红细胞裂解
红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×)
红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer ,10×)简介： 红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)是一种从人、鼠或其他哺乳动物等体内的组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，其主要有效成分为NH 4Cl 。
RBC Lysis Buffer(10×)配方经过优化不同于ACK Lysis Buffer ，在裂解无核红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(Lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。
使用1×RBC Lysis Buffer 处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的细胞培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测，尤其适用于流式细胞检测或需要高浓度裂解液的情况。
组成：操作步骤(仅供参考)：注意：绝大多数情况下，应使用无菌去离子水稀释RBC Lysis Buffer(10×)至1×使用，流式细胞术除外。
(一)组织细胞样本的常规操作1、制备细胞悬液，离心弃上清。
2、裂解: 加入1×RBC Lysis Buffer ，轻柔吹打混匀，裂解。
本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。
3、离心: 4℃离心，弃红色上清。
本步骤亦可在室温下操作。
4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3各一次。
5、洗涤：根据实验要求加入适量PBS 、HBSS 、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬沉淀。
4℃，离心，弃上清，该离心步骤亦可在室温下操作。
6、如有必要，重复上述步骤5一次，共洗涤1～2次。
7、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。
(二)组织细胞样本的快速操作(无需洗涤)1、制备细胞悬液：新鲜组织经胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，制备细胞悬液，离心弃上清。
2、裂解：加入1×RBC Lysis Buffer ，轻柔吹打混匀，裂解。
本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。
红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×)
红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer ,10×)简介： 红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)是一种从人、鼠或其他哺乳动物等体内的组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，其主要有效成分为NH 4Cl 。
RBC Lysis Buffer(10×)配方经过优化不同于ACK Lysis Buffer ，在裂解无核红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(Lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。
使用1×RBC Lysis Buffer 处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的细胞培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测，尤其适用于流式细胞检测或需要高浓度裂解液的情况。
组成：操作步骤(仅供参考)：注意：绝大多数情况下，应使用无菌去离子水稀释RBC Lysis Buffer(10×)至1×使用，流式细胞术除外。
(一)组织细胞样本的常规操作1、制备细胞悬液，离心弃上清。
2、裂解: 加入1×RBC Lysis Buffer ，轻柔吹打混匀，裂解。
本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。
3、离心: 4℃离心，弃红色上清。
本步骤亦可在室温下操作。
4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3各一次。
5、洗涤：根据实验要求加入适量PBS 、HBSS 、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬沉淀。
4℃，离心，弃上清，该离心步骤亦可在室温下操作。
6、如有必要，重复上述步骤5一次，共洗涤1～2次。
7、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。
(二)组织细胞样本的快速操作(无需洗涤)1、制备细胞悬液：新鲜组织经胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，制备细胞悬液，离心弃上清。
2、裂解：加入1×RBC Lysis Buffer ，轻柔吹打混匀，裂解。
本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。
裂解液配制方法
