【CN109761931A】一种检测细胞内pH的比率型荧光探针及其制备方法和应用【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910141848.9

(22)申请日 2019.02.26

(71)申请人 济南大学

地址 250022 山东省济南市市中区南辛庄

西路336号

(72)发明人 林伟英　宋文辉　董宝利　张楠　

卢雅茹　

(74)专利代理机构 济南泉城专利商标事务所

37218

代理人 李桂存

(51)Int.Cl.

C07D 277/66(2006.01)

C09K 11/06(2006.01)

G01N 21/64(2006.01)

(54)发明名称

一种检测细胞内pH的比率型荧光探针及其

制备方法和应用

(57)摘要

本发明提供了一种检测细胞内pH的比率型

荧光探针及其制备方法和应用。该荧光探针的化学结构式为：。

可通过4-氰基苯硼酸与5-溴水杨醛的反应产物

在进一步与邻氨基苯硫酚反应获得。本发明的荧

光探针具有高特异性，在进行相应pH检测过程中

不受其他组分的干扰，可用于活细胞内pH的实时

测定。该探针的灵敏度高，具有良好的荧光发射

光谱特性（415-700 nm），通过绘制标准曲线进行

细胞内pH的测定，可以实现对细胞内pH快速准确

检测的目的。本发明提供的荧光探针合成方法，工艺简单易行，原料廉价易得，制备成本低，易于推广。本探针在生物监测领域具有广阔的应用前

景。权利要求书1页 说明书4页 附图3页CN 109761931 A 2019.05.17

C N 109761931

A

1.一种检测pH的比率型荧光探针，其化学结构式如式（I ）

所示：

式（I ）。

2.一种如权利要求1所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将4-氰基苯硼酸，5-溴水杨醛，Pd(dppf)Cl 2，醋酸钾溶于1,4-二氧六环，在氮气保护下加热搅拌至反应充分，将反应液冷却至室温，过滤除去固体杂质，滤液分离纯化得到浅黄

色化合物1：

；

（2）化合物1和邻氨基苯硫酚在对甲基苯磺酸存在下于二甲基甲酰胺中加热搅拌反应；反应完成后，将反应液在0℃左右迅速冷却，后向反应液中加入水，得到黄色固体沉淀，分离沉淀并纯化得到化合物2，

即荧光探针：

。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，4-氰基苯硼酸与5-溴水杨醛的摩尔比为0.8-1:1-1.5；步骤（2）中，化合物1与邻氨基苯硫酚的摩尔比为1:1-1.5。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，分离纯化过程为：以石油醚：乙酸乙酯体积比为5:1的淋洗液，将滤液通过柱层析（石油醚：乙酸乙酯=5:1）；

步骤（2）中，纯化过程为：以石油醚：乙酸乙酯体积比为5:1的淋洗液，将沉淀通过柱层析得到探针。

5.一种如权利要求1所述的荧光探针在检测溶液、细胞或生物体中pH的应用。

权　利　要　求　书1/1页2CN 109761931 A