microRNA提取试剂盒

合集下载

rna提取试剂盒的提取流程及注意事项

rna提取试剂盒的提取流程及注意事项

rna提取试剂盒的提取流程及注意事项下载提示:该文档是本店铺精心编制而成的,希望大家下载后,能够帮助大家解决实际问题。

文档下载后可定制修改,请根据实际需要进行调整和使用,谢谢!本店铺为大家提供各种类型的实用资料,如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等,想了解不同资料格式和写法,敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you! In addition, this shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!RNA提取试剂盒的提取流程及注意事项RNA提取是分子生物学实验中常见的一项操作,而RNA提取试剂盒则是简化这一过程的重要工具。

赛默飞世尔TaqMan MicroRNA Assays 简要操作说明说明书

赛默飞世尔TaqMan MicroRNA Assays 简要操作说明说明书

快速参考手册TaqMan MicroRNA Assays简要操作说明(Rev.A.0)本操作说明提供了TaqMan MicroRNA Assays的简要操作指南。

更详细信息,请至赛默飞世尔官方网站下载英文版说明书:https:///content/sfs/manuals/cms_042167.pdf一.配制反转录体系1.准备总RNA(1)注意:应选择适当的提取方法,避免提取过程中丢失microRNA(2)RNA定量2.准备反转录预混液(1)将Taqman MicroRNA反转录试剂盒中的组分放在冰上融化后涡旋混匀。

(2)准备一支无RNA酶的离心管,参照下表,在冰上配制反转录预混液。

组成成分反应体系100mM dNTPs(with dTTP)0.15µl反转录酶 1.00µl10X反转录buffer 1.50µlRNase抑制剂0.19µl无核酸酶H2O 4.16µl总体积7.00µl(3)涡旋混匀,离心。

(4)将反转录预混液放置在冰上备用。

3.配制反转录体系(1)在冰上将5x反转录引物和RNA模板融化。

涡旋混匀。

(2)15µl的反转录体系中,加入1-10ng RNA(5µl),7µl反转录预混液,3µl反转录引物,涡旋混匀,离心。

(3)将反应管放在冰上放置5分钟,然后进行反转录实验。

4.设置反转录步骤将反应管放入PCR仪内,按照下列的反应程序进行设置:模式:标准模式,反应体积:15µl阶段时间温度退火30分钟16°C延伸30分钟42°C失活5分钟85°C∞4°C2二.定量PCR 扩增1.准备定量PCR 反应体系(1)将反应用到的组分放在冰上融化,混匀后放置冰上备用。

(2)按照20µl 反应体系计算所需要的试剂量。

将各组分加入离心管中,涡旋混匀,离心。

Allprep RNA-DNA-miRNA分提试剂盒使用说明书

Allprep RNA-DNA-miRNA分提试剂盒使用说明书
试剂盒组成、储存、稳定性:
试剂盒组成 裂解液 RLT Plus Wash Solution 1
Wash Solution 2/3 RNase-free H2O 抑制物去除液 IR
保存 室温 室温
室温 室温 室温
50 次(HXR4801)
50 ml 12 ml 第一次使用前加入 28ml 无水乙醇 10 ml 第一次使用前加入 42ml 无水乙醇 10 ml
-3-
miRNA分离并提取,富集miRNA。请咨询我们。

6. 关于DNA 的微量残留:
一般说来任何总 RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免 DNA 的微量残留 ( DNase 消 化 也 无 法 做 到 100% 无 残 留 ), 本 公 司 的 Allprep 组 织 / 细 胞 miRNA/RNA/DNA/ 分 提 试 剂 盒 , 由 于 采 取 了 本 公 司 独 特 的 缓 冲 体 系 和 基 因 组 DNA 分离清除技术,绝大多数 DNA 已经被清除,不需要 DNase 消化,可直接用 于反转录 PCR 和荧光定量 PCR。个别特殊情况如 DNA 含量过于丰富造成残留或 者要进行严格的 mRNA 表达量分析荧光定量 PCR,我们建议在进行模板和引物 的选择时:
以下步骤为提取 RNA 步骤: 4. 用微量移液器较精确估计滤过液体积(350μl 或者 600μl 左右,滤过时候损失体积
应该减去),加入 1.25 倍体积的无水乙醇,此时可能出现沉淀,但是不影响提取 过程,立即吹打混匀,不要离心。
-5-
5. 立刻将混合物(每次小于 700μl,多可以分两次加入)加入一个 RNA 吸附柱 RA 中,
储存事项:
1. 所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直 接使用,可在 37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。

rna提取试剂盒

rna提取试剂盒

RNA提取试剂盒1. 简介RNA提取试剂盒是一种用于从生物样品中提取RNA的试剂盒。

RNA提取是分子生物学和遗传学研究中的一个重要步骤,它可以从细胞中提取出RNA,并用于进一步的RNA分析,如逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、实时定量PCR(qRT-PCR)、Northern印迹、原位杂交等实验。