裂解液配制方法 The manuscript was revised on the evening of 20211、红细胞裂解液（去除红细胞）配制试剂所需材料：1. Ammonium Chloride x10 Lysing Concentrate Solutiona) NH4Cl (1.5 M) 80 gb) KHCO3 (100 nM) 10 gc) Na4EDTA (10 nM) 3.7 gd) Distilled H2O 1000 mL2. 1N HCl or 1N NaOH（调节pH值用）配制步骤：1. 将以上a、b、c试剂溶于900ml 去离子水中；2.调节溶液pH值到，加去离子水定容到1000ml；3.在制备工作液时，将此储存液稀释10倍后使用。
保存：储存液储存于2-8°C不能超过半年（六个月）；2.在使用前，工作液每天都应该新鲜配制放置于室温，当日用不完的弃掉。
2、ripa裂解液NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟） L(100μg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 μmol/Lμg/ml)Leupeptin（亮抑制肽） mlAprotinin（抑蛋白酶肽）μmol/L(1μg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于LHEPES；Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）3、细胞裂解液（Tris－HCL）1．1M Tris 溶液的配置取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解。
2．1M Tris－HCL Ph=溶液的配置取 1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=（需浓盐酸约），加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用。
Tris-氯化铵红细胞裂解液说明书
北京索莱宝科技有限公司Tris-氯化铵红细胞裂解液说明书货号：R1012规格：500mL保存：4℃保存，12个月有效。
产品说明：在生物科研领域，经常需要去除红细胞，去除红细胞的方法有多种，如ACK Lysis Buffer、Tris-氯化铵红细胞裂解液、Gey's Lysis Buffer。
Tris-氯化铵红细胞裂解液(Tris-NH4Cl Red Blood Cell Lysis Buffer)，也称为Tris-NH4Cl Lysis Buffer，是一种从人、鼠或其他哺乳动物等体内的组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，其主要有效成分为NH4Cl。
Tris-NH4Cl Lysis Buffer经过优化配方，在裂解无核红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞或其它有细胞核的细胞。
本裂解液经过滤除菌，经过Tris-NH4Cl Lysis Buffer处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的细胞培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。
自备材料：胰蛋白酶、离心机、PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液、胎牛血清注意事项：1、制备细胞悬液时应根据实验需要，不一定要制备成单细胞悬液。
2、后续试验如果是用于细胞培养，操作过程中应注意无菌操作，尽量在超净工作台内操作。
3、离心步骤尽量在4℃离心机上操作。
4、常规步骤与快速步骤的区别在于：常规步骤多了一步洗涤过程的离心，可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好，不需要大体积的离心管；快速步骤少了一次离心过程，洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离心管。
5、离心洗涤后，通常极微量的红细胞不会影响后续的检测。
6、如果经过ACK Lysis Buffer处理后的样品后续用于总RNA的提取，在处理细胞时不必使用DEPC处理的溶液，即无需在该操作中特意去除RNase。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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C3702 红细胞裂解液(碧云天)
红细胞裂解液产品简介：碧云天生产的红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)，也称ACK Lysis Buffer，是一种用于从人或鼠等的血液或组织样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。
本裂解液经过优化配方，在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。
本裂解液的主要有效成分为氯化铵。
本裂解液不适用于有细胞核红细胞的裂解，例如鸟或禽类的红细胞。
本裂解液经过无菌处理，处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。
保存条件：4℃保存，一年有效。
室温保存， 3个月有效。
注意事项：本裂解液为无菌产品，请注意保持无菌，使用本产品时宜在超净工作台内进行。
如果经过红细胞裂解液处理后的样品后续用于总RNA的提取，在处理细胞时不必使用经过DEPC处理过的溶液。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：对于组织细胞样品：1.新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2.加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。
例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入3-5ml的红细胞裂解液。
本步骤在室温或4度操作均可。
