免疫学实验指导书(副本)
《病原生物与免疫学基础》实训指导书(54课时)
台山市敬修职业技术学校病原生物与免疫学基础实训指导书目录实训一实验目的及实验室规则 2 实训二显微镜油镜的使用及保护方法 3 实训三细菌的基本形态与特殊结构观察 4 实训四细菌涂片标本的制作和革兰染色法 5 实训五常用培养基的制备 6 实训六细菌接种法7 实训七细菌生长现象及代谢产物观察8 实训八细菌的分布检查10 实训九消毒灭菌试验11 实训十药物敏感试验：纸片法12 实训十一药物的无菌检查与杂菌总数的测定13 实训十二免疫学基础实验14 实训十三免疫学应用实验15 实训十四病原生物：病原菌、病毒、寄生虫的观察与鉴别16 实训十五病例分析讨论：常见细菌、病毒和人体寄生虫18实训一实验目的及实验室规则一、实训目的了解实验课程目标、要求，遵守实验室规则。
二、实训准备多媒体、PPT、工作服、准备用物。
三、实训时间安排1、本次实训安排在学习第一章微生物概述之后。
2、实训时长为2学时。
四、实训注意事项实训中注意自我保护，初步建立无菌观念。
五、实训步骤1、部分教学内容讲授2、示教讲解3、实验操作示范4、学生穿好工作服，参观实验室5、做好课后作业，完成实训报告六、实训报告要求及成绩评定1、认真填写实训报告表中的各项内容。
2、按照实际操作的顺序把实训的过程填写好。
3、实训成绩是根据其完成程度与熟练与否评定。
附表1 总分实训二显微镜油镜的使用及保护方法一、实训目的初步学会显微镜油镜的使用和保护二、实训准备光学显微镜、香柏油、擦镜纸、大肠杆菌烘干标本三、实训时间安排1、本次实训安排在学习第一章微生物概述之后。
2、实训时长为2学时。
四、实训注意事项实训中注意自我防护，初步建立无菌观念。
五、实训步骤1、部分教学内容讲授2、示教讲解3、实验操作示范4、学生实操，观察标本并绘出镜下图5、做好课后作业，完成实训报告六、实训报告要求及成绩评定1、认真填写实训报告表中的各项内容。
2、按照实际操作的顺序把实训的过程填写好。
3、实训成绩是根据其完成程度与熟练与否评定。
《病原生物学与免疫学》病原生物学与免疫学实验指导
病原生物及免疫学实验指导实验目的及实验室规则一、实验目的二、实验室规则实验一一、显微镜油镜头的使用和保护法（操作）二、细菌的基本形态和特殊结构观察（示教）三、细菌涂片和革兰染色法（示教）实验二一、培养基的制备原则和培养基种类介绍（示教）二、细菌接种法三、细菌的生长现象及代谢产物的观察(示教)实验三一、空气、咽喉部细菌的检查(操作)二、常用消毒灭菌器和滤菌器(示教)三、紫外线杀菌试验(示教)四、皮肤消毒试验(操作)五、药物敏感试验(纸片法，示教)实验四一、免疫细胞二、豚鼠过敏反应(示教或观看录像)三、抗原抗体反应四、常用生物制品(示教)实验五一、化脓性球菌二、肠道杆菌及其他细菌实验六一、病毒包涵体的观察(示教)二、乙肝病毒酶联免疫吸附试验结果观察(示教)三、螺旋体、立克次体形态观察(示教)四、真菌形态和培养物观察(示教)实验七一、蠕虫成虫、虫卵及幼虫形态观察(示教)二、中间宿主标本观察(示教)三、粪便中寄生虫检查实验八医学原虫形态观察(示教)病原生物及免疫学基础实验实验目的及实验室规则一、实验目的病原生物及免疫学基础实验是本课重要的组成部分，通过实验，加深对基础理论知识的理解；通过实验操作，掌握有关的基础操作技能和无菌技术，建立无菌观念；通过正确地观察和分析实验结果，培养学生实事求是的科学态度、严肃认真的工作作风及分析和解决问题的能力。
二、实验室规则（一）进入实验室要穿工作服，离开室前脱下并折放好，工作服要经常清洗，保持洁净。
（二）非实验室必备的物品不准带入实验室。
带进实验室的必要教材和文具，要远离操作部位。
（三）实验室内绝对禁止饮食、吸烟或舔铅笔等。
（四）实验室内保持肃静，禁止谈笑和高声说话，以利集中精神完成实验操作。
（五）凡具有传染性的培养物、带菌材料、动物、器具等，均按要求处理，不得随便乱放或用水冲洗。
实验室内的任何物品不得携出室外。
（六）实验中一旦发生意外，如划破皮肤，细菌污染实验台、地面、手或衣物时，应该及时报告老师，按有关程序妥善处理。
免疫学实习指导
免疫学实习指导高晓明主编免疫学系集体编写北京大学医学部基础医学院免疫学系2004年12月序 言本实习指导内容的安排与免疫学理论课的内容相衔接，主要包括免疫学的经典实验，即吞噬细胞吞噬功能检测、补体结合试验、T淋巴细胞转化试验、免疫标记技术（膜表面免疫球蛋白的检测、ELISA）、溶血空斑试验、沉淀反应。
细胞凋亡的检测为新增加的实验。
本指导旨在让学生在有限的时间内学到现代免疫学常用的实验方法和技术，并使学生通过实验课的学习进一步认识和巩固课堂所学的知识，同时培养学生的实际操作能力及分析问题、解决问题的科学思维能力。
本指导适用于我校8年制、6年制、5年制的基础、医疗、预防、口腔医学及护理、药学专业。
不妥之处望指导教师和学生在使用过程中坦诚指出，以利进一步改进。
实验室规则一、 进入实习室实验要穿白大衣。
二、 除实验中必用的学习用品外，其他物品不要放在实验台上。
书包放桌屉内，衣帽挂衣架上。
三、 实习室内不允许吃食物或饮料，严禁吸烟。
四、 实验中一定要保持实习室安静，彼此讨论问题时不要大声喧哗、严禁打闹。
五、 实验过程要按照教师要求进行操作，如有疑问要请教指导教师。
六、 爱护实验器材，如有损坏应及时报告教师，需赔偿者按规定办理。
七、 实验完毕，要清理台面。
需冲洗的物品按要求冲洗，需收回的物品按要求摆放整齐送回教学准备室。
八、 值日生要做好值日，离开实习室时，一定要有专人负责关好门窗、水源及照明设备。
免疫学实验课授课进度本授课进度供承担免疫学实验教学（8年制）任务的教师使用和参考，为保证实验课内容充实，有些实验课的内容安排可能超过规定的学时数，希望任课教师能合理安排时间，必要时，可将几个实验内容穿插进行，以保证教学进度。
