2017春 植物生物技术实验指导 (自编) -1
植物生物技术实验指导
目录实验一培养基母液的配制 (1)实验二培养基的配制 (4)实验三愈伤组织诱导及培养 (6)实验四愈伤组织继代培养 (7)实验五植物生长调节剂对愈伤组织形态发生的作用 (8)实验六植物人工种子的制备 (9)实验七茎尖培养 (11)实验八细胞液体悬浮培养 (12)实验九低温和饥饿处理诱导悬浮培养细胞同步化 (14)实验十花药培养 (16)实验十一成熟胚的培养 (17)实验十二叶肉原生质体的分离与培养 (18)实验十三悬浮培养细胞原生质体的分离与培养 (20)实验十四PEG诱导原生质体融合 (22)实验十五三亲本杂交法转化农杆菌 (24)实验十六冻融法转化农杆菌 (26)实验十七基因枪法转化愈伤组织 (27)实验十八农杆菌介导法转化水稻愈伤组织 (30)实验十九转化愈伤的除菌、筛选及再生 (32)实验二十植物总DNA的提取 (35)实验二十一植物总RNA的提取 (37)实验二十二转化植株的PCR检测 (38)实验二十三组织化学染色法检测Gus活性 (41)实验二十四转化植株的Southern检测 (43)实验二十五转化植株的Northern检测 (47)实验一培养基母液的配制一、实验特点实验类型：验证实验类别：专业计划学时：3 每组人数：2二、实验目的要求掌握配制培养基母液的原理；学习培养基母液的配制方法和母液的使用方法。
三、实验原理在植物组织培养所用的培养基中，一般都含有无机盐、有机物和植物生长调节剂等十几种成分。
如果每次配制培养基时都按着成分表逐个地称量，不但费时，而且有些成分的用量极小，配制时容易产生误差。
因此，为了提高工作效率和减少误差，一般将常用的基本培养基中的各种成分配成一定倍数的贮存液，这种溶液叫培养基母液。
用时，根据培养基配方、母液浓度和要配制的培养基的体积计算出所需溶液的体积，用量筒、移液管或微量移液器量取即可。
母液的配制有2种方法：单配法和混配法。
前者便于配制不同种类的培养基，后者便于大量配制同种培养基。
《园艺植物生物技术》实验教案[修改版]
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第一篇：《园艺植物生物技术》实验教案《园艺植物生物技术》实验教案实验一现代生物技术实验室与实验仪器一、实验目的实验室和实验仪器是开展现代生物技术研究的基础平台，对实验室布局和仪器配置的掌握程度是学生知识结构完整性的重要体现。
通过现场参观和老师讲解加深同学们对现代分子生物学实验室的规划与布局及常用仪器设备的主要功能的认识，掌握高速冷冻离心机、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等关键仪器的使用方法。
二、实验场所选择及实验内容园艺学院植物分子生物技术实验室与开展现代生物技术研究直接相关的实验室分工与布局和主要相关仪器：如与组织培养有关的超净工作台、高压灭菌锅、接种至、培养室等；与分子生物学有关的高速冷冻离心机、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等。
三、实验方法与步骤1、相关背景知识回顾：对课堂讲述的各种生物技术如分子标记、细胞和组织培养等操作过程进行回顾，重要指出每个环节要用到的必备仪器的作用、性能指标、操作注意事项及仪器选购中应注意的问题等。
2、每班分为两小组简要介绍现代生物技术实验室的布局及功能分区情况；针对每个分区的重要仪器进行讲述，结束时对所有参观内容进行简要总结，并回答同学们的提问。
四、实验注意事项实验有很多易损仪器或有毒试剂，参观时要求同学们认真记录，不要随意动手，以保证仪器和人身安全。
五、思考题1、根据参观内容，描述本次参观有了解到的主要仪器的名称、用途及使用中的注意事项。
2、一个现代化生物技术实验室应具备的基本功能的必备仪器有哪些？实验二植物组织培养一、实验目的植物组织培养是现代生物技术研究的重要技术手段，在原生质体融合、病毒脱除、离体快繁及遗传转化等领域发挥着不可替代的作用。
胡萝卜以其培养体系成熟、再生容易而被视为组织培养的理想外植体材料，本实验通过胡萝卜的组织培养使同学们掌握基本培养基的配制、灭菌及培养的基本技能。
二、实验原理基于1902年德国科学家哈勃兰特（Haberlandt）提出植物细胞的全能性理论，即指已分化的细胞仍然具有分化发育成新个体的潜能。
《植物生物技术导论》实验指导
《植物生物技术导论》实验指导《植物生物技术导论》实验（周立刚，翟红，郭仰东等）实验一植物培养基的制备与灭菌一、实验目的1、在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物类、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。
当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取一定体积的母液即可。
通过本实验，学习和了解培养基母液的配制方法。
2、掌握培养基的配制方法。
3、学习和了解培养基、器皿和相关设备的灭菌方法。
二、主要实验用具和仪器设备烧杯（1000ml 、500ml 、100ml 、50ml ）、量筒（2000ml 、1000ml 、500ml 、250ml 、100ml 、50ml 、25ml 、10ml ）、容量瓶（1000ml 、500ml 、250ml 、100ml 、50ml 、25ml ）、试剂瓶（1000ml 、500ml 、200ml 、100ml 、50ml ）、玻璃棒、油性标记笔、移液枪（5ml 、1ml 、200μl 、100μl ）、对应的枪头、培养基瓶（1000ml 、500ml 、200ml ）等。
电子天平（感量为0.1mg 、10mg ）、pH 计、灭菌锅、微波炉、磁力搅拌器、电磁炉、超净工作台等。
三、实验药品按培养基配方准备。
1N NaOH 、1N HCl 。
四、实验内容（一）MS 培养基母液的配制1、大量元素母液的配制（配1L ）无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大10倍，分别用50ml 烧杯称量，用蒸馏水溶解，必要时加热。
溶解后，倒入1000ml 容量瓶中，最后用蒸馏水定容。
在混合定容时，必须最后加入氯化钙，因为氯化钙与磷酸二氢钾能形成难溶于水的沉淀。
将配好的混合液倒入细口试剂瓶中，贴好标签。
配制培养基时，每配1000ml 培养基，取大量元素母液100ml 。
化合物名称每升培养基用量（mg/L ）扩大10倍称量（g/L ）备注NH 4NO 3 1650 16.5 每升培养基取母液100mlKNO 3 1900 19.0 KH 2PO 4170 1.7 MgSO 4●7H 2O 370 3.7 CaCl 2●2H 2O 4404.42、微量元素母液的配制（配0.5 L ）无机盐中微量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大100倍，分别用50ml 烧杯称量，用蒸馏水溶解，必要时加热。
植物生物学实验报告
实验名称：探究植物生长素对植物生长的影响一、实验目的1. 了解植物生长素的作用原理；2. 探究不同浓度植物生长素对植物生长的影响；3. 分析植物生长素在植物生长过程中的作用。
