免疫学实验指导书(副本)
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免疫学实验指导
刘佳斌编
生命科学学院
生物技术系
2005.3
实验1
动物的注射采血及血清制备
家兔采血有耳静脉采血,耳动脉放血,心脏采血和劲动脉放血法,耳缘静脉采血一般适用于只需少量血液,常用于免疫注射采少量血,测其效价,心脏采血和耳动脉采血法,耳缘静脉采血一般只适用少量采血。常用于免疫注射采少量血,测其效价。心脏采血和耳缘动脉采血可采大量血有能保存动物,从动脉可采大量,动物死去。兔一般采血20ML不影响其存活。
鸡一般用心脏采血法,每只鸡一次取血20ML,不影响其存活,经3—6个月后,可再次采血。注射途径一般有皮下、静脉、皮内和腹腔。
一、目的与内容:
(一)目的
1.学习动物不同部位的采血方法
2.练习对家兔耳静脉的注射方法
3.用离心法制备血清
(二)内容
1、鸡心脏采血
2、家兔采血
3、制备血清
二、材料与用品
(一)材料
兔、鸡
(二)用品
生理盐水、注射器、剪刀、镊子、试管、离心管、离心机
三、操作与观察
(一)鸡心脏采血
1、固定鸡腿、翅膀,拔取心脏部位羽毛,用手将鸡按定。
2、寻找内肋骨到肩胛部皮下静脉,心脏在此静脉分支下面,以食指触摸心跳,消毒,垂直刺入针头,如触及肋骨则稍后退,将针头稍后偏于胸骨,切不可硬往里插,针头向里刺入后,可感到心脏跳动。此时,针头刺入心脏,徐徐抽取血液。采血20ML取下针头,将血液放入离心管。
(二)家兔采血
1、家兔心脏采血
(1)固定兔,剪取左前胸心脏部位的毛,酒精棉球消毒皮肤。
(2)用左手食指、中指、无名指防在右胸处,轻轻向左推,将心脏推至左恻固定,拇指在胸左恻由下向上数至第三至四肋骨探测心脏搏动最剧烈处
(3)将针头从搏动处刺入心脏,若准确徐徐抽取血液,足量后拔除,再改变方向成径直刺入心脏,取血液20ML,放入离心管。
(4)家兔静脉注射,在耳缘静脉注入1ML生理盐水。
2、家兔耳缘静脉采血。
(三)制备血清
四、作业与思考
1、心脏采血关键什么?需要注意哪些问题?
2、抓兔子时为什么不能抓它的双耳?正确的抓取方法是什么?
实验2
抗原与免疫血清的制备
将抗原注射入动物体内,刺激动物的B淋巴细胞转化为浆细胞,产生特异性抗体。待其血清中累积大量抗体时,采其血液分离血清,即抗体的免疫血清。抗原量低到一定程度时,抗体不能产生或用现有方法不能测出,但超过最高限度,又对抗体产生抑制作用。本实验抗原为细菌细胞,采用每毫升含9亿个细菌比较恰当。
一、目的与内容
(一)目的
1、抗原与抗体的制备方法
2、为凝集实验制备材料
(二)内容
1、抗原的制备
2、免疫血清的制备
二、材料与用品
(一)材料
大肠杆菌,家兔
(二)用品
麦氏比浊管,试管,注射器,9号、7号针头,离心机等
0.5%的石炭酸生理盐水
三、操作与观察
(一)抗原的制备
(1)取5ML0.5%的石炭酸生理盐水,注射大肠杆菌斜面,洗下菌台
(2)用无菌毛细菌滴管吸取洗下的菌液,注入无菌小试管
(3)将此含有菌液的小试管放60度水浴箱中1小时,并不时摇动。
(4)取一与比浊管同质量的小试管,加菌液1ml,再加石炭酸生理盐水4ml(或更多,是原菌液浓度而定),混匀后各比浊管比浊。
麦氏比浊法原理:某一未知菌浓度,菌液在投射光作用下用肉眼与某一比浊管比较,如果二者透光度相同,即可目测该菌大致浓度。
(5)稀释:用0.5%的生理盐水,待菌液稀释9亿/ml,即等浊于第3支。
(二)免疫血清的制备
(1)注射动物:耳缘静脉注射抗原。
(2)14日采血1ml,分离血清,测其效价,合格即大量采血。
(3)心脏采血
(4)分离免疫血清。
四、作业与思考
1.在动物体内制备免疫血清为何要多次注射?
2.制备大肠杆菌抗原时,使用石炭酸生理盐水和加热60℃1h的目的是什么?
实验3
环状沉淀反应
可溶性抗原与相应抗体反应,在有电解质的情况下,会产生细微的沉淀,称为沉淀反应。环状沉淀反应是使抗原抗体在沉淀管内形成交界面,然后在此交界面处出现—环状乳白色沉淀物,出现此环状反应的抗原最高峰,稀释度为沉淀素效价。
一、目的与内容
(一)目的
通过沉淀素的效价测定,学习环状沉淀反应的操作方法及结果观察。
(二)内容
鸡血清与免抗鸡免疫血清发生沉淀反应。
二、材料与用品
(一)材料
鸡血清、兔血清、免抗鸡免疫血清
(二)用品
小试管、1ml吸管量筒、生理盐水
三、操作与观察
1.将鸡血清以1:25稀释,去该液1ml,用倍比稀释法稀释为各种浓度(1#1*、2#2*……)分别表示自第1管、第2管中吸取1ml以此类推。)
2.将9个干洁小试管插在试管架上,使直立。
3.用吸管吸取1:2的免抗鸡免疫血清,加入小试管底部,每管约两滴。
从最高峰稀释度加起,加入时沿壁徐徐加入,使与下层免抗鸡免疫血清之间形成界面,切勿摇动。
5.室温静置15—30分钟,观察试管中的两液面交界处,有无白色沉淀出现。
6.结果记录:由白色沉淀“+”,无沉淀“—”,出现沉淀最大稀释度的试管其稀释度倒数为沉淀素效价。
四、作业与思考
1.结果:
该沉淀素效价为
2.试验时为何稀释抗原,而不稀释抗体?