13第十三章 其他革兰阴性杆菌检验
第十三章 化妆品微生物
铜绿假单胞菌检测
-6,7
6. 硝酸盐还原产气试验：挑取被检的纯培养物， 接种在硝酸盐蛋白胨水培养基中，置37℃培 养24h，观察结果。凡在硝酸盐胨水培养基 内的小倒管中有气体者，即为阳性，表明该 菌能还原硝酸盐，并将亚硝酸盐分解产生氮 气。
铜绿假单胞菌检测
-8
7. 明胶液化试验，取绿脓杆菌可疑菌落的纯培 养物，穿刺接种在明胶培养基内，置37℃培 养24h，取出放冰箱10～30min，如仍呈溶解 状时即为明胶液化试验阳性，如凝固不溶者 为阴性。 8. 42℃生长试验：挑取纯培养物，接种在普通 琼脂斜面培养基上，放在41～42℃培养箱中， 培养24～48h，绿脓杆菌能生长，为阳性，而 近似的荧光假单胞菌则不能生长。
第十三章
化妆品微生物
化妆品生境特性 化妆品微生物污染的来源、种类及意义 化妆品微生物检测与卫生标准 化妆品微生物污染及预防 化妆品微生物研究前景
化妆品生境特征
1. 水 2. 蛋白质、淀粉等 3. pH值 (4~7) 4. 油、石蜡等无水的脂类不支持微生物生长。 5. 脂肪酸、醇、酯等可以抑制微生物生长。 6. 防腐剂
4. 化妆品检验的特点
• 样品的前处理：对于一些油性样品，要先加入 液体石蜡混匀，再加入Tween-80使之均质化， 然后加生理盐水稀释；亲水性的样品可以直接 用生理盐水稀释 • 中和防腐剂的抑菌作用：需要加入相应的中和 剂，如使用含酚类防腐剂的化妆品，可在培养 基中加入卵磷脂和Tween-80以消除抑菌作用。 • 培养基的高营养成分：目前推荐的菌落总数测 定和增菌用培养基是卵磷脂、Tween-80、大豆、 及酪蛋白消化培养基（SCDLP）或卵磷脂、 Tween-80营养琼脂培养基。
可将皮肤微生物带入化妆品中。
第10章其他革兰阴性杆菌分析解析
+
+ + +
+
+ -
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+ + -
+
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+ + -
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(-) + -
+ +
&#+
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-
-
+
+
+
-
+
-
不定; (-) 大部分菌株阴性
第四节
巴斯德菌属（Pasteurella）
分类
多杀巴斯德菌（P.multocida） 嗜肺巴斯德菌（P.pneumotropica） 溶血巴斯德菌（P.haemolytica） 产气巴斯德菌（P.aerogenes） 鸡巴斯德菌（P.qallinarum） 犬巴斯德菌（P.Canis） 贝氏巴斯德菌（P.beffgae） 达可马巴斯德菌（P.dagmatis） 明立巴斯德菌（P.tomatts）
薯）、CCBA培养基
•百日咳鲍特菌在CCBA培养基的菌落
（二）临床检验程序
1.标本采集
咳碟法、鼻咽拭子法
2.标本直接检查
直接显微镜检查 抗原检测 核酸检测
3.分离培养与鉴定
标 本
直接检查（革兰染色） DFA 抗原检出 核酸检测
分离培养
血清学诊断，ELISA等
鲍-金琼脂 可疑菌落
菌血症
（70％）
临床检验技术中级《专业实践能力》模拟试卷一
临床检验技术中级《专业实践能力》模拟试卷一[单选题]1.ABO血型抗原属于A.异种抗原（江南博哥）B.同种异体抗原C.独特型抗原D.隐蔽的自身抗原E.异嗜性抗原参考答案：B参考解析：同种异体抗原指同一种属不同个体来源的抗原物质，人类ABO血型即属于此类抗原。
掌握“第五章血型和输血2”知识点。
[单选题]3.铁粒红细胞是指A.早幼红细胞B.中幼红细胞C.晚幼红细胞D.网织红细胞E.成熟红细胞参考答案：E参考解析：成熟红细胞中出现铁颗粒称为铁粒红细胞。
中幼和晚幼红细胞的胞质中出现铁颗粒称为铁粒幼红细胞。
掌握“第三章骨髓细胞学检查的临床意义1,3”知识点。
[单选题]5.免疫比浊属于A.沉淀反应B.中和反应C.补体结合反应D.凝集反应E.免疫标记技术参考答案：A参考解析：可溶性抗原与相应抗体结合，在一定条件下形成浊度，通过检测透射光或散射光的强度对抗原进行测定。
因此，免疫比浊法属于沉淀反应。
掌握“第六章体液内、凝胶内沉淀试验和免疫电泳技术4”知识点。
