总谷胱甘肽检测试剂盒(DTNB速率比色法)
氧化型谷胱甘肽检测试剂盒（DTNB速率比色法）
氧化型谷胱甘肽检测试剂盒（DTNB速率比色法）氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB 速率比色法)简介：谷胱甘肽(glutathione ，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。
谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。
还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB 速率比色法)(GSSG Assay Kit)是一种简单易行的氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测的试剂盒，其检测原理是先检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量，再检测总谷胱甘肽(T-GSH)含量T-GSH 减去GSH 即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)。
通过分光光度法(酶标仪)检测410nm 处吸光度，与相应处理的GSH 标准比较，分别获得还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)，用T-GSH 减去GSH 即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)。
该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量，亦可检测还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)含量。
该试剂盒仅用于科研，不用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、配制GSH 标准储存液：取10mg 还原型谷胱甘肽(GSH)标准加入3.25ml ddH 2O ，溶解并混匀，即为还原型GSH 标准储存液(10mM)。
一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
2、配制50×GSH 还原酶：按GSH 还原酶原液：GSH assay buffer =1:49的比例混合，即为50×GSH 还原酶。
3、配制GSH 检测工作液：按下表配制GSH 检测工作液。
1个样品10个样品50个样品编号名称TO1043 100T Storage试剂(A): 还原型谷胱甘肽(GSH)标准10mg 4℃ 避光试剂(D): 蛋白沉淀剂2g RT 避光试剂(E): NADPH 10mg -20℃ 避光试剂(F): DMSO 3ml RT 避光试剂(G): ddH 2O 100mlRT 避光使用说明书1份GSH assay buffer 1.6ml 16ml 80mlDTNB储存液5μl 50μl 250μl4、配制T-GSH检测工作液：按下表配制T-GSH检测工作液。
碧云天谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)产品编号 产品名称包装 S0056谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)100次产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)(Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性的试剂盒。
绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中心组成部分。
细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。
本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
本试剂盒的使用灵活方便，样品用量和检测时间的范围宽，样品用量可以根据样品中GPx 的活力在0.1-50微升之间调整，检测时间可以根据样品中GPx 的活力在5-30分钟内进行调整。
本试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(S0058)配合使用，可以定量检测出样品中不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内的过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。
细胞内的脂类容易和自由基发生反应，产生脂类过氧化物。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物，从而消除自由基的毒害作用。
谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。
在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显上调或下调。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有机醇。
但以过氧化氢为底物进行检测会受同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的影响，因为过氧化氢酶的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB法)说明书
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)产品简介：谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法) (Glutathione Reductase Assay Kit with DTNB)是一种简单易行的通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase, GR)活性的试剂盒。
谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。
GSH 可以清除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。
谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH)，而GSH 可以和生色底物DTNB 反应产生黄色的TNB 和GSSG ，并可以通过测定A 412来检测TNB 的生成量。
适当设置应体系，前后两个反应合并起来后，GSSG/GSH 过量而GR 相对不足时，该反应体系中谷胱甘肽还原酶就成为整个反应体系的限速因素，此时黄色的TNB 生成量和谷胱甘肽还原酶的活性呈线性正相关。
从而通过测定A 412就可以计算出谷胱甘肽还原酶的活性水平。
本试剂盒的具体反应原理如下：两个反应相合并：本试剂盒检测肝脏样品的检测效果如图1所示。
图中可见，对于肝脏样品可以检测到比较强的谷胱甘肽还原酶的活性并且有很好的剂量效应。
图1. 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)用于肝脏裂解样品的实测效果图。
本试剂盒可以检测组织匀浆液上清、细胞裂解液上清等生物样品中的谷胱甘肽还原酶的活性。
一个试剂盒共可以进行100次检测。
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线: 400-1683301或800-8283301 订货e-mail :****************** 技术咨询: ***************** 网址: 碧云天网站 微信公众号保存条件：-20ºC保存，一年有效。
还原型谷胱甘肽靶向氧化应激对肝癌干细胞的作用
网络出版时间：２０２０－８－２５１４：１９ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０７３．Ｒ．２０２００８２４．１６０６．００２．ｈｔｍｌ还原型谷胱甘肽靶向氧化应激对肝癌干细胞的作用高 兰１，龙世棋２，陈博鑫１，章 俊１摘要：目的 探讨还原型谷胱甘肽（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ，ＧＳＨ）对肝细胞癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＨＣＣ）干细胞性的作用。
方法 采用总谷胱甘肽／氧化型谷胱甘肽（Ｔ ＧＳＨ／ＧＳＳＧ）测试盒检测细胞内Ｔ ＧＳＨ／ＧＳＳＧ水平；应用ＣＣＫ ８实验评估细胞活力及干细胞培养基培养干细胞球（ＨＣＣｓｐｈｅｒｅ）；运用流式细胞技术分析ＣＤ１３３阳性细胞亚群比例。
结果 ＨＣＣ细胞中内源性Ｔ ＧＳＨ／ＧＳＳＧ水平比正常细胞显著升高。
外源性补充ＧＳＨ减少胞内活性氧物质（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）并抑制ＨＣＣ细胞活力及ＨＣＣｓｐｈｅｒｅ形成。
进一步分析发现ＧＳＨ显著降低ＣＤ１３３＋肝癌干细胞（ｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＬＣＳＣ）的亚群比例。
结论 ＨＣＣ细胞中ＲＯＳ水平及抗氧化防御能力增强。
外源性ＧＳＨ能够降低胞内的ＲＯＳ水平，并抑制ＨＣＣ细胞活力及干细胞性，降低ＬＣＳＣ在ＨＣＣ细胞中的亚群比例。
为靶向异常氧化应激（ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ，ＯＳ）及肿瘤干细胞（ｃａｎｃｅｒｓｔｅｍｃｅｌｌ，ＣＳＣ）治疗ＨＣＣ提供了新靶点。
关键词：肝肿瘤；肝细胞癌；肿瘤干细胞；还原型谷胱甘肽；氧化应激中图分类号：Ｒ７３５ ７ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－７３９９（２０２０）０８－０８８７－０６ｄｏｉ：１０．１３３１５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｃｅｐ．２０２０．０８．００２接受日期：２０２０－０５－２７基金项目：国家自然科学基金（８１８６０５４４）、贵州省教育厅青年科技人才成长项目［黔科合ＫＹ字（２０１７）１６８］作者单位：贵州医科大学１病理教研室、２免疫学教研室，贵阳 ５５０００４作者简介：高 兰，女，硕士研究生。
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒(比色法)
组成：
编号 名称 试剂(A): 样品匀浆液 试剂(B): GSH 试剂(C): GSH 配制液 试剂(D): 氧化剂 试剂(E): 酸性沉淀剂 试剂(F): GSH-Px assay buffer 试剂(H): ddH2O 使用说明书
TO1033 50T 50ml
15.4mg 10ml 2×1ml 100ml 62.5ml 50ml
北京雷根生物技术有限公司
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒(比色法)
简介：
谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase，GSH-Px)是一种含硒的水溶性四聚体 蛋白酶。几乎在所有组织中都有分布，在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发 生明显的变化，该酶可以清除活细胞内过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着 关键作用。
Leagene 谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(Glutathione Peroxidase Assay Kit)是一种 以过氧化氢为底物，通过比色法检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶活性的 试剂盒。绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中性组成 部分。细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。其检测原理是：GSH-Px 可催化谷胱甘肽(GSH)与苯甲酸显色液发生氧化反应，使之生成黄色阴离子，通过分光光度 计或酶标仪检测 422nm 处吸光度值测定该阴离子的浓度，间接推算 GSH 减少的量。本试 剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
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0.1ml
