黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒说明书 微量法
Elabscience黄嘌呤氧化酶比色法测试盒说明书
（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）Elabscience®黄嘌呤氧化酶（XOD）比色法测试盒Xanthine Oxidase (XOD) Activity Assay Kit产品货号：E-BC-K805-M产品规格：48T(32 samples)/96T(80 samples)检测仪器：酶标仪(540-560 nm)使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
用途本试剂盒适用于检测血清、血浆及动物组织样本中的黄嘌呤氧化酶的活力。
检测原理黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase, XOD)主要存在于哺乳动物的乳汁及肝脾中，属需氧脱氢酶类，是体内核酸代谢中的重要酶。
在肝细胞损伤时，此酶早于SGPT释放于血清中，并且升高明显，其对鉴别肝细胞性黄疸及阻塞性黄疸有明显的测定意义，在缺氧过程中黄嘌呤脱氢酶很快形成黄嘌呤氧化酶，黄嘌呤氧化酶对自由基的产生起了重要作用。
XOD可催化次黄嘌呤生成黄嘌呤，与此同时产生超氧阴离子自由基，当有电子受体及显色剂存在的情况下，生成紫红色结合物，根据后者生成量的多少可以推算出XOD的活力。
本试剂盒检测组织样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用BCA法。
(货号：E-BC-K318-M)。
提供试剂和物品说明：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。
对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。
所需自备物品仪器：酶标仪(540-560 nm，最佳检测波长550 nm)、37o C恒温箱试剂：双蒸水，生理盐水(0.9 %NaCl)试剂准备①检测前，试剂盒中的试剂平衡至室温。
②显色剂工作液的配制：将试剂四:试剂五按体积比= 1:1配制，现配现用，按需配制，避光待用，配好的显色剂显色剂工作液1 h用完。
黄嘌呤氧化酶-细胞色素法
黄嘌呤氧化酶-细胞色素法【摘要】黄嘌呤氧化酶-细胞色素法是一种重要的生物分析方法，本文从概述和历史出发，详细介绍了其原理、应用领域、优势和局限性，以及在生物医学和食品安全领域的具体应用。
结论部分分析了未来发展方向和总结了其重要性。
黄嘌呤氧化酶-细胞色素法在生物医学领域的应用能够为疾病诊断提供重要数据支持，在食品安全领域的应用则能够确保食品质量和消费者健康。
未来，该方法有望进一步改进和拓展应用领域，体现出重要的研究和发展价值。
通过本文对黄嘌呤氧化酶-细胞色素法的全面介绍和分析，读者对该方法的原理和应用有了更深入的了解，也为未来研究提供了重要的参考和指导。
【关键词】黄嘌呤氧化酶-细胞色素法, 引言, 发展历史, 原理, 应用领域, 优势, 局限性, 生物医学, 食品安全, 结论, 未来发展方向, 重要性.1. 引言1.1 黄嘌呤氧化酶-细胞色素法概述黄嘌呤氧化酶-细胞色素法是一种利用黄嘌呤氧化酶（XOD）和细胞色素C的生物酶法检测技术。
该方法通过检测黄嘌呤氧化酶在氧化黄嘌呤时释放氧化还原酶，进而产生氧化还原反应，从而实现对特定物质的测定。
黄嘌呤氧化酶-细胞色素法具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点，被广泛应用于生物医学和食品安全领域的检测工作中。
该方法在检测生物标本中的葡萄糖、尿酸等物质方面具有重要意义，可以帮助医生诊断疾病，保障食品安全。
随着科学技术的不断发展，黄嘌呤氧化酶-细胞色素法在生物医学和食品安全领域的应用前景十分广阔，将对医学诊断、食品安全检测等领域发挥重要作用。
1.2 黄嘌呤氧化酶-细胞色素法的发展历史黄嘌呤氧化酶-细胞色素法的发展历史可以追溯到20世纪中叶。
最初，科学家们发现黄嘌呤氧化酶可以被用于测定血清总胆固醇，具有很高的灵敏度和准确性，成为一种重要的生化分析方法。
随着科学技术的不断发展，黄嘌呤氧化酶-细胞色素法在生物医学和食品安全领域得到了广泛的应用。
在此过程中，科学家们不断改进和完善黄嘌呤氧化酶-细胞色素法的原理和技术，使其在不同领域发挥出更大的作用。
漆酶活性检测试剂盒说明书 微量法
漆酶活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1635规格：100T/96S产品内容：提取液：液体110mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×2瓶，4℃避光保存。
产品说明：漆酶（CE1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，漆酶存在菇、菌及植物中，是一种环保型酶，其独特的催化性质在生物检测中有广泛的应用。
漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、天平、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水，水浴锅。
操作步骤：一、粗酶液提取：（1）组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
10000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
（2）细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。
（3）培养液：直接检测。
二、测定步骤：1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至420nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、水浴锅温度调至45℃。
3、工作液的配制：一瓶试剂二用10mL试剂一溶解。
现用现配。
4、操作表：在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入下列试剂：样本名称测定管空白管样本（μL）30蒸馏水（μL）-30工作液（μL）170170在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入上述试剂，充分混匀后于420nm处测定10s时的吸光值A1，迅速置于45℃水浴3min（酶标仪有控温功能的可以将温度调至45℃），拿出迅速擦干测定190s时的吸光值A2，计算△A测定管=A2测定-A1测定，△A空白管=A2空白-A1空白，△A=△A测定管-△A空白管。
黄嘌呤氧化酶法测定抗氧化能力
黄嘌呤氧化酶法测定抗氧化能力集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）发酵过程产物形成的测定(SOD活性的测定)一、实验目的1、了解SOD活性测定的原理2、学习黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性二、实验原理原理：黄嘌呤氧化酶催化黄嘌呤产生超氧阴离子自由基，后者氧化羟胺成亚硝酸盐，亚硝酸盐在对氨基苯磺酸与甲萘胺作用下呈现紫红色，用可见光分光光度计测其吸光度。
当被测样品中含SOD时，则对超氧阴离子自由基有专一性抑止作用，使可形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于空白管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品中SOD 的活力。
操作步骤：如表2-1。
三、实验试剂硫酸盐缓冲液，盐酸羟胺，黄嘌呤，黄嘌呤氧化酶，醋酸等。
四、实验步骤试剂测定管对照管0.550.5575mmol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.8）待测样品（ml）A(取样量)00.1mol/L 盐酸羟胺溶液0.050.0575mmol/L 黄嘌呤溶液0.050.050.037U/L 黄嘌呤氧化酶0.050.05双蒸水0.2－A0.2用漩涡振荡器充分混匀，置37℃恒温水浴30min。
显色剂（ml）11总体积1.9ml ，混匀，室温放置10min ，蒸馏水调零，测A530五、计算方法计算公式：每毫升反应液中SOD 抑止率达50％时对应的SOD 量为一个SOD 活力单位（U ），待测样品中的SOD 活力由下式计算：SOD 抑制率（％）＝（A2-A1）/A2×100%SOD 活力（U/ml ）＝（A2-A1）/A2×100%÷50％×反应体系的稀释倍数×样本测试前的稀释倍数 式中：A1:测定管的吸光值；A2:空白管的吸光值 六、注意事项：1.试管要洗干净，在测定微量样品时尤为重要。
2.要做空白管，并且放在所有测试管的中间做，取平均值。
常用试剂（1）诱导剂：分别配制 IPTG 100μmol/mL ； CuSO 4·5H 2O 250μm/mL ； ZnSO 4 100μm/mL 。
NADH氧化酶(NOX)活性检测试剂盒说明书 微量法
NADH氧化酶（NOX）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC0635规格：100T/48S产品内容：试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体1mL×1瓶，-20℃保存。
试剂四：液体35mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保存。
试剂六：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入4.5mL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存。