3.400-500g离心5分钟，弃红色上清。
4℃离心效果更佳。
4.如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。
通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5.洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。
可再重复1次，共洗涤1-2次。
洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。
4℃离心效果更佳。
6.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤：1.新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
红细胞裂解液工作原理
红细胞裂解液工作原理
红细胞裂解液是一种用于分离红细胞，进而提取其他血细胞或血液成分的试剂。
其主要通过破坏红细胞、溶解红细胞、去除杂质以及提取所需物质等步骤来实现其工作原理。
1. 破坏红细胞
红细胞裂解液的第一步是破坏红细胞。
这一步通常通过使用渗透压改变或化学试剂的方法来实现。
渗透压改变通常通过使红细胞所处的环境高盐或低盐，使得红细胞膨胀或收缩，最终破裂。
而化学试剂通常选择能够破坏细胞膜的物质，直接导致红细胞破裂。
2. 溶解红细胞
在红细胞被破坏后，下一步是溶解红细胞。
这一步通常是通过一些能够与血红蛋白结合的物质，如硫氰酸盐或戊二醛等来实现。
这些物质与血红蛋白结合后，能够将血红蛋白从红细胞的细胞质中提取出来，从而实现红细胞的溶解。
3. 去除杂质
在溶解红细胞后，得到的溶液中除了血红蛋白外，还可能含有其他杂质，如白细胞、血小板等细胞的残留物以及血清等。
这些杂质需要通过离心或过滤等方法去除，以确保后续提取的物质纯净。
4. 提取所需物质
最后一步是提取所需物质。
根据实验或生产需求，可以从溶解后的溶液中提取出不同的物质。
例如，如果需要提取DNA，可以通过加入适当的盐溶液沉淀出DNA；如果需要提取RNA，可以通过醇沉淀等方法实现；如果需要提取膜蛋白，可以通过相应的亲和层析等方法进行。
总之，红细胞裂解液的工作原理主要涉及破坏红细胞、溶解红细胞、去除杂质以及提取所需物质等步骤。
通过这些步骤，可以有效地从血液中分离出所需的物质，为生物医学研究、血液分析等领域提供有力的支持。
Tris-氯化铵红细胞裂解液
Tris-氯化铵红细胞裂解液产品简介：在生物科研领域，经常需要去除红细胞。
去除红细胞的方法有ACK Lysis Buffer、Tris-氯化铵细胞裂解液、Gey，s Lysis Buffer。
Tris-氯化铵细胞裂解液(Tris-NH4CI Red Blood Cell Lysis Buffer),也称为Tris-NH4CI Lysis Buffer，是一种从人、鼠或其他哺乳动物等体内的组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，其主要有效成份为NH4CI。
Jimei Tris-NH4CI Lysis Buffer经过优化配方，在裂解无核红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞（Lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。
本裂解液经高压灭菌及过滤除菌，经过Tris-NH4CI Lysis Buffer处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的细胞培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。
自备材料：1、胰蛋白酶2、胎牛血清3、低温离心机4、Hanks平衡盐溶液（HBSS）操作步骤（仅供参考）：（一）组织细胞样本的常规操作1、制备细胞悬液：新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，通过适当方法制备成细胞悬液，离心弃上清。
2、裂解：加入3~5倍细胞沉淀体积的Tris-NH4CI Lysis Buffer，轻柔吹打混匀，裂解1~2min。
本操作在4。
C条件下操作更佳，亦可在室温下操作。
3、离心：4。
C，400~500g离心5min，弃红色上清。
本步骤亦可在室温下操作。
4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3各一次。
5、洗涤：根椐实验要求加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬沉淀。
4。
C，400~500g离心2~3 min，弃上清，该离心步骤亦可在室温下操作。
所加入PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液的量一般应大于细胞沉淀体积的5倍以上。
6、如有必要，重复上述步骤5一次，共洗涤1~2次。
联科生物科技有限公司流式细胞仪红细胞裂解液说明书
Toll Free: 400 6721 600 (China Only) Website: Lysing solution for FACS (10×)I.产品信息目录号: LSB01, LSB02, LSB03 规格: 100T,250T, 500T保存: 室温效期: 一年II.产品简介本产品可在哺乳动物外周血细胞经荧光素标记的抗体染色后，将红细胞裂解，随后进行流式分析。
当抗体加入到全血中，与白细胞特异性的表面抗原结合。
染色的样品随后用流式红细胞裂解液处理，在温和的低渗条件下裂解红细胞，从而保留住白细胞。
III.使用方法1.用蒸馏水将10×红细胞裂解液稀释为1×，稀释后的工作液可在室温保存一个月。
2.用合适的抗凝管收集全血。
3.取100 μl混匀的抗凝血到流式管。
4.按照抗体说明书加入合适的剂量，混匀后孵育适当时间。
5.加入2 ml 1×红细胞裂解液，涡旋振荡混匀。
6.室温避光孵育10分钟。
7.300 - 400 g离心5分钟，弃上清。