二、实验原理植物生长素是一种植物激素，具有促进植物生长和发育的作用。
生长素在植物体内分布不均，对植物的生长发育具有重要影响。
本实验通过观察不同浓度植物生长素对植物生长的影响，分析植物生长素在植物生长过程中的作用。
三、实验材料1. 植物材料：小麦种子；2. 实验药品：植物生长素；3. 实验器材：培养皿、蒸馏水、滴管、剪刀、放大镜等。
四、实验步骤1. 将小麦种子用蒸馏水浸泡6小时，使种子吸足水分；2. 将浸泡好的小麦种子均匀地放入培养皿中，每个培养皿放50粒种子；3. 将培养皿放入恒温培养箱中，保持温度25℃，光照12小时；4. 将植物生长素配制成不同浓度，分别为0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L；5. 用滴管将不同浓度的植物生长素滴加到培养皿中的小麦种子上，每个浓度滴加10滴；6. 将滴加好植物生长素的培养皿放入恒温培养箱中继续培养；7. 观察记录小麦种子的发芽率、株高、叶片数量等生长指标；8. 在实验过程中，对照组（不添加植物生长素）和实验组（添加不同浓度的植物生长素）进行对比；9. 分析实验结果，得出结论。
五、实验结果1. 发芽率：对照组的发芽率为90%，添加0.1mg/L植物生长素的实验组的发芽率为95%，添加0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L植物生长素的实验组的发芽率分别为92%、93%、88%；2. 株高：对照组的株高为10cm，添加0.1mg/L植物生长素的实验组的株高为12cm，添加0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L植物生长素的实验组的株高分别为11cm、13cm、9cm；3. 叶片数量：对照组的叶片数量为6片，添加0.1mg/L植物生长素的实验组的叶片数量为8片，添加0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L植物生长素的实验组的叶片数量分别为7片、9片、6片。
植物生物学实验课程教案(1)
植物生物学实验课程教案（1）
植物生物学实验课程教案（2）
植物生物学实验课程教案（3）
植物生物学实验课程教案（4）
植物生物学实验课程教案（5）
植物生物学实验课程教案（6）
植物生物学实验课程教案（7）
植物生物学实验课程教案（8）
植物生物学实验课程教案（9）
植物生物学实验课程教案（10）
植物生物学实验课程教案（11）
植物生物学实验课程教案（12）
植物生物学实验课程教案（13）
植物生物学实验课程教案（14）
植物生物学实验课程教案（15）
植物生物学实验课程教案（16）
植物生物学实验课程教案（17）
植物生物学实验课程教案（18）
植物生物学实验课程教案（19）
植物生物学实验课程教案（20）。
植物生物技术实验设计
植物生物技术实验设计植物生物技术实验设计是一个引人注目和不断发展的领域，通过应用生物技术方法，我们可以改良和优化植物的性状，提高作物的抗病能力和产量。
在这篇文章中，我们将探讨一个植物生物技术实验设计的例子，以展示如何应用现代生物技术来改良植物。
实验设计：在这个实验中，我们将使用基因编辑技术来改变植物的性状。
具体而言，我们将通过CRISPR-Cas9系统来靶向编辑植物基因组中的关键基因，以增强植物对干旱的抵抗力。
材料和方法：1. 选择目标植物：在这个实验中，我们选择了大麦（Hordeum vulgare L.）作为研究对象。
大麦是一种重要的粮食作物，在很多地区广泛种植。
2. 选择靶向基因：通过文献调研和生物信息学分析，我们确定了大麦中参与干旱抗性的关键基因。
我们选择了其中一个基因作为我们的靶向基因。
3. 设计寡核苷酸：根据选择的靶向基因序列，我们设计了两个寡核苷酸（gRNA），这些gRNA将和Cas9蛋白结合，并指导Cas9蛋白靶向编辑大麦基因组。
4. 转化大麦胚胎体细胞：我们采用侵染法将CRISPR-Cas9组件导入大麦胚胎体细胞。
通过这种方法，CRISPR-Cas9系统可以靶向编辑大麦细胞的基因组。
5. 筛选转基因植株：将侵染后的大麦胚胎体细胞培养在选择性培养基上，只有经过基因编辑的细胞能够生存和继续生长。
通过筛选，我们可以获得转基因植株。
6. 验证编辑效果：通过PCR、Southern blot等技术，我们可以对转基因植株进行确认，确定它们的基因组中的目标基因是否被成功编辑。
结果和讨论：通过这个实验设计，我们成功编辑了大麦基因组中的目标基因，使其对干旱具有更强的抵抗力。
我们获得了多个编辑目标基因的转基因植株，并通过验证实验证明了编辑的有效性。
这项植物生物技术实验设计为我们提供了一种改良植物性状的新方法。
通过编辑植物基因组，我们可以针对作物的特定性状进行优化，提高其适应环境的能力。
这项实验的成功为植物育种和农业生产提供了新的思路和方法。
植物生物学实验教案
植物生物学实验教案第一章：植物标本的采集与制作1.1 教学目标了解植物标本的重要性学会正确采集植物标本的方法掌握植物标本的制作技巧1.2 教学内容植物标本的概念与作用采集植物标本的工具与方法植物标本的制作过程1.3 实验步骤讲解植物标本的采集与制作方法分组进行植物标本的采集示范植物标本的制作过程学生动手制作植物标本1.4 实验材料与器材植物采集工具（如剪刀、采集箱等）植物标本制作材料（如标本纸、标签等）显微镜等观察器材第二章：植物细胞的观察与分类2.1 教学目标了解植物细胞的结构与功能学会观察植物细胞的方法掌握植物细胞的分类与鉴别2.2 教学内容植物细胞的基本结构与功能植物细胞的观察方法与技巧植物细胞的分类与鉴别2.3 实验步骤讲解植物细胞的基本结构与功能分组进行植物细胞的观察示范植物细胞的分类与鉴别方法学生动手进行植物细胞的观察与分类2.4 实验材料与器材植物叶片、根等样本显微镜等观察器材植物细胞分类与鉴别图谱第三章：植物组织的观察与分类3.1 教学目标了解植物组织的结构与功能学会观察植物组织的方法掌握植物组织的分类与鉴别3.2 教学内容植物组织的基本结构与功能植物组织的观察方法与技巧植物组织的分类与鉴别3.3 实验步骤讲解植物组织的基本结构与功能分组进行植物组织的观察示范植物组织的分类与鉴别方法学生动手进行植物组织的观察与分类3.4 实验材料与器材植物叶片、根等样本显微镜等观察器材植物组织分类与鉴别图谱第四章：植物器官的观察与分类4.1 教学目标了解植物器官的结构与功能学会观察植物器官的方法掌握植物器官的分类与鉴别4.2 教学内容植物器官的基本结构与功能植物器官的观察方法与技巧植物器官的分类与鉴别4.3 实验步骤讲解植物器官的基本结构与功能分组进行植物器官的观察示范植物器官的分类与鉴别方法学生动手进行植物器官的观察与分类4.4 实验材料与器材植物叶片、花朵、果实等样本显微镜等观察器材植物器官分类与鉴别图谱第五章：植物分类学的基本方法与应用5.1 教学目标了解植物分类学的基本方法学会植物分类学的观察与研究方法掌握植物分类学的应用与实践5.2 教学内容植物分类学的基本方法（如形态学、分子生物学等）植物分类学的观察与研究方法（如野外调查、实验室分析等）植物分类学的应用与实践（如植物资源利用、生态保护等）5.3 实验步骤讲解植物分类学的基本方法与应用分组进行植物分类学的观察与研究示范植物分类学的应用与实践方法学生动手进行植物分类学的观察与研究5.4 