S0024-总一氧化氮检测试剂盒
人一氧化氮NO酶联免疫分析试剂盒使用方法
人一氧化氮(NO)酶联免疫分析试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：48T6μmol/L -200μmol/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中一氧化氮(NO)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人一氧化氮(NO)水平。
用纯化的人一氧化氮(NO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮(NO)，再与HRP 标记的一氧化氮(NO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的一氧化氮(NO)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人一氧化氮(NO)浓度。
试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品（400μmol/L）0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
200μmol/L 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液100μmol/L 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液50μmol/L 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液25μmol/L 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液12.5μmol/L 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
一氧化氮(Nitric oxide ,NO)含量测定试剂盒说明书
货号：QS1804 规格：50管/24样一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量测定试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：NO（Nitric Oxide，NO）广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中，特别是神经组织中较丰富。
它作为细胞间及细胞内的信息物质，发挥信号传递的作用，是一种新型的生物信使分子，在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。
测定原理：NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO2—，在酸性条件下，NO2—与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在550nm处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算NO含量。
为了排除样品色素等的影响，每个样品需做对照管。
自备实验用品及仪器：天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体6mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体12mL×1瓶，4℃避光保存。
样品处理：1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。
10000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。
3.体液和培养液等其它液态样品：直接测定。
NO含量计算：标准曲线回归方程为：y= 0.016x -0.0103，R2= 0. 99861、组织样品：NO含量定义：25℃时，每克样品或每毫克蛋白15min生成1μmoL NO2—，相当于1μmoL NO。
Elabscience 一氧化氮（NO）比色法测试盒说明书
（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）Elabscience®一氧化氮（NO）比色法测试盒Nitric Oxide (NO) Colorimetric Assay Kit产品货号：E-BC-K035-S产品规格：50 assays(48 samples)/100 assays(96 samples)检测仪器：紫外-可见光分光光度计（550 nm）使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
用途本试剂盒适用于检测血清、血浆、及动植物组织样本中的NO含量。
检测原理NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO2-，与显色剂生成淡红色偶氮化合物（如下图），生成偶氮化合物的浓度与NO的浓度具有线性关系，通过比色可以间接计算NO的浓度。
试剂一和试剂二的作用，为除去样本有色物质的干扰。
本试剂盒检测组织样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用本公司BCA试剂盒(货号E-BC-K318-M)进行测定。
提供试剂和物品说明：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。
对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。
所需自备物品仪器：紫外-可见光分光光度计（550nm）、涡旋混匀仪、磁力搅拌器、分析天平、微量移液器（1000 μL，200 μL，100 μL，10 μL）、离心机、烧杯（50 mL，25 mL）。
耗材：枪头（1000 μL，200 μL，10 μL）、EP管（5 mL，2 mL）、吸水纸、擦镜纸、磁力搅拌子。
试剂：双蒸水、生理盐水（0.9% NaCl）或PBS（0.01 M，pH 7.4）。
试剂准备①试剂盒中的试剂平衡至室温。
②试剂四工作液：将试剂四加入37.5 mL双蒸水溶解，混匀即可，2-8℃避光保存2个月。
一氧化氮检测试剂盒(化学法)
