抗TCR抗体诱导正常及NOD小鼠胸腺细胞阴性选择
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下结论。 １．抗ＴＣＲ抗体、ＰＭＡ、Ｃｏｎ Ａ诱导胸腺及外周Ｔ细胞的活化分裂，我们
用ＣＦＳＥ标记细胞、流式细胞仪分析法检测，证明此法不仅可以测定单细 胞水平上细胞的分裂，还可根据荧光强度判断细胞的分裂次数。 ２．正常ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠胸腺不同亚群Ｔ细胞对抗ＴＣＲ抗体诱导敏感性有差 异，ＣＤ３。ＣＤ４’ＣＤ８‘（三阴ＴＮ）、ＣＤ８＋ＣＤ３‘、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８一（单阳ＳＰ）、 ＣＤ３＋ＣＤ４。ＣＤ８＋ＳＰ细胞出现不同变化，ＴＮ细胞相对耐受凋亡，而 ＣＤ８＋ＣＤ３。、ＤＰ细胞对凋亡诱导敏感。 ３．胸腺和脾脏表面ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８的表达与性别无明显关系，６—９周小
鼠脾脏ＣＤ３＋细胞明显多于３—４周小鼠；胸腺细胞的增殖与年龄、性别无 关，而３周雌性小鼠脾细胞对ＰＭＡ＋ＩＯＮＯ刺激后的增殖应答比雄性明显， ４—６周雄性小鼠脾细胞的增殖能力强于雌性小鼠，７—８周雌性小鼠脾细 胞对抗ＴＣＲ抗体的应答能力明显减小。表明免疫系统的雌雄异型可能早 于青春期。
６
第二军医大学博士论文
中文摘要
４．雌、雄不同Hale Waihona Puke Baidu别ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠对相同ＴＣＲ受体诱导凋亡的敏感性有
差异，雄性小鼠胸腺细胞的凋亡明显于雌性。且随着大量皮质区
ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺细胞的凋亡，ＣＤ４。ＣＤ８’细胞、成熟的髓质ＣＤ４‘ＣＤ８一细胞 增加，ＣＤ４’ＣＤ８＋细胞水平无明显改变。 ５．ａｎｔｉ．ＣＤ２８ ｍＡｂ刺激能明显增强ａｎＥ．ＴＣＲ ｍＡｂ诱导胸腺细胞的凋亡。 胸腺Ｔ细胞对ａｎｔｉ．ＴＣＲ ｍＡｂ或ａｎｔｉ．ＴＣＲ ｍＡｂ＋ＣＤ２８ ｍＡｂ刺激的不同应 答与细胞的成熟阶段密切相关。胸腺皮、髓质中的胸腺细胞亚群发生凋 亡时，经ＣＤ２８传导的胞内途径均受到影响。 ６．抗ＴＥＲ抗体处置后，小鼠成熟髓质区高表达Ｔ细胞受体的单阳性细 胞数目成倍增加，皮质区低表达Ｔ细胞受体的不成熟双阳性细胞数目减 少。成熟的单阳性胸腺细胞高表达归巢受体Ｌ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ， 表型分析（ＴＣＲ ａ Ｂ、ＣＤ６９、ＨＳＡ、Ｖ Ｂ ７－ｉｎｔｅｇｒｉｎ、Ｏａ一２）显示增加的这群细胞为胸 腺的新迁出细胞，同时小鼠外周淋巴结及脾脏ＣＤ４＋、ＣＤ８＋新迁出细胞数 量减少，表明抗ＴＣＲ抗体能抑制胸腺Ｔ细胞向外周迁移。 ７．与ＢＡＬＢ＆小鼠胸腺细胞结果相比较：抗ＴＣＲ抗体诱导的增殖应答 较弱，此种缺乏与年龄及ＮＯＤ胸脓ＣＤ４＋ＣＤ８’和ＣＤ４。ＣＤ８＋ＳＰ细胞有关， ＮＬ。２能部分恢复对ＴＣＲ抗体应答的缺乏。ＮＯＤ小鼠对ＰＭＡ＋ＩＯＮＯ和 ＰＭＡ＋ａｎｆｉ．ＴＣＲｍＡｂ应答正常，但对ａｎｔｉ．ＴＣＲｍＡｂ＋ＩＯＮＯ应答缺乏，推 测与年龄有关的ＮＯＤ小鼠胸腺细胞对ＴＣＲ抗体应答的缺乏与Ｔ细胞激 活时上游ＰＫＣ信号通路的缺乏有关。 ８．与ＢＡＬＢ／ｃ小鼠胸腺细胞结果相比较：１）双信号刺激对ＮＯＤ和 ＢＡＬＢ／ｃ ＣＤ４＋ＣＤ８＋亚群的明显促凋亡作用相似；而ＮＯＤ小鼠髓质 ６Ｃ１０＋ＨＳＡＨＣＤ４＋ＣＤ８。ＳＰ细胞对ａｎｔｉ－ＴＣＲｍＡｂ＋ＣＤ２８ｍＡｂ介导凋亡的敏 感性明显弱于ＢＡＬＢ／ｅ小鼠。２）体内抗ＴＣＲ抗体处置后＇ＮＯＤ髓质 ６Ｃ１０＊ＨＳＡ“１ＣＤ４ＳＰ不成熟单阳细胞的凋亡耐受明显。表明ＮＯＤ小鼠胸腺 髓质不成熟单阳性细胞亚群的阴性选择缺乏，反映了ＮＯＤ小鼠疾病的发 作可能不仅与外周耐受有关、同时与胸腺细胞的中枢耐受有关。
ＣｓＡ ＧＡＤ６５
ＩＤＤＭ