8.加入2 ml PBS，300 - 400 × g离心5分钟。
9.弃上清，加入0.5 ml PBS重悬细胞沉淀。
10.在流式细胞仪上进行分析。
如不能马上检测，请将样品避光保存于2 - 8℃。
IV. 结果示例图. FSC/SSC散点图。
全血细胞经1×红细胞裂解液裂解后，在Becton Dickinson FACSCalibur TM流式细胞仪。
通过FSC和SSC可以清晰地区分出淋巴细胞、单核细胞和粒细胞，几乎很少细胞碎片产生。
Toll Free: 400 6721 600 (China Only) Website: V. 注意事项1.本产品经优化，专门针对临床实验室所用的流式细胞仪，包括Becton Dickinson FACSCalibur TM和CoulterEPICS® XL®。
红细胞裂解液使用说明书
红细胞裂解液使用说明书产品货号：SL1070储存条件：2-8度保存，有效期1年。
产品内容：产品内容SL1070-100ml SL1070-500ml 红细胞裂解液100ml500ml说明书1份产品简介：红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)，也称ACK Lysis Buffer，是一种用于从人或鼠等的血液或组织样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。
本产品经过优化配方，在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞（lymphocyte）或其它有细胞核的细胞。
不适用于鸟或禽类等有细胞核红细胞的裂解。
本产品主要成分为氯化铵，经过无菌处理。
经过处理的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合，核酸或蛋白的提取，及各种常规的分析和检测。
使用说明：组织细胞样品常规操作步骤：.1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2、加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。
室温或4度操作均可。
3、400-500g离心5分钟，弃红色上清。
4℃离心效果更佳。
4、如果红细胞裂解不完全，可以重复步骤2和步骤3。
一般极微量的红细胞不影响后续检测。
5、加入5-8倍细胞体积的PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。
4℃离心效果更佳。
洗涤1-2次。
6、根据实验需要，选用适当溶液重悬细胞沉淀，随后进行计数等后续实验。
组织细胞样品快速操作步骤：1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2、加入5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。
室温或4度操作均可。
3、加入15-20倍红细胞裂解液体积的PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。
4、400-500g离心5分钟，弃红色上清。
4℃离心效果更佳。
5、如果红细胞裂解不完全，可以重复步骤2和步骤3。
红细胞裂解液原理
红细胞裂解液原理
红细胞裂解液是一种用于分解红细胞的溶液，其主要成分是一种化学物质，可以溶解红细胞膜，使红细胞内部的细胞器和溶液成分释放出来。
红细胞裂解液的原理是通过改变细胞外环境的渗透压和离子浓度来破坏红细胞的结构。
通常，红细胞在等渗溶液中可以维持其正常的形态和功能。
然而，当红细胞置于高渗透溶液中时，溶液中的溶质引起红细胞内部的水分向外流动，导致细胞内部的渗透压增高。
这种渗透压的不平衡最终会导致红细胞膜的破裂，释放出红细胞内部的细胞器和溶质。
红细胞裂解液中的化学物质通常包括一种或多种溶解酶，如血红蛋白酶。
这些酶能够与红细胞膜上的特定蛋白质结合，从而溶解红细胞膜，使细胞内部的内容物得以释放。
同时，一些红细胞裂解液中还含有适量的盐类和缓冲剂，以维持溶液的酸碱度和离子浓度，从而提供适宜的环境来完全溶解红细胞。
红细胞裂解液的使用在许多实验室和临床应用中被广泛采用。
例如，它可以用于获取血液样本中的血红蛋白、细胞内细胞器和溶质，进而进行血型鉴定、研究红细胞组分、分析血红蛋白的结构和功能等。
此外，在临床诊断过程中，红细胞裂解液也可用于处理样本，清除红细胞残留物，减少样本含红细胞造成的干扰。
总的来说，红细胞裂解液通过改变细胞外环境的渗透压和离子浓度，以及溶解酶的作用，可以有效地破坏红细胞膜，使红细
胞内部的细胞器和溶质得以释放。
这为血液分析和临床诊断提供了一种重要的实验工具和样本处理方法。
C3702 红细胞裂解液
红细胞裂解液
产品名称 红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)，也称ACK Lysis Buffer，是一种用于从人或鼠等的血液或组织细 胞样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。
¾ 本裂解液经过优化配方，在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。 ¾ 本裂解液的主要有效成分为氯化铵。 ¾ 本裂解液不适用于有细胞核红细胞的裂解，例如鸟或禽类的红细胞。 ¾ 本裂解液经过无菌处理，处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各
使用说明：
对于组织细胞样品： 1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。 2. 加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入3-5ml的红细胞裂
解液。本步骤在室温或4度操作均可。 3. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。 4. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。 5. 洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。可再重复1