一氧化氮检测试剂盒（化学法）说明书修订日期：2016.06.22 Cat number：KGT008Store at4℃for for6months,避光For Research Use Only（科研专用）一、实验原理一氧化氮NO(即血管内皮舒张因子)，在生物体内作为一种反应性极强的自由基，兼有第二信使和神经递质作用，同时又是一种效应分子，在体内具有广泛的生理作用，如松弛血管平滑肌，抑制血小板聚集，调节血流，介导细胞毒效应和免疫调节，参与学习和记忆、动脉粥样硬化等作用。
NO本身半衰期极短，血液中的NO主要由血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、巨噬细胞等产生以硝酸盐的形式存在，通过其浓度可以间接测知NO浓度。
NO遇氧及水生成硝酸盐及亚硝酸盐，后二者遇硝酸盐显色剂可生成淡红色偶氮化合物，通过比色可间接测知NO浓度。
二、试剂盒组份组份KGT008（100assays）保存条件Buffer A100mL4℃Buffer B50mL室温或4℃试剂C粉剂一支4℃避光试剂D粉剂一支4℃避光Buffer E12mL室温亚硝酸钠标准液（2mmol/L）1mL4℃注意事项1．试剂C工作液配制：用时加入双蒸水至30mL，4℃避光保存。
（难溶，可以60℃隔水加热至溶解）2．试剂D工作液配制：用时加入双蒸水至12mL，4℃避光保存。
3．显色剂配制：试剂C工作液︰试剂D工作液︰Buffer E＝2.5︰1︰1的体积比配制（现配现用），配好的显色剂放冰箱保存，如颜色变得很深则不可再用。
4.亚硝酸钠标准液（20umol/L）配制：将亚硝酸钠标准液（2mmol/L）用双蒸水100倍稀释待用，现用现配。
三、操作步骤1．操作方法：于一次性塑料试管中按下表加入试剂试剂空白管标准管测定管双蒸水（mL）a﹡20μmoL/L亚硝酸钠标准液（mL）a﹡样本（mL）a﹡Buffer A（mL）0.80.80.8Buffer B（mL）0.40.40.4混匀后室温放置10分钟，3500～4000转/分，离心10分钟，取澄清的上清液上清液（mL）0.80.80.8显色剂（mL）0.40.40.4混匀,15分钟后,550nm比色，0.5cm光径比色杯，水调零，测各管OD值注意事项a﹡为取样量=标准品量=蒸馏水量)/()/20()mol/gprot (L gprot L mol OD OD OD OD NO 待测样本蛋白浓度标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量÷⨯-=μμ样品测试前稀释倍数标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量⨯⨯-=)/20()mol/L (L mol OD OD OD OD NO μμ四、计算1．计算公式血清：组织：2．计算举例(1)兔血清测定管OD 值为0.018，空白管OD 值为0.004，标准管OD 值为0.024。
碧云天生物技术一氧化氮检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号一氧化氮检测试剂盒产品编号 产品名称包装 S0021S 一氧化氮检测试剂盒 500次 S0021M一氧化氮检测试剂盒2500次产品简介：碧云天生产的一氧化氮检测试剂盒采用了经典的Griess Reagent ，并对其测定的溶液体系进行了优化，使检测下限达到1µM ，在1-100µM 范围内有非常完美的线性关系。
检测速度极快，完成一条标准曲线或5-10个样品的测定只需3分钟。
样品范围广，可以检测细胞或组织及其培养液中的一氧化氮的含量，酚红和10%血清均对测定无明显干扰，也可以检测血清、血浆和尿液中一氧化氮的含量。
包装清单：产品编号 产品名称 包装 S0021S-1 1M NaNO 2 1ml S0021S-2 Griess Reagent I 25ml S0021S-3 Griess Reagent II25ml —说明书1份产品编号 产品名称 包装 S0021M-1 1M NaNO 2 1ml S0021M-2 Griess Reagent I 125ml S0021M-3Griess Reagent II125ml —说明书1份保存条件：-20ºC 避光保存，一年有效。
4ºC 避光保存，半年有效。
注意事项：本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
如保存不当导致溶液变色或沉淀，则说明该溶液已经失效，请购买新的试剂盒。
不建议使用RIPA 裂解液对细胞或者组织进行裂解，使用RIPA 裂解液可能在后续反应中产生沉淀，影响测试。
推荐使用碧云天的细胞与组织裂解液(一氧化氮检测用)(S3090)或Western 及IP 细胞裂解液(P0013)。
碧云天一氧化氮合成酶检测试剂盒
一氧化氮合成酶检测试剂盒产品编号产品名称包装S0025 一氧化氮合成酶检测试剂盒 100次产品简介：¾一氧化氮合成酶检测试剂盒(Nitric Oxide Synthase Assay Kit)可以检测活细胞内总的一氧化氮合成酶的活性。
如果和特异性的一氧化氮合成酶抑制剂配合使用，也可以检测不同类型的一氧化氮合成酶的活性。
¾本试剂盒提供了一种在生理条件下通过荧光检测活细胞内一氧化氮合成酶活性的方法，不需要使用传统方法所需的放射性同位素。
本试剂盒采用了可以穿透细胞膜的最新一代一氧化氮荧光检测探针DAF-FM DA (3-amino,4-aminomethyl-2’,7’-difluorescein, diacetate)，在提供充足的底物的条件下检测细胞内的一氧化氮合成酶可以催化产生的一氧化氮量，从而检测出一氧化氮合成酶的活性。
详细的检测原理参考图1。
采用一些一氧化氮合成酶的抑制剂则可以测定出特定类型的一氧化氮合成酶的活性。
例如，采用iNOS抑制剂，未加iNOS抑制剂测定出来的酶活力减去加了iNOS抑制剂测定出来的酶活力就是iNOS的酶活力。
图1. 一氧化氮合成酶检测试剂盒原理图¾本试剂盒是目前为止世界上最先进的一种一氧化氮合成酶检测试剂盒。
和Calbiochem等多年前就开始提供的一氧化氮合成酶检测试剂盒相比无需使用同位素，和Sigma等最近推出的基于荧光的一氧化氮合成酶检测试剂盒相比采用了最新一代的荧光探针，灵敏度更高，特异性更好。
本试剂盒的缺点是和其它荧光法一氧化氮合成酶检测试剂盒一样，仅能提供一氧化氮合成酶的相对活性。
¾本试剂盒和检测细胞内一氧化氮水平的不同之处在于提供了充足的底物L-Arginine和一些可以穿透细胞膜的反应辅助因子，确保一氧化氮合成酶的催化的一氧化氮合成不会受底物的量或辅助因子的量的限制，从而可以测定出细胞内一氧化氮合成酶活力。