1、单扩、双扩及免疫电泳（示教）共2学时（1） 原理、试验方法及注意事项的讲解（15分钟）（2） 双扩铺板和打孔（30分钟）（3） 单扩打孔和单、双扩加样（30分钟）（4） 电泳示教及原理讲解（15分钟）（5） 小结10分钟2、溶血空斑试验——小室液相法（PFC）和分析单扩和双扩结果共2学时（1） 原理、试验方法及注意事项的讲解（15分钟）（2） 取小鼠脾脏和制备单细胞悬液（30分钟）（3） 离心、灌注小室和封腊（30分钟）（4） 观察和分析单、双扩结果（20分钟）（5） 观察PFC结果和小结10分钟3、吞噬细胞吞噬试验和免疫荧光染色实验共3学时（1） 原理、试验方法及注意事项的讲解（15分钟）（2） 吞噬细胞吞噬实验（共65分钟）A．小鼠注射SRBC （20分钟）B．小鼠腹腔取巨噬细胞和涂片（30分钟）C．观察结果（15分钟）（3） 免疫荧光染色实验（共120分钟）A．取小鼠脾脏和制备单细胞悬液及稀释计数（30分钟）B．荧光染色（40分钟）C．离心备涂片（20分钟）D．荧光显微镜观察（30分钟）（4） 小结10分钟4、淋巴细胞转化试验和ELISA检测IgE试验（一）共2学时（1） 原理、试验方法及注意事项的讲解（15分钟）（2） 取小鼠脾脏和制备单细胞悬液（30分钟）（3） 加样（30分钟）（4） ELISA包板（20分钟）（5） 小结10分钟5、 ELISA检测IgE试验（二）和观察分析淋巴细胞转化试验结果共3学时（1） 原理、试验方法及注意事项的讲解（15分钟）（2） 洗板和加抗原（20分钟）（3） 37O C孵育（40分钟）（4） 洗板、加酶标抗体（20分钟）（5） 37O C孵育（40分钟）（6） 洗板、加底物（20分钟）（7） 显色（20分钟）（8） 加终止液和观察结果（10分钟）（9） 观察淋巴细胞转化结果（15分钟）（10） 取小鼠胸腺，制备胸腺细胞悬液（15分钟）（11） 离心（20分钟）（12） Annexin V-FITC抗体染色（30分钟）（13） 荧光显微镜观察结果（30分钟）（14） 小结10分钟6、细胞毒试验及E花环形成（示教）和免疫器官（示教）2学时（1） 原理、试验方法及注意事项的讲解（15分钟）（2） 细胞毒试验加样（30分钟）（3） 37O C孵育（30分钟）（4） 示教E花环（15分钟）（5） 示教免疫器官——胸腺及脾脏（15分钟）（6） 小结10分钟目 录实验一、免疫器官（示教）（1）实验二、单向、双向免疫琼脂扩散和免疫电泳（示教）（4）实验三、吞噬细胞功能检测（10）实验四、B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白（SmIgG）的检测—直接免疫荧光法（12）实验五、溶血空斑形成（液相小室法）试验（PFC）——体外抗体形成细胞检测（14）实验六、T淋巴细胞转化试验（MTT法）（16）实验七、酶联免疫吸附试验（ELISA）（18）实验八、细胞凋亡检测（21）实验九、补体介导的细胞毒试验（26）实验十、E玫瑰花环形成试验（示教）（28）实验一、免疫器官(Organs of the Immune System)（本实验属于示教内容）免疫器官包括中枢免疫器官和外周免疫器官。
免疫学实验教学指导书
《免疫学》实验教学指导书生物与食物工程学院2013-05-31实验一玻片凝集实验细菌细胞或红细胞等颗粒性抗原与特异性抗体结合后，在有电解质的情形下，会出现肉眼能够看见的凝集块，称为凝集反映。
这种反映较简单、迅速，常常利用于抗原或抗体的定性检测。
例如细菌的鉴定、分型及ABO血型鉴定。
这里介绍人类的ABO血型鉴定方式。
1.原理ABO血型系统是依照血液中红细胞表面的抗原分子来命名的。
人类ABO血型抗原有两种:A抗原和B抗原。
A型血红细胞表面有A抗原，B型血红细胞表面有B抗原，AB型血红细胞表面有A、B两种抗原，若红细胞表面无这两种抗原，则为O型血。
若用已知的抗A血清和抗B血清与受试者红细胞上的相应抗原结合，即可能引发红细胞凝集，据凝集状况即可判定出受试者的血型。
2.材料（1）标准抗A血清、抗B血清。
（2）玻片、75%酒精、碘酒、无菌三棱采血针、灭菌火材棒、无菌棉签。
3.方式（1）取干净载玻片1张，用蜡笔分为2格，注明A、B字样。
（2）倒置标准抗血清试剂瓶，悬空轻挤出抗A血清1滴，滴加在A格内；同法在B格内加抗B血清1滴。
（3）消毒左手无名指指尖，待酒精自然干燥后，用无菌采血针快速刺破皮肤。
（4）用木棒的两头取血，别离在抗A血清和抗B血清中搅拌混匀。
（5）无菌干棉球压迫手指止血。
（6）静置玻片数分钟，在白色背景下观察凝集结果。
4.结果判断混合液由红色均匀浑浊逐渐变成透明，并出现大小不等的红色凝集块者，为红细胞凝集。
混合液仍呈均匀浑浊，则未发生凝集。
按照结果可判断血型。
5.注意事项（1）载玻片标明A、B，不要让两种抗血清混合。
（2）采血前要消毒手指，在酒精干燥前不要采血，以避免酒精破坏红细胞。
（3）木棒的两头不可混用。
（4）及时观察结果。
（5）对被血液污染的用品在废弃前，要定点放置，集中进行严格的消毒，以防传播疾病。
例如，沾血的载玻片浸泡在84消毒液中，木棒、采血针、棉球要高压处置。
6. 作业与试探（1）按表1上报实验结果。
医学免疫学实验指导
医学免疫学实验指导医学免疫学实验指导病原生物与免疫学教研室实验一免疫系统组织和细胞形态学一、实验目的观察小鼠胸腺、脾脏等免疫器官及免疫细胞二、实验内容机体免疫系统由免疫器官、免疫细胞、免疫分子组成。
该系统具有识别和排除抗原性异物、维持机体内环境稳定和生理平衡的功能，是执行体液免疫和细胞免疫的物质基础。
本次实验主要观察免疫器官大体解剖学、免疫细胞的形态学特征。
小鼠是啮齿目中体形较小的动物，淋巴系统很发达，包括胸腺、脾脏、淋巴管、外周淋巴结及肠道派氏集合淋巴结。
本实验在带教老师指导下，解剖小鼠，观察胸腺、脾脏等免疫器官，并制血涂片，观察小鼠免疫细胞。