产品说明：NOX（EC1.6.99.3）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可在氧气存在下，直接将NADH氧化为NAD。
该酶不仅参与NAD的再生，而且与免疫反应密切相关。
NOX能够将NADH氧化为NAD，NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝（DCPIP）的还原相偶联，蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP，在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水操作步骤：一、样品测定的准备：1、组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：2、准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
3、将匀浆600g，4℃离心5min。
4、将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
5、将上清液转移至另一EP管中，用于线粒体中泄露NOX活性测定。
6、沉淀即为线粒体，加入200uL试剂二和2uL试剂三，用于NOX活性测定。
7、NOX总酶活即为上清中NOX活性与沉淀中NOX活性之和。
二、测定步骤和加样表：1、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至600nm，蒸馏水调零。
2、试剂四37℃保温放置。
试剂名称（µL）测定管对照管试剂四175175试剂五2525样本1010蒸馏水40试剂六40-将上述试剂按顺序在微量玻璃比色皿/96孔板中操作，加入试剂六后立即混匀，同时开始计时，在600nm 波长下记录20秒时的初始吸光度A1，迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃水浴中，准确反应1分钟。
黄嘌呤氧化酶活性分析试剂盒，究竟有何作用？
黄嘌呤氧化酶活性分析试剂盒，究竟有何作用？
别误会！这里说的XO可不是洋酒XO，而是黄嘌呤氧化酶(EC 1.2.3.2，XanthineOxidase，缩写为XO，或XOD)，是一种专一性不高，既能催化次黄嘌呤生成黄嘌呤，进而生成尿酸，又能直接催化黄嘌呤生成尿酸的酶。
最早发现存在于牛乳、动物肝脏与肾脏中。
当黄嘌呤氧化酶活性异常增高的时候，生成大量尿酸。
但尿酸在体液中溶解度有限，当体液中浓度超过其饱和浓度时，易在组织中析出结晶，就形成了高尿酸症和痛风。
另有研究表明，黄嘌呤氧化酶活性影响2型糖尿病风险，且与高尿酸血症、糖代谢异常和血栓形成状态有关联。
同时，血清XO水平的测定可作为急性肝损伤的敏感指标，例如黄疸。
我比较推荐Abbkine检测试剂盒：CheKine™ Xanthine Oxidase Assay Kit CheKine™ 黄嘌呤氧化酶（XO）活性分析试剂盒 KTB1070 在该实验中，XO将黄嘌呤氧化成超氧化物（O2-）。
超氧化物（O2-）与四唑盐WST-8染料反应形成水溶性有色产物，其可在
OD450nm下被定量。
因此，样品中存在的黄嘌呤氧化酶活性与获得的信号成比例。
特点：
· 测定血清，血浆，组织/细胞裂解物和其他生物体液中的黄嘌呤氧化酶活性。
· 广泛的检测范围：15.6 -500 mU/mL。
结果展示：
需要注意的是：
§ 开盖前，以低速简单地离心。
§ 如果未立即检测，样品可以在-80°C下储存。
超氧化物歧化酶测定方法 黄嘌呤氧化酶
超氧化物歧化酶测定方法黄嘌呤氧化酶摘要：一、引言二、超氧化物歧化酶简介1.定义与作用2.分布与生理功能三、黄嘌呤氧化酶简介1.定义与作用2.与超氧化物歧化酶的关系四、超氧化物歧化酶测定方法1.比色法2.化学发光法3.酶联免疫吸附法五、黄嘌呤氧化酶测定方法1.比色法2.酶联免疫吸附法3.高效液相色谱法六、应用与意义1.在疾病诊断中的应用2.在科研与生产中的应用七、总结正文：一、引言超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）和黄嘌呤氧化酶（Xanthine oxidase，XOD）是生物体内重要的氧化还原酶，它们的活性测定在生物学、医学和工业领域具有重要的意义。
本文将介绍这两种酶的测定方法及其应用。
二、超氧化物歧化酶简介1.定义与作用超氧化物歧化酶是一种抗氧化酶，主要作用是清除生物体内产生的超氧阴离子自由基，保护细胞免受氧化损伤。
2.分布与生理功能超氧化物歧化酶广泛分布于动植物细胞、微生物和人体内，具有重要的生理功能，包括抑制脂质过氧化、维护细胞膜稳定性、抗衰老等。
三、黄嘌呤氧化酶简介1.定义与作用黄嘌呤氧化酶是一种存在于细胞胞液和线粒体的酶，主要作用是将黄嘌呤氧化为尿酸，参与嘌呤代谢。