次，共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更佳。 6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤： 1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。 2. 对于0.2ml细胞沉淀加入1ml红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。本步骤在室温或4度操作均可。 3. 加入15-20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。 4. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。 5. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。 6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
红细胞裂解液的配制
红细胞裂解液的配制我在一个公司的网站上看到的红细胞裂解液的说明书上说操作要点是：1.在37度预热；2.充分混匀细胞我就是这样做的，效果还可以。
不过我只做流式细胞仪的检测，活性没测。
我的裂解液是0.16M NH4Cl，0.13mM EDTA，12mM NaHCO3我用的方法：全血：裂解液=1：3，如2ml的全血加上6ml的红细胞裂解液，充分混匀后，室温静置5mim，1000rpm离心6~10min。
红细胞裂解得非常充分。
0.15 M NH4CL, 0.01 M NaHCO3 and 1 mM EDTA (Sigma)Ammonium chloride (NH4Cl) 8.29 g 0.155 MPotassium bicarbonate (KHCO3) 1 g 10mMEDTA 0.37 g 1mMH2O 1l.Filter with 0.45µm filteraliquot in 100 ml aliquotsfilter the solution to be used with 0.2µm filter.我们用的是Tris-NH4Cl,具体配方如下:NH4Cl:4.15克加双蒸水500ml,取450ml;Tris:1.0297克加双蒸水50ml,再加上上面的450ml,共计500ml,高压灭菌,用时加10-20ml,静置5min,效果蛮好.9月29日我用的配方氯化铵3.735g，tris 1.3g，加在500ml水中，ph约7.2。
将全血约5ml加入配好的加入30ml裂解液的50ml试管中5分钟或15分钟，发现5分钟组细胞要多些，15分钟组细胞要少些，而且红细胞仍然有。
红细胞裂解液配方
红细胞裂解液配方
1.裂解液：的确是ACK裂解液作用更柔和些
配方：
NH4CL 8.29g
KHCO3 1.00g
Na2EDTA 37.2mg
溶于1000mL蒸馏水，pH 7.2-7.4，效果一直很好。
注意：
（1）裂解液如果放在冰箱里，一定要预热，37度即可。
裂解期间试管也可水浴，但如果是夏天室温比较高则不必；
（2）裂解5min后立刻离心（从所有管都混匀后计时间）；
（3）PBS离心洗涤2次；
（4）裂解液pH值很重要，最好一次不要配多，时间长效果不好，我一般一次配100mL，避光保存。
2.离心速度：800-1000rpm，5min
3.研磨轻柔很重要
4.培养淋巴细胞的最佳培养液是RPMI 1640，因为是原代细胞，要用10%胎牛血清。
还有非常重要的一点，要想让细胞增殖得好，必须加二巯基乙醇（beta-2ME）
5.细胞密度1－2X10^6/mL。
红细胞裂解液 原理
红细胞裂解液原理
红细胞裂解液是一种用于溶解红细胞的溶液。
其原理基于红细胞的细胞膜结构和溶液内外渗透压的差异。
红细胞膜由磷脂双层组成，而磷脂分子在水溶液中亲水基团朝向水相，疏水基团朝向内膜。
当红细胞悬浮在高渗透压溶液中时，溶液中的溶质分子浓度较高，红细胞内部的水分子会通过渗透作用流入溶液，导致红细胞收缩。
红细胞裂解液的作用是增加溶液外的渗透压，使红细胞受到渗透压力的作用而发生溶解。
通常，红细胞裂解液中会含有一些渗透物质，如氯化铵、氯化钠等。
这些物质会引起溶剂向溶液内渗透，进而使红细胞发生收缩并最终破裂。
裂解液的渗透浓度需要根据所需红细胞溶解程度和实验目的来调整。
一般来说，溶解程度较大的液体通常有更高的渗透浓度。
红细胞裂解液通常用于实验室中的一些实验和技术操作，例如血细胞计数、血型鉴定、细胞培养等。
通过使用红细胞裂解液，可以有效地使红细胞破裂释放其内部的细胞器和成分，以便进行后续的实验操作。
红细胞裂解液法操作
红细胞裂解液法分离脐带血单个核细胞实验设计
操作步骤：
将新鲜采集的脐血在2小时内送至实验室并开始分离操作。
↓
无菌室内75％酒精喷射表面消毒注射器、操作台及操作涉及到的相关器具。
↓
用50ml一次性注射器将采血袋内脐血转至50ml离心管n管（每管血液体积不大于30ml），血袋交计数组进行有核细胞(NC)计数（NC计数1）。
余下用于分离的血液4℃冰箱预温30min。
↓
2000rpm 10℃10min离心，取血浆到一个50ml离心管（NC计数2 ），（找时间500g 10min 离心血浆余下细胞单独冻存），用PBS还原体积混匀。
每450ml红细胞裂解液加入还原体积的血液50ml（室温避光计时10min准时开始离心）充分混匀并立刻分装到12个50ml离心
管中放入离心机400g 10℃5min离心。
↓
用血浆配制10%DMSO冻存保护剂（血浆体积/9=需要DMSO量，精确到微升）5℃预温
↓
去上清，加入过量PBS混匀400g 10℃5min
↓
去上清，尽量将细胞集中到1个离心管加入PBS至40ml混匀，交计数组有核细胞(NC)计数
（NC计数3）然后400g 10℃5min
↓
去上清，根据NC计数2NC计数3与血浆管B一并加入配制好的冻存保护剂（5℃），混匀，分装至n（细胞总数/1.8×107）个冻存管中，每管1.8ml（控制终浓度在0.5～1 ×107 /ml）。