¾本试剂盒最适合用于贴壁的细胞或组织的一氧化氮合成酶的检测，对悬浮细胞也可以进行检测。
人一氧化氮NOELISA试剂盒使用方法
人一氧化氮(NO)ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：48T6μmol/L -200μmol/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中一氧化氮(NO)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人一氧化氮(NO)水平。
用纯化的人一氧化氮(NO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮(NO)，再与HRP 标记的一氧化氮(NO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的一氧化氮(NO)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人一氧化氮(NO)浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
碧云天-总一氧化氮检测试剂盒说明书
总一氧化氮检测试剂盒产品简介：总一氧化氮检测试剂盒(Total Nitric Oxide Assay Kit, 即Nitrate/Nitrite Assay Kit)采用了硝酸盐还原酶(Nitrate reductase)还原硝酸盐(nitrate)为亚硝酸盐(nitrite)，然后通过经典的Griess reagent检测亚硝酸盐，从而测定出总一氧化氮。
一氧化氮本身极不稳定，在细胞内很快代谢为硝酸盐(Nitrate)和亚硝酸盐(Nitrite)，通过上述方法检测出硝酸盐和亚硝酸盐的总量，就可以推算出总的一氧化氮的量。
本试剂盒采用了NADPH依赖性硝酸盐还原酶(NADPH dependent nitrate reductase)。
高浓度的NADPH会干扰后续的检测，消除NADPH的一种常用方法就是使用Lactate dehydrogenase (LDH)清除NADPH。
本试剂盒采用了LDH清除NADPH的方法，使检测结果更加准确。
对亚硝酸盐的检测下限达到2微摩尔/升，在2-80微摩尔/升的范围内有很好的线性关系。
浓度过高的样品可以适当稀释后再进行检测。
样品范围广，可以检测细胞裂解液、组织裂解液、细胞或组织的培养液、血清、血浆或尿液等中一氧化氮的含量。
酚红和10%血清对测定无明显干扰。
样品需要量少。
根据样品中一氧化氮的浓度不同，仅需0-60微升样品。
检测速度快，仅需约80分钟即可完成检测。
本试剂盒采用了间接的一氧化氮检测方法，如需检测细胞内实际的一氧化氮水平，可以采用碧云天生产的DAF-FM DA (NO荧光探针)(S0019)。
保存条件：-20℃保存，一年有效。
NADPH，Nitrate Reductase，NaNO2 (1M)，Griess Reagent I 和Griess Reagent II需避光保存。
NADPH配制成溶液后必须分装并-70℃保存。
注意事项：RPMI 1640等含有较高浓度硝酸盐的培养液容易对本试剂盒的检测产生干扰，请尽量避免。
人一氧化氮NOELISA试剂盒使用方法
人一氧化氮(NO)ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：48T6μmol/L -200μmol/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中一氧化氮(NO)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人一氧化氮(NO)水平。
用纯化的人一氧化氮(NO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮(NO)，再与HRP 标记的一氧化氮(NO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的一氧化氮(NO)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人一氧化氮(NO)浓度。
试剂盒组成1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
一氧化氮检测试剂盒(化学法)
一氧化氮检测试剂盒（化学法）说明书修订日期：2016.06.22 Cat number：KGT008Store at4℃for for6months,避光For Research Use Only（科研专用）一、实验原理一氧化氮NO(即血管内皮舒张因子)，在生物体内作为一种反应性极强的自由基，兼有第二信使和神经递质作用，同时又是一种效应分子，在体内具有广泛的生理作用，如松弛血管平滑肌，抑制血小板聚集，调节血流，介导细胞毒效应和免疫调节，参与学习和记忆、动脉粥样硬化等作用。
NO本身半衰期极短，血液中的NO主要由血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、巨噬细胞等产生以硝酸盐的形式存在，通过其浓度可以间接测知NO浓度。
NO遇氧及水生成硝酸盐及亚硝酸盐，后二者遇硝酸盐显色剂可生成淡红色偶氮化合物，通过比色可间接测知NO浓度。
二、试剂盒组份组份KGT008（100assays）保存条件Buffer A100mL4℃Buffer B50mL室温或4℃试剂C粉剂一支4℃避光试剂D粉剂一支4℃避光Buffer E12mL室温亚硝酸钠标准液（2mmol/L）1mL4℃注意事项1．试剂C工作液配制：用时加入双蒸水至30mL，4℃避光保存。
（难溶，可以60℃隔水加热至溶解）2．试剂D工作液配制：用时加入双蒸水至12mL，4℃避光保存。
3．显色剂配制：试剂C工作液︰试剂D工作液︰Buffer E＝2.5︰1︰1的体积比配制（现配现用），配好的显色剂放冰箱保存，如颜色变得很深则不可再用。
4.亚硝酸钠标准液（20umol/L）配制：将亚硝酸钠标准液（2mmol/L）用双蒸水100倍稀释待用，现用现配。