2ml
1ml
4、 GSH-Px 显色反应: 可参考下表设置检测反应体系，依次加入试剂：
Hale Waihona Puke 加入物质空白对照管 本底对照管 测定管
总抗氧化能力(T-AOC)比色法测试盒(ABTS酶催化法)
用途本试剂盒适用于检测血清（浆）、尿液、动植物组织、细胞等样本中总抗氧化能力。
检测范围及灵敏度检测范围：0.047-1.50 mmol/L灵敏度：0.047 mmol/L背景介绍机体存在两类抗氧化系统，一类是酶抗氧化系统，包括超氧化物歧化酶(SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px）；另一类是非酶抗氧化系统，包括尿酸、维生素C、维生素E、谷胱甘肽、胆红素、α-硫辛酸、类胡萝卜素[1-3]。
抗氧化能力被认为是血液和体液中所有抗氧化剂的累积效应[3]。
检测原理ABTS在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的 ABTS●+，在抗氧化物存在时ABTS●+的产生会被抑制，在414 nm测定ABTS●+的吸光度即可测定并计算出样本中的总抗氧化能力。
Trolox是一种维生素E的类似物，具有和维生素E相近的抗氧化能力，用作其他抗氧化物总抗氧化能力的参考。
例如，Trolox的总抗氧化能力为1，相同浓度情况下，其他物质的总抗氧化能力用其抗氧化能力和Trolox相应的倍数来表示。
本试剂盒测组织和细胞样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用BCA法（货号：E-BC-K318-M）。
提供试剂和物品注：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同批次试剂盒中的试剂不能混用。
Focus on your research Service for life science 耗材：枪头（1000 μL ，200 μL ，10 μL ）。
仪器：酶标仪（405-425 nm ）、微量移液器（1000 μL ，200 μL ，100 μL ，10 μL ）。
所需自备物品配制试剂之前，请穿戴好防护装备。
试剂盒中部分试剂含有危险性物质。
禁止食入，吸入，直接接触眼睛、皮肤和衣物。
使用完后的试剂瓶经彻底清洗后再处理。
安全提示试剂：双蒸水、生理盐水（0.9% NaCl ）、PBS （0.01 M，pH 7.4）、80%乙醇。
实验关键点ABTS工作液配制完成后，室温避光保存，在30 min内使用完毕。
s-乙酰-l-谷胱甘肽酶法合成
s-乙酰-l-谷胱甘肽酶法合成下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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谷胱甘肽标准测定方法
谷胱甘肽标准测定方法
谷胱甘肽的测定方法主要有以下几种：
1. 埃尔曼（Ellman）法：这是最常用的谷胱甘肽测定方法，其原理是谷胱甘肽在DTNB（二硝基苯磺酸）的作用下，生成具有黄色的DTNB-SH，通过测定其吸光度来定量谷胱甘肽的含量。
2. 弗斯特（Foster）法：这种方法是通过测定谷胱甘肽在酸性环境下的还原能力，即测定其对2-硝基-5-苯甲酸的还原能力，通过测定其产物2-氨基-5-苯甲酸的吸光度来定量谷胱甘肽的含量。
3. 比色法：这种方法是通过测定谷胱甘肽在酸性环境下的还原能力，即测定其对2,4-二硝基苯酚的还原能力，通过测定其产物2,4-二氨基苯酚的吸光度来定量谷胱甘肽的含量。
4. 高效液相色谱法（HPLC）：这种方法是通过分离、定量样品中的谷胱甘肽，通过比较其峰面积与已知浓度的谷胱甘肽峰面积来定量谷胱甘肽的含量。
5. 荧光光谱法：这种方法是通过测量谷胱甘肽的荧光光谱，通过比较其荧光强度与已知浓度的谷胱甘肽荧光强度来定量谷胱甘肽的含量。
以上方法都有其优点和缺点，选择哪种方法主要取决
于实验的目的和条件。
还原型谷胱甘肽 (reduced glutathione,GSH)含量测定试剂盒使用说明
还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）含量测定试剂盒使用说明产品简介：GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。
因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
DTNB与GSH反应生成复合物，在412nm处有特征吸收峰；其吸光度变化与GSH含量成正比。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml比色皿、双蒸水产品内容：试剂一×1支，充分溶解于100ml双蒸水，4℃保存试剂二×1支，充分溶解于50ml试剂一中，4℃保存试剂三×1支，充分溶解于10ml双蒸水中，4℃避光保存操作步骤：一、样品前处理：取组织约0.1g，加1ml试剂二，冰上充分研磨，8000rpm4℃离心10min，取上清。
（如上清不清澈，再离心3min）GSH测定操作：测定前将试剂一于25℃水浴20min按每100mg组织加入1000µL生理盐水的比例进行匀浆。
8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
对于非哺乳动物组织：按每100mg组织加入1000µL提取液的比例进行匀浆。
8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
（2）血清（浆）样品：直接检测。
二、测定操作表：测定管空白管样本0.1ml/试剂一0.7ml0.7ml蒸馏水/0.1ml试剂三0.2ml0.2ml 迅速混匀，于412nm测吸光值，并记录第60s的OD值GSH含量计算：GSH标准曲线公式：y=0.0015x+0.0818（x为GSH浓度，y为吸光值）液体中GSH（µmol/L）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数组织中GSH计算：①GSH（µmol/mg prot）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品蛋白浓度（Cpr）②GSH（µmol/g mass）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品质量（g）注意事项：（1）样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，以免影响其活力测定时，除试剂一外，其它试剂均需放置在冰上；（2）样本测定前先取1-2个样做预实验，如吸光值太高（超过标准曲线范围，即y ＞0.2时），应先用试剂二稀释到适当倍数，使得吸光值在标准曲线范围内。