ＤＡＧ ＰＫＣ ＰＬＣ ＩＰ３
墓塞笪堕堕
５－ｃａｒｂａｘｙｆｌｕｏｒｓｃｅｉｎ
ｄｉａｃｅｔａｔｅ
ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ｅｓｔｅｒ
ｒｅａｇｇｒｅｇａｔｅｄ ｔｈｙｍｉｃ ｏｒｇａｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｃｅｌｌ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｅｌｌ ｄｅａｔｈ
ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ
ａｌｌｏｐＨｙｃｙｃｙａｎｉｎ ｂａｌａｎｃｅｄ ｓａｌｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ
ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ＣｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎＡ
ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ ｄｅｃａａｒｂｏｘｙｌａｓｅ６５ ｉｎｓｕｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｈｎａｓｅ Ｃ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ｃ ｉｎｏｓｉｔｏｌ ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ
第二军医大学博士论文
Ａｇ ＣＲＳ Ｃｙ５ ＤＮ ＤＰ ＳＰ ＦＡＣＳ ＦＳＣ ＦＣＳ ＦＩＴＣ ＨＳＡ ＩＦＮｖ Ｉｇ ＩＬ Ｉｎｔ
ＭＡｂ
ＮＣＳ
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英文缩略语
英文缩略语
ａｎｔｉｇｅｎ ｃｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｋｅｗｅｄ Ｃｙｃｈｒｏｍｅ ＣＤ４。ＣＯＳｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ ＣＤ４＋ＣＤ８＋ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ ｓｉｎｇｌｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｓｏｒｔｅｒ Ｆｏｒｗａｒｄ ｌｉｇｈｔ ｓｃａｔｔｅｒ
ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｉｎ ｒｅｃｅｎｔ ｔｈｙｍｉｃ ｅｍｉｇｒａｎｔ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｎｏｎ．ｏｂｅｓｅ ｄｉａｂｅｒｉｃ ｍｏｕｓｅ ＣＤ３’ＣＤ４＂ＣＤ８’ｃｅｌｌｓ
ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ
４
．！坚兰匡查鲎鲤圭堡塞
ＣＦＳＥ
ＩＵＤＣ ＭＡＣＳ
ＡＩＣＤ
ＴＮＦ ＡＰＣ ＢＳＳ ＰＣＤ
５
第二军医大学博士论文
中文摘要
中文摘要
胸腺是Ｔ细胞发育的主要场所，胸腺前体细胞由骨髓迁入胸腺，经历 一系列克隆选择，最终产生成熟的功能性Ｔ细胞，迁出胸腺，形成外周Ｔ
细胞库。胸腺内按照细胞表面标志的变化，ａ Ｂ Ｔ细胞的发育过程可分 为以下步骤：ＣＤ４’ＣＤ８一一ＣＤ４＋ＣＤ８＋一ＣＤ４＋ＣＤ８‘或ＣＤ４。ＣＤ８＋。一旦 ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺细胞表达克隆特异的ＴＣＲ ｎ Ｂ，这些细胞就经历阳性、 阴性选择，上调ＴＣＲ分子表达，下调ＣＤ４或ＣＤ８分子。由胸腺皮质迁入 髓质细胞并非过去认为的是处于一种静止状态，而是要经历表型乃至功 能的进一步成熟，才能成为功能成熟的Ｔ细胞。抗ＴＣＲ单克隆抗体是 有效的免疫耐受诱导剂，能减少Ｔ细胞数量和阻断Ｔ细胞功能，明显造 成机体的免疫抑制状态。本文根据抗ＴＣＲ单克隆抗体对正常ＢＡＬＢ／Ｃ及 自身免疫性糖尿病模型ＮＯＤ小鼠胸腺细胞阴性选择的诱导研究，得出以