（一）小鼠免疫器官解剖学观察【材料】１动物：昆明种小白鼠。
２试剂：3%来苏尔水，瑞特氏染液。
３器材：眼科镊，眼科剪，玻片。
【方法】１小鼠脱臼处死，投入盛有3%来苏尔水的缸内，浸泡5分钟。
取出小鼠，仰卧位置于试验台上，使动物腹部朝上。
２以镊子提起耻骨处皮肤，用剪刀沿正中线直剪开至下颌部，然后钝性分离皮肤，再把皮肤向四肢剪开。
３注意观察腹壁，用剪刀沿正中线自阴部至膈肌为止剪开，观察腹腔液量及性状，观察脾脏。
４切开膈肌，剪断胸骨，翻起胸骨，观察胸腺、心脏及肺脏，胸腺位于小鼠胸腔心脏前上方，内有许多大淋巴细胞（即前胸腺细胞）及特定的上皮网状细胞（分泌胸腺激素）。
５解剖结束，深埋动物。
（二）免疫细胞的形态观察【材料】１动物：昆明种小白鼠。
２试剂：3%来苏尔水，瑞特氏染液，pH8.6硫酸盐缓冲液，20%盐酸甲醇。
３器材：眼科镊，眼科剪，玻片。
【方法】１准备洁净玻片两张，一张用于推片，另一张用于固定标本。
２剪断小鼠尾巴取血或小鼠眼球取血，迅速在玻片上涂血膜制备血涂片，自然干燥。
３瑞氏染色（１）染色：甲醇固定标本２分钟（亦可省略），滴加瑞氏染液数滴覆盖血膜，染色１分钟，再加等量的pH8.6硫酸盐缓冲液或新制蒸馏水，用洗耳球吹打，使之与染液混匀，静置染色8～10分钟，弃去染料，水洗。
免疫学的实践指导
疫苗研究：针对肿瘤相关抗原开发疫苗，激发机体免疫系统对肿瘤细胞的 杀伤作用。
肿瘤免疫逃逸机制：研究肿瘤细胞如何逃避免疫系统的识别和攻击，为免 疫治疗提供新的靶点。
免疫学与神经科学的交融
神经免疫学：研究神经系统与免 疫系统之间的相互作用和影响。
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免疫学的实践指导
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目录
01 02 03 04 05 06
添加目录项标题 免疫学基础
免疫学诊断技术 免疫学预防与治疗 免疫学与其他学科的交叉研究 免疫学研究的伦理与法规
01
添加目录项标题
02
免疫学基础
免疫系统概述
免疫系统由免疫器官、 免疫细胞和免疫活性
物质组成
免疫系统分为固有免 疫和适应性免疫，适 应性免疫具有特异性
疫苗的研发与使用
疫苗种类：减毒 活疫苗、灭活疫 苗、基因工程疫 苗等
研发过程：确定 病原、分离病原、 制备疫苗株、生 产疫苗等步骤
使用方法：接种 途径、接种剂量 、接种次数等
预防效果：疫苗 预防疾病的有效 率、持久性等
免疫治疗原理与实践
免疫治疗定义： 利用免疫系统 来对抗疾病的
方法
分类：免疫疗 法包括过继细 胞疗法、免疫 检查点阻断、
03
免疫学诊断技术
抗原检测
方法：包括血清学方法和分子 生物学方法
定义：通过检测病原体抗原来 确定感染或疾病状态的技术
应用：用于诊断感染性疾病、 自身免疫性疾病和肿瘤等
优势与局限性：抗原检测可以 早期诊断感染，但灵敏度较低，
易出现假阳性或假阴性结果
抗体检测
定义：通过检测血液或其 他体液中的抗体来判断是
免疫学实验指导
免疫学实验指导大连医科大学免疫教研室抗原抗体检测 _____________________________________________________ 4（一）免疫血清的制备与鉴定___________________________________________ 4实验一、免疫血清的制备____________________________________________________4 实验二、免疫血清的鉴定、纯化和保存________________________________________6（二）血清学反应（Serological reaction）_________________________________ 8 1．凝集反应（Agglutination reaction）________________________________________9 实验三、试管凝集实验（Tube agglutination test）—抗体效价测定 __________________9 实验四、玻片凝集试验（Slide agglutination test） _______________________________ 10 2．沉淀反应（Precipitation reaction） _________________________________________ 11 实验五、环状沉淀试验（Ring precipitation test）—血迹鉴定______________________ 11 实验六、单向免疫扩散法（Single radil immunodiffusion）—正常人群IgG正常值检测 12 实验七、双向扩散法（Double diffusion）—抗原分析 ____________________________ 14 实验八、对流免疫电泳_____________________________________________________ 15 实验九、免疫电泳（Immunoelectrophoresis）___________________________________ 16 3．