[单选题]6.对于霍乱弧菌生物学特性叙述正确的是A.短链球菌B.肾球形细菌C.革兰阳性弧菌D.椭圆球菌E.弧形或逗点状，人工培养易失去弧形而呈杆状参考答案：E参考解析：霍乱弧菌为弧形或逗点状，人工培养易失去弧形而呈杆状，有菌毛，有鞭毛，运动活泼。
掌握“第十五章弧菌科及检验1”知识点。
[单选题]7.关于Rh血型的叙述错误的是A.红细胞膜含有D抗原的是Rh阳性B.Rh阳性人血中含有抗D抗体C.Rh阴性者再次接受阳性输血时会发生凝集反应D.Rh阴性母亲再次孕育Rh阳性胎儿时可能发生新生儿溶血E.Rh血型系统的抗体为获得性免疫抗体参考答案：B参考解析：Rh阳性人血中含有D抗原。
掌握“第五章血型和输血2”知识点。
[单选题]8.与特发性血小板减少性紫癜实验室特征不符合的是A.血小板计数明显降低B.骨髓巨核细胞增多C.急性型患者以颗粒型巨核细胞增多为主D.血小板寿命缩短E.血小板相关抗体及补体增高参考答案：C参考解析：急性型患者以幼稚型巨核细胞增多为主。
微生物检验第二十一章 其他革兰阴性杆菌及检验(小细菌)讲义
第二十一章其他革兰阴性杆菌及检验（小细菌）本章内容嗜血杆菌属（一）流感嗜血杆菌（二）其他嗜血杆菌弗朗西斯菌属鲍特菌属布鲁菌属巴斯德菌属标题记忆关联记忆图像记忆小细菌·菌体小，形态近似球杆菌。
·无动力，无芽胞。
·对营养要求较苛刻。
·主要包括嗜血杆菌属、鲍特菌属、布鲁菌属等。
嗜血杆菌属·G-小杆菌，呈球杆状，有时呈杆状、长丝状等多形态。
·无动力、无芽胞。
·包括16个菌种，其中与临床有关的有流感、副流感、溶血、副溶血、嗜沫、副嗜沫、杜克及埃及嗜血杆菌。
·须在人工培养基中加入新鲜血液才能生长，故称嗜血杆菌。
流感嗜血杆菌——生物学特性·形态与结构形态：急性感染标本为短小球杆菌，恢复期或长期人工传代培养后可呈多形态性。
染色：G-，着色较浅。
苯酚复红或亚甲蓝单染色，呈现两端浓染现象。
特殊结构：毒力株（黏液型菌株）在营养丰富的培养基上，6～8h有明显荚膜。
无鞭毛，无芽胞。
流感嗜血杆菌——生物学特性·培养特性营养要求：高。
气体环境：需氧或兼性厌氧。
温度环境：最适37℃，pH7.6～7.8。
·培养特性菌落特点：普通培养基中须加入X和V因子。
加热血平板（巧克力平板）：18～24h后圆形、光滑湿润、边缘整齐，呈露滴状的小菌落。
在其中加一定量抗生素（万古霉素/杆菌肽/克林霉素）制成选择培养基可提高检出率。
在葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大，离葡萄球菌菌落越远的菌落越小，此称为卫星现象，这有助于对流感嗜血杆菌的鉴定。
液体培养基：有荚膜的菌株均匀混浊生长，无荚膜的菌株颗粒状沉淀生长。
流感嗜血杆菌——微生物检验及鉴定·标本采集：根据病情采集相应的临床标本。
·形态学检查：G-短小杆菌或多形态杆菌。
·分离培养：巧克力琼脂平板或选择性巧克力琼脂平板，经37℃培养24～48h。
根据菌落形态、涂片染色、卫星现象，X、V因子需求与否判断。
临床医学检验考试辅导《微生物检验》其他革兰阴性杆菌及检验讲义
其他革兰阴性杆菌及检验●考点◆ 嗜血杆菌属·生物学性状·临床意义·微生物学检查◆ 军团菌属、鲍特菌属、布鲁菌属【内容讲解】其他革兰阴性杆菌：◆ 一些无动力，无芽胞，菌体小，形态近似球杆菌，对营养要求较苛刻的小杆菌。
◆ 主要包括嗜血杆菌属、鲍特菌属、布鲁菌属等。
一、嗜血杆菌属◆ 一类无动力、无芽胞的革兰阴性小杆菌，常呈球杆状，有时呈杆状、长丝状等多形态。
◆ 与临床有关的为9个种，即流感、副流感、溶血、副溶血、嗜沫、副嗜沫、杜克及埃及嗜血杆菌。
◆ 人工培养基中加入新鲜血液才能生长，故称嗜血杆菌。
（二）流感嗜血杆菌简称流感杆菌，不是流感的病原菌。
1.生物学性状（1）形态与染色：◆ 急性感染标本，如脑脊液中多为短小球杆菌，恢复期病灶或长期人工传代培养呈球杆状、长杆状、丝、状等多形态性。
◆ G-，着色较浅。
石碳酸复红或美蓝单染色，两端浓染现象。
◆ 毒力株（粘液型菌株）在营养丰富的培养基上，6～8h有明显荚膜，在陈旧培养物中荚膜消失。
◆ 无鞭毛，无芽胞。
（2）培养特性：◆ 需氧菌。
初次分离培养时，最好在5%～10%C02环境中，以促进其生长。
◆ 普通培养基中须加入X和V因子，才能生长。
◆ 巧克力琼脂平板上生长较佳：圆形、光滑、湿润、边缘整齐，呈露滴状的小菌落。
48h后可形成直径1.0～1.5mm灰白色较大的菌落。
有荚膜菌株的菌落呈轻度粘稠。
◆ 卫星现象：有助于对流感嗜血杆菌的鉴定。