实验材料与器材植物样本分类学观察与研究器材（如野外调查工具、实验室分析器材等）植物分类学相关书籍与资料第六章：植物生长与发育的观察6.1 教学目标了解植物生长的基本过程学会观察植物生长与发育的方法掌握植物生长与发育的关键因素6.2 教学内容植物生长的基本过程（如种子发芽、幼苗生长等）植物生长与发育的观察方法与技巧植物生长与发育的关键因素（如光照、水分、养分等）6.3 实验步骤讲解植物生长与发育的基本过程分组进行植物生长与发育的观察示范植物生长与发育的关键因素的观察方法学生动手进行植物生长与发育的观察6.4 实验材料与器材植物样本（如种子、幼苗等）观察器材（如放大镜、测量工具等）植物生长与发育相关书籍与资料第七章：植物生态学的观察与研究了解植物生态学的基本概念学会观察与研究植物生态学的方法掌握植物生态学的基本研究方法7.2 教学内容植物生态学的基本概念与原理植物生态学的观察与研究方法植物生态学的基本研究方法（如种群动态、生态系统分析等）7.3 实验步骤讲解植物生态学的基本概念与原理分组进行植物生态学的观察与研究示范植物生态学的基本研究方法学生动手进行植物生态学的观察与研究7.4 实验材料与器材植物样本（如植物群落、生态系统等）观察与研究器材（如野外调查工具、实验室分析器材等）植物生态学相关书籍与资料第八章：植物遗传与进化的观察与研究8.1 教学目标了解植物遗传与进化的基本概念学会观察与研究植物遗传与进化的方法掌握植物遗传与进化的基本研究方法植物遗传与进化的基本概念与原理植物遗传与进化的观察与研究方法植物遗传与进化的基本研究方法（如杂交实验、分子标记等）8.3 实验步骤讲解植物遗传与进化的基本概念与原理分组进行植物遗传与进化的观察与研究示范植物遗传与进化的基本研究方法学生动手进行植物遗传与进化的观察与研究8.4 实验材料与器材植物样本（如植物种子、叶片等）观察与研究器材（如显微镜、实验室分析器材等）植物遗传与进化相关书籍与资料第九章：植物生理学的观察与研究9.1 教学目标了解植物生理学的基本概念学会观察与研究植物生理学的方法掌握植物生理学的基本研究方法9.2 教学内容植物生理学的基本概念与原理植物生理学的观察与研究方法植物生理学的基本研究方法（如光合作用、呼吸作用等）9.3 实验步骤讲解植物生理学的基本概念与原理分组进行植物生理学的观察与研究示范植物生理学的基本研究方法学生动手进行植物生理学的观察与研究9.4 实验材料与器材植物样本（如植物叶片、根等）观察与研究器材（如显微镜、实验室分析器材等）植物生理学相关书籍与资料第十章：植物生物化学与分子生物学的观察与研究10.1 教学目标了解植物生物化学与分子生物学的基本概念学会观察与研究植物生物化学与分子生物学的方法掌握植物生物化学与分子生物学的基本研究方法10.2 教学内容植物生物化学与分子生物学的基本概念与原理植物生物化学与分子生物学的观察与研究方法植物生物化学与分子生物学的基本研究方法（如酶活性分析、基因表达分析等）10.3 实验步骤讲解植物生物化学与分子生物学的基本概念与原理分组进行植物生物化学与分子生物学的观察与研究示范植物生物化学与分子生物学的基本研究方法学生动手进行植物生物化学与分子生物学的观察与研究10.4 实验材料与器材第十一章：植物遗传转录与翻译的观察与研究11.1 教学目标了解植物遗传转录与翻译的基本概念学会观察与研究植物遗传转录与翻译的方法掌握植物遗传转录与翻译的基本研究方法11.2 教学内容植物遗传转录与翻译的基本概念与原理植物遗传转录与翻译的观察与研究方法植物遗传转录与翻译的基本研究方法（如RNA提取、基因表达分析等）11.3 实验步骤讲解植物遗传转录与翻译的基本概念与原理分组进行植物遗传转录与翻译的观察与研究示范植物遗传转录与翻译的基本研究方法学生动手进行植物遗传转录与翻译的观察与研究11.4 实验材料与器材植物样本（如植物叶片、根等）观察与研究器材（如显微镜、实验室分析器材等）植物遗传转录与翻译相关书籍与资料第十二章：植物细胞的信号传导与调控12.1 教学目标了解植物细胞信号传导与调控的基本概念学会观察与研究植物细胞信号传导与调控的方法掌握植物细胞信号传导与调控的基本研究方法12.2 教学内容植物细胞信号传导与调控的基本概念与原理植物细胞信号传导与调控的观察与研究方法植物细胞信号传导与调控的基本研究方法（如信号通路分析、基因表达调控等）12.3 实验步骤讲解植物细胞信号传导与调控的基本概念与原理分组进行植物细胞信号传导与调控的观察与研究示范植物细胞信号传导与调控的基本研究方法学生动手进行植物细胞信号传导与调控的观察与研究12.4 实验材料与器材植物样本（如植物叶片、根等）观察与研究器材（如显微镜、实验室分析器材等）植物细胞信号传导与调控相关书籍与资料第十三章：植物生长发育的分子机制13.1 教学目标了解植物生长发育的分子机制的基本概念学会观察与研究植物生长发育的分子机制的方法掌握植物生长发育的分子机制的基本研究方法13.2 教学内容植物生长发育的分子机制的基本概念与原理植物生长发育的分子机制的观察与研究方法植物生长发育的分子机制的基本研究方法（如基因表达分析、蛋白质相互作用分析等）13.3 实验步骤讲解植物生长发育的分子机制的基本概念与原理分组进行植物生长发育的分子机制的观察与研究示范植物生长发育的分子机制的基本研究方法学生动手进行植物生长发育的分子机制的观察与研究13.4 实验材料与器材植物样本（如植物叶片、幼苗等）观察与研究器材（如显微镜、实验室分析器材等）植物生长发育的分子机制相关书籍与资料第十四章：植物逆境生物学14.1 教学目标了解植物逆境生物学的基本概念学会观察与研究植物逆境生物学的方法掌握植物逆境生物学的基本研究方法14.2 教学内容植物逆境生物学的基本概念与原理植物逆境生物学的观察与研究方法植物逆境生物学的基本研究方法（如植物抗逆性评价、信号通路分析等）14.3 实验步骤讲解植物逆境生物学的基本概念与原理分组进行植物逆境生物学的观察与研究示范植物逆境生物学的基本研究方法学生动手进行植物逆境生物学的观察与研究14.4 实验材料与器材植物样本（如植物叶片、根等）观察与研究器材（如显微镜、实验室分析器材等）植物逆境生物学相关书籍与资料第十五章：植物与环境的相互作用15.1 教学目标了解植物与环境的相互作用的基本概念学会观察与研究植物与环境的相互作用的方法掌握植物与环境的相互作用的基本研究方法15.2 教学内容植物与环境的相互作用的基本概念与原理植物与环境的相互作用的观察与研究方法植物与环境的相互作用的基本研究方法（如植物对环境因素的响应分析、生态系统分析等）15重点和难点解析本教案主要涵盖了植物生物学实验的各个方面，从植物标本的采集与制作，到植物细胞的观察与分类，再到植物生长与发育的观察，以及植物生态学、遗传学、生理学、生物化学与分子生物学等多个领域。
植物生物技术的实习报告
一、实习背景随着科技的发展，植物生物技术作为一门新兴的交叉学科，在我国农业、医药、环保等领域发挥着越来越重要的作用。
为了更好地将所学理论知识与实际操作相结合，提高自身的实践能力，我于2021年7月至9月在中国科学院XX植物研究所进行了为期两个月的植物生物技术实习。
二、实习目的1. 巩固和深化植物生物技术理论知识，将所学知识运用到实际工作中。
2. 掌握植物组织培养、基因工程、分子标记等植物生物技术基本操作。
3. 了解植物生物技术领域的研究动态和发展趋势。
4. 培养严谨的科学态度和团队协作精神。