补体相关试验 __________________________________________________________ 17 实验十一、总补体活性（CH50）的测定_______________________________________ 17 实验十二、补体介导的细胞毒试验___________________________________________ 19（三）免疫标记技术__________________________________________________ 22 实验十三、酶联免疫吸附试验——双抗体夹心法_______________________________ 22 免疫细胞（Immunocyte）__________________________________________ 23 （一）T淋巴细胞检查_________________________________________________ 23 实验十四、E玫瑰花环形成试验（E Rosette Test）______________________________ 23 实验十五、淋巴细胞转化试验（Lymphocyte Transformation Test，LTT）___________ 24 实验十六、T淋巴细胞CD亚群测定 __________________________________________ 26 实验十七、MTT比色法测定活细胞数量及功能_________________________________ 28 实验十八、白细胞介素2活性测定___________________________________________ 28 （二）B淋巴细胞检查_________________________________________________ 31 实验十九、B细胞膜表面免疫球蛋白（SmIg）的检查——直接免疫荧光法（DirectImmunoflurescent method for B Cell SmIg） _____________________________________ 31 实验二十、EA玫瑰花环实验（EA Rosette test） ________________________________ 32 实验二十一、EAC玫瑰花环实验（EAC Rosette test） ___________________________ 32 实验二十二、体外抗体形成细胞（Plaque Forming Cell，PEC）检查法 _____________ 33（三）巨噬细胞及嗜中性粒细胞________________________________________ 35 实验二十三、吞噬细胞吞噬羊红细胞实验_____________________________________ 35免疫病理学试验 __________________________________________________ 36（一）速发型超敏反应（Immediate hypersensitivity） _____________________ 36 实验二十四、自动过敏反应——豚鼠速发型过敏反应___________________________ 36 实验二十五、被动过敏反应_________________________________________________ 36 实验二十六、肥大细胞脱颗粒试验___________________________________________ 37（二）Ⅱ型超敏反应——细胞毒型或溶细胞型过敏反应（Cytolytic or cytotoxic type allergic reaction）________________________________________________ 38 实验二十七、药物过敏性血球减少症检测_____________________________________ 38（三）Ⅲ型超敏反应__________________________________________________ 38 实验二十八免疫复合物型超敏反应（Immune Complex hypersensitivity）——Arthus现象 _______________________________________________________________________ 38（四）Ⅳ迟发型超敏反应（Delayed hypersensitivity）______________________ 39 实验二十九、豚鼠结核菌素试验（Tuderculin test）_____________________________ 39 实验三十、小鼠DNFB试验 _________________________________________________ 40 实验三十一、小鼠DTH试验 ________________________________________________ 40抗原抗体检测（一）免疫血清的制备与鉴定实验一、免疫血清的制备机体的特异性免疫反应是指机体受抗原物质刺激后产生体液免疫（抗体）和细胞免疫（致敏的T淋巴细胞及其产物多种淋巴因子）的过程。
医学免疫学实验指导
医学免疫学实验指导病原生物与免疫学教研室实验一免疫系统组织和细胞形态学一、实验目的观察小鼠胸腺、脾脏等免疫器官及免疫细胞二、实验内容机体免疫系统由免疫器官、免疫细胞、免疫分子组成。
该系统具有识别和排除抗原性异物、维持机体内环境稳定和生理平衡的功能是执行体液免疫和细胞免疫的物质基础。
本次实验主要观察免疫器官大体解剖学、免疫细胞的形态学特征。
小鼠是啮齿目中体形较小的动物淋巴系统很发达包括胸腺、脾脏、淋巴管、外周淋巴结及肠道派氏集合淋巴结。
本实验在带教老师?傅枷陆馄市∈蠊鄄煨叵佟⑵⒃嗟让庖咂鞴俨⒅蒲 科 鄄煨∈竺庖呦赴 ?一小鼠免疫器官解剖学观察【材料】动物昆明种小白鼠。
试剂3来苏尔水瑞特氏染液。
器材眼科镊眼科剪玻片。
【方法】小鼠脱臼处死投入盛有3来苏尔水的缸内浸泡5分钟。
取出小鼠仰卧位置于试验台上使动物腹部朝上。
以镊子提起耻骨处皮肤用剪刀沿正中线直剪开至下颌部然后钝性分离皮肤再把皮肤向四肢剪开。
注意观察腹壁用剪刀沿正中线自阴部至膈肌为止剪开观察腹腔液量及性状观察脾脏。