当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上共同培养时，由于后者能合成较多的V因子，可促进流感嗜血杆菌的生长，在葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大，离葡萄球菌菌落越远的菌落越小。
◆ 液体培养基中：有荚膜的菌株呈均匀混浊生长，无荚膜的R型菌株则为颗粒状沉淀生长。
（3）生化反应：◆ 对糖发酵不稳定。
一般分解葡萄糖只产酸，不分解乳糖或甘露醇，对麦芽糖、蔗糖或糊精的发酵不稳定。
◆ 还原硝酸盐。
有荚膜菌株产生吲哚。
其它革兰阴性杆菌
故名百日咳 + 细菌仅存在于呼吸道上皮细胞表面，不进入血流 + 感染后可获得持久免疫力，再次感染少见
21
+ + +
革兰阴性短小杆菌 无鞭毛、无芽胞、光滑型菌株有荚膜 专性需氧，最适温度35 ℃
+
营养要求高，初次分离培养需用含有
甘油、马铃薯、血液的鲍-金（B-G） 培养基：经35～37℃培养3～5天后，
分布：极其广泛，遍布于天然水源(河水，湖水，川水) ， 泥土及人工水源(空调水塔，挥发式冷凝器，冷43; 形态与染色
革兰阴性杆菌，有时呈丝状，，有端生或侧生鞭毛，有微 荚膜，无芽胞。常规染色方法菌体不易着色，用姬美耐染 色，菌体呈红色，背景为绿色。用苏丹黑B作脂肪染色， 可观察到细胞内有蓝黑色或蓝灰色颗粒
4
几种主要嗜血杆菌常栖部位及所致疾病
常栖部位及所致疾病 寄居于正常人呼吸道，引起原发化脓性感染及继发性感染，包 括脑膜炎、鼻咽炎、关节炎、心包炎、鼻窦炎及中耳炎等。 口腔及阴道正常菌群，偶尔可引起心内膜炎、尿道炎。 鼻咽部正常菌群，常引起儿童上呼吸道感染。 口腔、咽部正常菌群，偶可引起咽炎、化脓性口腔炎和心内膜 炎
14
血清学试验
菌落特征 菌体形态 卫星现象 X、V因子需求试验 直接荧光抗体法 沉淀试验 荚膜肿胀试验
15
+ 药敏试验：K-B法 + 培养基：HTM + 质控菌株：（ATCC49247） + 需常规检测β-内酰胺酶
+ 耐药机制是：
1.由质粒介导的β-内酰胺酶基因TEM-1型 2.由染色体介导的PBP（青霉素结合蛋白）的改变 3.对氯霉素、四环素耐药与R质粒相关
其他革兰阴性杆菌共48页
31、别人笑我太疯癫，我笑他人看不 穿。(名 言网) 32、我不想听失意者的哭泣，抱怨者 的牢骚 ，这是 羊群中 的瘟疫 ，我不 能被它 传染。 我要尽 量避免 绝望， 辛勤耕 耘，忍 受苦楚 。我一 试再试 ，争取 每天的 成功， 避免以 失败收 常在别 人停滞 不前时 ，我继 续拼搏 。
1、最灵繁的人也看不见自己的背脊。——非洲 2、最困难的事情人共事，无字句处读书。——周恩来 5、阅读使人充实，会谈使人敏捷，写作使人精确。——培根
33、如果惧怕前面跌宕的山岩，生命 就永远 只能是 死水一 潭。 34、当你眼泪忍不住要流出来的时候 ，睁大 眼睛， 千万别 眨眼!你会看到 世界由 清晰变 模糊的 全过程 ，心会 在你泪 水落下 的那一 刻变得 清澈明 晰。盐 。注定 要融化 的，也 许是用 眼泪的 方式。
35、不要以为自己成功一次就可以了 ，也不 要以为 过去的 光荣可 以被永 远肯定 。
第10章 其他革兰阴性杆菌
第二节 布鲁菌属——分类
人兽共患病的病原菌之一 羊布鲁菌 牛布鲁菌 猪布鲁菌 绵羊布鲁菌 狗布鲁菌 森林鼠布鲁菌
第二节 布鲁菌属——临床意义
传染源：病兽，以羊、牛、猪多见 传播途径：病兽的组织、尿、乳液、等通过人体 的皮肤、呼吸道、消化道进入人体 易感人群：发病以青壮年为主，从事兽医、皮毛 加工、屠宰的工人发病率较高 潜伏期：5~21日，亦可高达数月 动物感染后 乳腺炎、流产 人感染后 波浪热 人对该菌易感性 羊＞猪＞牛布鲁菌
可疑菌落
菌落观察
镜检
生化反应
核酸检测
凝集反应
第二节 百日咳鲍特菌——微生物学检验
标本直接检测 抗原检测 ①直接荧光抗体检测 ②单克隆抗体检测 核酸检测 抗体检测：IgM及IgA，其中IgA在感染早期出现， 不受接种疫苗干扰，有利于早期诊断
第二节 百日咳鲍特菌——微生物学检验
药物敏感试验及结果解释 本菌的感染以预防接种为主，进行控制 临床治疗首选红霉素类，次选氨曲南及磺胺增效 剂（SMZ-TMP） 青霉素不敏感，大多数菌株对四环素耐药
第二节 布鲁菌属——生物学特性
标本（血液、羊水、骨髓、分泌物等）
血清学诊断 凝集试验 抗人球蛋白试验 补体结合试验
分离培养（5%~10%CO2） 血琼脂、双相培养基 马铃薯培养基 分离培养 菌落、染色镜检
动物实验（豚鼠腹腔 或皮下注射）
镜检
凝集试验