2.与超氧化物歧化酶的关系黄嘌呤氧化酶和超氧化物歧化酶在生理功能上相互关联，黄嘌呤氧化酶的活性增高可能导致超氧化物歧化酶的消耗增加，从而影响生物体的抗氧化能力。
四、超氧化物歧化酶测定方法1.比色法比色法是测定超氧化物歧化酶活性的一种常用方法，通过测定反应体系中酶催化的超氧阴离子清除速率与酶活性之间的关系，从而计算出酶活性。
2.化学发光法化学发光法是一种灵敏、快速的测定超氧化物歧化酶活性的方法，通过监测酶催化反应产生的化学发光信号强度，反映酶活性。
3.酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法是一种特异性强的测定超氧化物歧化酶活性的方法，通过抗原-抗体反应及酶标记技术，检测酶活性。
五、黄嘌呤氧化酶测定方法1.比色法比色法是测定黄嘌呤氧化酶活性的一种常用方法，通过测定反应体系中黄嘌呤氧化酶催化的黄嘌呤浓度变化，计算出酶活性。
氧化低密度脂蛋白,OxLDLELISA试剂盒说明书
氧化低密度脂蛋白，OxLDLELISA试剂盒说明书氧化低密度脂蛋白，OxLDLELISA试剂盒说明书产品规格：96T/48T。
保存条件：2-8℃低温保存保质期：6个月，所有试剂盒均提供最新批次。
试剂盒成分：酶标板，试剂，标准品等。
上海乔羽生物有限公司专业的提供elisa试剂盒，人elisa试剂盒，猪elisa试剂盒，大鼠elisa试剂盒，小鼠elisa试剂盒，羊elisa试剂盒，植物elisa试剂盒等等，更多优惠，来电咨询！谢谢！氧化低密度脂蛋白，OxLDLELISA试剂盒说明书氧化低密度脂蛋白，OxLDLELISA试剂盒说明书操作步骤标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl?，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到?第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各?取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul?，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标?准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别?加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度?分别为1800ng/L，1200ng/L?，600ng/L，300ng/L，?150ng/L）。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。
在?酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）?。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5-NT检测试剂盒操作规程
5'-核苷酸酶检测标准操作规程1、目的用于体外定量检测人血清中5'-核苷酸酶的含量。
2、适用范围：所有工作人员。
3、方法原理方法：连续监测法原理：5'-NT 水解次黄苷-5'-单磷酸盐（5'-IMP ），生成次黄苷，在嘌呤核苷磷酸化酶（PNP ）存在下， 后者转化为次黄嘌呤，继而经黄嘌呤氧化酶（XOD ）作用，次黄嘌呤转化为尿酸和H 2O 2，在过氧化物酶（POD ）存在下H 2O 2与N-乙基-N-（2-羟基-3-磺丙基）-3-甲基苯胺（EHSPT ）和4-氨基安替比林（4-AAP ）反应生成有色醌，在550 nm 处连续监测有色醌的生成速率，计算出5'-NT 活性。
次黄苷-5'-单磷酸盐＋H 2O 5'-NT 次黄苷 ＋磷酸次黄苷 ＋磷酸 次黄嘌呤＋核糖-1-磷酸次黄嘌呤＋2H 2O ＋2O 2 尿酸＋2H 2O 22H 2O 2 ＋ 4-AAP ＋EHSPT 4H 2O ＋有色醌单位定义：在37℃条件下催化底物生成1μmol 次黄苷的酶量，为1个5'-NT 活性单位。
4、试剂4.1试剂厂家及规格试剂厂家：试剂规格：4.2储存条件及有效期2～8℃避光保存，自生产日期起可稳定12个月。
试剂开封后，在2～8℃冷藏，避光条件下可稳定20天有效。
5、使用仪器奥林巴斯AU400。
6、标本6.1标本的采集、处理及储存常规静脉采集约2ml 置于含分离胶的采血试管内，做统一且唯一标识，30min 内离心备用。
室温（15-25℃）稳定一周，2-8℃稳定一个月，对于保存时间超过1个小时的血清为避免标本水分挥发使血清浓缩需加塞密封。
6.2标本的运输常温下避光保存运输。