2. 原理RNA提取试剂盒的原理通常基于以下步骤:2.1 细胞破碎首先,样品中的细胞需要被破碎,以释放细胞内的RNA。

常用的方法有机械破碎、化学破碎和酶解法等。

机械破碎是利用高速旋转的珠子等破碎细胞膜,而化学破碎通常使用细胞裂解液来破坏细胞膜。

酶解法则是利用特定酶来降解细胞膜。

2.2 RNA结合破碎的细胞后,RNA需要与试剂盒中的特定试剂结合。

这些试剂通常包括抗RNA酶和助剂,可以保护RNA不被降解,同时也可与其他细胞成分如DNA和蛋白质区分开来。

2.3 吸附和洗脱结合的RNA会通过离心等操作与试剂盒中的吸附材料结合,并且其他杂质如DNA、蛋白质等被洗脱。

这一步骤通常是通过向细胞裂解液中加入酒精或其他特定试剂来实现。

2.4 最后的RNA洗脱和纯化最后,从吸附材料上洗脱RNA,并通过离心等方式纯化RNA。

这样可以得到纯度较高的RNA样品,并且可以进一步用于RNA分析。

3. 使用RNA提取试剂盒的优势使用RNA提取试剂盒进行RNA提取的主要优势如下:3.1 高纯度RNA提取试剂盒可以通过洗脱和纯化步骤,获得高纯度的RNA,可以减少其他杂质对实验的干扰,提高实验结果的可靠性。

3.2 方便快捷相对于传统的RNA提取方法,使用RNA提取试剂盒可以更快速、更方便地提取RNA。

通常只需要几个步骤即可完成RNA提取,节省了实验人员的时间和精力。

3.3 可重复性好由于使用RNA提取试剂盒的步骤相对标准化,因此可以获得较好的重复性。

这对于需要进行大量实验或进行样本比较分析的研究非常有价值。

3.4 更适合高通量实验随着高通量实验技术的发展,需要处理大量样本的实验也越来越常见。

miRNA高效检测方法及具体步骤

miRNA高效检测方法及具体步骤

miRNA高效检测方法及具体步骤miRNA(microRNA)是一类长度约为22个核苷酸的小分子RNA,它在生物体内起到调节基因表达的重要作用。

由于miRNA在许多生物学功能中的重要性,开展高效检测miRNA的方法具有很大的研究价值。

目前,有许多方法可以用于检测miRNA,本文将介绍其中几种常见的方法及其具体步骤。

1.基于荧光探针的实时定量PCR法实时定量PCR (qPCR) 是一种常见且广泛应用的方法,可以用于miRNA的检测。

该方法在miRNA的检测过程中,首先将miRNA转录为cDNA,然后通过PCR反应扩增miRNA的序列。

在qPCR中,miRNA将与一个标记有荧光探针的引物结合,通过荧光信号的监测,可以对miRNA的数目进行定量分析。

具体步骤如下:- 步骤一:RNA提取:使用RNA提取试剂盒将miRNA从细胞或组织样本中提取出来。

- 步骤二:miRNA逆转录:使用miRNA逆转录试剂盒将miRNA逆转录为cDNA。

- 步骤三:qPCR扩增:使用qPCR试剂盒对miRNA的cDNA进行PCR扩增。

- 步骤四:数据分析:通过检测PCR产物的荧光信号,计算miRNA的表达量。

2. Northern blotting法Northern blotting是一种传统的RNA分析方法,也可以用于miRNA的检测。

在该方法中,首先将miRNA与若干硝酸酰胺交联,并通过琼脂糖凝胶电泳分离miRNA。

然后,将miRNA转移到膜上,并使用与miRNA互补的探针进行杂交。

通过放射性或化学染料检测标记的探针与miRNA的结合,可以确定miRNA的存在与周围环境的定量。

具体步骤如下:- 步骤一:miRNA分离:使用硝酸酰胺交联和电泳方法从总RNA中分离miRNA。

- 步骤二:膜转移:将miRNA转移到膜上。

- 步骤三:杂交:使用与miRNA互补的标记探针进行杂交。

- 步骤四:探针检测:通过放射性或化学物质检测标记的探针与miRNA的结合来确定miRNA的存在。

microRNA定量研究实验指南

microRNA定量研究实验指南

HaiGene miRNA 定量整套解决方案----miRNA 提取、反转录、RealTime PCR前言对miRNA 进行定量研究的经典方法是ABI 公司的探针法,其采用特殊结构的茎环反转录引物对miRNA 进行反转录,之后采用MGB 探针进行RealTime PCR 定量分析,这种方法具有特异性高、定量准确的优点,但是试验需要订购ABI 公司的成套的引物试剂,成本很高。