切开膈肌剪断胸骨翻起胸骨观察胸腺、心脏及肺脏胸腺位于小鼠胸腔心脏前上方内有许多大淋巴细胞即前胸腺细胞及特定的上皮网状细胞分泌胸腺激素。
解剖结束深埋动物。
二免疫细胞的形态观察【材料】动物昆明种小白鼠。
试剂3来苏尔水瑞特氏染液pH8.6硫酸盐缓冲液20盐酸甲醇。
器材眼科镊眼科剪玻片。
【方法】准备洁净玻片两张一张用于推片另一张用于固定标本。
剪断小鼠尾巴取血或小鼠眼球取血迅速在玻片上涂血膜制备血涂片自然干燥。
瑞氏染色染色甲醇固定标本分钟亦可省略滴加瑞氏染液数滴覆盖血膜染色分钟再加等量的pH8.6硫酸盐缓冲液或新制蒸馏水用洗耳球吹打使之与染液混匀静置染色810分钟弃去染料水洗。
脱色用20盐酸甲醇脱色肉眼观察玻片呈粉红色为宜显微镜下观察结果。
细胞特征细胞细胞是由胸腺内的淋巴干细胞分化而成的是淋巴细胞中数量最多、功能最复杂的一类细胞占外周血液淋巴细胞总数的7580。
医学微生物学与免疫学实验指导
医学微生物学与免疫学实验实验目的和要求一、实验前务必做好预习，明确实验目的、内容及理论依据等，避免或减少错误的发生，以保证实验在预期内完成。
二、实验操作严格按要求进行，严防污染和感染。
三、对示教实验联系理论认真观察。
对光镜下标本不得擅自挪动视野，其他示教标本看后必放回原处。
对录像教学应作重点、简要的笔记。
四、客观真实地记录实验结果并进行分析，若与理论不符，要加以分析讨论，找出原因，必要时重复实验。
五、在规定时间内完成实验报告，报告要求字迹清楚，说明问题简单扼要。
实验室规则1. 非实验必需品禁止带入实验室。
2. 穿白大衣，按规定就坐。
3. 实验室应保持安静和良好的秩序，不得高声谈笑、乱动物品或随便走动。
4. 实验室内严禁吸烟、进食、饮水或用嘴湿润铅笔和标签等，也不要用手搔抓抚摸机体。
5. 实验时若不慎发生皮肤创伤，或病原菌污染衣物、卓（地）面等事故，应立即报告指导老师，进行紧急处理。
6. 实验所用的玻片、试管、吸管等，用后应随即投放盛有消毒剂的指定容器内，不得放在桌上，也不可在水池中冲洗。
7. 每次实验完毕，按实验要求应及时清理实验物品，清扫卫生；离开实验室时，消毒洗手后离开实验室；对白大衣经常清洗消毒。
油镜的使用和维护目的：掌握油镜的使用与维护，熟悉油镜的使用原理。
材料：显微镜，拭镜纸，液体石蜡油，二甲苯原理：油镜的透镜极小，工作焦距最短，光线通过玻璃和空气，由于介质密度不同发生折射，射入镜筒的光线极少，视野暗，物象不清晰。
如在玻片与镜头（透镜）之间加上折光率和玻片（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515）就可减少光线的折射，加强视野的亮度，获得清晰的物象。
步骤：显微镜油镜的使用和维护1.将显微镜平稳地安放在实验台适宜处。
识别油镜头：标有100×、OIL、HI等字样。
2. 打开电源，用低倍镜对光，打开光圈，调节聚光镜的位置，使视野光线充足。
3. 标本上加镜油一滴，转动粗螺旋，使油镜头缓缓下降，用眼从侧面观察，直到油镜头浸入油中接近玻片为止。
基础免疫学指导书(学生用)
实验一、免疫扩散反应一、实验目的1、了解免疫扩散反应的原理。
2、学习几种免疫扩散实验方法。
二、实验原理可溶性抗原和相应抗体在含有电解质的琼脂凝胶中扩散相遇，特异性地结合，在比例合适处，形成肉眼可见的沉淀物的一种免疫血清学技术。
（一）单向扩散实验一种定量实验，将一定量的抗体混合于琼脂内，倾注于玻片上，凝固后，在琼脂层上打孔，再将抗原加入孔中，使其向四周扩散。
抗原抗体复合物形成的沉淀环直径与抗原的浓度成正比。
如事先用不同浓度的标准抗原制成标准曲线，则未知标本中的抗原含量即可从标准曲线中求出。
本实验主要用于检查标本中各种免疫球蛋白和血清IgG含量。
（二）双向扩散实验抗原抗体在一定pH和离子存在的琼脂糖凝胶中相向扩散，一定时间后，两者相遇而形成不明显的抗原抗体聚合物并继续扩散，当扩散至两者的适当比例时便形成大的抗原抗体复合物而出现明显沉淀，形成垂直于扩散方向的免疫沉淀线即等价线。
三、实验材料及设备1、抗体：羊抗人IgG单价抗血清（双流正龙，效价1:100）2、抗原：人的免疫球蛋白（双流正龙）3、琼脂、生理盐水、0.01mol/LPBS缓冲液载玻片、自制打孔器、移液枪，培养皿4、0.05%氨基黑10B染色液称取0.5g氨基黑10B溶于500mL lmol/L乙酸及500mL 0.1mol/L乙酸钠溶液中。
四、实验内容（一）单向扩散实验——平板法1、制备含抗体的琼脂板取3%生理盐水琼脂，电炉加热使之溶解，然后置56℃水浴中，待琼脂温度降至56℃时，立即加入等体积已稀释一定倍数（40倍稀释）的羊抗人IgG抗体（混合前已在56℃水浴中预热），迅速轻轻混匀，勿使产生气泡，迅速倾入载玻片上，待凝固。
（建议制片时多个载玻片放在一起同时到平板，琼脂板效果较佳）2、稀释人的免疫球蛋白抗原（教师已做好）将人的免疫球蛋白抗原用生理盐水作相应倍数稀释（1:10～1:80），3、打孔、加样用自制打孔器打孔，如下图所示。
（打孔时注意不要将孔打穿）用10u L移液枪加抗原。
免疫学实验指导
免疫学实验指导生命科学与工程学院生物工程、生物技术、动物医学专业用玉萍[分组]：4人/组，实验用动物、器材以每组需要量设计[班级] 2006生物工程、生物技术 [学生人数]：65人/58人。
分16组/15组[时间] 2008年3月—2008年7月两周一次4学时。
目录实验一、免疫学实验动物的一般操作实验二、实验动物免疫器官、免疫细胞观察实验三、实验动物的采血方法、动物血清及红细胞的制备方法实验四、淋巴细胞分离与E玫瑰花环形成试验实验五、IgG的分离和纯化实验六、玻片凝集试验(ABO血型鉴定)实验七、环状沉淀试验实验八、琼脂扩散试验（单向）实验九、巨噬细胞吞噬功能试验实验十、白细胞吞噬试验实验一、免疫学实验动物的一般操作[实验原理]实验动物的基本操作是免疫学实验的基础,抗原对动物机体的免疫效果，通过实验动物进行验证，因此必须掌握实验动物的一般操作技术。
