医学免疫学：溶血空斑试验(PFC测定)
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机， • 载玻片、双面胶、微量加样器、Tip头、棉签、石
蜡、石蜡锅、温箱等。
1.脾细胞悬液的制备
5％ SRBC 0.4ml腹腔内注射免疫小鼠
实
验
4d后
流
颈椎脱臼处死小鼠，取脾脏，放入已加8ml Hank’s液的平皿中，研磨，200目筛网过滤
程
离心：1000r/min×10min
去上清，加2ml Hank’s液制成脾细源自文库悬液
• 实验目的：
1. 掌握PFC试验的基本原理及实验方 法；
2. 了解PFC试验的临床意义。
实验原理
➢ 抗原刺激B细胞活化分泌特异性抗体 ➢ 抗原抗体复合物经典途径激活补体系统
实验材料
• 小鼠18～22g， • 5％、15％SRBC，补体，Hank’s液， • 解剖器械（剪刀、镊子）， • 空平皿、筛网、组织研磨器、吸管、试管、离心
37度，40min.
实验组
对照组
结果：
实验组出现无数个透明的溶血空斑，而对照组无。 溶血空斑边缘不规则，而气泡透亮、边缘规则。
实验组
对照组
气泡 空斑
B细胞 浆细胞
• 【注意事项】 1.灌注时防止气泡的出现。
溶血空斑试验（PFC测定）
(Plaque forming cell assay)
小鼠B细胞溶血空斑形成试验
➢ 溶血空斑试验是基于抗原抗体反应可活化补体， 溶解细胞的原理来检测抗体形成细胞的一种体外 试验方法，用于检测动物的抗体产生功能的经典 的试验。
➢ 将SRBC免疫过的小鼠脾细胞制成细胞悬液，与一 定量的SRBC混合，在补体参与下，使抗体产生细 胞周围的SRBC溶解，形成一个肉眼可见的溶血空 斑。主要用于测定B细胞抗体产生能力。
2.制作小室
取洁净载玻片两张
实
验
用双面胶在中间和两端各粘一条，将
流
两张玻片黏在一起即成2个小室
程
3.配制小室灌注液
准备2支试管，按照下表加样：
实 验 脾细胞悬液 流 15%SRBC 程 补体
实验管（μl） 对照管 （μl）
100
100
100
100
100
-
Hank’s液
500
600
混匀，分别灌注小室（注满），石蜡封口，
蜡、石蜡锅、温箱等。
1.脾细胞悬液的制备
5％ SRBC 0.4ml腹腔内注射免疫小鼠
实
验
4d后
流
颈椎脱臼处死小鼠，取脾脏，放入已加8ml Hank’s液的平皿中，研磨，200目筛网过滤
程
离心：1000r/min×10min
去上清，加2ml Hank’s液制成脾细源自文库悬液
• 实验目的：
1. 掌握PFC试验的基本原理及实验方 法；
2. 了解PFC试验的临床意义。
实验原理
➢ 抗原刺激B细胞活化分泌特异性抗体 ➢ 抗原抗体复合物经典途径激活补体系统
实验材料
• 小鼠18～22g， • 5％、15％SRBC，补体，Hank’s液， • 解剖器械（剪刀、镊子）， • 空平皿、筛网、组织研磨器、吸管、试管、离心
37度，40min.
实验组
对照组
结果：
实验组出现无数个透明的溶血空斑，而对照组无。 溶血空斑边缘不规则，而气泡透亮、边缘规则。
实验组
对照组
气泡 空斑
B细胞 浆细胞
• 【注意事项】 1.灌注时防止气泡的出现。
溶血空斑试验（PFC测定）
(Plaque forming cell assay)
小鼠B细胞溶血空斑形成试验
➢ 溶血空斑试验是基于抗原抗体反应可活化补体， 溶解细胞的原理来检测抗体形成细胞的一种体外 试验方法，用于检测动物的抗体产生功能的经典 的试验。
➢ 将SRBC免疫过的小鼠脾细胞制成细胞悬液，与一 定量的SRBC混合，在补体参与下，使抗体产生细 胞周围的SRBC溶解，形成一个肉眼可见的溶血空 斑。主要用于测定B细胞抗体产生能力。
2.制作小室
取洁净载玻片两张
实
验
用双面胶在中间和两端各粘一条，将
流
两张玻片黏在一起即成2个小室
程
3.配制小室灌注液
准备2支试管，按照下表加样：
实 验 脾细胞悬液 流 15%SRBC 程 补体
实验管（μl） 对照管 （μl）
100
100
100
100
100
-
Hank’s液
500
600
混匀，分别灌注小室（注满），石蜡封口，