↓
手工冻存或程序降温，转液氮保存
备注：试验操作可根据具体情况进行适当修改
蔡一村王瑛
2005-7-19。
ACK红细胞裂解液ACKLysisBuffer
注意事项：
1、制备细胞悬液是应根据具体实验需要，不一定要制备成单细胞悬液。 2、后续试验如果是用于细胞培养，操作过程中应注意无菌操作，尽量在超净工作台内操作。 3、离心步骤尽量在 4℃离心机上操作。 4、对于常规步骤与快速步骤的区别在于：常规步骤多了一步洗涤过程的离心，可以节省洗 涤液的用量，并且洗涤效果也更好，不需要大体积的离心管；快速步骤少了一次离心过程， 洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离心管。 5、离心洗涤后，通常极微量的红细胞不会影响后续的检测。 6、如果经过 ACK Lysis Buffer 处理后的样品后续用于总 RNA 的提取，在处理细胞时不必 使用 DEPC 处理的溶液，即无需在该操作中特意去除 RNase。 7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 6 个月有效。
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产品编号 CC0007 CC0022 CC0033 CC0045 CC0130 CPBS,无钙镁) D-Hanks 平衡盐溶液(1×,含酚红) Hanks 平衡盐溶液(1×HBSS,无酚红) Earle's 平衡盐溶液(1×EBSS,无钙镁糖酚红) 胰蛋白酶-EDTA 溶液(0.25%:0.02%) Tris-氯化铵红细胞裂解液
Leagene ACK Lysis Buffer 对于裂解、去除有细胞核红细胞，例如鸟或禽类的红细胞， 效果不佳，裂解类似细胞时，不建议采用。本裂解液经过滤除菌，经过 ACK Lysis Buffer 处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的细胞培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取 及各种常规的分析和检测。
（四）血液样本的快速操作(无需洗涤)
北京雷根生物技术有限公司
1、新鲜抗凝血中加入 10 倍体积的 ACK Lysis Buffer，轻轻吹打混匀，裂解 4～15min。 本操作步骤在 4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。（特别提醒：对于鼠的血液，裂解 4～5min 已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至 10min，但通常不宜超过 15min， 并且裂解过程中宜适当摇动以促进红细胞裂解。 2、加入 20～30ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀。 3、400～500g 离心 5min，弃红色上清。4℃离心效果更佳。 4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤 2 和步骤 3 一次。 5、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。
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对于组织细胞样品：
1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2. 加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。
例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入3-5ml的红细胞裂解液。
本步骤在室温或4度操作均可。
3. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。
4℃离心效果更佳。
4. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。
通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5. 洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。
可再重复1次，共洗涤1-2次。
洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。
4℃离心效果更佳。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤：
1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2. 对于0.2ml细胞沉淀加入1ml红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。
本步骤在室温或4度操作均可。
3. 加入15-20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。
4. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。
4℃离心效果更佳。
5. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。
通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
说明：对于常规步骤，多一步洗涤过程中的离心，但可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好一些，同时不需要大体积的离心管。
快速步骤少了一次离心，但洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离心管。
对于血液样品：
1. 取新鲜抗凝血，400-500g离心5分钟，离心弃上清。