三、实习内容1. 植物组织培养技术在实习期间，我主要参与了植物组织培养技术的学习和实践。
首先，学习了植物组织培养的基本原理、培养基的配制、外植体选择、愈伤组织诱导、再生体系建立等理论知识。
然后，在导师的指导下，进行了实际操作，包括外植体消毒、接种、培养基更换、诱导分化等。
通过实践，我掌握了植物组织培养的基本技能，并成功诱导出愈伤组织和再生植株。
2. 基因工程在基因工程方面，我学习了基因克隆、重组、转化等基本操作。
实习期间，我参与了植物基因工程实验，包括目的基因的克隆、表达载体构建、转化等。
通过实验，我了解了基因工程在植物育种、抗病性提高等方面的应用。
3. 分子标记技术分子标记技术在植物遗传育种、基因定位等方面具有重要意义。
在实习期间，我学习了分子标记技术的原理、方法及其应用。
通过实验，我掌握了PCR、DNA测序等分子标记技术的基本操作，并成功应用于植物遗传多样性分析。
4. 学术交流与讲座实习期间，我参加了植物生物技术领域的学术讲座和研讨会，了解了国内外植物生物技术的研究动态和发展趋势。
通过与专家学者的交流，拓宽了视野，提高了自己的学术素养。
四、实习收获1. 理论与实践相结合：通过实习，我深刻体会到理论知识与实际操作的重要性，提高了自己的实践能力。
2. 技能提升：掌握了植物组织培养、基因工程、分子标记等植物生物技术基本操作，为今后的研究工作奠定了基础。
植物生物学实验
植物生物学大实验----自己设计实验材料的石蜡制片和显微测量与分析方法一．石蜡制片的操作流程1 取材选取经过自己设计实验的对照和处理的材料的根、茎、叶的相同部位。
2 固定和抽气在测定生理指标的同时，进行固定，固定液为FAA（75℅酒精90ml+冰醋酸5ml+甲醛5ml）。
，重复3次，材料的长和宽最大不超过1cm。
固定液为材料的20倍左右。
将选取的材料分装两试管，加入固定液。
固定时间24小时，其间要放入抽真空机中抽气15-30分钟至材料完全沉浸在固定液下面。
并用铅笔写好标签。
3 脱水、透明及渗蜡将材料从固定液中取出后，其具体流程如下：A：酒精X：二甲苯75%A（2h）→85%A（2h）→95%A（2h）→100%A（2h）→100%A（2h）→3/4A+1/4X（2h）→1/2A+1/2X（2-3h、过夜）→1/4A+3/4X（2h）→X（2h）→1/2X+1/2蜡（过夜）→渗蜡1（2h）→渗蜡2（2h）→渗蜡3（2h）设置浓度梯度是为了防止材料皱缩，但具体浓度梯度和浸泡时间要视材料情况而定，对于幼嫩的材料，梯度要大些，各步浸泡时间可短些，老的硬的梯度则要小些，各步浸泡时间则相应要长些。
第二次100％A脱水很关键，一定要确保水脱尽。
4 包埋将渗蜡后的材料和石蜡一起倒入小纸盒，用加热的镊子迅速把材料按需要的切面和一定的间隔排列整齐并使其竖直，倒入纯蜡进行包埋。
稍微凝固后倒置于清水盆中彻底冷却凝固。
5 修块将包埋好的材料切割成小块，每个小块包含一个材料，并修成梯形，切面在梯形的上部。
注意上部矩形对边平行，梯形底部用烧热的蜡将其固定在木块上。
6 切片将粘有蜡块的小木块至于切片机上，调整切距到适当大小，转动调节器条切片厚度12µm 进行切片。
注意切片时要一手转动切片机，另一手执毛笔将切下来的片子摊开以形成一长条蜡带。
切片过程中，如果蜡带偏向一边，也要及时修正。
7 烫片滴一滴蛋白胶于干净载玻片中央，用干净的手指涂抹均匀后，滴上清水，将取下的蜡带切成小段置于载玻片上（放上两至三段），然后将载玻片放到展片台上(保持40℃)烫片。
植物发育生物学实验指导
实验一低拷贝质粒的大量提取——碱法【实验原理】质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA，是进行DNA重组的常用载体。
作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体之外，质粒DNA上携带了部分的基因信息，经过基因表达后使其宿主细胞表现相应的性状。
在DNA重组中，质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。
从宿主细胞中提取质粒DNA，是DNA重组技术中最基础的实验技能。
分离质粒DNA有三个步骤：培养细菌使质粒扩增，收集和裂解细菌，分离和纯化质粒DNA。
在质粒提取过程中，由于机械力、酸碱度、试剂等的原因，可能使质粒DNA链发生断裂。
所以，多数质粒粗提取物中含有三种构型的质粒：共价闭合环状DNA（cccDNA）：质粒的两条链没有断裂；超螺旋开环DNA（ocDNA）：质粒的一条链断裂；松弛的环状分子线形DNA（lDNA）：质粒的两条链均断裂；线性分子质粒DNA的分子构型。
质粒DNA琼脂塘凝胶电泳模式图可分为：松弛线性的DNA；松弛开环的OC构型；超螺旋的SC构型。
由于琼脂糖中加有嵌入型染料溴化乙锭，因此，在紫外线照射下DNA电泳带成橘黄色。
道中的SC DNA走在最前沿，OC DNA则位于凝胶的最后边；道中的L DNA 是经核酸内切限制酶切割质粒之后产生的，它在凝胶中的位置介于OC DNA 和SC DNA 之间。
碱法提取质粒是Ｒ．Ｔreisman尚未发表的方法，同时也是Brinboim和Doly(1979)及Ish-Horowicz和Burke(1981)所用方法的改进。
该方法对于目前使用的所有大肠菌菌株都卓有成效，并可与随后的纯化步骤，如聚乙二醇沉淀或氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心等，一并联合使用。
【药品试剂】1、溶液I：50 mmol/L葡萄糖、 25 mmol/L Tris.Cl（pH8.0）、10mmol/L EDTA（pH8.0）。
溶液I可成批配制，在10 lbf/in2（6.895x104Pa或者是115 ℃）高压下蒸气灭菌15min，贮存于4 ℃。
植物学实验指导
植物生物学实验指导中国海洋大学水产学院目录绪论 (1)实验一普通光学显微镜的构造和使用方法 (3)实验二生物绘图 (6)实验三植物细胞基本结构的观察 (9)实验四植物细胞的有丝分裂显微观察 (12)实验五植物体各种组织的显微观察 (14)实验六根的形态和结构观察 (17)实验七茎的形态和结构观察 (21)实验八低等植物（藻类、菌类和地衣植物） (25)绪论一、实验课教学的目的及意义本课程以验证课堂理论、掌握研究方法和操作技能为宗旨，培养学生独立开展以植物生物学为基础的科学研究和实际工作能力。
通过实验教学，要求学生掌握植物生物学实验的基本理论、基本知识，以及研究植物的一些基本方法和基本技能，并运用这些方法和技能去研究植物个体发育中植物器官的形态建成与结构；学习植物系统发育过程中植物界各大类群植物的主要的形态特征、代表植物、它们在植物界中的地位和演化规律，认识一些常见的与人类关系密切的植物;理论与实践统一，使学生加深对课堂讲授的内容的认识与理解。
更重要的是培养学生进行科学探索与实验的能力与素质，以适应新经济时代对科技人才的基本要求。
二、实验室规则1. 学生应提前5-10分钟进入实验室,做好实验前的准备工作。
2. 按号使用显微镜和解剖镜，使用前要检查,使用后要擦试整理，并放回原处.如果发现损坏或发生故障,要及时报告指导教师。
3. 爱护仪器、标本及其他公共设施,节约药品和水电。
损坏物品时应主动向指导教师报告并及时登记。
4. 保持实验室安静、整洁。