三、操作步骤1．操作方法：于一次性塑料试管中按下表加入试剂试剂空白管标准管测定管双蒸水（mL）a﹡20μmoL/L亚硝酸钠标准液（mL）a﹡样本（mL）a﹡Buffer A（mL）0.80.80.8Buffer B（mL）0.40.40.4混匀后室温放置10分钟，3500～4000转/分，离心10分钟，取澄清的上清液上清液（mL）0.80.80.8显色剂（mL）0.40.40.4混匀,15分钟后,550nm比色，0.5cm光径比色杯，水调零，测各管OD值注意事项a﹡为取样量=标准品量=蒸馏水量)/()/20()mol/gprot (L gprot L mol OD OD OD OD NO 待测样本蛋白浓度标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量÷⨯-=μμ样品测试前稀释倍数标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量⨯⨯-=)/20()mol/L (L mol OD OD OD OD NO μμ四、计算1．计算公式血清：组织：2．计算举例(1)兔血清测定管OD 值为0.018，空白管OD 值为0.004，标准管OD 值为0.024。
人试剂盒说明书人血清一氧化氮NOELISA检测试剂盒
人试剂盒说明书人血清一氧化氮NOELISA检测试剂盒人试剂盒说明书,人血清一氧化氮（NO）ELISA检测试剂盒樊克生物专业供应：使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本血清试验原理：NO试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知NO浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将NO和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中NO的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制自备材料1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法1、血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
碧云天-总一氧化氮检测试剂盒说明书
总一氧化氮检测试剂盒产品简介：总一氧化氮检测试剂盒(Total Nitric Oxide Assay Kit, 即Nitrate/Nitrite Assay Kit)采用了硝酸盐还原酶(Nitrate reductase)还原硝酸盐(nitrate)为亚硝酸盐(nitrite)，然后通过经典的Griess reagent检测亚硝酸盐，从而测定出总一氧化氮。
一氧化氮本身极不稳定，在细胞内很快代谢为硝酸盐(Nitrate)和亚硝酸盐(Nitrite)，通过上述方法检测出硝酸盐和亚硝酸盐的总量，就可以推算出总的一氧化氮的量。
本试剂盒采用了NADPH依赖性硝酸盐还原酶(NADPH dependent nitrate reductase)。
高浓度的NADPH会干扰后续的检测，消除NADPH的一种常用方法就是使用Lactate dehydrogenase (LDH)清除NADPH。
本试剂盒采用了LDH清除NADPH的方法，使检测结果更加准确。
对亚硝酸盐的检测下限达到2微摩尔/升，在2-80微摩尔/升的范围内有很好的线性关系。
浓度过高的样品可以适当稀释后再进行检测。
样品范围广，可以检测细胞裂解液、组织裂解液、细胞或组织的培养液、血清、血浆或尿液等中一氧化氮的含量。
酚红和10%血清对测定无明显干扰。
样品需要量少。
根据样品中一氧化氮的浓度不同，仅需0-60微升样品。
检测速度快，仅需约80分钟即可完成检测。
本试剂盒采用了间接的一氧化氮检测方法，如需检测细胞内实际的一氧化氮水平，可以采用碧云天生产的DAF-FM DA (NO荧光探针)(S0019)。
保存条件：-20℃保存，一年有效。
NADPH，Nitrate Reductase，NaNO2 (1M)，Griess Reagent I 和Griess Reagent II需避光保存。
NADPH配制成溶液后必须分装并-70℃保存。
注意事项：RPMI 1640等含有较高浓度硝酸盐的培养液容易对本试剂盒的检测产生干扰，请尽量避免。
一氧化氮检测试剂盒及检测方法与设计方案
图片简介:本技术阐述了一种一氧化氮检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，R1试剂包括盐酸多巴胺、乙酸和乙酸钠，pH为4.50～5.30；R2试剂包括3甲基2苯并噻唑啉酮腙盐酸盐、叠氮化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、稳定剂和叠氮化钠，pH为7.2～7.5；R1试剂和R2试剂均为液体试剂。
本技术提供的一氧化氮检测试剂盒的R2试剂的采用双缓冲液体系，减弱空气对R2试剂pH值减低作用，从而减少对主导反应的影响，并同时其还能激活主导反应。
技术要求1.一种一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，包括独立包装的R1试剂和R2试剂：所述R1试剂包括以下浓度的组分：盐酸多巴胺50-300mmol/L，ProClin300 1-5ml/L，乙酸50-150mmol/L，乙酸钠40-100mmol/L；所述R2试剂包括以下浓度组分：3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙盐酸盐40-200moml/L，PIPES 200-500mmol/L，磷酸二氢钠168-336mmol/L，磷酸氢二钠32-64mmol/L，稳定剂1-5ml/L，叠氮化钠1-5g/L，其中所述R1试剂的pH为4.50～5.30，所述R2试剂的pH为7.2～7.5。
2.如权利要求1所述的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂还包括以下浓度组分：磷酸氢二钠80-300mmol/L。
3.如权利要求1所述的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂还包括硫酸0.02～0.5mol/L。
4.如权利要求1所述的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂还包括0.5-20g/L的表面活性剂，所述表面活性剂选自Tritox-100、Emulgen A90、Emulgen A60、GENAPOLX-080，吐温-20和吐温-80中的一种。