2. 加入6-10倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。
例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入6-10ml的红细胞
裂解液。
本步骤在室温或4度操作均可。
注意：对于鼠的血液，裂解1-2分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时
间至4-5分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
3. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。
4℃离心效果更佳。
4. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。
通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5. 洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。
可再重复1
次，共洗涤1-2次。
洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。
4℃离心效果更佳。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
注意：对于微量或少量的血液样品，可以在第一步中不进行离心弃上清的操作，直接在第二步中加入10倍血液体积的红细胞裂
解液，并在室温或4℃裂解4-5分钟。
对于鼠的血液，裂解4-5分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至10分钟，但
通常不宜超过15分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
后续步骤相同。
对于血液样品无需洗涤的快速操作步骤：
1. 每1ml新鲜抗凝血中加入10ml红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解4-5分钟。
本步骤在
室温或4度操作均可。
注意：对于鼠
的血液，裂解4-5分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至10分钟，但通常不宜超过15分钟，并且裂解过程中
宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
2. 加入20-30ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。
3. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。
4℃离心效果更佳。
4. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。
通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
说明：对于常规步骤，多一步洗涤过程的离心，但可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好一些，同时不需要大体积的离心管。
快速步骤少了一次离心，但洗涤效果略差一些，同
时需要大体积的离心管。
5.细胞分选
5.1分选细胞样本处理
贴壁细胞培养：一个细胞样本悬浮细胞培养：一个细胞样本
至少需要一个10cm细胞板细胞总数应大于1×107
(细胞总数大于1×107 )
收集细胞
去除培养液
胰酶消化(一般加入2ml胰酶，
37 ºC充分消化，大约3分钟,
消化至细胞轻拍脱壁)
加入5ml培养液中和，充分
分散细胞(尽量使之呈单
细胞悬液,可通过显微镜观察判断)
取100ul细胞上机，测定转染效率，剩余细胞记数，离心
根据转染效率，分选模式(一般选用exclusion模式)，调节细胞浓度，达到上样速率1000-3000个/秒，目的细胞300个/秒(细胞浓度(个/ul)=300/目的细胞百分率)
上机，分选
分选后细胞，1500转/秒，5min,离心收集细胞
1) 若所要分选的是悬浮细胞，要求细胞总数大于1×107，直接收集细胞液
2) 必需的control：举例说明，如果需要筛选的是GFP阳性的细胞，必须提供没
有转染的同种细胞。
3) 如果分选后的细胞还需要继续培养，需要预先用无菌的4%BSA包埋收集管
(在无菌收集管中，加满4%BSA ，并放置于4℃至少1小时，使用前倒除包埋液)。
4) 如果分选后的细胞还需要继续培养，所有用到的试剂，包括鞘液，都必须无
菌处理；在分选前及分选过程中，必须进行严格无菌操作，机器需要经过酒精冲洗，无菌PBS冲洗的过程。
5.2 分选细胞的上机操作程序
5.2.1上机分选前准备
1)无菌分选
分选前夜FACS仪器间需紫外照射过夜，收集管预先用4%BSA包埋(4℃至少1小时) 分选前冲洗机器程序：1. 将上样管换成75%酒精，鞘液桶中换成3L 75%酒精冲洗，至3L酒精完全跑完； 2. 倒去鞘液桶中残余的酒精，用无菌PBS冲洗鞘液桶使酒精彻底去除，加无菌PBS至鞘液桶满，同时上样管中换成无菌PBS，冲洗，使每个收集管收集液体约20ml 左右,即可上机分选。
2)非无菌分选
如果不需要无菌分选，可仅用少量酒精冲洗，再用PBS冲洗至每管收集约20ml后即可上机分选。
5.2.2 上机分选步骤
打开cellquest软件，先上control样本，确定细胞获取条件，并划定需要获取的细胞范围；在Acquire menu菜单下，选择SortSetup，并设定SortSetup下的一系列参数，设定完毕，Acquire,上样分选。
注：SortSetup下主要的参数设定如下：
SortGate选择分选门，SortCount选择0(连续分选)，
SortMode选择分德国美天妮磁珠分选.ppt
选模式(一般使用exclusion)
*须知：分选完毕后，用水冲洗，使每个收集管收集液体约20ml 左右后可停止(防止分选管道中形成盐结晶)。
继而用常规冲洗方法冲洗上样管。