实验5 血清三酰甘油测定

CHO2 CR3
CH2O-H R3-COOH
三酰甘油 水
甘油 脂肪酸
抽提
血清三酰甘油的测定
三、实验原理
上层液0.4ml
三酰甘油 甘油磷脂
正庚烷 异丙醇-水
血清三酰甘油的测定
皂化 氧化 显色
+ KOH 65℃ 3
5 min
三酰甘油
脂肪酸钾
甘油
甘油
HIO4 2
+
OH
甲醛
甲酸
+
甲醛
乙酰丙酮
NH4+ 15 min
血清三酰甘油 的测定
生物化学与分子生物学学科
一、实验目的
血清三酰甘油的测定
1.掌握血清三酰甘油的测定的 基本原理和方法。
2.了解血清三酰甘油的测定的 临床意义。
血清三酰甘油的测定
二、器材和试剂
1.器材 试管及试管架、混匀器、恒温水浴箱、微 量加样器、吸量管、吸耳球、可见光分光光度计 、比色杯、记号笔。
2.试剂 (1)新鲜血清 (2)抽提剂为正庚烷—异丙醇(2∶3.5)(V／V) (3)40mmol/L H2SO4溶液 (4)异丙醇 (5)皂化剂 (6)氧化剂 (7)乙酰丙酮 (8)1.1mmol/L三油酸甘油酯标准液
三、实验原理
血脂
甘 FA
甘油三酯(TG) 油 FA
FA
FA = Fat Acid
甘油磷脂 (PL) 甘 FA
X = 胆碱
油
FA Pi O-X
乙醇胺 丝氨酸 肌醇等
胆固醇酯(CE)
胆固醇 FA
三、实验原理ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
O
O
CH2 O C R1
R2 C O CH
O
CH2 O P X
OH
甘油磷脂
O
O CHO2 CR1
CH2O-H R1-COOH
R2COCH O + 3H2O 脂肪酶或酸 HOCH + R2-COOH
结果计算：
标准管TG浓度：1.1mmol/L
C测=A测/A标 ×C标
血清三酰甘油 （mmol/L）
测定管光密度
＝
×1.1
标准管光密度
正常值=0.22～1.21mmol/L
五、注 意 事 项
抽提时摇匀静置，待完全分层后才能吸取上层液， 吸取上层液时不能吸入下层液；
选用小试管时试管可用离心试管；
试管使用时必须要干燥； 实验完成后，试管和比色杯必须用皂粉洗干净， 不能有油污，将水甩干，倒置晾干； 枪头必须清洗干净，甩干。
0.6
0.6
0.6
皂化 吸取上层液体0.3-0.5ml，加入对应的3 只大试管（三管液量相等）， 再加异丙醇2ml及皂化剂0.4ml，立即摇匀，于65℃保温5min
氧化显色 各管加入氧化剂2ml充分混匀后，加入乙酰丙酮试剂2ml，摇匀，
65℃水浴15min
比色 取出试管，流水/室温冷却，测420nm的吸光度
3,5-二乙酰-1,4二氢-2,6 二甲基吡啶 （黄色带荧光）
四、实验步骤
抽提 取3支小试管，按下表操作，边加边摇，混匀器振摇10min， 静置分层 。
试剂
空白管
标准管
测定管
血清（ml）
—
—
0.2
标准液（ml）
—
0.2
—
蒸馏水（ml）
0.2
—
—
抽提剂（ml）
2
2
2
40mmol/LH2SO4(ml)