纯培养
生化反应
凝集试验
第四节 巴斯德菌属——分类
第五节 弗朗西斯菌属——微生物学检验
培养困难，一般采用血清凝集试验 在发病一周后即出现血凝抗体 1月后抗体效价可高达1:10000 8个月后降到1:640 在病程中抗体效价4倍增长 单价血清效价＞1:160才可诊断
13第十三章 其他革兰阴性杆菌检验 (1)
第十三章其他革兰阴性杆菌检验一、名词解释1.卫星现象(Satellite phenomenon)2.百日咳毒素(pertussis toxin, PT)3.丝状血细胞凝集素(filamentous hemagglutinin, FHA)4.腺嘌呤环酶毒素（adenylcyclase toxin, ACT）二、选择题【A1型题】1.布氏菌病患者，细菌检出率最高的标本是A、骨髓B、分泌物C、血液D、尿液E、痰液2.在脑脊液涂片染色中，发现革兰阴性、多形态、菌体着色不均的细菌，可初步判定为A、脑膜炎奈瑟菌B、肺炎链球菌C、大肠埃希菌D、产单核李斯特菌E、流感嗜血杆菌3.如果在加有X、V因子的巧克力琼脂或血琼脂平板上生长出小的、无色透明的菌落，革兰染色呈阴性短小球杆菌，应按何菌鉴定A、脑膜炎奈瑟菌B、肺炎链球菌C、流感嗜血杆菌D、产单核李斯特菌E、大肠埃希菌4.流感嗜血杆菌常规检测A、乳酸脱氢酶B、β内酰胺酶C、琥珀酸脱氢酶D、耐热核酸酶E、丙氨酸脱氢酶E、以上皆是5.下列细菌所选培养基正确的是A、钩端螺旋体接种于沙氏培养基B、艰难梭菌接种于厌氧血琼脂C、氧化-发酵试验接种于含糖蛋白胨水D、军团菌接种于BCYE琼脂E、流感嗜血杆菌接种于营养琼脂6.能引起性病软性下疳的嗜血杆菌是A、杜克嗜血杆菌B、埃及嗜血杆菌C、嗜沫嗜血杆菌D、溶血嗜血杆菌E、副嗜沫嗜血杆菌7.不属人畜共患病原菌的是A、小肠结肠耶尔森菌B、假结核耶尔森菌C、空肠弯曲菌D、布鲁菌E、嗜肺军团菌8.流感嗜血杆菌不能引起的疾病是A、脑膜炎B、流行性感冒C、败血症D、心包炎E、中耳炎9.百日咳鲍特菌检出率最高的病期是A、潜伏期B、卡他期C、痉咳期D、恢复早期E、恢复晚期10.下列布氏菌中毒力最强的是A、牛布氏菌B、猪布氏菌C、羊布氏菌D、犬布氏菌E、森林鼠布鲁菌11.疑似布氏菌病患者，作血液增菌时首选的培养基是A、葡萄糖肉汤B、硫酸镁葡萄糖肉汤C、双相肝浸液培养基D、肝浸汤E、蛋白胨肉汤12.与流感嗜血杆菌有关的是A、革兰阴性小杆菌环境B、初次培养需要5%～10%的CO2C、营养要求很高D、生长需要X、V因子E、以上均是13.引起幼儿脑膜炎的流感嗜血杆菌最多见的型是A、a型B、b型C、c型D、e型E、f型14.军团菌病的传播途径是A、空气B、食物C、血液D、皮肤E、人畜【B型题】32～36题：细菌与所致疾病A、百日咳鲍特菌B、羊布鲁菌C、多杀巴斯特菌D、杜克氏嗜血杆菌E、流感嗜血杆菌15.咽炎、中耳炎、肺炎16.软下疳，性传播性疾病17.百日咳18.流产及死胎19.动物咬伤后的淋巴结肿大【X型题】20.关于百日咳鲍特菌的描述，正确的是A、革兰阴性小杆菌B、专性需氧C、无芽胞、有荚膜D、K抗原中7因子是百日咳、副百日咳、支气管鲍特菌的共有因子E、抵抗力强，紫外线不敏感21.关于嗜肺军团菌的描述，错误的是A、革兰阴性杆菌B、无芽胞、无荚膜C、触酶阴性D、不液化明胶E、动力阳性22.关于流感嗜血杆菌的描述，正确的是A、可在呼吸道定植B、无动力C、血清b型致病力强D、可引起中耳炎E、可引起软性下疳三、问答题1.军团菌感染的实验室诊断检查项目有哪些？如何选用？2.临床常见嗜血杆菌属引起感染的疾病有哪些？其培养特性是什么？3.百日咳病是由什么菌引起？该菌的主要致病毒素有哪五种？。
革兰阴性需氧和兼性厌氧性杆菌鉴定—非发酵菌的共性(微生物检验课件)
+/-
非发酵菌－－检验程序
涂片 染色镜检
标本
分离培养 （血平板、麦康凯）
血标本 增菌
可疑菌落
涂片 动力观察 革兰染色 鞭毛染色
氧化酶
O/F 硝酸盐还原
KIA斜面底层不变色 其他生化反应
第三节 非发酵革兰阴性杆菌
❖ 是一大群不发酵葡萄糖或以氧化形式利用 糖、需氧或兼性厌氧、无芽孢的革兰阴性 杆菌。
非发酵菌主要种类
❖ 铜绿假单胞菌 ❖ 不动杆菌属 ❖ 产碱杆菌属 ❖ 莫拉菌属 ❖ 黄杆菌属 ❖ 嗜麦芽假单胞菌属 ❖ 荧光假单胞菌属等
非发酵菌主要特点
❖ 氧化酶：＋；不动杆菌属除外 ❖ O/F试验：O/－ ❖ 动力试验：多数有鞭毛，但半固体动力试验不明显，常采用
氧化酶
－
＋
＋
葡萄糖氧化/ 发酵（O/F）
鞭毛
F 周鞭毛
O／－
F
单、丛、周 单、丛