总抗氧化能力(T-AOC)比色法测试盒(ABTS酶催化法)
用途本试剂盒适用于检测血清（浆）、尿液、动植物组织、细胞等样本中总抗氧化能力。
检测范围及灵敏度检测范围：0.047-1.50 mmol/L灵敏度：0.047 mmol/L背景介绍机体存在两类抗氧化系统，一类是酶抗氧化系统，包括超氧化物歧化酶(SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px）；另一类是非酶抗氧化系统，包括尿酸、维生素C、维生素E、谷胱甘肽、胆红素、α-硫辛酸、类胡萝卜素[1-3]。
抗氧化能力被认为是血液和体液中所有抗氧化剂的累积效应[3]。
检测原理ABTS在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的 ABTS●+，在抗氧化物存在时ABTS●+的产生会被抑制，在414 nm测定ABTS●+的吸光度即可测定并计算出样本中的总抗氧化能力。
Trolox是一种维生素E的类似物，具有和维生素E相近的抗氧化能力，用作其他抗氧化物总抗氧化能力的参考。
例如，Trolox的总抗氧化能力为1，相同浓度情况下，其他物质的总抗氧化能力用其抗氧化能力和Trolox相应的倍数来表示。
本试剂盒测组织和细胞样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用BCA法（货号：E-BC-K318-M）。
提供试剂和物品注：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同批次试剂盒中的试剂不能混用。
Focus on your research Service for life science 耗材：枪头（1000 μL ，200 μL ，10 μL ）。
仪器：酶标仪（405-425 nm ）、微量移液器（1000 μL ，200 μL ，100 μL ，10 μL ）。
所需自备物品配制试剂之前，请穿戴好防护装备。
试剂盒中部分试剂含有危险性物质。
禁止食入，吸入，直接接触眼睛、皮肤和衣物。
使用完后的试剂瓶经彻底清洗后再处理。
安全提示试剂：双蒸水、生理盐水（0.9% NaCl ）、PBS （0.01 M，pH 7.4）、80%乙醇。
实验关键点ABTS工作液配制完成后，室温避光保存，在30 min内使用完毕。
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法)
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法) 简介：谷胱甘肽(glutathione，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。
谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能，保护组织细胞免受氧化损伤，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，半胱氨酸上的巯基为其活性基团，故常简写为G-SH或GSH，易与某些药物(如扑热息痛)、毒素(如自由基、碘乙酸、铅、汞、砷等)等结合，具有整合解毒作用。
谷胱甘肽具有广谱解毒作用，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。
谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。
还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法)(GSSG Assay Kit)是一种简单易行的氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测的试剂盒，其检测原理是先检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量，再检测总谷胱甘肽(T-GSH)含量T-GSH减去GSH即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)：待测样品中的还原型谷胱甘肽(GSH)与发色底物DTNB反应，产生稳定黄色的TNB和GSSG；谷胱甘肽还原酶把氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原成还原型谷胱甘肽(GSH)，由GSSG还原成的GSH和样品本身含有的GSH都与发色底物DTNB反应，生成黄色的TNB和GSSG，前后两个反应合并起来，总谷胱甘肽(GSSG+GSH)就相当于一个呈色的限速反应，总谷胱甘肽(T-GSH)含量决定了黄色含量。
通过分光光度法(酶标仪)检测410nm处吸光度，与相应处理的GSH标准比较，分别获得还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)，用T-GSH 减去GSH即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)。
该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量，亦可检测还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)含量。
总谷胱甘肽检测试剂盒
50 μl
50 μl
50 μl
b. 加入50微升0.16mg/ml NADPH溶液，混匀。
c. 立即用酶标仪测定A412，每5分钟测定一次或实时测定，共测定25分钟，测得5个数据。(说明：为了简化实验步骤，可 以在加入NADPH溶液混匀后25分钟，仅测定一次A412)。如果仪器可以设置温度，把温度设置在25℃，否则就在室温
2. Xiao-Long W, Chuan-Ping Y, Kai X, Ou-Jv Q. Selenoprotein W depletion in vitro might indicate that its main function is not as an antioxidative enzyme. Biochemistry (Mosc). 2010;75(2):201-7.
