磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯

磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯(Triglyceride,TG)

一、实验目的

测定血清中的甘油三酯含量，为临床诊断疾病提供依据。

二、实验原理

血清中甘油三酯经脂蛋白脂酶（LPL）作用，可水解为甘油和游离脂肪酸(FFA)，甘油在ATP和甘油激酶(GK)的作用下生成3-磷酸甘油，再经磷酸甘油氧化酶作用生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢，过氧化氢与4-氨基安替比林（4-APP）和4-氯酚在过氧化物酶（POD）作用下，生成红色醌类化合物，其显色程度与TG的浓度成正比。

三、试剂

1.甘油三酯液体稳定酶试剂

GOODs缓冲液（PH=7.2） 50 mmol/L

脂蛋白脂酶≥4000 U/L

甘油激酶≥40 U/L

磷酸甘油氧化酶≥500 U/L

过氧化物酶≥2000 U/L

ATP 2.0 mmol/L

硫酸镁 15 mmol/L

4-AAP 0.4 mmol/L

4-氯酚 4.0 mmol/L

2.三油酸甘油酯标准液 2.26 mmol/L（200mg/dl）

准确称取三油酸甘油酯（平均分子量：885.4）200mg加

Triton X-100 5ml，用蒸馏水定容至100ml，分装后，4℃

保存。

四、实验步骤

1.取三支试管按下表操作

加入物空白管（B）标准管(S)

测定管(U)

血清（μl）——

10

标准液（μl）— 10 —

蒸馏水（μl）10 —

—

酶试剂（μl） 1000 1000 1000

混匀置37度水浴保温5分钟，以空白管调零，在波长500nm处测各管的吸光度。

五、计算

血清TG(mmol/L)=A

测定管/A

标准管

×标准液浓度

六、参考范围

正常成人血清TG为0.55~1.70 mmol/L；

临界阈值：2.30 mmol/L；

危险阈值：4.50 mmol/L。

七、临床意义

1.血清TG增高常见于家族性脂类代谢紊乱、肾病综合征、糖尿病、甲状腺功能减退、急性胰腺炎、糖原积累病、胆道梗阻、原发性甘油三酯增高症、动脉粥样硬化等。

2.血清TG降低见于慢性阻塞性肺疾患、脑梗死、甲状腺功能亢进、营养不良和消化吸收不良综合征等。

八、注意事项

1.实验中所用酶试剂应在4℃避光保存，出现红色时不能

再用，试剂空白的

吸光度应 0.05 。

2.血清TG易受饮食的影响，在进食脂肪后可以观察到血清中的甘油三酯明显上升，2-4小时内即可出现血清浑浊，8小时以后接近空腹水平。因此，要求空腹12小时后再进行采血，并要求72小时内不饮酒，否则会使检测结果偏高。

3.本实验方法的线性上限为11.3 mmol/L ，若所测TG值超过了11.0 mmol/L，则可用生理盐水稀释后再测。

4.实验中没有进行抽提和吸附，所以血清中游离的甘油对TG测定结果有一定的影响。

5.三油酸甘油酯标准液配好后切勿冷冻保存。

九、选择原因

本实验的一步终点法，具有简便、快速、微量且试剂较稳定等优点，适用于手工和自动化测定；其主要缺点是所测TG 值包括了血清中游离的甘油。为了除去FG的干扰，常用的方法有外空白法和内空白法两种:

1.外空白法即同时使用不含LPL的酶试剂测定FG作空白值，此法需作双份测定，使成本加倍，但是可同时得到血清中FG数据；

2.内空白法又称为两步法或双试剂法，将酶试剂分作两部分，其中LPL和4-AAP组成试剂Ⅱ，其余部分为试剂Ⅰ，血清先加试剂Ⅰ，37℃孵育后，因无LPL存在，TG不被水解，FG在GK和GPO的作用下反应生成H2O2，但因不含4-AAP，不能完成显色反应，故可除去FG的干扰；再加入试剂Ⅱ，即可测出TG水解生成的甘油。内空白法虽然增加了操作步骤，但不增加试剂成本，且排除FG干扰效果好，预孵育5 min 即可排除4 mmol/L FG的干扰。本法线性范围在11.4mmol/L 以内，精密度为：批内CV≤3%、批间CV≤5%。加入不同浓度TG，平均回收率98.6%，加入甘油的平均回收率10

3.6%。

与乙酰丙酮法比较：y＝0.996x－4.2，r＝0.9996。

因为LPL除水解TG外，亦能水解甘油一酯和甘油二酯(血清中这二者的浓度约占TG的3%)，所以本法测定结果包含了后二者的值。