[目的要求]1、实验材料的准备（棉球、注射器的准备与消毒）（演示）2、了解免疫学实验常用动物的生物学特性、用途及其健康要求。
[自学]3、学习实验动物的编号、抓取、固定和几种不同的注射途径方法。
4、练习对小白鼠给药的几种不同途径的注射方法。
5、练习小白鼠的取血方法。
6、学习血涂片的制作及染色；观察动物血液中有形成分的形态结构特点。
[实验动物]小白鼠，2只/组，共需18 ~ 20只。
[试剂]⑴ 3%来儿或3%石炭酸 100~150 ml/组；⑵无菌生理盐水100~150ml/组；磷酸盐缓冲液20~50ml/组（带滴管、染色用）。
⑶ 3 ~ 5% 苦味酸20~50ml/组（带滴管,编号用）；⑷ 5%品红20ml~50ml/组（带滴管，编号用）；⑸瑞特氏（wright‘s）染色液50ml/组（带滴管，染色用）；*抗凝剂一支[器材]⑴ 1ml注射器及针头2支/组；⑵碘酒棉球、酒精棉球、无菌干棉球各适量；⑶手术剪刀2把/组；镊子2把/组；载玻片、盖玻片各6片/组；⑷毛细吸管2支、50—100ml烧杯1个/组⑸显微镜6台/组[6] 鼠笼1个/组[操作步骤]1、练习小白鼠抓取、编号、皮下注射、皮注射、腹腔注射的方法。
皖南医学院：医学免疫学(实验指导)
医学免疫学实验指导皖南医学院微生物学免疫学教研室2004年12月实验室规则实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段，为保证实验效果，同时避免病原微生物的实验室内传染，保障实验操作者的安全，特制定如下规则：一、尽量不带个人生活、学习用品入实验室，必要的用具带入后，应放在远离操作的位置。
二、进入实验室后穿上工作衣，离室时脱下反叠带走。
在实验室内应保持安静、整洁、有秩序，不得高声谈笑，随便走动或拆卸仪器、搬弄标本。
三、实验室内严禁吸烟、进食、饮水，严禁用嘴吸移液及润湿标签，尽量不要用手触摸头面部及身体其他暴露部位。
四、如遇不慎而打破菌种管或使有菌材料污染皮肤、衣物、桌面等情况，应立即报告指导教师，切勿隐瞒或自行处理。
五、被污染过且需要回收的吸管、滴管、试管、玻片等物应用完后立即投入已准备的消毒液中，不得放在桌面上或水槽内。
六、爱护公物，节约试剂材料，不得将实验室任何物品私自带走。
如遇仪器、用品损坏，应报告指导教师并按规定予以赔偿。
七、实验完毕，整理桌面，值日生打扫室内卫生，最后离开的同学应注意关好水电、门窗，洗手后离室。
第一单元体外抗原抗体反应实验目的掌握体外抗原抗体反应的特点和影响因素；掌握经典的体外抗原抗体反应的原理、方法和应用。
凝集反应基本原理颗粒性抗原与相应抗体在一定条件下特异性结合而出现肉眼可见的凝集现象。
实验一直接凝集反应一、玻片凝集试验（一）血型鉴定目的掌握玻片凝集反应的原理和应用；熟悉ABO血型的鉴定方法。
原理将已知标准抗A和抗B血型抗体分别与待测红细胞混合。
如果抗原与抗体相对应，则引起红细胞凝集，反之则不凝集，据其凝集现象可判断血型。
材料1、标准的抗A和抗B单克隆抗体（抗A为蓝色，抗B为黄色）2、酒精棉球、采血针、生理盐水、试管、滴管、载玻片、蜡笔。
方法1、酒精棉球消毒耳垂或手指末端后，用采血针刺破皮肤，取1—2滴血放入盛有0.5ml生理盐水的试管中，混匀制成红细胞悬液。
医学免疫学实习指导
医学免疫学实习指导曹雅明主编吕昌龙审中国医科大学免疫教研室2002年1月1前言本《医学免疫学实习指导》是在1990年再版的基础上改编而成。
供五年制本科学生学习免疫学实验课程之所用。
此次改编，仍保持原再版本的结构。
同时，增加了部分新的免疫学实验检测技术。
通过实验课的教学，使学生掌握免疫学的基本研究方法并了解其在医学中的应用；同时也可获得相应的感性知识。
为了培养学生的科学思维能力和独立工作能力，同学们应充分利用“实习指导”，作好预习，并使其成为指导自己进行实验的有力工具。
此次改编，对每项实验的目的、实验意义及实验的注意事项都有所交代，对实验结果的观察与分析，也给予了必要的辅导。
限于教学时数和实验条件，有些实验内容将以示教或教师讲解的方式进行，这部分内容尤其需要加强复习，以弥补未能亲自操作之不足。
此次改编由曹雅明副教授主要编写，刘军主管技师也参加了部分内容的编写工作，吕昌龙教授全面审定。
希望它能成为更适合于学生使用的一本实习指导。
有关实验课的改革设想，需在不断地实践中检验。
本实习指导虽经改编，仍难免有不当之处，欢迎校内外任课教师及同学们予以批评指正。
中国医科大学免疫教研室2002年1月2目 录实验须知…………………………………………………………………………………………………（ ）实验一 凝集反应……………………………………………………………………………….（ ）一.直接凝集反应………………………………………………………………（ ）二.间接凝集试验………………………………………………………………（ ）三.间接凝集抑制试验…………………………………………………….（ ）实验二 沉淀反应…………………………………………………………………………………（ ）一.琼脂扩散试验……………………………………………………………….（ ）二.环状沉淀反应……………………………………………………………….（ ）三.免疫电泳试验……………………………………………………………….（ ）实验三 补体参与的反应………………………………………………………………… （ ）一.溶血反应……………………………………………………………………… （ ）二.溶血空斑试验……………………………………………………………… （ ））测总补体活性………………………… （ ）三.50 %溶血法（CH50实验四 免疫标记技术…………………………………………………………………… （ ）一.