NADPH。每检测一个样品需50微升0.16mg/ml NADPH。
2. 标准品的准备：
把10mM GSH储备液用蛋白去除试剂S溶液稀释成50μM GSH溶液。然后依次稀释成25、15、10、5、2μM GSH溶液。取
50、25、15、10、5、2μM GSH溶液六个点做标准曲线。注意：由于GSH在蛋白去除试剂S溶液中不太稳定，用蛋白去除
b. 细胞样品的准备。请尽量使用新鲜的细胞进行测定，而不要使用冻存的细胞进行测定。PBS洗涤细胞一次，离心收集
细胞，吸尽上清。加入细胞沉淀体积3倍量的蛋白去除试剂S溶液，即如果细胞沉淀为10微升，则加入30微升蛋白去除
试剂S溶液，充分Vortex。(细胞沉淀的体积可以根据细胞沉淀的重量进行估算。收集细胞前后分别对离心管进行称
等处理，而直接加入适量蛋白去除试剂S溶液进行匀浆)。4℃放置10分钟后，10,000g 4℃离心10分钟，取上清用于总
硫氧还蛋白还原酶（TrxR）活性检测试剂盒说明书
硫氧还蛋白还原酶（TrxR ）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：AC10253规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系本公司工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体120 mL×1瓶4℃保存试剂二液体3 mL×1瓶4℃保存试剂三粉剂×2支-20℃保存试剂四液体30μL ×1支-20℃保存溶液的配制：1、试剂三：临用前取1支加入1.667 mL 蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃保存1周。
2、试剂四：临用前根据样本数量将试剂四用无水乙醇稀释10倍后使用。
产品说明： TrxR 是一种NADPH 依赖的包含FAD 结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。
TrxR 与GR 活性类似，催化GSSG 还原生成GSH ，是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。
TrxR 催化NADPH 还原DTNB 生成TNB 和NADP +，TNB 在412nm 有特征吸收峰，但还原型谷胱甘肽与DTNB 同样能反应生成TNB ，因此本试剂盒利用2-乙烯吡啶抑制样本中原有的还原型谷胱甘肽，通过测定412nm 波长处TNB 的增加速率，即可计算TrxR 活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：低温离心机、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水、无水乙醇。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：按照组织质量（g ）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。
10000rpm ，4℃离心10min ，取上清置冰上待检测。
谷胱甘肽
高效液相色谱法
原理：高效液相色谱法是由于溶质在同定相和流动相之间的分配系数、亲和力、分子大小、吸附能力等不同， 而进行连续分离的过程 。
操作步骤： ①色谱条件 色谱柱：Kromasil C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm） 。 流动相：磷酸二氢钠和辛烷磺酸钠混合溶液（磷酸二氢钠3.0 g、辛烷磺酸钠1.0 g，加水溶解并定容至500 mL，用磷酸调溶液pH为3）：乙腈 = 96：4（体积比） 。 检测波长：210 nm，流速0.8 mL/min，柱温30℃，进样量10 μL 。 ②制作标准溶液 准确称取谷胱甘肽标准品适量，用去离子水溶解于容量瓶中，混合均匀，定容，制成25 μg/mL、50 μg/mL、100 Vg/mL、200 μg/mL、400 μg/mL、800 μg/mL系列浓度样品液，作为标准溶液 。
谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统功能，并具有抗氧化作用、整合解毒作用。半胱氨酸上的巯基为其活性 基团（故常简写为G-SH），易与某些药物、毒素等结合，使其具有整合解毒作用。谷胱甘肽不仅可用于药物，更 可作为功能性食品的基料，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。
谷胱甘肽有还原型（G-SH）和氧化型（G-S-S-G）两种形式，在生理条件下以还原型谷胱甘肽占绝大多数。 谷胱甘肽还原酶可以催化两型间的互变，该酶的辅酶还可以为磷酸戊糖旁路代谢提供的NADPH。
方法步骤：
1、DTNB贮存液配制：将0.01 mol/L的DTNB溶解于0.05 mol/L的磷酸缓冲液（pH7.0）中形成DTNB贮存液 。
2、DTNB分析液配制：将DTNB贮存液用0.5 mol/L、pH8.0的Tris - HCl缓冲液稀释100倍，配成DTNB分析 液，避光放置，现配现用 。