2008年Soroush 首次报道了miR-Q 技术【1】,该技术使用了含有tag 的特异性反转录引物,这样可以很好的区分相似度很高的miRNA (原理如图1A )。

2011年Peter 对miR-Q 技术进行了改良【2】,对miRNA 进行加A 后,采用含tag 和oligo dT 的引物进行反转录,之后采用含特异性序列的上下游引物进行RealTime PCR (原理如图1B ),这样保证了miRNA 的扩增特异性,其可以很好的区分单个碱基差异的miRNA 【结果如图2所示】。

实际的大规模应用中也表明该方法确实可以有效的对miRNA 进行定量研究,其结果的可靠性可比拟探针法【结果如图3所示】,已经被大量研究者所采用【3~13】。

图1A miR-Q 技术原理;图1B Peter 改良的miR-Q 技术原理图2:使用Peter 改良的技术能够有效的区分相似度很高的miRNAs图3:使用Peter改良的技术能够高效的扩增miRNAs海基优化的miRNA定量方案是在Peter改良的技术方法基础上建立起来的,包括三部分:高效提取miRNA、通过加A法反转录获得miRNA的cDNA、应用SYBR Green染料法对获得的cDNA产物进行RealTime PCR扩增。

采用该实验方案进行miRNA表达研究结果可靠、操作简便、重复性高、耗时短、费用低,操作流程如图4所示。

下面将该方案的使用特点和方法进行详细阐述。

图4 HaiGene优化的miRNA qRealTime PCR定量方案第一步miRNA的提取核酸的提取往往是研究过程的第一步、是实验的基础。

miRNA提取试剂盒中文说明书

miRNA提取试剂盒中文说明书

Protocol A:Isolation of miRNA from Cells and Tissue.Materials supplied by user●Absolute ethanol (100%)●RNase-free filter pipette tips●Centrifuge capable of 14,000 x g一、裂解组织1.用1ml RNA-Solv® Reagent裂解细胞或组织(50-100mg植物组织),匀浆。

2.将匀浆液在室温下静置2-3min;3.向匀浆液中加入200μL氯仿,盖紧离心管的盖,剧烈振荡15s,冰浴10min。

4.4℃,12000g,15min离心。

匀浆分离为下层的有机相和上层的水相。

RNA留在上层水相中。

5.转移不超过80%体积的上清至一新的2.0ml离心管中,加入1/2体积的无水乙醇,振荡混匀。

二、去除大RNA6.涡旋振荡第5步中的混合物,然后将混合物全部转移至2mL HiBind® RNAMini column中(每次吸取不超过700μL液体,多余700μL时逐次加入)。

室温下10000*g离心30-60s,转移流出液至新的2ml离心管中(注意记录转移出的体积),以用于分离小RNA。

Note:HiBind RNA Mini Column可以被用来提取大RNA(>200nt),方法见Protocol B。

三、miRNA的分离纯化7.加入0.9倍流出液体积的无水乙醇至第6步的离心管中,涡旋振荡混匀。

取一个HiBind® RNA Mini column,置于一个新的2ml收集管中。

8.取第7步的混合物加入吸附柱中,弃流出液。

9.重复步骤8,将剩余样品加入吸附柱中,10000g,30-60s,弃流出液10.将吸附柱放在同一个2ml收集管中,添加500μl RWB Wash Buffer,10000g,30-60s,弃流出液,重复使用收集管在第11步。

天漠科技RNA 小量提取试剂盒说明书

天漠科技RNA 小量提取试剂盒说明书

操作手册RNA小量提取试剂盒Catalog No. TR154-50 (50次反应)TR154-200 (200次反应)Highlights∙适用于从细胞,组织,酵母菌,植物或者细菌中提取到总RNA(含microRNA)。