实验时不得随意走动和谈笑。
室内禁止吸烟，不准随地吐痰和乱扔纸屑、杂物。
每次实验后，各实验小组要清理实验桌面，并轮流打扫实验室。
5. 最后离开实验室的学生要负责检查水、电、门、窗等是否关严。
三、实验课课程的进行方式及对学生的要求1. 实验前必须预习每次实验课内容，写出简单的实验提纲，并把个人准备好的实验必备物品带到实验室。
2. 必须仔细听取教师对实验课的要求、操作中的重点、难点和应注意问题的讲解。
植物生物技术实习报告
一、前言随着生物技术的飞速发展，植物生物技术在农业生产、医药保健、环境保护等领域发挥着越来越重要的作用。
为了更好地将理论知识与实践相结合，提升自身技能，我于2021年7月至8月参加了为期一个月的植物生物技术实习。
此次实习在我国某知名植物研究所进行，实习期间，我参与了植物组织培养、基因工程、分子标记等多个方面的实验操作，对植物生物技术有了更深入的了解。
二、实习目的1. 巩固和深化植物生物技术相关理论知识，提高动手实践能力。
2. 学习掌握植物组织培养、基因工程、分子标记等实验技术。
3. 了解植物生物技术在农业生产、医药保健、环境保护等领域的应用。
4. 培养团队协作精神和严谨的科研态度。
三、实习内容1. 植物组织培养在实习初期，我主要参与了植物组织培养实验。
在指导老师的带领下，我学习了植物组织培养的基本原理和操作技术。
具体内容包括：（1）外植体选择：根据实验目的，选择适宜的外植体，如叶片、茎段、愈伤组织等。
（2）消毒处理：对外植体进行消毒处理，以防止微生物污染。
（3）接种培养：将消毒后的外植体接种到培养基中，进行培养。
（4）观察记录：定期观察培养瓶中的植物生长状况，记录数据。
通过植物组织培养实验，我掌握了植物组织培养的基本操作，并学会了如何根据实验目的调整培养基配方。
2. 基因工程在实习中期，我参与了基因工程实验。
具体内容包括：（1）目的基因的克隆：通过PCR、酶切、连接等操作，将目的基因克隆到载体上。
（2）转化受体细胞：将含有目的基因的载体转化到受体细胞中。
（3）筛选阳性克隆：通过分子生物学方法，筛选出含有目的基因的阳性克隆。
通过基因工程实验，我学习了目的基因的克隆、转化和筛选等操作，为后续研究奠定了基础。
3. 分子标记在实习后期，我参与了分子标记实验。
具体内容包括：（1）DNA提取：提取植物基因组DNA。
（2）PCR扩增：利用PCR技术扩增特定基因片段。
（3）电泳分析：通过电泳分析，检测PCR产物。
园艺植物生物技术实验指导
园艺植物生物技术实验指导单位河南科技学院教研室园艺植物遗传育种教研室时间2 0 0 8 年1 月编写说明课程编码：0 6 0 0 0 1 7课程教学总学时：3 6课程实验总学时：1 0总学分：2适用专业：园艺先修课程：植物学；植物生理学；园艺植物遗传学一、目的与任务实践课堂主要内容，了解生物技术相关实验设施，掌握生物技术基本实验操作，培养学生的动手操作能力、分析和解决问题的能力。
二、实验教学的基本要求通过本课程的学习了解生物技术实验室的设计、常用仪器设备的基本操作；掌握园艺植物组织培养基本流程及技术，初步掌握以基因工程为核心的相关技术操作。
三、实验教学的时数安排总学时1 0 学时，各实验学时数分配见下表：序号实验内容学时实验一培养基母液的配制2实验二培养基的配制与灭菌2实验三无菌操作技术及植物组织培养2实验四园艺植物脱毒技术2实验五园艺植物D N A 提取技术2实验一实验一实验一实验一培养基母液的配制一、实验目的通过配制M S 培养基母液，掌握贮备液的配制和保存方法。
二、实验原理配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存。
使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
以M S 培养基为例，所需配制的母液为：大量元素母液（母液Ⅰ，浓缩2 0倍）、微量元素母液（母液Ⅱ，浓缩2 0 0 倍）、铁盐母液（母液Ⅲ，浓缩2 0 0倍）和有机化合物母液（母液Ⅳ，浓缩2 0 0 倍）等。
三、主要仪器设备和试剂1 . 仪器设备：冰箱，天平，酸度计，烧杯（5 0 m l ，1 0 0 m l ，5 0 0 m l ，1 0 0 0 m l ），量筒( 1 0 0 0 m l ，1 0 0 m l ，2 5 m l ) ，容量瓶( 1 0 0 0 m l ，5 0 0 m l ，1 0 0 m l ) ，磨口试剂瓶( 1 0 0 m l ，5 0 0 m l ，1 0 0 0 m l ) ，药勺、称量纸、滴管、玻璃棒，电炉，微波炉2 . 试剂：N H 4 N O3 , M n S O4 . 4 H 2 O , K N O 3 , Z n S O 4 . 7 H 2 O , C a C l 2 . 2 H 2 O ,N a 2 M o O 4 . 2 H 2 O , M g S O 4 . 7 H 2 O , C u S O 4 . 5 H 2 O , K H 2 P O 4 , C o C l 2 . 6 H 2 O ,H 2 B O 3 ，N a 2 ? E D T A ? 2 H 2 O ，K I , F e S O 4 . 7 H 2 O ，烟酸，甘氨酸, 盐酸硫胺素, 肌醇, 盐酸吡哆醇, 蒸馏水四、实验方法1 . M S 大量元素母液的配制配制时先用量筒量取蒸馏水大约3 5 0 m l ，放入5 0 0 m l 的烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：N H 4 N O 3 , K N O 3 , K H 2 P O 4 , M g S O 4 .7 H 2 O , C a C l 2 . 2 H 2 O ，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入5 0 0 m l 的容量瓶中，用蒸馏水定容至5 0 0 m l ，然后，倒入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4 ℃冰箱中保存备用。
植物生物学实验实验报告(3篇)
第1篇实验名称：植物细胞的有丝分裂观察实验目的：1. 观察植物细胞有丝分裂的过程，识别有丝分裂的不同时期。
2. 初步掌握制作洋葱根尖有丝分裂装片的技能。
3. 初步掌握绘制生物图的方法。
实验原理：在植物体中，有丝分裂常见于根尖、茎尖等分生区细胞。
高等植物细胞有丝分裂的过程，分为分裂间期和分裂期的前期、中期、后期、末期。
通过高倍显微镜观察植物细胞的分裂过程，根据各个时期细胞内染色体（或染色质）的变化情况，可以识别细胞处于有丝分裂的哪个时期。
细胞核内的染色体容易被碱性染料着色，便于观察。
实验材料：洋葱根尖、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、培养皿、铅笔、质量分数为15%的盐酸、体积分数为95%的酒精、质量分数为0.01g/ml的龙胆紫（或紫药水）实验步骤：1. 洋葱根尖的培养：提前3-4天，将洋葱根尖置于适宜的培养液中培养，使其生长良好。
2. 解离：将洋葱根尖置于盛有15%盐酸和95%酒精的混合液中，在室温下解离5分钟。
3. 漂洗：用蒸馏水漂洗根尖，去除解离液。
4. 染色：将根尖置于盛有质量分数为0.01g/ml的龙胆紫溶液的培养皿中，染色5分钟。