非发酵菌主要菌属的生化反应
菌属 氧化酶 葡萄糖 O/F
假单胞菌属 +
不动杆菌属 -
产碱杆菌属 +
莫拉菌属
+
黄杆菌属
+
O/O/-
O/F
动力 触媒 硝酸盐还原 麦康凯上生长
+
+
+/-
+
-
+
-
+
+
+
+/-
+
-
3;
-
+
-
镜检或鞭毛染色 （不动杆菌、黄杆菌属和莫拉菌属除外）
葡萄糖氧化发酵试验（O/F）
O/F培养基 （半固体高层）
其他革兰阴性杆菌
百日咳
临床意义
2）腺嘌呤环酶毒素（adenylcyclase toxin,ACT）：使ATP转化为cAMP，干扰 免疫效应细胞的功能（抑制巨噬细胞的氧 化活性，抑制NK细胞的溶细胞作用）。
3）丝状血细胞凝集素（filamentous hemagglutinin,FHA）：促进病原体与上 皮细胞粘附。
鲍特菌属 布鲁菌属 巴斯德菌属 弗朗西斯菌属
鲍特菌属
共同特征 革兰阴性小杆菌 无芽胞、无鞭毛（支气管炎鲍特菌、鸟
鲍特菌除外）、有荚膜
鲍特菌属
百日咳鲍特菌 副百日咳鲍特菌 支气管败血鲍特菌 鸟鲍特菌 欣氏鲍特菌 霍氏鲍特菌
百日咳鲍特菌
形态染色 革兰阴性短杆菌或椭圆形菌，多单 个分散存在，培养条件不适可出现 丝状形态。
抵抗力弱， 对热敏感（56℃30min、日 光照射1h即死亡）。干燥尘埃中能存活3 天。
临床意义
所致疾病：百日咳，人类是百日咳鲍特菌唯一 宿主。
致病因素： 1）百日咳毒素（perttussis toxin,PT）：为外 毒素，由5个蛋白亚单位构成，是百日咳杆菌 的主要毒力因子，与附着纤毛上皮和阵发性咳 嗽有关。
传播途径
– 直接接触，引起母畜流产，病畜可表现为睾 丸炎、附睾炎、乳腺炎、子宫炎等。
– 间接接触引起人兽共患性疾病
流行环节
分泌物、乳品
消化道、呼吸道粘 膜、皮肤接触及眼
人
结膜
1－6W 菌血症 潜伏期 （70％）
内毒素
发热、出汗、 关节痛和全 身乏力
进入肝、脾、骨髓 繁殖入血
菌血症
（发热消退）
（寄生在巨噬细胞内）
（体温再次上升）
波浪热
其他革兰阴性杆菌
3. 生化鉴定及染料抑制试验 氧化酶、触酶：＋ 氧化分解葡萄糖，但产酸量少。 产生硫化氢
34
菌 种
羊布鲁菌 牛布鲁菌 猪布鲁菌 绵羊布鲁菌
各种布鲁菌的生化鉴定
触酶 氧化酶 葡萄糖 精氨酸 分解 脱羧
+
+
+
-
+
+
+
-
+
+
+
+
+
-
-
-
染料的耐受
硫堇 复红
40μg 20μg
+
+
-
+
+
-
+
-
犬布鲁菌
一
分类
二 临床意义
三 形态和培养特征
四 种属鉴定
40
(一)分类
百日咳鲍特菌(B.pertussis) 副百日咳鲍特菌（B.parapertussis）
支气管鲍特菌(B.branchiseptica) 鸟鲍特菌(B.avium)
欣氏鲍特菌(B.hinzii)
霍氏鲍特菌(B.holmesii)
前三种DNA同源性72％～94％，
52
标本
直接检查（革兰染色）
抗D原FA检出 核酸检测
分离培养
血清学诊断，ELISA等
鲍金琼脂等
可疑菌落
菌落观察
镜检
生化反应
DFA 核酸检测
鲍特菌检验程序
凝集反应
53
3. 初次分离 营养要求较高，需半胱氨酸和组氨酸等， 产过多脂肪酸抑制生长，加入15％~25％血、活性炭吸附多 余脂肪酸； 2~3天形成细小光滑、灰色不透明露滴状菌落，狭窄溶血环。
中级临床医学检验技术微生物学及检验(其他革兰阴性杆菌、弧菌科
中级临床医学检验技术微生物学及检验（其他革兰阴性杆菌、弧菌科、弯曲菌与螺杆菌）模拟试卷2(题后含答案及解析) 题型有：1. A2型题 2. A1型题 3. B1型题1．支气管哮喘患者雾化吸入治疗后，10天出现乏力，头痛，继而高热，咳嗽，脓痰伴胸痛、恶心、呕吐、腹泻，白细胞15×109／L，怀疑军团菌感染，应选用的抗生素是A．头孢类抗生素B．青霉素C．红霉素D．庆大霉素E．亚胺培南正确答案：C解析：军团菌为细胞内寄生菌，作用于细胞壁的抗生素无效。
知识模块：其他革兰阴性杆菌2．男性病人，43岁，头晕，腹胀，剧烈腹泻水样便伴呕吐1天。
无腹痛，无里急后重。
查，疲倦面容，皮肤、唇舌干燥，眼窝内陷。
血压80／60mmHg。
应首先进行如下何种检查来进行初步诊断A．便常规B．尿常规C．取粪便标本立即进行直接悬滴检查D．取耳血立即进行直接悬滴检查E．碱性蛋白胨水接种正确答案：C解析：初步怀疑是霍乱弧菌感染，一般取粪便标本立即进行直接悬滴检查。