∙提取到的RNA不含DNA,并可应用于Q-PCR,高通量测序等实验。

∙此产品仅供科研使用。

Ver.1.0.9北京天漠科技开发有限公司Tel: +86-10-58235289产品组成:50200 RNA裂解液室温50 ml 2 X 100 mlRNA预洗液室温25 ml 100 mlRNA洗涤液室温 24 ml 2 X 48 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free H2O 室温 6 ml 30 mlDNase I DNA消化液-20℃室温250U X 1管 250U X 4管4 ml 16 ml3号柱G(绿色)室温50个200个3号柱Y(黄色)室温50个200个收集管(2ml)室温50个200个特性:1.样品来源:细胞,组织,酵母,植物或者细菌,兼容核酸保护剂。

2.样品范围:最多107细胞或50mg的组织。

3.RNA纯度:高质量的RNA可应用于高通量测序等敏感的下游实验。

4.RNA回收率:可从30μl洗脱体积中回收到100μg的RNA.试剂制备RNA洗涤液在使用之前一定要配好,添加好乙醇后在试剂瓶上做好标记!!!需要添加96ml100%的乙醇(或104ml95%乙醇)到24ml的 RNA洗涤液中需要添加192 ml 100% ethanol (208 ml 95% ethanol) 到48ml的 RNA洗涤液中试用装已经添加好无水乙醇,无需额外添加。

溶解冻干粉状态的DNase I需要按照管子上的量添加 RNase-free H2O一般250U的DNase I 需要添加275μl的RNase-free H2O操作步骤:整个操作步骤是由3个步骤组成:(I)样品裂解匀浆(I I)样品清理(I I I)样品纯化.所有步骤均在室温下操作(20-30℃)(I)样品裂解匀浆贴壁细胞去除液体培养基后,直接往培养板中加入RNA裂解液溶解细胞,并用移液枪轻轻吹打混匀。

M5PlantmicroRNAExtractionKit使用说明书

M5PlantmicroRNAExtractionKit使用说明书

M5 Plant microRNA Extraction Kit使用说明书产品名称单位货号M5 Plant microRNA Extraction Kit 50T MF044-plant-05【储存条件】本试剂盒室温保存,储存6个月不影响使用效果。

所有溶液应是澄清的,如果环境温度低时可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟可恢复澄清。

Wash Solution 2/3可能加入乙醇使用几天后出现沉淀晶体,吸上清使用就可以,不影响使用。

避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

【产品简介】传统的microRNA 提取试剂盒均是采用异硫氰酸胍/苯酚/氯仿(TRIzol 法)加高浓度乙醇硅胶膜吸附小片段microRNA 的原理方法制成,但是复杂的植物品类如棉花、葡萄、胡杨、冬青、月季、石斛、单参、水稻种子、人参、玉米胚芽等大量样品用TRIzol 的原理甚至无法提取符合要求的总RNA,更不用说microRNA。

因此包括Qiagen,Invitrogen 等世界著名公司采用Trizol 法原理的microRNA 提取试剂盒面临复杂植物样品时束手无策,产品线中干脆就没有复杂植物microRNA 提取试剂盒。

用户万般无奈只好用传统方法,或者TRIzol 法提取,用异丙醇/乙醇沉淀方法来提取microRNA,虽然也能提取到部分microRNA,但是沉淀法损失巨大或者和杂质共沉淀,影响实验结果,在国际刊物投稿时常常面临质疑,甚至论文被撤销。

而本试剂盒在公司全球领先数百种复杂植物提取的经验基础上(发表文章120 多篇,包括人参、雪莲、棉花、胡杨、冬青等各种复杂植物,并获得发明专利授权),创新性的采用了不用苯酚,氯仿的技术路线全球首家解决该问题,可以提取绝大多数复杂植物如棉花、杨树、冬青、月季、丹参等植物microRNA,当然本试剂盒也适用于拟南芥、水稻、小麦、烟草、水稻等各种简单样品。

rna提取试剂盒原理

rna提取试剂盒原理

RNA提取试剂盒的基本原理RNA提取试剂盒是一种用于从生物样品中提取RNA的化学试剂盒。

它可以将细胞或组织中的RNA分离出来,以便后续的分子生物学研究,如逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、实时定量PCR、Northern blotting等。