5.如权利要求1所述的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述稳定剂选自ProClin300、乙二醇、脱氧胆酸钠、胆酸钠、硫磺脱氧胆酸钠、谷氨酸钠、三乙醇胺、聚乙二醇400、木糖醇、甘露醇和山梨醇中的一种。
一氧化氮(NO)含量检测试剂盒.96S
一氧化氮（NO）含量检测试剂盒说明书(货号：NM-W-0132 微量法100T/96S)一、产品简介：一氧化氮（Nitric Oxide，NO）是一种气态分子自由基，在生物体内作为重要的信使分子和效应分子，参与调节血管形成、神经传递、免疫调控及肿瘤生长等多种生理及病理过程。
此外，NO是植物的主要生物活性分子，在植物的生长发育和对胁迫的反应过程中参与了多种生理活动，如种子萌发、叶扩展、根生长、花器官发生、气孔运动的调节以及植物的抗逆反应等。
NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO2-。
在酸性条件下，NO2-与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在550nm处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算NO含量。
酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、超声细胞破碎仪、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、冰和蒸馏水。
四、操作步骤：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、预实验样本制备℃ 组织样本：称取0.2g样本，加入1mL提取液进行冰浴匀浆后，10000g，4℃离心15min，取上清置于冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为2~5：10的比例进行提取。
℃ 细菌/细胞样本：建议1000万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔7s，总时间5min），10000g，4℃离心15min，取上清置于冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为1000~2000：1的比例进行提取。
℃ 血清（浆）等液体样本：直接测定。
若液体有浑浊则离心取上清测定。
2、标准溶液的配制：把10μmol/mL标准品母液用蒸馏水稀释成1.25μmol/mL的标准溶3、预实验上机操作：℃ 酶标仪预热30min以上，调节波长至550nm。
4、正式实验：℃ 若预实验∆A 测定小于0.005，可以增加样本量后再进行测定；如果∆A测定大于1.5，建议将样本上清用稀释液适当稀释后再进行测定，并将改变后的W和D代入公式计算；℃ 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；℃ 正式实验按照预实验操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。
测定试剂盒(测总NOS)
一氧化氮合酶一氧化氮合酶（（NOS ）测定试剂盒测定试剂盒（（测总NOS ）说明书修订日期说明书修订日期：：2015.07.13 Cat number ：KGT020-1/KGT020-2 Store at -20 for for ℃ 3 months For Research Use Only （科研专用）一、实验原理NOS 催化L －Arg 和分子氧反应生成NO ，NO 与亲核性物质生成有色化合物，在530nm 波长下测定吸光度，根据吸光度的大小可计算出NOS 活力。
二、试剂盒组份组份KGT020-1 25TKGT020-2 50T 保存条件Buffer A 6.0 mL 6.0 mL*2 －20℃ 试剂 B 粉剂*2 粉剂*3 －20℃ 试剂 B 稀释液 0.6ml*2 0.6ml*3 －20℃ Buffer C 3.0 mL 6.0 mL 4℃避光 Buffer D 3.0 mL 6.0 mL 室温 Buffer E60 mL60 mL*24℃注意事项1. Buffer A ： 底物缓冲液6ml×2瓶，－20℃以下避光冷冻保存3个月。
临用前化冻摇匀。
没有用完的试剂，可以－20℃以下避光冷冻保存以备下次再用。
2. 试剂B 工作液：促进剂淡黄色或白色粉剂×3支，稀释液0.6ml×3支。
-20℃以下冷冻保存6个月。
测试前取试剂 B 稀释液一支0.6ml 加入一支粉剂中充分混匀（即将1.5ml 小离心管反复颠倒，并将小离心管尖部的液体弹下来），测试后剩余的试剂可放入－20℃以下冷冻保存，时间不超过一周。
若发现粉剂变成黄褐色或咖啡色，则不可再用。
3. Buffer C ：黄色显色剂6ml×1瓶，4℃避光冷藏保存3个月。
4. Buffer D ：透明剂6ml×1瓶，室温保存6个月。
天冷后会凝固，待37℃水浴变澄清时再使用。
5. Buffer E ：终止剂60ml×2瓶，4℃保存6个月。
一氧化氮检测试剂盒原理
一氧化氮检测试剂盒原理一氧化氮检测试剂盒是一种基于化学反应的检测方法。
该方法利用了一氧化氮与二氧化氮（Nitrogen Dioxide, NO2）在碱性条件下的反应，通过测量反应产生的颜色变化来间接检测一氧化氮的含量。
一氧化氮检测试剂盒通常包含两种关键试剂：Griess试剂和还原剂。
Griess试剂是一种含有硫酸铁铵和磷酸的溶液，它可以与反应中产生的亚硝酸盐（Nitrite）反应生成深紫色的染料。
还原剂是一种强还原剂，如氢氨基钠（Hydroxylamine hydrochloride），它的作用是将一氧化氮和二氧化氮还原为亚硝酸盐。
一氧化氮检测试剂盒的操作步骤通常如下：1. 准备样品：收集待测样品，并将其加入试剂盒中。
2. 加入试剂：加入Griess试剂和还原剂，使样品中的一氧化氮与还原剂发生反应。
3. 反应发生：在碱性条件下，一氧化氮与还原剂反应生成亚硝酸盐。
4. 颜色变化：亚硝酸盐与Griess试剂反应生成深紫色的染料，产生颜色变化。
5. 测量光密度：使用光度计或分光光度计测量反应产物的光密度，光密度与一氧化氮的含量成正比。
6. 计算浓度：通过与已知一氧化氮浓度的标准品比较，计算待测样品中一氧化氮的浓度。
一氧化氮检测试剂盒的原理是基于一氧化氮与还原剂在碱性条件下的反应，通过测量反应产生的染料的光密度来间接检测一氧化氮的含量。
这种检测方法具有灵敏度高、操作简便、结果准确等优点，被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。