5. 制片：将染色后的根尖取出，用镊子夹取根尖，放在载玻片上，滴加适量的蒸馏水，盖上盖玻片。
6. 镜检：用显微镜观察制片，调整焦距，观察有丝分裂的不同时期。
实验结果：通过观察，可以观察到洋葱根尖细胞的有丝分裂过程，包括分裂间期、前期、中期、后期和末期。
在分裂间期，细胞核呈圆形，染色体呈细丝状；在前期，染色体开始缩短变粗，细胞核膜逐渐消失；在中期，染色体排列在细胞中央，呈赤道板状；在后期，染色体分离，向细胞两极移动；在末期，染色体到达细胞两极，细胞质分裂，形成两个子细胞。
结果分析：1. 观察到的有丝分裂过程符合植物细胞有丝分裂的基本规律。
2. 通过实验，掌握了制作洋葱根尖有丝分裂装片的技能。
3. 通过绘制生物图，加深了对有丝分裂过程的理解。
讨论：1. 制作洋葱根尖有丝分裂装片的关键是什么？- 关键在于解离充分，使组织分散，细胞不会重叠；漂洗时间要足够，使细胞染色；染色时，染液的浓度和染色时间要掌握好。
植物生物学实验技术
植物生物学实验技术植物生物学是研究植物生命特性的学科，为了深入了解植物的生长、发育、适应能力等方面的问题，进行实验是必不可少的手段。
植物生物学实验技术是指在科学实验中，通过使用一系列的操作步骤和技术手段，来研究植物生物学相关问题的方法。
一、植物生物学实验技术的分类植物生物学实验技术可以根据研究对象和目的的不同，分为多个不同的分类。
以下是几种常见的植物生物学实验技术分类：1. 植物生长实验技术：通过研究不同条件下的植物生长情况，了解植物对环境的适应性和生长规律。
常见的实验技术包括播种试验、穗试验等。
2. 植物发育实验技术：通过观察和研究植物在不同生育阶段的变化，揭示植物发育规律和机制。
例如，植物生长素对植物发育的影响等。
3. 植物遗传实验技术：通过遗传实验手段，研究植物的遗传特性和变异规律，探讨植物遗传背后的机制。
典型的实验技术包括杂交、基因转化等。
4. 植物生理实验技术：通过测量和观察植物的生理指标，研究植物对环境的响应和适应机制。
例如，光合作用速率、水分利用效率等的测定与计算。
5. 植物生态实验技术：通过构建生态系统模型或控制环境条件，研究植物与环境之间的相互作用和相互依赖关系。
例如，植物与土壤微生物的互作实验。
二、常用的1. 组织培养技术：组织培养技术是一种用于植物细胞、组织和器官的无菌培养的方法。
通过控制培养基的成分和环境因素，可以实现植物细胞的分化、增殖和再生等过程，研究植物的发育和生物合成等方面的问题。
2. PCR技术：PCR（聚合酶链反应）是一种用于扩增特定DNA序列的方法。
在植物生物学中，PCR技术广泛应用于基因检测、基因表达研究、基因工程等方面的实验。
3. 荧光探针技术：荧光探针技术是基于荧光信号的检测和定量分析方法。
通过标记荧光探针，可以在植物体内实现对特定物质或特定细胞的检测，应用于植物根系研究、药物代谢途径分析等领域。
4. 基因组学技术：基因组学技术是研究植物基因组的方法。
作物生物技术育种实验指导
实验一基因组DNA提取一、实验目的和要求学习并掌握植物基因组DNA的提取原理和方法。
二、实验原理冷冻的植物组织，在低温干燥状态下机械磨碎。
通常精提DNA，都要加液氮使材料变脆，易于研磨。
低温降低了DNase的活性，利用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）去污剂溶解细胞膜，使核蛋白等解聚，使DNA游离出来。
CTAB作为一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，与核酸形成复合物，可使核酸沉淀出来。
通过离心将CTAB-核酸复合物语糖类、蛋白质等分离开来。
随后将复合物溶于高盐溶液中，再加乙醇使核酸沉淀，而CTAB溶于乙醇，从而去除CTAB。
三、实验材料与试剂1、实验材料：植物幼嫩叶子2、实验试剂：(1) 100ml CTAB提取缓冲液：1.0M Tris-Cl 8.35ml0.5M EDTA 3.35ml5.0M NaCl 23.40mlCTAB 1.675gO 64.90mlH2注意：使用前加入1mlβ-巯基乙醇（1%~2% w/v）(2) 氯仿-异戊醇（24 ：1）(3) 70% 乙醇、异丙醇四、实验步骤1. 取2g新鲜植物材料，于液氮中研成粉。
2. 将冻粉转入预冷的离心管中，立即加入等体积(w/v) 2×CTAB提取缓冲液，65℃保温10-20分钟，其间不时摇动。
3.加入等体积的氯仿/异戊醇，轻缓颠倒离心管混匀，室温下，12000r/min 离心10-20分钟。
4.将上清液转入另一离心管中,加入等体积的氯仿/异戊醇，颠倒离心管混匀，室温、12000r/min 离心10分钟。
5. 将上层水相转入新的经硅烷化处理的离心管中，加入0.6-1倍体积的异丙醇,混匀，室温下放置30分钟。
6. 3500-4000r/min 离心5-10分钟，去上清液, 70%乙醇漂洗，沉淀吹干。
7.风干后加入20ul的ddH2O溶解DNA，-20℃保存备用。
五、结果与分析对实验过程中出现的异常现象进行分析。
实验二琼脂糖凝胶电泳技术一、实验目的（1）学习琼脂糖凝胶电泳的基本原理；（2）掌握使用水平式电泳仪的方法；（3）学习DNA电泳的方法。
植物生物实验报告模板
植物生物实验报告模板【实验报告】实验名称：植物生物实验实验目的：通过观察和研究植物生物的一些基本特征，提高对植物结构和功能的了解。
实验材料：1. 植物标本2. 显微镜3. 刀片、剪刀等工具4. 实验器材和药品等（根据需求自行准备）实验步骤：1. 选择适当的植物标本进行观察和分析。
2. 用显微镜放大植物标本的细微结构，观察和记录相关特征。
3. 使用刀片等工具进行植物标本的切割，以观察内部结构。
4. 根据需要，进行一些相应的实验操作，如染色、培养等。
5. 对观察到的特征和实验结果进行分析和总结。
实验结果：通过实验观察，我发现了一些植物生物的基本特征和结构，如根、茎、叶、花、果实等。
通过显微镜放大观察，我发现了细胞的基本结构和组织的排列方式。
切割植物标本后，我进一步观察到了根系和维管束等内部结构。
在染色和培养实验中，一些细菌和真菌的存在也进一步展示了植物的生物多样性。
实验讨论：通过本次实验，我对植物生物的结构和功能有了更深入的了解。
我明白了根在植物中的吸收水分和养分的作用，茎的支持和输送功能，叶的光合作用以及花与果实的繁殖功能。
同时，通过观察植物细胞的结构和组织的排列方式，我也了解到植物的组成方式和生长过程。
不过，在实验过程中，我也遇到了一些困难和问题。
比如，对于一些细微的结构和细胞内部的运作机制，我难以确切地观察和理解。
此外，在一些操作时，可能出现了实验材料的浪费和误操作等情况，这些都是需要进一步改进和加强的地方。
实验总结：通过本次植物生物实验，我对植物的结构和功能有了更加深入的了解，并且学习到了使用显微镜观察和切割植物标本的技巧。
实验中，我发现了一些植物生物的基本特征和内部结构，并通过一些实验操作，进一步认识到了植物的多样性。
通过本次实验，我不仅提高了对植物生物的认识，同时也锻炼了实验操作和科学思维的能力。
在今后的学习和研究中，我将更加深入地探索植物的奥秘，并努力将理论和实践相结合，为促进植物学的发展做出自己的贡献。
生物实验报告关于植物
生物实验报告关于植物实验目的本实验旨在观察和探究光照和水分对植物生长的影响。