下面将详细解释RNA提取试剂盒的基本原理。

1. 细胞破碎和裂解RNA提取试剂盒首先要对细胞或组织进行破碎和裂解,以释放内部的RNA。

这一步通常使用离心和化学方法来实现。

首先,通过离心将样品离心下来,去除上清液中的培养基或缓冲液。

然后,加入裂解缓冲液和蛋白酶K等蛋白酶来破坏细胞膜和核膜,并降解RNA酶。

裂解缓冲液中通常含有高浓度的盐和洗涤剂,以破坏细胞膜结构。

蛋白酶K能够降解核酸结合蛋白和核酸酶,从而保护RNA不被降解。

2. RNA的结合与纯化在细胞裂解后,RNA提取试剂盒通过添加特定的试剂和离心步骤来使RNA与其他杂质分离。

首先,加入乙酸酚/氯仿溶液,这种溶液可以使DNA和蛋白质沉淀到有机相中,而RNA则存在于水相中。

然后,通过离心将两个相分离开来。

DNA和蛋白质会沉淀到底部形成有机相,而RNA会存在于上层的水相中。

接下来,将水相转移到新的离心管中,并加入异丙醇。

异丙醇能够使RNA与水分子结合起来形成复合物,并沉淀下来。

然后再次进行离心分离,并去除上清液。

3. RNA的洗涤和去除污染物为了得到纯净的RNA样品,需要对沉淀下来的RNA进行洗涤和去除污染物。

首先,在沉淀下来的RNA上加入75%乙醇溶液进行洗涤。

乙醇能够使RNase失活,并帮助去除污染物。

然后通过离心将RNA沉淀下来,去除上清液。

接下来,重复洗涤步骤一次或两次,以进一步去除污染物。

4. RNA的溶解和保存最后一步是将纯化的RNA溶解在适当的缓冲液中,并保存起来以便后续实验。

通常使用无RNase的缓冲液(如DEPC水)来溶解RNA。

然后通过离心去除任何可能残留的杂质。

为了保护RNA不被降解,在提取过程中需要使用RNase抑制剂和无RNase的试剂。

microrna磁珠手动提取

microrna磁珠手动提取

microrna磁珠手动提取介绍在分子生物学研究中,microrna(miRNA)是一类长度约为22个核苷酸的非编码RNA分子,它在基因表达调控中起着重要的作用。

研究人员常常需要从样本中提取miRNA,以便进行进一步的实验分析。

而microrna磁珠手动提取就是一种常用的提取方法,本文将详细介绍该方法的步骤和操作要点。

准备工作在进行microrna磁珠手动提取之前,我们需要准备以下材料和试剂: - miRNA提取试剂盒 - 样本(例如细胞、组织或体液) - miRNA磁珠 - 离心管和离心机 - 磁珠分离架步骤1. 样本处理首先,我们需要对样本进行处理,以使miRNA能够充分释放。

具体步骤如下: 1. 将样本加入离心管中。

2. 加入适量的细胞裂解缓冲液,并充分混合。

3. 在室温下孵育一段时间,以使细胞或组织充分裂解。

4. 用离心机将样本离心,以去除细胞碎片和其他固体物质。

2. miRNA结合接下来,我们将利用miRNA磁珠将miRNA结合并分离出来。

具体步骤如下: 1. 向离心管中加入适量的miRNA磁珠,并充分混合。

2. 在室温下孵育一段时间,以使miRNA与磁珠结合。

3. 使用磁珠分离架将磁珠沉积到离心管底部,然后将上清液小心地倒掉。

4. 用洗涤缓冲液洗涤磁珠,以去除非特异性结合的物质。

5. 重复洗涤步骤,直到上清液清澈为止。

3. miRNA洗脱最后,我们需要将miRNA从磁珠上洗脱下来,以得到纯净的miRNA样品。

具体步骤如下: 1. 加入适量的洗脱缓冲液,并充分混合。

2. 在室温下孵育一段时间,以使miRNA从磁珠上洗脱下来。

3. 使用磁珠分离架将磁珠沉积到离心管底部,然后将上清液转移到一个新的离心管中。

4. 检查洗脱液的浓度和纯度,以确保miRNA 样品的质量。

注意事项在进行microrna磁珠手动提取时,我们需要注意以下几点: 1. 严格按照试剂盒的说明书操作,避免交叉污染和误操作。

microRNA快速提取试剂盒使用手册

microRNA快速提取试剂盒使用手册

1、组织处理:将组织于液氮内研磨,每50-100mg加1mL裂解液MRL后匀浆,组织样品容积不能超过MRL的10%;2、将匀浆剧烈混匀,在15-30℃条件下孵育5min,是核蛋白体完全分解;3、可选步骤:4℃的条件下12000rpm离心10min,小心取上清转入一个新的RNase free的离心管中。