谷胱甘肽还原酶测定试剂盒(谷胱甘肽底物法)产品技术要求广州科方生物技术
医疗器械产品技术要求编号：谷胱甘肽还原酶测定试剂盒（谷胱甘肽底物法）2.性能指标2.1试剂盒性能指标2.1.1外观试剂盒各组分应齐全、完整、无液体渗漏；液体试剂应为澄清透明、无絮状物、无肉眼可见颗粒及沉淀的液体；包装标签应清晰，准确、牢固。
2.1.2装量液体试剂的装量应不小于标示量。
2.1.3试剂空白2.1.3.1试剂空白吸光度在温度37℃、波长340nm条件下检测，试剂空白吸光度应≥0.5000（比色杯光径1.0cm）。
2.1.3.2试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率（△A/min）应≤0.0100（比色杯光径1.0cm）。
2.1.4分析灵敏度测定谷胱甘肽还原酶活性为70U/L的样品时，其吸光度变化率（△A/min）应≤0.5000。
2.1.5线性a）线性区间[4,300]U/L，相关系数r应≥0.9900；b）[4,30]U/L区间内绝对偏差应不超过±4.5U/L；（30,300]U/L区间内相对偏差应不超过±15%。
2.1.6精密度2.1.6.1重复性CV应≤10%。
2.1.6.2批间差相对极差（R）应≤10%。
2.1.7准确度以企业参考品为检测样本，测定结果与企业参考品靶值浓度的相对偏差应在±15%范围内。
2.2校准品性能指标2.2.1性状校准品应为无色至淡黄色液体。
2.2.2装量校准品装量应不少于标示值。
2.2.3正确度使用校准物校准后测量参考物质，量值传递的正确度应符合｜En｜≤1。
2.2.4均匀性a）瓶内均匀性：CV≤10%；b）瓶间均匀性：CV≤15%。
2.3质控品性能指标2.3.1外观质控品应为无色至淡黄色液体。
2.3.2装量质控品装量应不少于标示值。
2.3.3预期结果用校准品校准测量程序后测定质控物，结果应在靶值范围内。
2.3.4均匀性瓶间均匀性：CV应≤15.0%。
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒
GSSG。1 U=1000 mU。
c. 对于谷胱甘肽还原酶：1mU/ml＝1nmol NADPH/min/ml＝(A340/min)/0.00622 即相当于：[检测体系中谷胱甘肽还原酶活力]=[A340/min(sapmle)－A340/min(blank)]/0.00622 注：[检测体系中谷胱甘肽还原酶活力]的单位为mU/ml。
如果A340/min(sapmle)＝0.0255，A340/min(blank)＝0.0006，那么 [检测体系中谷胱甘肽还原酶活力]= (0.0255-0.0006)/0.00622=4.0mU/ml
[样品中谷胱甘肽还原酶活力]= 4.0mU/mlX10X20/(0.5mg/ml)=1.6U/mg(蛋白)
注意事项：
¾ 本试剂盒检测时牵涉到氧化还原反应，所有氧化剂或还原剂都会干扰本试剂盒的测定。另外，硫酸钠、硫酸铵和铁氰化 物都会干扰本试剂盒的测定。请尽量避免。
¾ 样品可以立即测定，也可以-70℃冻存待以后测定。 ¾ 一定要严格控制反应时的温度，否则会引起较多误差。 ¾ NADPH不太稳定，要严格按照后续说明操作，谨防失活。 ¾ 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 S0055
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒
产品名称 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒
包装 100次
产品简介：
¾ 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(Glutathione Reductase Assay Kit)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样 品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase)活性的试剂盒。谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷 胱甘肽(GSH)。谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。GSH可以清 除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。
谷胱甘肽还原酶测定试剂盒(谷胱甘肽底物法)产品技术要求jiuqiang
谷胱甘肽还原酶测定试剂盒（谷胱甘肽底物法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清谷胱甘肽还原酶的含量。
1.1 包装规格包装规格见表1。
表1 包装规格1.2 主要组成成分主要组成成分见表2。