通过设置不同的实验组和对照组，比较植物在不同光照和水分条件下的生长情况，以探究最适宜的生长环境要求。
材料和方法材料：- 绿豆种子- 培养皿- 蒸馏水- 白纸- 文件袋- 遮光布- 光照灯方法：1. 先将一张纸用剪刀剪成与培养皿大小相符的形状，并将其放入培养皿底部，以避免水分直接接触。
2. 在3个培养皿中分别加入等量的蒸馏水，作为对照组。
3. 在另外3个培养皿中，分别加入等量的蒸馏水，再放入白纸上分别放置几颗绿豆种子，作为水分和光照组。
4. 将其中2个培养皿用黑色文件袋完全遮盖，以排除光照的影响，作为水分组。
5. 将所有培养皿放在同一温度下，并设置定时器，每天照射12小时光照，然后关闭光源。
6. 每天测量并记录每个培养皿中的绿豆种子的生长情况，包括根长、茎长、叶片数量等。
7. 持续记录10天后，结束实验，并进行数据分析和结果讨论。
结果和讨论通过上述实验方法和步骤，我们观察到了以下结果：1. 对照组中的绿豆种子在正常水分和正常光照的条件下，生长迅速，根长和茎长都有明显的增加，叶片数量也逐渐增多。
2. 水分和光照组中的绿豆种子在正常水分和光照的条件下，根长和茎长较对照组稍微减少，但仍保持正常增长，叶片数量也有逐渐增多的趋势。
3. 水分组中的绿豆种子在黑暗条件下生长缓慢，根长和茎长都明显减少，叶片数量也难以增加。
根据实验结果可以看出，光照和水分都对植物生长有一定的影响。
在适宜的光照和水分条件下，植物生长迅速，根长、茎长和叶片数量都有明显增加。
光照是植物进行光合作用的重要因素，能够提供植物所需的光能，促进光合作用的进行，使植物能够正常生长。
水分则是植物细胞的重要组成部分，通过水分的吸收和运输，植物细胞能够正常代谢和生长。
在实验过程中，黑暗条件下的水分组明显生长受限，说明植物对光照的需求更为重要。
通过本实验，我们还验证了光照和水分对植物生长的互补作用。
植物的生物技术应用实验
汇报人：XX
2024-01-12
• 引言 • 植物生物技术应用概述 • 实验材料与方法 • 实验结果与数据分析 • 植物生物技术应用前景展望 • 实验总结与反思
01
引言
实验目的和意义
探究植物生物技术的潜力
通过本实验，可以深入了解植物生物技术在改良作物、提高产量 和品质等方面的潜力。
பைடு நூலகம்
杂交育种
利用不同品种间的杂交优势，选育具有优良性状的新品种。
诱变育种
通过物理或化学方法诱发植物基因突变，筛选具有有益突变的新品 种。
细胞工程
利用植物细胞培养技术，实现植物快速繁殖、种质保存和性状改良 。
生产药用植物和功能性食品
1 2
植物次生代谢产物
通过调控植物次生代谢途径，提高药用植物中有 效成分的含量。
实验步骤
• 愈伤组织诱导
将筛选出的抗性愈伤组织转移到含有适宜激素的培养基上，诱导其 分化成苗。
• 植株再生
将分化出的苗转移到生根培养基上，诱导其生根并获得完整植株。
• 转基因植株鉴定
对获得的转基因植株进行PCR检测、Southern杂交等分子生物学 鉴定，确认目的基因是否整合到植物基因组中并稳定遗传。
植物细胞发酵
01
利用植物细胞作为发酵原料，通过微生物发酵生产有用物质，
如酶、抗生素、激素等。
植物组织发酵
02
将植物组织破碎后，利用微生物进行发酵，生产食品添加剂、
香料、色素等。
固定化细胞发酵
03
将植物细胞固定在载体上，构建固定化细胞反应器进行连续发
酵，提高生产效率。
03
实验材料与方法
实验材料
植物材料
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生物工程综合实验—植物生物技术模块生物工程教研组编2017年春学期目录实验一植物组培实验室设计和实验设备、实验用品认知 (3)实验二MS培养基母液的配制 (6)实验三MS培养基配制与灭菌 (9)实验四无菌接种操作 (12)实验五外植体分化生长的诱导培养 (12)实验六外植体脱分化生长的诱导培养 (17)实验七组培苗的炼苗 (20)实验一植物组培实验室设计和实验设备、实验用品认知一、目的与要求1、结合对植物细胞工程安徽省工程技术研究中心植物组织培养生产车间和研究实验室的现场认知，了解掌握植物组织培养实验室的组成和所需的基本仪器设备，学会植物组织培养实验室的设计；2、为后续植物组培实验课程学习与实训准备所需的相关用品。
二、教学场所1、植物细胞工程技术研究中心；2、生物工程综合实验分室（A514）。
三、内容与方法（一）关于植物组培实验室的认知与设计1、组培实验室设计原则要求环境干燥清洁；符合无菌操作规程要求；满足生产技术流程需要。
2、组培实验室的一般组成与设备包括化学实验室、洗涤准备室、培养基制备室、无菌操作室、培养室、细胞学观察研究室，等。
（1）化学实验室各种相关药品的贮存、溶液配制等。
主要设备：药品柜，防尘橱，冰箱，天平，蒸馏水发生器，加热器（电磁炉等），玻璃器皿，等。
（2）洗涤准备室用于完成相关器具的洗涤、干燥、堆放存储等。
主要设备：洗涤池，洗瓶机，操作台，烘箱，储物架（柜）等。
（3）培养基制备室用于进行培养基的生产。
主要设备：冰箱，天平，蒸馏水发生器，酸度计，加热器（电磁炉等），玻璃器皿，分装机，灭菌设备，操作台，等。
（4）无菌操作室主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的继代等。
无菌室的房间不宜太大，数量根据需要设置。
要求干爽清洁，相对密闭，墙地光滑防潮，配置平移门。
每一无菌室设内外二间，外间为缓冲室，内间较大，为接种室。
主要设备：紫外灯，超净工作台，臭氧发生器，酒精灯，接种器械（镊子、剪刀、解剖刀、接种针），手推车，等。
（5）培养室是将接种的材料进行培养生长的场所，大小依规模而定。
培养室的设计以充分利用空间和节省能源为原则。
主要设备：空调机，加热器，增湿器，培养架，光照设备，培养箱，转床，人字梯，等。
（6）细胞学观察室用于进行培养物的取样观察和分析。
主要设备：显微镜，细胞染色、计数、制片设备，天平，离心机，等。
（二）组培实验用品的准备1、玻璃器皿及规格（1）培养瓶：100~500 mL的玻璃或塑料培养瓶等；（2）培养皿：9～15 cm；（3）烧杯：100～5000 mL；（4）量筒：10～1000 mL；（5）移液管：1～10 mL；（6）试剂瓶：100～1000 mL；（7）容量瓶：100～1000 mL。
2、接种器械酒精灯，不锈钢镊子、剪刀、解剖刀等。
3、其它用品培养瓶封口膜（盖），棉线，记号笔，打包纸（牛皮纸、报纸），转运筐，等。
四、预习思考与作业1、试分析植物组培苗工厂化生产的车间设计与设备选型。
2、分组准备（领取、洗涤、保管）植物组培实验主要用品。
实验二MS培养基母液的配制一、目的与要求1、了解植物组织培养培养基的组成，常用配方；2、掌握培养基配制的步骤，母液的概念与配制方法。
二、教学场所生物工程综合实验分室（A514）。
三、内容与方法（一）基本原理植物培养基配方中的成分多样，为减少每次培养基配制的工作量和误差，有必要将配方中的成分分为几类，分别配制成若干浓缩倍数的母液备用。
（二）实验内容完成MS培养基各种母液的配制。
四、材料与用品（一）主要化学试剂和药品详见表1。
（二）仪器用具天平、烧杯、试剂瓶、量筒、容量瓶、蒸馏水器、加热器、电冰箱，等。
五、实验操作（一）MS培养基的基础配方与母液配制1、MS培养基的配方和母液配制用量详见表1。