4、每1ML加0.2ml氯仿。

剧烈震荡15s,并将其在室温下孵育3min;5、于4℃12000rpm离心10分钟,样品会分3层,上层为水相,RNA存在于水相中,水相层的容量大约为锁甲MRL体积的60%,把水相转移到新管仲,进行下一步操作;6、加入0.6倍体积70%乙醇,混匀,转移至RA中;7、(10000rpm离心45秒,收集下滤液,准确估计下滤液的体积,加入2/3倍体积的无水乙醇,混匀,将混合液倒入RB中,每次最多700ul,10000rpm离心30秒弃掉废液。

)滤出小RNA.8、加入700ul漂洗液RW,12000rpm离心60秒,弃掉废液(下液);9、加入500ul漂洗液RW,12000rpm离心60秒,弃掉废液(下液);10、空液离心2min,1200rpm;11、取出吸附柱RB,放入RNase free离心管中,根据预期RNA产量,在吸附膜中间部位加入60-80ul,RNase free water事先在65-70℃水浴加热,室温放置2min,12000rpm 离心1min,收集得到microRNA,保存于-20摄氏度或更低。

1、组织+裂解液每50-100mg加1mL 15-30℃条件下孵育5min2、每1ML加0.2ml氯仿剧烈震荡15s,并将其在室温下孵育3min 4℃12000rpm离心10分钟3、把水相转移到新管仲加入0.6倍体积70%乙醇,混匀,转移至RA中4、(10000rpm离心45秒,收集下滤液,准确估计下滤液的体积,加入2/3倍体积的无水乙醇,混匀,将混合液倒入RB中,每次最多700ul,10000rpm离心30秒弃掉废液。

血清血浆microRNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书

血清血浆microRNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://Serum/Plasma microRNA Kit血清/血浆microRNA快速提取试剂盒目录号:RN46适用范围:适用于从动物及人体血浆和血清中纯化包括miRNA的无细胞总RNA。

试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存50次(RN4601)Lysis buffer 4°C避光50 mlWash Solution 1 室温12 ml第一次使用前加入28ml无水乙醇Wash Solution 2/3 室温10 ml第一次使用前加入42ml无水乙醇RNase-free H2O 室温10 mlRNase-free吸附柱RA和收集管室温50套本试剂盒在室温储存6个月不影响使用效果。

储存事项:1.所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。

2.不合适的储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。

3.Wash Solution 2/3可能加入乙醇使用几天后出现沉淀晶体,并不影响使用,直接不吸晶体,吸上清使用就可以。

4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍:近年来对RNA干扰和调节性小RNA的广泛研究迫切需要一种能有效提取15-30核苷酸左右大小RNA(包括siRNA和miRNA)的试剂盒。

但是传统的RNA提取方法如硅胶膜不能有效吸附回收,酚/胍抽提和异丙醇或者乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA,对于血清血浆样本更是由于其自身特点更难提取。

本试剂盒采用独特的裂解液迅速直接裂解血清血浆RNA酶,强烈有机抽提去除蛋白和DNA,RNA包括微小分子RNA在高浓度乙醇下吸附于离心柱内特殊硅基质膜,再通过一系列特殊漂洗液快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质进一步去除,最后低盐的洗脱液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