表2 主要组成成分2.1 外观试剂1a为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂1b为无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂2为无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；质控品为无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。
试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。
2.2 净含量液体试剂的净含量应不少于标称量。
2.3 试剂空白吸光度2.3.1 试剂空白吸光度A340nm下测定空白吸光度应≤1.5000。
2.3.2 试剂空白吸光度变化率A340nm下测定试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）应≤ 0.0100。
2.4 准确度与已上市产品进行比对试验：在[12，184] U/L区间内，相关系数r≥0.975，在[12，50] U/L区间内测定的绝对偏差应不超过±7.5 U/L，在(50，184]U/L区间内测定的相对偏差应不超过±15%。
2.5 分析灵敏度样本浓度为70U/L时，其吸光度变化率应不超过0.5000。
2.6 线性范围在[12，184] U/L区间内，线性相关系数r≥0.990，在[12，50]U/L区间内线性绝对偏差应不超过±7.5U/L，在(50，184] U/L区间内线性相对偏差应不超过±15%。
2.7 测量精密度2.7.1 重复性使用高、低不同浓度的血清样本或质控品重复测定10次，其测定值的变异系数（CV％）应不大于10％。
2.7.2 批间差随机抽取三批试剂盒的批间相对极差（R）应不大于10%。
2.8 瓶间差试剂1b、试剂2、质控品的瓶间差应≤10%。
谷胱甘肽还原酶测定试剂盒(谷胱甘肽底物法)产品技术要求万泰德瑞
谷胱甘肽还原酶测定试剂盒（谷胱甘肽底物法）2.1 外观试剂1：无色至淡黄色液体；试剂2：无色至淡黄色液体；校准品：冻干粉，复溶后为无色或淡黄色液体；质控品：冻干粉，复溶后为无色或淡黄色液体。
2.2 试剂装量液体成分应不少于标示值。
2.3 试剂空白吸光度2.3.1 试剂空白吸光度试剂空白吸光度应不小于0.6000。
2.3.2 试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率的绝对值应不大于0.0200/min。
2.4 分析灵敏度70U/L样本的吸光度变化率的绝对值应不小于0.0050。
2.5 准确度用已上市试剂盒和本公司试剂盒同时测试至少40例线性范围内的不同浓度的血清样本，其相关系数（r）不小于0.975；在[5，50] U/L区间内，线性绝对偏差不超过±7.5 U/L，(50，200]U/L区间内，线性相对偏差应不超过±15%。
2.6 精密度2.6.1 重复性变异系数（CV）应不大于15%。
2.6.2 批间差批间相对极差（R）应不大于15%。
2.7 线性在[5，200] U/L区间内，线性相关系数(r)应不小于0.990；[5，50]U/L区间内，线性绝对偏差不超过±7.5U/L，(50，200] U/L区间内，线性相对偏差应不超过±15%。
2.8 瓶间均一性校准品、质控品瓶间变异系数应不大于15%。
2.9 质控品赋值有效性质控品检测结果应在其质控范围内。
2.10 校准品溯源性根据GB/T 21415-2008 《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》要求，提供试剂盒内校准品的来源、赋值过程及测量不确定度。
校准品可溯源至本公司工作校准品。
2.11 稳定性2.11.1 效期稳定性原包装试剂盒在2℃～8℃贮存有效期为12个月，取过效期2个月内试剂盒检测性能指标应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7、2.8、2.9之规定。
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总谷胱甘肽(T-GSH)检测试剂盒(DTNB 速率比色法)
简介：
谷胱甘肽(glutathione ，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。
还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。
总谷胱甘肽(T-GSH)检测试剂盒(DTNB 速率微板法)(T otal Glutathione Assay Kit)是一种简单易行的检测总谷胱甘肽(T-GSH)的试剂盒，其检测原理是谷胱甘肽还原酶把氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原成还原型谷胱甘肽(GSH)，由GSSG 还原成的GSH 和样品本身含有的GSH 都与发色底物DTNB 反应，生成黄色的TNB 和GSSG 。