2、配制1 L培养基所取母液的量配制1 L培养基，所取上述各种母液的数量为：大量元素和钙盐母液各50 mL，铁盐、微量元素和有机物的母液各10 mL。
铁盐配制：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将Fe盐溶液倒入EDTA 溶液中混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。
CuSO4·5H2O 和CoCl2·6H2O 因量较小，应先配成更高浓度250mg/L 的母液(10000×), 再根据母液体积取用。
（二）植物激素的母液配制6-BA、NAA、2,4-D等常用植物激素，可配制成0.1 mg/mL的母液，单独配制和取用。
配制时，6-BA、NAA、2,4-D等，可先用少量1 M NaOH再加入热水定容。
表1 MS培养基的母液配制方法参考表注意事项：（1）钙盐、铁盐单独配制。
铁盐需要用棕色试剂瓶盛装。
（2）烟酸在冷水中溶解度差，称量后可先单独用适量热水溶解后，再加到相应的母液中一起定容。
附：MS培养基是目前使用最普遍的培养基。
其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。
由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。
MS 固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。
MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。
因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。
和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。
六、预习思考与作业1、MS培养基配方中，CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O的用量小，配制母液时直接称量相对较困难，如何操作可减少此困难并降低误差？2、配制浓缩倍数较高的大量元素母液时，为何往往会发生沉淀，如何避免？3、表1中的试剂，有的含有结晶水，假如提供的试剂的结晶水的个数与配方中的不一样，应如何处理？实验三MS培养基配制与灭菌一、目的与要求1、学习掌握植物组培培养基（含分化诱导培养基）的配制方法与流程；2、了解、掌握培养基高温高压灭菌的方法与流程；二、实验内容1、设计和配制用于诱导和增殖的培养基；2、外植体消毒所需用品的准备。
三、教学场所生物工程综合实验分室。
四、材料与用品（一）主要试剂和材料已配制的MS各种母液，蔗糖，琼脂粉，HCl和NaOH自选。
（二）仪器用具天平、烧杯、玻棒、量筒、移液管、培养瓶、电磁炉、平底煮锅、酸度计、培养皿，等。
五、实验操作（一）培养基的配制设计并配制用于诱导和增殖生长的培养基。
1、培养基的基础配方MS + 蔗糖30 g/L + 琼脂4.5 g/L （以下简写为MS）2、诱导培养基中的激素组合分化生长培养基1)MS + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L2)MS + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L3)MS + 6-BA 0.1 mg/L + NAA 2.0mg/L4)MS + 6-BA 0.2 mg/L + NAA 2.0 mg/L脱分化培养基1)MS + 6-BA 0.5 mg/L + NAA 0.5 mg/L2)MS + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 1.0 mg/L3)MS + 2,4-D 1.0 mg/L + 6-BA 1.0 mg/L4)MS + 2,4-D 0.5 mg/L + 6-BA 0.5 mg/L3、培养基的制备（1）以实验小组为操作单元，每小组20瓶（每瓶分装量约50 mL），计算所需培养基的总体积；然后根据培养基的总体积，计算和称取琼脂粉、蔗糖，量取各种母液存放于烧杯中。
（2）量取约为培养基总体积2/3比例的纯净水，放入煮锅，置于电磁炉上，加入琼脂粉，加热并不断搅拌，直至琼脂粉完全融化、澄清透明。
（3）加入蔗糖并搅拌至融化；倒入已量取好的母液，搅拌混匀；倒入大容器，补加纯水定容至预定的体积数。
（4）取样，用酸度计测pH值；用1 M的HCl或NaOH溶液调节pH值至6.0左右。
（5）各实验小组分别按照选定的一个激素组合，计算并用移液管吸取加入相应的激素母液，混匀。
（6）分装到培养瓶，封好瓶口，作好分组标记。
（7）高压湿热灭菌；冷凝备用。
（二）外植体消毒所需用品的准备1、外植体消毒所需的用品无菌水，灭菌后的500 mL烧杯、15 cm培养皿以及吸水滤纸，等。
2、消毒用品的准备用750 mL兰花培养瓶盛装自来水或纯水（装水体积不得超过培养瓶容积的2/3），封口；玻璃器皿（500 mL烧杯，15 cm培养皿等）、吸水滤纸等，分别用牛皮纸或报纸打包捆扎好。
然后，进行高压灭菌。
灭菌完毕后，取出，烘干表面水分，转移到无菌室储物架上存放备用。
注意事项：（1）培养基分装时，尽量不要沾到瓶口，若有沾染要擦除后再封口；灭菌和转运时，培养基不能过于倾斜，以免瓶口部位沾染培养基，容易造成后期染菌。
（2）使用高压灭菌锅时，一定要先检查锅底水位。
灭菌完毕开盖取物时，要避免被烫伤。
六、预习思考与作业1、了解植物组培常用的植物激素种类，各类激素对植物离体培养物的生理作用和效应。
2、实验室高压灭菌的基本操作步骤如何？哪些因素可能会影响高压灭菌的实际效果？实验四无菌接种操作过程一、目的与要求1、、以草本或藤本植物为材料，学习外植体消毒和无菌接种操作方法；二、实验原理植物组织培养技术是植物生物技术的基础。
植物组织培养的基本原理是植物细胞的全能性（totipotency）。
无菌操作是植物组培的基本要求。
三、教学场所植物细胞工程技术研究中心组培室。
四、材料与用品（一）实验材料草本或藤本植物的茎尖，芽尖或茎段。
（二）培养基已分组配制好的培养基。
（三）主要试剂70%～75%乙醇，0.1%升汞（HgCl2），等。
（四）用品用具超净工作台，酒精灯，酒精棉球，无菌水，已灭菌的500 mL烧杯、15 cm培养皿，接种用工具（医用剪刀、镊子、手术刀具），废液杯，工作帽，口罩，工作服，记号笔，等。
五、实验操作（一）外植体的预处理先将外植体在加入少量洗洁精的自来水中清洗表面，沥水，然后放入烧杯，带进接种室。
（二）无菌室消毒接种操作前半小时，先将培养基、无菌水、烧杯、培养皿、外植体材料等有序放置在超净工作台上，打开紫外灯（不开照明灯）进行空间消毒；20 min后，关闭紫外灯（仍不开照明灯），开启超净工作台；至超净工作台运行10 min后，进入无菌室操作。
（三）外植体的消毒操作者坐在超净工作台前，用酒精棉球擦拭双手和手臂，蘸酒精灼烧托盘、剪刀、镊子等接种工具。
先将外植体材料转入一只无菌烧杯，用75%乙醇浸润8 s左右（时间不宜太长），倒出乙醇，立即加入无菌水洗涤2遍，沥水；将材料转移到另一无菌烧杯中，再用0.1%升汞溶液浸泡消毒10 min，用无菌水清洗4次，沥水；然后转移到无菌的大培养皿中，待剪切接种。