总结起来，一氧化氮检测试剂盒利用一氧化氮与还原剂在碱性条件下的反应，通过测量反应产生的染料的光密度来间接检测一氧化氮的含量。
该方法操作简便、结果准确，被广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。
通过对一氧化氮的检测，可以更好地了解其在生物体内的功能和调节作用，为相关研究和治疗提供重要的参考依据。
一氧化氮检测试剂盒及检测方法与设计方案
一氧化氮检测试剂盒及检测方法与设计方案一氧化氮（NO）是一种重要的生物活性分子，在许多生理和病理过程中发挥重要作用。
因此，开发一种简单快速、灵敏准确的一氧化氮检测试剂盒及相应的检测方法和设计方案具有重要的意义。
以下将详细介绍一氧化氮检测试剂盒及相应的设计方案。
首先，对于试剂的选择，应选取具有高度灵敏性和特异性的试剂。
一氧化氮的浓度通常很低，因此需要使用高灵敏度的化学试剂来检测其浓度。
一种常用的试剂是Griess试剂，该试剂与一氧化氮反应生成可检测的化合物。
此外，还有一些基于荧光和发光技术的试剂可用于一氧化氮的检测。
其次，在实验步骤方面，应设计简单可行的实验步骤来进行一氧化氮的检测。
一种常用的实验步骤是将待测样品和试剂混合，并在一定的温度和时间条件下反应，然后通过光谱测定试剂与一氧化氮反应产生的化合物的吸光度或荧光强度。
实验步骤应尽可能简单明了，以提高实验的可重复性和稳定性。
在检测原理方面，应该基于一氧化氮的化学性质和检测方法的原理来设计。
一氧化氮是一种高活性的气体，其荧光、发光、吸光度或电化学性质可用于检测。
例如，荧光性染料可以与一氧化氮反应生成荧光产物，通过测定荧光的强度来分析一氧化氮的浓度。
另一种常用的方法是通过光谱测定试剂与一氧化氮反应产生的化合物的吸光度。
此外，还可以使用电化学方法来检测一氧化氮的浓度。
最后，在数据分析方面，应使用合适的统计方法来处理实验数据，计算并分析一氧化氮的浓度。
如果设计了标准曲线，可以根据标准曲线来计算样品中一氧化氮的浓度。
此外，对于复杂的样品或实验结果，可以使用统计学方法进行数据分析和解释。
总结起来，设计一氧化氮检测试剂盒及相应的检测方法和设计方案应包括试剂的选择、实验步骤、检测原理以及数据分析等方面。
通过合理的设计，可以开发出简单快速、灵敏准确的一氧化氮检测方法，为一氧化氮的检测提供重要的工具和技术支持。
人血清一氧化氮(NO)ELISA试剂盒试验方法
人血清一氧化氮（NO）ELISA试剂盒试验方法人血清一氧化氮（NO）ELISA试剂盒（用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内），仅供科研使用，不得用于临床！原理本试验采用双抗体夹心ABCELISA法。
用抗人NO单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的NO与单抗结合，加入生物素化的抗人NO，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最终加停止液硫酸，在450nm处测OD值，NO浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中NO浓度。
试剂盒构成（28℃保管）酶标板（CoatedWells） 96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate） 12ml 10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml 20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：1000μM/瓶 2瓶底物工作液（TMBSolution） 12ml 第一抗体工作液（BiotinylatedAntibody） 12ml 停止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（EDTA）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，28℃保管48小时；更长时间须冷冻（20℃或70℃）保管，避开反复冻融。
2.标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，配成1000μM的溶液。
设标准管8管，第一管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。
在第一管中加入1000μM的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。
如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。
第八管为空白对照。
3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液 9ml蒸馏水）。
4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
人(Human)一氧化氮(NO)ELISA试剂盒说明书
Assay procedure
1. Prepare all r e a g e n t s before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate. 2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well. 3. Add Sample: Add testing sample 10μl then add Sample Diluent 40μl to testing
Note: The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or
spectrophotometer. In order to measure the concentration of NO in the sample, this
Sample collection and storages
Serum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes
before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and
granule was allowed.
