持在25℃左右，湿度在70%左右，昼夜时长为13:11。连续调查一周虫体的死亡数，若死亡虫体为正常色，则表示是正常死亡，若死亡虫体为红色，则表示是因为沙雷氏菌导致死亡。在调查虫体死亡数的同时，要视餐巾纸的干燥程度适量浇水。

第三个实验是提DNA（试剂盒方法）。1、将灰飞虱从-80℃中取出，清洗虫体，先用75%的酒精清洗，再用去离子水漂洗，放到餐巾纸上干燥。2、取单头灰飞虱入离心管，加入300微升细胞裂解液（Nucle Lysis Solution），进行研磨，磨好后再加入150微升细胞裂解液。3、在65℃条件下孵育15~30min（一般取30min）。4、在组织液中加2微升RNA酶，混匀。于37℃下孵育15~30min（一般30min）。冷却至室温。5、再加入150微升蛋白沉淀液（Protein Precipitation Solution），用移液器吸打均匀，然后在冰上放置5~10min。6、14000*rcf。离心8min。7、将上清液转移到含有600微升异丙醇的离心管中，然后在-20℃冰箱中放置1h。（此步可以不放入-20℃冰箱中，而直接进行下一步）8、轻轻颠倒混匀混合物，然后14000*rcf离心2min，此步可检测到DNA。（离心管底—白色物质）

9、弃去上清液（动作轻缓），然后将离心管倒置在吸水纸（或纸巾）上5min，然后加入600微升70%的乙醇，混匀。（乙醇浓度至少为70%）10、14000*rcf离心8min。11、倒去上清乙醇（注意不要将DNA沉淀一同吸走），然后放入55℃烘箱中15min。（使管中的乙醇完全挥发掉，即使DNA完全干燥）12、在DNA沉淀中加60微升DNA补充液（DNA Rehydration Solution），然后在65℃烘箱中放置一段时间，促进其溶解。

DNA提取成功之后，需要用PCR仪对DNA进行复制。先配置混合液，Mix 12.5微升，引物F 2微升，引物R 2微升，DNA模板2微升，Tag酶8微升，去离子水12微升。若之前提取了80头灰飞虱，则可以配置85倍的混合液，一次性配置，然后依次移入八连管中，但DNA模板要单独加样。转移后，放到PCR仪上，设置好程序，即可。

PCR程序完成之后，要在电泳仪上，获得DNA图像。称取琼脂糖凝胶2g，倒入100ml的电泳液中。充分混匀后，倒入凝胶板中，用插孔板阻隔，待凝固后，将插孔板拔起，将样点入胶中，插上点。30min后，放在紫外线下，拍照。

短短两个月的实习已经结束，我学到了很多在学校没有学过的理论和实验知识，实验技能得到了很大的提升。