免疫吸附试验……………………………………………………………… （ ）二.免疫荧光技术……………………………………………………………….（ ）实验五 细胞因子检测…………………………………………………………………………（ ）一.IL-2检测…………………………………………………………………………（ ）二.TNF检测……………………………………………………………………………（ ）实验六 T淋巴细胞亚群及功能检测…………………………………………………（ ）一.细胞亚群检测…………………………………………………………….（ ）二.淋巴细胞转化试验……………………………………………………（ ）实验七 NK细胞活性检测…………………………………………………………………….（ ）免疫学实验复习思考题…………………………………………………………………………（ ）3实 验 须 知一、实验目的和要求【目的】1.掌握免疫学的基本实验方法和操作技术。
免疫学技术实验指导
免疫学技术实验指导硕士研究生使用上海交通大学医学院免疫学教研室2010年11月免疫学实验须知本课程是以实验为主的综合技术性课程，旨在提高和发掘同学们的创造性思维及实验操作能力，培养同学们严谨、严肃、求实、创新的科学作风。
通过实验教学力求使同学们掌握免疫学技术的基本原理、基本方法与基本操作。
为此，对所有参加本课程的同学特要求如下：1．参加本课程学习的同学，在每次实验前务必认真预习本实验指导，对实验的原理、操作方法和实验用的器材、试剂以及预期的实验结果必须做到“心中有数”。
2．参加本课程学习的同学，在进入实验室时应自觉穿好白大衣，保持实验室环境的安静和整洁，遵守课堂秩序。
3．参加本课程学习的同学，在实验过程中必须爱护实验器材与设备，节约实验试剂。
使用贵重仪器时应该获得指导教师的许可和指导。
如遇器材损坏或其它意外情况应及时报告指导教师。
4．参加本课程学习的同学，在实验完成后必须按照指导老师的要求，清洗、整理好实验器具，并按要求妥善处理各类实验废弃物。
5．参加本课程学习的同学，在实验完成后应按照指导老师的要求，本着实事求是的科学精神，详尽完成实验报告，并能对实验结果做出一定的分析与讨论。
目录第一章抗原获取与抗体的制备 (3)实验一免疫球蛋白的分离与纯化 (4)实验二动物免疫与佐剂制备 (6)第二章体外抗原抗体反应及其应用 (8)实验三凝集抑制试验—妊娠试验 (9)实验四双向琼脂扩散试验—免疫球蛋白鉴定 (10)实验五免疫电泳—免疫球蛋白鉴定 (11)第三章免疫标记技术 (12)实验六荧光抗体标记 (13)实验七酶联免疫吸附试验（ELISA）—双抗体夹心法 . 14 实验八酶联免疫吸附试验（ELISA）—间接法 (15)第四章免疫细胞的检测 (17)实验九外周血单个核细胞的分离—密度梯度离心法 (18)实验十外周血T细胞的数量检测—E-花环形成试验 (20)实验十一淋巴细胞表面抗原检测—免疫荧光法 (22)实验十二细胞膜表面抗原检测—补体依赖的微量淋巴细胞毒试验24实验十三NK细胞杀伤功能检测 (26)第五章细胞因子检测 (28)实验十四肿瘤坏死因子检测 (29)附录：免疫学技术实验常用试剂配方 (31)第一章抗原获取与抗体的制备在以抗原和抗体的特异性结合为基础的免疫学应用技术中，抗原的获取与抗体的制备构成了免疫应用技术的重要基础。
(整理)免疫学实验指导080410.
免疫学实验指导生命科学与工程学院生物工程、生物技术、动物医学专业用冯玉萍[分组]：4人/组，实验用动物、器材以每组需要量设计[班级] 2006生物工程、生物技术[学生人数]：65人/58人。
分16组/15组[时间] 2008年3月—2008年7月两周一次4学时。
目录实验一、免疫学实验动物的一般操作实验二、实验动物免疫器官、免疫细胞观察实验三、实验动物的采血方法、动物血清及红细胞的制备方法实验四、淋巴细胞分离与E玫瑰花环形成试验实验五、IgG的分离和纯化实验六、玻片凝集试验(ABO血型鉴定)实验七、环状沉淀试验实验八、琼脂扩散试验（单向）实验九、巨噬细胞吞噬功能试验实验十、白细胞吞噬试验实验一、免疫学实验动物的一般操作[实验原理]实验动物的基本操作是免疫学实验的基础,抗原对动物机体的免疫效果，通过实验动物进行验证，因此必须掌握实验动物的一般操作技术。
[目的要求]1、实验材料的准备（棉球、注射器的准备与消毒）（演示）2、了解免疫学实验常用动物的生物学特性、用途及其健康要求。
[自学]3、学习实验动物的编号、抓取、固定和几种不同的注射途径方法。
4、练习对小白鼠给药的几种不同途径的注射方法。
5、练习小白鼠的取血方法。
6、学习血涂片的制作及染色；观察动物血液中有形成分的形态结构特点。
[实验动物]小白鼠，2只/组，共需18 ~ 20只。
[试剂]⑴3%来苏儿或3%石炭酸100~150 ml/组；⑵无菌生理盐水100~150ml/组；磷酸盐缓冲液20~50ml/组（带滴管、染色用）。
⑶3 ~ 5% 苦味酸20~50ml/组（带滴管,编号用）；⑷5%品红20ml~50ml/组（带滴管，编号用）；⑸瑞特氏（wright‘s）染色液50ml/组（带滴管，染色用）；*抗凝剂一支[器材]⑴1ml注射器及针头2支/组；⑵碘酒棉球、酒精棉球、无菌干棉球各适量；⑶手术剪刀2把/组；镊子2把/组；载玻片、盖玻片各6片/组；⑷毛细吸管2支、50—100ml烧杯1个/组⑸显微镜6台/组[6] 鼠笼1个/组[操作步骤]1、练习小白鼠抓取、编号、皮下注射、皮内注射、腹腔注射的方法。
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免疫学实验指导
刘佳斌编
生命科学学院
生物技术系
2005.3
实验1
动物的注射采血及血清制备
家兔采血有耳静脉采血，耳动脉放血，心脏采血和劲动脉放血法，耳缘静脉采血一般适用于只需少量血液，常用于免疫注射采少量血，测其效价，心脏采血和耳动脉采血法，耳缘静脉采血一般只适用少量采血。