NO ELISA Kit includes a set of calibration standards. The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus NO concentration. The concentration of NO in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.
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总一氧化氮检测试剂盒
产品名称 总一氧化氮检测试剂盒
包装 200次
产品简介：
总一氧化氮检测试剂盒(Total Nitric Oxide Assay Kit, 即Nitrate/Nitrite Assay Kit)采用了硝酸盐还原酶(Nitrate reductase)还原 硝酸盐(nitrate)为亚硝酸盐(nitrite)，然后通过经典的Griess reagent检测亚硝酸盐，从而测定出总一氧化氮。一氧化氮本身 极不稳定，在细胞内很快代谢为硝酸盐(Nitrate)和亚硝酸盐(Nitrite)，通过上述方法检测出所有的硝酸盐和亚硝酸盐的量， 就可以推算出总的一氧化氮的量。
50微升
50微升
50微升
混匀后，室温(20-30℃)孵育10分钟后测定A540
注意事项： a. 反应必须避光进行。如果使用96孔板进行检测，可以使用铝箔纸包裹96孔板进行避光。 b. 样品的用量上限为60微升，血清、血浆或组织匀浆液通常使用40微升就已经足够。样品不足60微升时，不同样品之
间的体积最好能保持一致，体积不足的部分用样品稀释液补足。标准品可以参考上表直接使用60微升。 c. 可以同时设置加入200微升水或PBS的2-3个孔为阴性对照，这2-3个孔仅仅加入水或PBS，不再加入任何其他试剂。 d. 第一部分37℃孵育15分钟，或室温(20-30℃)孵育40分钟后，直接参考上表依次加入LDH Buffer和LDH，并进行后续
(NO荧光探针)(S0019)。
包装清单：
产品编号 S0024-1 S0024-2 S0024-3 S0024-4 S0024-5 S0024-6 S0024-7 S0024-8 S0024-9
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产品名称 样品稀释液
NADPH FAD
Nitrate Reductase LDH Buffer LDH
KNO2 (10mM) Griess Reagent I Griess Reagent II
对亚硝酸盐的检测下限达到2微摩尔/升，在2-50微摩尔/升的范围内有很好的线性关系。浓度过高的样品可以适当稀释后 再进行检测。
样品范围广，可以检测细胞、组织、细胞或组织的培养液、血清、血浆或尿液等中一氧化氮的含量。酚红和10%血清对 测定无明显干扰。
样品需要量少。根据样品中一氧化氮的浓度不同，仅需0-60微升样品。 检测速度快，仅需约45分钟即可完成检测。 本试剂盒采用了间接的一氧化氮检测方法，如需检测细胞内实际的一氧化氮水平，可以采用碧云天生产的DAF-FM DA
在使用RPMI 1640培养液时会发生这种情况。因为RPMI 1640培养液中含有高浓度的硝酸盐从而会使空白对照和样品检测 出来的吸光度都非常高。其他含有高浓度硝酸盐的试剂也会产生类似情况，影响氧化还原反应的试剂也可能产生类似干扰。使
用过程中避免使用RPMI 1640等可能导致干扰检测的试剂即可。
注意事项：
RPMI 1640等含有较高浓度硝酸盐的培养液容易对本试剂盒的检测产生干扰，请尽量避免。必需使用RPMI 1640培养液 时，在检测一氧化氮前必需先换成其他适当培养液例如DMEM、MEM、F12等，或换成HBSS或PBS等。
检测反应必须避光进行。 由于检测过程中有还原反应，凡是影响还原反应的氧化或还原试剂要注意避免，例如常用的还原剂DTT和巯基乙醇。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
c. Nitrate reductase在临用前取出，试剂盒中的其余各种试剂在溶解后保存在冰浴上。Griess Reagent I和Griess Reagent II
在使用前需达到室温。
d. 首次使用时把Nitrate Reductase和LDH分别适当分装，暂时不使用的可以-20℃冻存，最好能-70℃冻存。反复冻融会导
是：(1) 加大样品和标准品的使用量至60微升，其余试剂用量不变。(2) 把整个检测体系每种试剂的用量加大50%，这样可以使 检测灵敏度增加约50%。如果上述方法还不能解决问题，可以考虑浓缩样品，即一方面在收集样品的时候尽量使一氧化氮的浓 度保持得较高(例如裂解细胞时采用较小体积的裂解液)，另一方面可以考虑用真空干燥或真空冷冻干燥的方法浓缩样品。对于 培养的细胞，通常上清液测定出来的吸光度相对较低，而细胞裂解液测定出来的吸光度会稍高一些。 2． 检测时发现空白对照和每个样品的吸光度都非常高。
孵育。 e. 第二部分37℃孵育5分钟，或室温(20-30℃)孵育20分钟后，直接参考上表依次加入Griess Reagent I和Griess Reagent
II。加入Griess Reagent I后需要轻轻混匀。 f. 每次混匀后，可以1000-3000g离心数秒，把液体沉淀到管底。 g. 检测时，如无540nm滤光片，520-560nm的滤光片也可以使用。如无酶标仪或合适的滤光片，也可以通过目测比色或
4. Ling Y, Ye X, Ji H, Zhang Y, Lai Y, Peng S, Tian J. Synthesis and evaluation of nitric oxide-releasing derivatives of farnesylthiosalicylic acid as anti-tumor agents. Bioorg Med Chem. 2010 ;18(10):3448-56. Epub 2010 Apr 3.