该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中总谷胱甘肽(T-GSH)含量。
该试剂盒仅用于科研，不用于临床诊断或其他用途。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 配制GSH 标准储存液：取10mg 还原型谷胱甘肽(GSH)标准加入3.25ml ddH 2O ，溶
解并混匀，即为还原型GSH 标准储存液(10mM)。
一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
2、 配制50×GSH 还原酶：按GSH 还原酶原液：GSH assay buffer =1:49的比例混合，
即为50×GSH 还原酶。
-20℃保存，3个月有效。
3、 配制T-GSH 检测工作液：按下表配制T-GSH 检测工作液。
1个样品 10个样品 50个样品 GSH assay buffer 1.6ml 16ml 80ml DTNB 储存液
5μl
50μl
250μl
编号 名称
TO1049 100T Storage
试剂(A): 还原型谷胱甘肽(GSH)标准 10mg 4℃ 避光 试剂(B): GSH assay buffer 250ml RT 试剂(D): 蛋白沉淀剂 4g RT 避光 试剂(E): NADPH 10mg -20℃ 避光 试剂(F): DMSO 1.5ml RT 避光 试剂(G): ddH 2O 50ml
RT 避光 使用说明书
1份
50×GSH还原酶43.2μl 432μl 2160μl
4、配制蛋白沉淀工作液：在本试剂盒提供的4g蛋白沉淀剂中加入80ml ddH2O，配制成
10ml 5%的水溶液，即为蛋白沉淀工作液，4℃保存。
5、配制标准品：把还原型GSH标准储存液(10mM)用蛋白沉淀工作液稀释成50μM标准
溶液。
然后依次稀释成6个点做标准曲线。
6、准备样品：
①红细胞或血浆样品的制备：请尽量使用新鲜的血液进行测定。
离心，沉淀为红细胞，上
清为血浆。
对于红细胞，用PBS洗涤两次。
取约5红细胞沉淀或血浆，加入蛋白沉淀工作液，充分Vortex振匀。
4℃或冰浴放置，4℃离心，取上清用于还原型谷胱甘肽(GSH)测定，样品需暂时4℃保存备用。
②组织样品的制备：取组织用液氮速冻，迅速研磨，按每50mg加入150μl蛋白沉淀工
作液，充分Vortex振匀，再加入350μl蛋白沉淀工作液，用匀浆器充分匀浆。
4℃孵育，离心，取上清用于还原型谷胱甘肽(GSH)测定。
③细胞样品的制备：PBS洗涤细胞1次，离心收集细胞，吸尽上清。
加入细胞沉淀3倍
体积的蛋白沉淀工作液，充分Vortex振匀。
(收集细胞前后分别对离心管进行称重，从而就可以计算出细胞沉淀的重量，10mg细胞沉淀的体积可以粗略地看做10ml。
)对样品进行快速的冻融后，4℃或冰上孵育5min。
离心取上清用于还原型谷胱甘肽(GSH)测定。
7、T-GSH加样操作：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，
并注意避免产生气泡。
如果样品中的T-GSH浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
加入物(ml) 空白管标准管测定管蛋白沉淀工作液0.08 ——
系列标准品(2～50μM) —0.08 —
待测样品——0.08
GSH检测工作液 1.6 1.6 1.6
室温或25℃孵育。
NADPH工作液(0.12mg/ml) 0.4 0.4 0.4
9、T-GSH检测：立即用酶标仪或自动生化分析仪于410nm处每隔2min检测一次，空白管调零，共检测6min(亦可加入NADPH工作液反应6min后检测，只检测1次)，以检测其反应速率ΔA/min。
如果酶标仪不能检测410nm，可测定405～420nm处吸光度。
计算：
①动力学测定法：根据不同时间点测定得到的吸光度值计算出ΔA410/min，以GSH标准
的浓度为横坐标，以ΔA410/min为纵坐标，做出标准曲线。
根据待测的ΔA410/min，对照标准曲线就可以计算出测定时样品还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)的含量。
GSSG含量=总谷胱甘肽(T-GSH)的含量-还原型谷胱甘肽(GSH)含量
②终点测定法：即反应6min仅测定1次吸光度。
以GSH标准的浓度(50、25、15、10、
5、2μM)为横坐标，以ΔA410/min为纵坐标，做出标准曲线。
样品对照标准曲线即可
计算出总谷胱甘肽的含量。
终点测定法比动力学法快捷。
GSSG含量=总谷胱甘肽(T-GSH)的含量-还原型谷胱甘肽(GSH)含量
参考区间：
成年全血GSH 1.02～mmol/L
注意事项：
1、请尽量使用新鲜的细胞进行测定，而不要使用冻存的细胞进行测定，避免使酶活性下
降。
2、全血GSH与吸烟和锻炼成正比。
3、测定各孔时，各孔温度均需达到室温或25℃，否则影响结果。
4、轻度溶血样本对GSH测定无影响。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。