rna提取试剂盒

rna提取试剂盒

RNA提取试剂盒1. 简介RNA提取试剂盒是用于从生物样本中提取RNA的一种化学试剂盒。

RNA提取是生物学研究中非常重要的一步,它能够从细胞中分离纯净的RNA,方便后续的RNA分析和研究。

RNA提取试剂盒通常包含了一系列试剂和材料,能够在简单、快速、高效的条件下提取RNA。

本文将介绍RNA提取试剂盒的原理、使用方法和优势。

2. 原理RNA提取试剂盒的原理通常包括以下几个步骤:2.1 细胞破碎首先,生物样本中的细胞需要被破碎,使得细胞内的RNA释放出来。

破碎方法可以采用机械破碎、化学破碎或者超声波破碎等。

2.2 RNA结合经过细胞破碎后,RNA需要与特定的结合试剂结合。

这些结合试剂能够与RNA特异性结合,使RNA保持稳定并与其他杂质分离。

2.3 杂质去除通过洗涤步骤,可以去除非RNA分子,如DNA、蛋白质和其他杂质。

这些杂质的去除可以提高RNA的纯度。

2.4 RNA洗脱最后,将纯化好的RNA从结合试剂中洗脱出来。

这样得到的RNA可以用于后续的实验操作,如逆转录、聚合酶链式反应(PCR)等。

3. 使用方法使用RNA提取试剂盒提取RNA的一般步骤如下:1.准备样本:收集需要提取RNA的生物样本,如细胞、组织等。

2.细胞破碎:将样本进行适当的细胞破碎方法,如使用细胞破碎缓冲液、机械破碎器等。

3.加入结合试剂:将细胞破碎后的样本与RNA提取试剂盒中的结合试剂进行混合,使RNA与结合试剂特异性结合。

4.杂质去除:通过一系列洗涤步骤,去除非RNA分子和其他杂质。

这些洗涤步骤通常使用缓冲液和离心的方式。

5.RNA洗脱:将纯化好的RNA从结合试剂中洗脱出来,得到纯净的RNA。

洗脱可以使用RNA洗脱缓冲液等。

4. 优势RNA提取试剂盒相比传统的RNA提取方法具有以下优势:•快速方便:RNA提取试剂盒提供了一种简单、快速的RNA提取方法,大大节省了实验时间。

•高纯度:RNA提取试剂盒能够高效地去除杂质,提供高纯度的RNA样品。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

◆RNAmisi microRNA快速提取试剂盒◆目录号1105◆使用手册◆实验室使用,仅用于体外RNAmisi microRNA快速提取试剂盒目录号:1105目录编号包装单位110501 50次适用范围:适用于快速提取各种细胞组织miRNA和其它各种小RNA 试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存50次Lysis/Binding buffer 4°C避光50 ml70%乙醇室温9ml RNase-free H2O第一次使用前按说明加指定量乙醇Wash Solution 1 室温12 ml第一次使用前加入28ml无水乙醇Wash Solution 2/3 室温10 ml第一次使用前加入42ml无水乙醇RNase-free H2O 室温10 ml吸附柱RA和收集管室温50套microRNA吸附柱MA和收集管室温50套本试剂盒按照指示储存6个月不影响使用效果。

储存事项:1.Wash Solution 1和Wash Solution 2/3加入无水乙醇后,可以在常温保存一个月,如果要更长时间保存,请存放在4°C,但是使用前,应该先回复到室温。

2.Wash Solution 2/3可能加入乙醇使用几天后出现沉淀晶体,并不影响使用,直接不吸晶体,吸上清使用就可以。

3.运输在常温下进行,不影响使用效果。

4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍:近年来对RNA干扰和调节性小RNA的广泛研究迫切需要一种能有效提取15-30核苷酸左右大小RNA(包括siRNA和miRNA)的试剂盒。

但是传统的RNA提取方法如硅胶膜不能有效吸附回收,酚/胍抽提和乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA。

本试剂盒采用独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,强烈有机抽提去除蛋白和DNA,RNA包括微小分子RNA吸附于离心柱内特殊硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质进一步去除,最后低盐的洗脱液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点:1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。

克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.也不需要乙醇沉淀等容易丧失微小分子RNA的步骤。

3.快速,简捷,单个样品操作一般可在30分钟内完成。

4.多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.9~2.0,基本无DNA残留,可用于RNAi,RT-PCR,Northern-blot和各种实验。

注意事项:1.第一次使用前请先在70%乙醇、Wash Solution 1瓶和Wash Solution 2/3瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!2.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

3.需要自备乙醇,氯仿,一次性注射器,研钵。

4.Lysis/Binding buffer 和Wash Solution 1含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。

若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5.预防RNase 污染,应注意以下几方面:1)经常更换新手套。

因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase 污染。

2)使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。

3)RNA 在裂解液中时不会被RNase 降解。

但提取后继续处理过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。

玻璃器皿可在150℃烘烤4小时,塑料器皿可在0.5 MNaOH 中浸泡10 分钟,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。

4)配制溶液应使用无RNase 的水。

(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%( v/v),37℃放置过夜,高压灭菌。

)6.RNA 纯度及浓度检测:完整性:RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件:胶浓度1.2%;0.5×TBE电泳缓冲液;150v,15 分钟)检测完整性。

由于细胞中70%-80%的RNA 为rRNA,电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA 条带。

动物rRNA 大小分别约为5 kb 和2kb,分别相当于28S 和18S rRNA。

动物RNA 样品中最大rRNA 亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0 倍,否则表示RNA 样品的降解。

出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。

纯度:OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的指标。

高质量的RNA,OD260/OD280 读数(10mMTris, pH7.5)在1.8-2.1 之间。

OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。

同一个RNA 样品,假定在10mM Tris,pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间,在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9 之间,但这并不表示RNA 不纯。

浓度:取一定量的RNA 提取物,用RNase-free 水稀释n 倍,用RNase-free水将分光光度计调零,取稀释液进行OD260, OD280 测定,按照以下公式进行RNA 浓度的计算:终浓度(ng/μl)= (OD260)×(稀释倍数n)×40。