知识模块：弧菌科3．嗜血杆菌分离培养时，需要V因子是因为它是A．高铁血红素B．脱氢酶的辅酶C．过氧化氢酶的辅基D．细胞色素氧化酶的辅基E．触酶的辅基正确答案：B解析：X因子是对热稳定的物质，是一种含铁的卟啉，是细菌合成过氧化氢酶、细胞色素氧化酶、过氧化物酶的辅基；V因子是对热不稳定的维生素B类物质，是一种脱氢酶的辅基酶。
知识模块：其他革兰阴性杆菌4．流感嗜血杆菌不产生的致病物质是A．外毒素B．内毒素C．菌毛D．荚膜E．IgA蛋白酶正确答案：A解析：流感嗜血杆菌不产生外毒素，其致病物质是具有抗吞噬作用的荚膜、具有黏附作用的菌毛，以及能分解分泌性IgA的IgA酶。
知识模块：其他革兰阴性杆菌5．下列有关嗜肺军团菌的描述，错误的是A．生长繁殖较快B．有鞭毛，无芽孢C．最适生长温度35℃D．主要通过呼吸道传播E．培养需用含半胱氨酸和铁的培养基正确答案：A解析：军团菌属是革兰阴性、无芽孢、无荚膜、有鞭毛，严格需氧、触酶阳性，可液化明胶，不分解糖类，本菌营养要求苛刻，生长缓慢，最适生长温度35℃，初次分离必须用L-半胱氨酸和铁离子，在活性炭酵母浸液琼脂培养基上3～5天可形成1～2mm直径的光泽菌落。
13第十三章 其他革兰阴性杆菌检验
临床微生物学检验技术
临床意义
表9-1 几种主要嗜血杆菌常栖部位及所致疾病
菌种 流感嗜血杆菌
副流感嗜血杆菌 溶血嗜血杆菌 副溶血嗜血杆菌
杜克雷嗜血杆菌 埃及嗜血杆菌 嗜沫嗜血杆菌 副嗜沫嗜血杆菌
常栖部位及所致疾病
原发化脓性感染及继发性感染，包括脑膜炎、鼻咽炎、关节炎、 心包炎、鼻窦炎及中耳炎等。 口腔及阴道正常菌群，偶尔可引起心内膜炎、尿道炎。 鼻咽部正常菌群，常引起儿童上呼吸道感染。
核酸检测
分离培 养
血清学诊断，ELISA等
鲍金琼脂 等
可疑菌落
菌落观察
镜检
生化反应 DFA 核酸检测
鲍特菌检验程 序
凝集反应
临床微生物学检验技术
分离培养与鉴定
在CCBA琼脂平 版上形成光滑、 有光泽、水银 样的菌落
•百日咳鲍特菌在CCBA培养基的菌落
临床微生物学检验技术
6种鲍特菌生化特征
动力 氧化酶 脲酶
临床微生物学检验技术
临床意义
传染源：病兽，以羊、牛、猪多见 传播途径：病兽的组织、尿、乳液、等通过人体的
皮肤、呼吸道、消化道进入人体 易感人群：发病以青壮年为主，从事兽医、皮毛加
工、屠宰的工人发病率较高 潜伏期：5~21日，亦可高达数月
临床微生物学检验技术
临床表现：
• 症状：长期发热，多汗，关节疼痛及全身乏力，疼痛 • 病理：菌在淋巴结、脾、骨髓等处繁殖，并多次入
百日咳鲍特菌
-
+
-
副百日咳鲍特菌 -
-
+
支气管炎鲍特菌 +
+
+
鸟鲍特菌
+
+
-
革兰氏阴性菌检测
选择培养基(selective medium)选择培养基是用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基。
根据不同种类微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不同，在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。
一种类型选择培养基是依据某些微生物的特殊营养需求设计的，例如，利用以纤维素或石蜡油作为唯一碳源的选择培养基，可以从混杂的微生物群体中分离出能分解纤维素或石蜡油的微生物；利用以蛋白质作为唯一氮源的选择培养基，可以分离产胞外蛋白酶的微生物；缺乏氮源的选择培养基可用来分离固氮微生物。
另一类选择培养基是在培养基中加入某种化学物质，这种化学物质没有营养作用，对所需分离的微生物无害，但可以抑制或杀死其他微生物，例如，在培养基中加入数滴10%酚可以抑制细菌和霉菌的生长，从而由混杂的微生物群体中分离出放线菌；在培养基中加入亚硫酸铵，可以抑制革兰氏阳性细菌和绝大多数革兰氏阴性细菌的生长，而革兰氏阴性的伤寒沙门氏菌(Salmomnella typhi)可以在这种培养基上生长；在培养基中加入染料亮绿(brilliant green)或结晶紫(crystal vio1et)，可以抑制革兰氏阳性细菌的生长，从而达到分离革兰氏阴性细菌的目的；在培养基中加人青霉素、四环素或链霉素，可以抑制细菌和放线菌生长，而将酵母菌和霉菌分离出来。
现代基因克隆技术中也常用选择培养基，在筛选含有重组质粒的基因工程菌株过程中，利用质粒上具有的对某种(些)抗生素的抗性选择标记，在培养基中加入相应抗生素，就能比较方便地淘汰非重组菌株，以减少筛选目标菌株的工作量。