常用于免疫注射采少量血，测其效价。
心脏采血和耳缘动脉采血可采大量血有能保存动物，从动脉可采大量，动物死去。
兔一般采血20ML不影响其存活。
鸡一般用心脏采血法，每只鸡一次取血20ML，不影响其存活，经3—6个月后，可再次采血。
注射途径一般有皮下、静脉、皮内和腹腔。
一、目的与内容：
(一)目的
1.学习动物不同部位的采血方法
2.练习对家兔耳静脉的注射方法
3.用离心法制备血清
(二)内容
1、鸡心脏采血
2、家兔采血
3、制备血清
二、材料与用品
(一)材料
兔、鸡
(二)用品
生理盐水、注射器、剪刀、镊子、试管、离心管、离心机
三、操作与观察
(一)鸡心脏采血
1、固定鸡腿、翅膀，拔取心脏部位羽毛，用手将鸡按定。
2、寻找内肋骨到肩胛部皮下静脉，心脏在此静脉分支下面，以食指触摸心跳，消毒，垂直刺入针头，如触及肋骨则稍后退，将针头稍后偏于胸骨，切不可硬往里插，针头向里刺入后，可感到心脏跳动。
此时，针头刺入心脏，徐徐抽取血液。
采血20ML取下针头，将血液放入离心管。
(二)家兔采血
1、家兔心脏采血
（1）固定兔，剪取左前胸心脏部位的毛，酒精棉球消毒皮肤。
（2）用左手食指、中指、无名指防在右胸处，轻轻向左推，将心脏推至左恻固定，拇指在胸左恻由下向上数至第三至四肋骨探测心脏搏动最剧烈处
（3）将针头从搏动处刺入心脏，若准确徐徐抽取血液，足量后拔除，再改变方向成径直刺入心脏，取血液20ML，放入离心管。
（4）家兔静脉注射，在耳缘静脉注入1ML生理盐水。
2、家兔耳缘静脉采血。
(三)制备血清
四、作业与思考
1、心脏采血关键什么？需要注意哪些问题？
2、抓兔子时为什么不能抓它的双耳？正确的抓取方法是什么？
实验2
抗原与免疫血清的制备
将抗原注射入动物体内，刺激动物的B淋巴细胞转化为浆细胞，产生特异性抗体。
待其血清中累积大量抗体时，采其血液分离血清，即抗体的免疫血清。
抗原量低到一定程度时，抗体不能产生或用现有方法不能测出，但超过最高限度，又对抗体产生抑制作用。
本实验抗原为细菌细胞，采用每毫升含9亿个细菌比较恰当。
一、目的与内容
(一)目的
1、抗原与抗体的制备方法
2、为凝集实验制备材料
(二)内容
1、抗原的制备
2、免疫血清的制备
二、材料与用品
(一)材料
大肠杆菌，家兔
(二)用品
麦氏比浊管，试管，注射器，9号、7号针头，离心机等
0.5%的石炭酸生理盐水
三、操作与观察
（一）抗原的制备
（1）取5ML0.5%的石炭酸生理盐水，注射大肠杆菌斜面，洗下菌台
（2）用无菌毛细菌滴管吸取洗下的菌液，注入无菌小试管
（3）将此含有菌液的小试管放60度水浴箱中1小时，并不时摇动。
（4）取一与比浊管同质量的小试管，加菌液1ml，再加石炭酸生理盐水４ml（或更多，是原菌液浓度而定），混匀后各比浊管比浊。
麦氏比浊法原理：某一未知菌浓度，菌液在投射光作用下用肉眼与某一比浊管比较，如果二者透光度相同，即可目测该菌大致浓度。
（5）稀释：用0.5％的生理盐水，待菌液稀释9亿／ｍｌ，即等浊于第3支。
（二）免疫血清的制备
（1）注射动物：耳缘静脉注射抗原。
（2）14日采血1ｍｌ，分离血清，测其效价，合格即大量采血。
（3）心脏采血
（4）分离免疫血清。
四、作业与思考
１．在动物体内制备免疫血清为何要多次注射？
２．制备大肠杆菌抗原时，使用石炭酸生理盐水和加热６０℃1ｈ的目的是什么？
实验3
环状沉淀反应
可溶性抗原与相应抗体反应，在有电解质的情况下，会产生细微的沉淀，称为沉淀反应。
环状沉淀反应是使抗原抗体在沉淀管内形成交界面，然后在此交界面处出现—环状乳白色沉淀物，出现此环状反应的抗原最高峰，稀释度为沉淀素效价。
一、目的与内容
(一)目的
通过沉淀素的效价测定，学习环状沉淀反应的操作方法及结果观察。
(二)内容
鸡血清与免抗鸡免疫血清发生沉淀反应。
二、材料与用品
(一)材料
鸡血清、兔血清、免抗鸡免疫血清
(二)用品
小试管、1ml吸管量筒、生理盐水
三、操作与观察
1.将鸡血清以1：25稀释，去该液1ml，用倍比稀释法稀释为各种浓度（1#1*、2#2*……）分别表示自第1管、第2管中吸取1ml以此类推。
）
2.将9个干洁小试管插在试管架上，使直立。
3.用吸管吸取1：2的免抗鸡免疫血清，加入小试管底部，每管约两滴。
从最高峰稀释度加起，加入时沿壁徐徐加入，使与下层免抗鸡免疫血清之间形成界面，切勿摇动。
5.室温静置15—30分钟，观察试管中的两液面交界处，有无白色沉淀出现。
6.结果记录：由白色沉淀“+”，无沉淀“—”，出现沉淀最大稀释度的试管其稀释度倒数为沉淀素效价。
四、作业与思考
1.结果：
该沉淀素效价为
2.试验时为何稀释抗原，而不稀释抗体？
实验4
玻片凝集反应
细菌细胞成红细胞颗粒抗原与特异性抗体结合后，在有电解质的情况下，会出现肉眼可以看见的凝集块，称为凝集反应。
玻片凝集法主要利用抗血清来鉴定未知菌，也可用来显示免疫血清的存在，这是一种定性方法。
一、目的与内容
(一)目的
1.了解血清学反应的基本原则。
2.学习玻片凝集现象。
3.观察凝集现象。
(二)内容
兔抗血清与与大肠杆菌发生凝集反应。
二、材料与用品
(一)材料
大肠杆菌、注射大肠杆菌抗原后的家兔
(二)用品
琼脂斜面、培养物、生理盐水、玻片、接种环、血清
三、操作与观察
1.采集家兔血液10ml，离心，制备抗血清。
2.以1：10用生理盐水稀释抗血清。
3.在玻片一端用小滴管加1 滴1：10抗血清，另一端加1滴生理盐水。
4.挑取少许细菌混入生理盐水中，再搅匀，挑取少许细菌混入血清，搅匀。
5.将玻片略微摆动后，静置室温中，1—3 分钟后观察一端是否有凝集反应出现，另一端为生理盐水对照，仍未均匀混合。
四、作业与思考
2. 是否出现凝集反应，如没有分析原因？
3.为何采用生理盐水稀释血清，而不用蒸馏水？。