ｆｅｔａｌ ｔｈｙｍｉｃ ｏｒｇａｎ ｃｕｌｔｕｒｅ
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ ｈｅａｔ ｓｔａｂｌｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｖ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ
ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ
ｎｅｗ．ｂｏｒｎ ｃａｌｆ ｓｅｒｕｍ
用ＣＦＳＥ标记细胞、流式细胞仪分析法检测，证明此法不仅可以测定单细 胞水平上细胞的分裂，还可根据荧光强度判断细胞的分裂次数。 ２．正常ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠胸腺不同亚群Ｔ细胞对抗ＴＣＲ抗体诱导敏感性有差 异，ＣＤ３。ＣＤ４’ＣＤ８‘（三阴ＴＮ）、ＣＤ８＋ＣＤ３‘、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８一（单阳ＳＰ）、 ＣＤ３＋ＣＤ４。ＣＤ８＋ＳＰ细胞出现不同变化，ＴＮ细胞相对耐受凋亡，而 ＣＤ８＋ＣＤ３。、ＤＰ细胞对凋亡诱导敏感。 ３．胸腺和脾脏表面ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８的表达与性别无明显关系，６—９周小
鼠脾脏ＣＤ３＋细胞明显多于３—４周小鼠；胸腺细胞的增殖与年龄、性别无 关，而３周雌性小鼠脾细胞对ＰＭＡ＋ＩＯＮＯ刺激后的增殖应答比雄性明显， ４—６周雄性小鼠脾细胞的增殖能力强于雌性小鼠，７—８周雌性小鼠脾细 胞对抗ＴＣＲ抗体的应答能力明显减小。表明免疫系统的雌雄异型可能早 于青春期。
６
第二军医大学博士论文
中文摘要
４．雌、雄不同Hale Waihona Puke Baidu别ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠对相同ＴＣＲ受体诱导凋亡的敏感性有
差异，雄性小鼠胸腺细胞的凋亡明显于雌性。且随着大量皮质区
ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺细胞的凋亡，ＣＤ４。ＣＤ８’细胞、成熟的髓质ＣＤ４‘ＣＤ８一细胞 增加，ＣＤ４’ＣＤ８＋细胞水平无明显改变。 ５．ａｎｔｉ．ＣＤ２８ ｍＡｂ刺激能明显增强ａｎＥ．ＴＣＲ ｍＡｂ诱导胸腺细胞的凋亡。 胸腺Ｔ细胞对ａｎｔｉ．ＴＣＲ ｍＡｂ或ａｎｔｉ．ＴＣＲ ｍＡｂ＋ＣＤ２８ ｍＡｂ刺激的不同应 答与细胞的成熟阶段密切相关。胸腺皮、髓质中的胸腺细胞亚群发生凋 亡时，经ＣＤ２８传导的胞内途径均受到影响。 ６．抗ＴＥＲ抗体处置后，小鼠成熟髓质区高表达Ｔ细胞受体的单阳性细 胞数目成倍增加，皮质区低表达Ｔ细胞受体的不成熟双阳性细胞数目减 少。成熟的单阳性胸腺细胞高表达归巢受体Ｌ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ， 表型分析（ＴＣＲ ａ Ｂ、ＣＤ６９、ＨＳＡ、Ｖ Ｂ ７－ｉｎｔｅｇｒｉｎ、Ｏａ一２）显示增加的这群细胞为胸 腺的新迁出细胞，同时小鼠外周淋巴结及脾脏ＣＤ４＋、ＣＤ８＋新迁出细胞数 量减少，表明抗ＴＣＲ抗体能抑制胸腺Ｔ细胞向外周迁移。 ７．与ＢＡＬＢ＆小鼠胸腺细胞结果相比较：抗ＴＣＲ抗体诱导的增殖应答 较弱，此种缺乏与年龄及ＮＯＤ胸脓ＣＤ４＋ＣＤ８’和ＣＤ４。ＣＤ８＋ＳＰ细胞有关， ＮＬ。２能部分恢复对ＴＣＲ抗体应答的缺乏。ＮＯＤ小鼠对ＰＭＡ＋ＩＯＮＯ和 ＰＭＡ＋ａｎｆｉ．ＴＣＲｍＡｂ应答正常，但对ａｎｔｉ．ＴＣＲｍＡｂ＋ＩＯＮＯ应答缺乏，推 测与年龄有关的ＮＯＤ小鼠胸腺细胞对ＴＣＲ抗体应答的缺乏与Ｔ细胞激 活时上游ＰＫＣ信号通路的缺乏有关。 ８．与ＢＡＬＢ／ｃ小鼠胸腺细胞结果相比较：１）双信号刺激对ＮＯＤ和 ＢＡＬＢ／ｃ ＣＤ４＋ＣＤ８＋亚群的明显促凋亡作用相似；而ＮＯＤ小鼠髓质 ６Ｃ１０＋ＨＳＡＨＣＤ４＋ＣＤ８。ＳＰ细胞对ａｎｔｉ－ＴＣＲｍＡｂ＋ＣＤ２８ｍＡｂ介导凋亡的敏 感性明显弱于ＢＡＬＢ／ｅ小鼠。２）体内抗ＴＣＲ抗体处置后＇ＮＯＤ髓质 ６Ｃ１０＊ＨＳＡ“１ＣＤ４ＳＰ不成熟单阳细胞的凋亡耐受明显。表明ＮＯＤ小鼠胸腺 髓质不成熟单阳性细胞亚群的阴性选择缺乏，反映了ＮＯＤ小鼠疾病的发 作可能不仅与外周耐受有关、同时与胸腺细胞的中枢耐受有关。
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ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ
ａｌｌｏｐＨｙｃｙｃｙａｎｉｎ ｂａｌａｎｃｅｄ ｓａｌｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ
ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ＣｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎＡ
ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ ｄｅｃａａｒｂｏｘｙｌａｓｅ６５ ｉｎｓｕｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｈｎａｓｅ Ｃ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ｃ ｉｎｏｓｉｔｏｌ ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ
第二军医大学博士论文
Ａｇ ＣＲＳ Ｃｙ５ ＤＮ ＤＰ ＳＰ ＦＡＣＳ ＦＳＣ ＦＣＳ ＦＩＴＣ ＨＳＡ ＩＦＮｖ Ｉｇ ＩＬ Ｉｎｔ
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英文缩略语
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．！坚兰匡查鲎鲤圭堡塞
ＣＦＳＥ
ＩＵＤＣ ＭＡＣＳ
ＡＩＣＤ
ＴＮＦ ＡＰＣ ＢＳＳ ＰＣＤ
５
第二军医大学博士论文
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胸腺是Ｔ细胞发育的主要场所，胸腺前体细胞由骨髓迁入胸腺，经历 一系列克隆选择，最终产生成熟的功能性Ｔ细胞，迁出胸腺，形成外周Ｔ
细胞库。胸腺内按照细胞表面标志的变化，ａ Ｂ Ｔ细胞的发育过程可分 为以下步骤：ＣＤ４’ＣＤ８一一ＣＤ４＋ＣＤ８＋一ＣＤ４＋ＣＤ８‘或ＣＤ４。ＣＤ８＋。一旦 ＣＤ４＋ＣＤ８＋胸腺细胞表达克隆特异的ＴＣＲ ｎ Ｂ，这些细胞就经历阳性、 阴性选择，上调ＴＣＲ分子表达，下调ＣＤ４或ＣＤ８分子。由胸腺皮质迁入 髓质细胞并非过去认为的是处于一种静止状态，而是要经历表型乃至功 能的进一步成熟，才能成为功能成熟的Ｔ细胞。抗ＴＣＲ单克隆抗体是 有效的免疫耐受诱导剂，能减少Ｔ细胞数量和阻断Ｔ细胞功能，明显造 成机体的免疫抑制状态。本文根据抗ＴＣＲ单克隆抗体对正常ＢＡＬＢ／Ｃ及 自身免疫性糖尿病模型ＮＯＤ小鼠胸腺细胞阴性选择的诱导研究，得出以
ｆｅｔａｌ ｔｈｙｍｉｃ ｏｒｇａｎ ｃｕｌｔｕｒｅ
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ ｈｅａｔ ｓｔａｂｌｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｖ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ
ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ
ｎｅｗ．ｂｏｒｎ ｃａｌｆ ｓｅｒｕｍ