粪大肠菌群标准检验方法及注解GB 7918.3-87化妆品微生物标准检验方法粪大肠菌群及注解中华人民共和国国家标准化妆品微生物标准检验方法粪大肠菌群UDC 668：576 .85.07(GB7918.3－87)Standard methods of microbiological examination for cosmeticsFecal coliforms粪大肠菌群细菌来源于人和温血动物的粪便。
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V
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牛布鲁菌 + +
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猪布鲁菌 + +
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森林鼠布 鲁菌
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绵羊布鲁 菌
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犬布鲁菌 + +
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注：V 不定; (-) 大部分菌株阴性
临床微生物学检验技术
分离培养
培养条件： 需要X、V因子 营养要求高 生长温度为35℃ 血琼脂平板培养基 巧克力琼脂培养基
临床微生物学检验技术
菌落特征：巧克力琼脂培养基小、无色透明菌落
•流感嗜血杆菌巧克力琼脂养基菌落
临床微生物学检验技术
鉴定
培养需要X、V因子 菌落形态 卫星现象
卫星现象(Satellite phenomenon)
菌科，嗜血杆菌属 • 流感嗜血杆菌（H.influenzae） • 副流感嗜血杆菌（H.parainfluenzae） • 溶血嗜血杆菌(H.haemolyticus) • 副溶血嗜血杆菌（H.parahaemolyticus） • 克雷嗜血杆菌（H.ducreyi） • 埃及嗜血杆菌（H.aegyptius） • 嗜沫嗜血杆菌（H.aphrophilus） • 副嗜沫嗜血杆菌(H.paraphrophilus) • 迟缓嗜血杆菌（H.segnis）
3种鲍特菌抗原因子
百日咳鲍特菌 副百日咳鲍特菌 支气管炎鲍特菌
种特异因子
1 14 12
其它因子
2、3、4、5、6、7 8、9、11、7
8、9、10、11、7
临床微生物学检验技术
微生物检验
• 检验程序 • 分离鉴定与培养 • 标本直接检查
临床微生物学检验技术
标本
直接检查（革兰染色）
DFA 抗原检出
口腔、咽部正常菌群，偶可引起咽炎、化脓性口腔炎和心内膜 炎 软下疳，为性传播病菌。常引起外阴脓疱、溃疡、淋巴结肿大。 急性亚急性结膜炎、儿童巴西紫癜热 咽部正常菌群、牙菌斑中常见菌、偶致心内膜炎和脑脓肿
咽部及阴道正常菌群，偶可引起亚急性细菌性心内膜炎、败血 症、甲沟炎、、脑脓肿、脑膜炎。
临床微生物学检验技术
临床微生物学检验技术
分类
• 百日咳鲍特菌(B.pertussis) • 副百日咳鲍特菌（B.parapertussis） • 支气管鲍特菌(B.branchiseptica) • 鸟鲍特菌(B.avium) • 欣氏鲍特菌(B.hinzii) • 霍氏鲍特菌(B.holmesii)
临床微生物学检验技术
临床微生物学检验技术
临床意义
表9-1 几种主要嗜血杆菌常栖部位及所致疾病
菌种 流感嗜血杆菌
副流感嗜血杆菌 溶血嗜血杆菌 副溶血嗜血杆菌
杜克雷嗜血杆菌 埃及嗜血杆菌 嗜沫嗜血杆菌 副嗜沫嗜血杆菌
常栖部位及所致疾病
原发化脓性感染及继发性感染，包括脑膜炎、鼻咽炎、关节炎、 心包炎、鼻窦炎及中耳炎等。 口腔及阴道正常菌群，偶尔可引起心内膜炎、尿道炎。 鼻咽部正常菌群，常引起儿童上呼吸道感染。
血引起菌血症及网状内皮系统上皮样增生，形 成肉芽肿。 • 致病性：不产生外毒素，有较强的内毒素
可产生透明质酸酶和过氧化氢酶 侵袭力较强 迟发性超敏反应
临床微生物学检验技术
微生物特性
• 革兰阴性短小球杆菌，两 端钝园，偶见两极浓染，
• 无动力、无芽胞、无荚膜 • 抗原：A抗原、M抗原
羊—1:20
A:M
不受接种疫苗干扰，有利于早期诊断
临床微生物学检验技术
药物敏感试验及结果解释
1、本菌的感染以预防接种为主，进行控制 2、临床治疗首选红霉素类，次选氨曲南及磺胺
增效剂（SMZ-TMP） 3、对青霉素不敏感，大多数菌株对四环素耐药
临床微生物学检验技术