操作步骤:(提取包含microRNA的总RNA)提示:⇨第一次使用前请先在70%乙醇、Wash Solution 1瓶和Wash Solution 2/3瓶中加入指定量乙醇!1.组织培养细胞a.收集<107悬浮细胞到一个1.5ml离心管。

(对于贴壁细胞,孔板培养和细胞瓶培养可以直接裂解,尽可能吸干净所有培养液残留后直接加入1ml的Lysis/Binding buffer, 迅速轻摇使Lysis/Binding buffer充分和瓶底所有细胞接触裂解细胞并灭活RNA酶,轻轻用移液枪反复吹打混匀接操作步骤项下3。

)b.13,000rpm离心10秒(或者300g离心5分钟),使细胞沉淀下来。

完全吸弃上清,留下细胞团,注意不完全弃上清会稀释裂解液导致产量纯度降低。

c.轻弹管壁将细胞沉淀完全松散重悬,加入1ml Lysis/Binding buffer,涡旋或者吹打,充分裂解混匀。

d.接操作步骤项下3。

2.动物组织(例如鼠肝脑)a.新鲜组织用解剖刀迅速切成小碎块,根据处理组织的质量,按照50-100mg加入1ml的比例加入Lysis/Binding buffer后电动或者手动彻底匀浆。

或者在液氮中研磨组织成细粉后,取适量组织细粉(约50-100mg)转入装有1ml Lysis/Binding buffer 的1.5ml离心管中,剧烈吹打涡旋混匀。

b.可选,一般不需要:如果处理量大,有明显颗粒或者不溶物,非常粘稠或者裂解不充分, 可立即用带针头的一次性 5 ml(约0.9mm针头) 注射器抽打裂解物10 次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。

c.接操作步骤项下3。

3.室温放置5分钟以充分分离核酸蛋白复合物。

4.加入200μl氯仿,剧烈振荡15秒。

5.室温放置2-3分钟,13,000rpm离心10分钟。

6.小心取上清(约600μl)转入到新的离心管,加入1.5倍体积的无水乙醇(必须是室温的,通常900μl),涡旋混匀。

此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心,立刻接下步。

7.将混合物(每次小于700μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)12,000 rpm离心30-60秒,弃掉废液。

8.加700μl 700μl Wash Solution 1(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。

9.加入500μl Wash Solution 2/3(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000 rpm 离心30秒,弃掉废液。

加入500μl Wash Solution 2/3,重复一遍。

10.将吸附柱RA放回空收集管中,13,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

11.取出吸附柱RA,放入一个RNase free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water(事先在100℃水浴中预热效果更好),室温放置1分钟,12,000 rpm 离心1分钟。

12.如果预期RNA产量>30μg,加30-50μl RNase free water重复步骤11, 合并两次洗脱液,或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。

洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高, 分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高1 5–30%, 但是浓度要低,用户根据需要选择。

附:microRNA富集方法(仅仅提取microRNA,不包含>200 nt其它总RNA成份。

)1.按照前面标准操作步骤1-5操作,直到得到上清。

2.较精确估计上清体积(约600μl),加入等体积70%乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇!)(必须是室温的),涡旋或者吹打充分混匀,不要离心。

3.将混合物加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)12,000 rpm离心30-60秒,收集滤过物。

将滤过物从收集管转移到一个新的离心管后,把吸附柱子放回空的收集管内,再加入剩下的混合物,离心,收集滤过物。

合并两次滤过物,计算体积。

此时,滤过物含有microRNA, 吸附柱子上面是除去了microRNA的总RNA(不包含microRNA),如果需要,可以按照前面标准操作步骤8-11操作漂洗,洗脱回收得到去除了microRNA的总RNA。

4.较精确估计滤过物体积,加入0.65倍体积无水乙醇(必须是室温的),涡旋或者吹打充分混匀,不要离心。

5.取一套新的microRNA吸附柱MA,将上一步骤混合物(每次小于700μl,多可以分两次加入)加入microRNA吸附柱MA中,(吸附柱放入收集管中)12,000 rpm离心30秒,弃掉废液。

6.按照前面标准操作步骤8-11操作漂洗,洗脱得到富集的microRNA。

注意:不同的实验可以选择不同的方法,例如Northern Blot或者表达芯片谱分析可以选择提取包括microRNA的总RNA。

富集方法提取的microRNA因为去除了较大片段的mRNA和rRNA等,可能减少某些下游试验的扩增背景,当背景较高或者非特异扩增较多时,可以尝试使用富集方法提取的microRNA。

相关文档
最新文档