本试剂盒采用了NADPH依赖性硝酸盐还原酶(NADPH depedent nitrate reductase)。高浓度的NADPH会干扰后续的检测，消 除NADPH的一种常用方法就是使用Lactate dehydrogenase (LDH)清除NADPH。本试剂盒采用了LDH清除NADPH的方法， 使检测结果更加准确。
数码相机拍照后在适当图形软件中进行定量分析，并确定样品中一氧化氮的浓度。目测比色或拍照比色时标准品需 要更为精细的浓度梯度。 5. 根据标准品曲线计算出样品中一氧化氮的浓度。
常见问题：
1． 检测结果标准曲线良好，但样品的吸光度很低，和空白对照接近。 标准曲线良好说明检测方法和检测试剂盒基本上没有问题，样品吸光度低说明样品中一氧化氮含量很低。可以采取的办法
标准品。
3. 试剂的准备：
a. 加约1ml蒸馏水或MilliQ级纯水至5mg NADPH中，颠倒混匀溶解后，再用蒸馏水或MilliQ级纯水定容至3ml，配制成
2mM NADPH，除立即使用的部分外，其余NADPH溶液必须立即分装后-70℃冻存。
b. FAD已经配制在Nitrate Reductase检测缓冲液中。FAD可以适当分装后-20℃或-70℃保存。
使用本产品的文献：
1. Wang M, Zhao XR, Wang P, Li L, Dai Y, Huang H, Lei P, Zhu HF, Shen GX. Glucose regulated proteins 78 protects insulinoma cells (NIT-1) from death induced by streptozotocin, cytokines or cytotoxic T lymphocytes. Int J Biochem Cell Biol. 2007;39(11):2076-82. Epub 2007 Jun 8.
使用说明：
1. 样品处理： 含有高浓度蛋白的样品例如血清、含有高浓度血清的细胞培养液，在加入Griess Reagent I后可能会产生沉淀。可以取50微 升样品，加入50微升Greiss Reagent I进行测试，观察是否产生沉淀。如果产生沉淀，则可以把样品沸水浴加热5分钟，以 变性蛋白，然后12,000g离心5分钟，取上清用于后续的测定。对于细胞或组织样品可以用碧云天生产的RIPA裂解液
5. Zhang XP, Xiong JY, Jiao YX, Wang G, Zuo ZY. Involvement of mitochondrial ATP-sensitive potassium channels in etomidate preconditioning-induced protection in human myeloid HL-60 cells. Environmental Toxicology and Pharmacology. 29 (2010) 320–322.
说明书
包装 15ml 5mg 1.1ml X2 1ml 1.1ml X2 1ml X2 1ml 12ml 12ml 1份
保存条件：
-20℃保存，一年有效。NADPH，Nitrate Reductase，Griess Reagent I 和Griess Reagent II需避光保存。NADPH配制成溶液 后必须分装并-70℃保存。
5微升
5微升
5微升
混匀后，37℃孵育15分钟，或室温(20-30℃)孵育40分钟
LDH Buffer
10微升
10微升
10微升
LDH
10微升，37℃孵育5分钟，或室温(20-30℃)孵育20分钟
Griess Reagent I
50微升
50微升
50微升
Griess Reagent II
致Nitrate Reductase和LDH酶活力的逐渐下降。
4. 参考下表依次加入标准品、样品和检测试剂并进行相应检测：
空白对照
标准品
样品
标准品
－
60微升
－
样品
－
－
x微升
样品稀释液
60微升
－
(60-x) 微升
NADPH (2mM)
5微升
5微升
5微升
FAD
10微升
10微升
10微升
Nitrate Reductase
(弱)(P0013D)或Western及IP细胞裂解液(P0013)进行裂解。对于尿液样品，通常需要用水稀释10-50倍后检测。不宜使用肝