第三节军团菌属（Legionella）
临床微生物学检验技术
临床微生物学检验技术
临床意义
传染源：病兽，以羊、牛、猪多见 传播途径：病兽的组织、尿、乳液、等通过人体的
皮肤、呼吸道、消化道进入人体 易感人群：发病以青壮年为主，从事兽医、皮毛加
工、屠宰的工人发病率较高 潜伏期：5~21日，亦可高达数月
临床微生物学检验技术
临床表现：
• 症状：长期发热，多汗，关节疼痛及全身乏力，疼痛 • 病理：菌在淋巴结、脾、骨髓等处繁殖，并多次入
牛—20:1
猪— 2:1
马尔他布鲁菌革兰染色
临床微生物学检验技术
培养特性:
• 需氧菌营养要求较高 • 需5%~10%的CO2 • 培养基：硫胺、烟酸、
生物素等物质 • 生长温度为35℃ • 最适pH6.7 • 生长缓慢（5-7天）
马尔他布鲁菌血平板菌落
临床微生物学检验技术
微生物检验
• 检验程序 • 标本采集 • 标本直接检查 • 分离培养与鉴定
2.痉挛期：1~4周，阵发性剧烈咳嗽，直至咳出粘 稠的痰液或呕吐为止
3.恢复期：1~2周，阵咳减轻，渐趋停止
临床微生物学检验技术
生物学特性
• 革兰阴性短小杆菌 • 无芽孢，有荚膜 • 支气管鲍特菌、鸟鲍特
菌有鞭毛 • 专性需氧，最适温度35
℃， 最适pH6.8~7.0
百日咳鲍特菌革兰染色
临床微生物学检验技术
生物学特性
• 革兰阴性短小球杆菌 • 呈双球形或短丝状或
多形性 • 无芽孢、无鞭毛 • 有荚膜
临床微生物学检验技术
微生物检验
• 检验程序 • 标本采集 • 抗原检测及核酸检测 • 分离培养与鉴定 • 药物敏感试验
临床微生物学检验技术
标本采集原则
• 在疾病早期采取标本，立即送检。 • 在取标本时以肉汤湿润，防止干燥。 • 对心内膜炎、患者取血液标本。 • 痰液标本，应洗涤、消化，再接种。
临床微生物学检验技术
第十三章 其他革兰阴性杆菌检验
临床微生物学检验技术
第十章 其他革兰阴性杆菌
• 嗜血杆菌属 • 鲍特菌属 • 布鲁菌属 • 巴斯特菌属 • 费朗西斯菌属
临床微生物学检验技术
第一节 嗜血杆菌属
（Haemophilus）
临床微生物学检验技术
分类 • 嗜血杆菌属（Haemophilus）隶属于巴斯德
临床微生物学检验技术
药物敏感试验
• 药敏试验：K-B法 • 培养基：HTM • 质控菌株：（ATCC49247） • 需常规检测β-内酰胺酶 • 耐药机制是：
1.由质粒介导的TEM-1型 2.由染色体介导的PBP的改变 3.对氯霉素、四环素耐药与R质粒相关
临床微生物学检验技术
第二节 鲍特菌属（Bordetella）
BCYE +抗生素
BCYE +抗生素 抗原检测 核酸检测
35℃,2.5% CO2 革兰阴性菌，仅BCYE 培养基上生长
报告军团菌
临床微生物学检验技术
第四节 布鲁菌属（Brucella）
临床微生物学检验技术
分类
• 羊布鲁菌（B.melitensis又称马尔他布鲁菌） • 牛布鲁菌（B.abortus又称流产布鲁菌） • 猪布鲁菌（B.svis） • 绵羊布鲁菌(B.ouis) • 狗布鲁菌(B.canis) • 森林鼠布鲁菌（B.neotomaes）
百日咳鲍特菌
-
+
-
副百日咳鲍特菌 -
-
+
支气管炎鲍特菌 +
+
+
鸟鲍特菌
+
+
-
欣氏鲍特菌
+
+
-
霍氏鲍特菌
-
-
-
枸橼酸盐利用 + + + -
硝酸盐还原 + -
临床微生物学检验技术
标本直接检测
• 抗原、抗体检测采用ELISA检测 • ①直接荧光抗体检测 • ②单克隆抗体检测 • ③核酸检测 • 抗体检测：IgM及IgA，其中IgA在感染早期出现，
临床微生物学检验技术
标本直接检验 • 凝集反应：玻片凝集或试管凝集法 • PCR检测： • 抗体检测：
临床微生物学检验技术
布鲁氏菌的生化特性
菌种
糖分解
染料的耐受
精氨 硝酸
触 酶
氧化 酶
葡萄 糖
半乳 糖
阿拉伯 糖
酸脱 羧
盐还 原
尿素 H2S产 硫廑 复红
酶
生 (40μ (20μ
g) g)
羊布鲁菌 + +
该病分三种类型：肺炎型，肺炎感染型，流感样型。 至今尚无有效的军团菌疫苗，加强水源的管理，尤其是 医院人工输水管道系统和设施的消毒处理，是预防军团菌传 播的重要措施。
临床微生物学检验技术
三、微生物学检验
血液、
胸水、痰、组织（无菌操作制成悬液）
抗体检测 增菌培养 革兰染色 血琼脂平板 或镀银染色 巧克力琼脂
一、分类
• 不断有新种发现，现已命名的有40多个种 • 从人体中分离出19种 • 其中对人致病的主要是嗜肺军团菌，根据该菌O抗原的不同分