6.3标本的拒收标准1）严重溶血、脂血、细菌污染的标本；2）没有对应标识的标本；3）非避光保存运输的标本；4）其他如标识涂改、试管破裂的标本.7、操作步骤7.1基本参数设定：分析方法速率法 血清+R 1反应时间 5 min 主波长505 nm 血清+R 1+R 2延迟时间 3 min 辅助波长660 nm 标 本 量 5 μl 反应温度37℃ 试剂R 1量 210 μl 读数时间2min 试剂R 2量 70 μl 反应方向 +PNP XOD POD7.2测定方法：测定管 标准管 空白管 试剂R 1（μl ）210 210 210 标 本（μl ）5 --- --- 标准液 （μl ）--- 5 --- 蒸馏水 （μl ）--- --- 5 混匀，置37℃孵育5分钟试剂R 2（μl ） 70 70 70 混匀，置37℃孵育3分钟后读取各管吸光度，每隔1分钟读1次，共读2分钟，并计算平均每分钟吸光度变化率ΔA/分。
多酚氧化酶(PPO)活性检测试剂盒说明书 微量法
多酚氧化酶（PPO）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC0195规格：100T/48S产品内容：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存，用前混匀即可；试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：PPO（EC1.10.3.1）是一种广泛存在于植物体内的含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。
PPO能够催化邻苯二酚产生邻苯二醌，后者在410nm有特征光吸收。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、粗酶液提取：1、收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
2、称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至410nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）试剂名称（μL）测定管对照管试剂一200200试剂二5050样本50煮沸的样本5037℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）中准确水浴10min后，迅速放入沸水中加热10min 充分混匀，5000g，常温离心10min，收集上清，取200μL至微量玻璃比色皿或96孔板中，410nm处检测测定管和对照管吸光度，计算ΔA=A测定-A对照。
注意:每个测定管需要设置一个对照管,可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行5 min沸水浴处理。
PPO活性计算：a.用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下（1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。
黄嘌呤氧化酶法测定抗氧化能力
发酵过程产物形成的测定(SOD活性的测定)一、实验目的1、了解SOD活性测定的原理2、学习黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性二、实验原理原理：黄嘌呤氧化酶催化黄嘌呤产生超氧阴离子自由基，后者氧化羟胺成亚硝酸盐，亚硝酸盐在对氨基苯磺酸与甲萘胺作用下呈现紫红色，用可见光分光光度计测其吸光度。
当被测样品中含SOD时，则对超氧阴离子自由基有专一性抑止作用，使可形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于空白管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品中SOD 的活力。
操作步骤：如表2-1。
三、实验试剂硫酸盐缓冲液，盐酸羟胺，黄嘌呤，黄嘌呤氧化酶，醋酸等。
四、实验步骤试剂测定管对照管75mmol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.8）0.55 0.55待测样品（ml）A(取样量) 00.1mol/L 盐酸羟胺溶液0.05 0.0575mmol/L 黄嘌呤溶液0.05 0.050.037U/L 黄嘌呤氧化酶0.05 0.05双蒸水0.2－A 0.2用漩涡振荡器充分混匀，置37℃恒温水浴30min。
显色剂（ml） 1 1总体积1.9ml，混匀，室温放置10min，蒸馏水调零，测A530五、计算方法计算公式：每毫升反应液中SOD 抑止率达50％时对应的SOD 量为一个SOD 活力单位（U），待测样品中的SOD 活力由下式计算：SOD抑制率（％）＝（A2-A1）/A2×100%SOD 活力（U/ml）＝（A2-A1）/A2×100%÷50％×反应体系的稀释倍数×样本测试前的稀释倍数式中：A1:测定管的吸光值；A2:空白管的吸光值六、注意事项：1.试管要洗干净，在测定微量样品时尤为重要。
2.要做空白管，并且放在所有测试管的中间做，取平均值。
常用试剂（1）诱导剂：分别配制IPTG 100μmol/mL； CuSO4·5H2O 250μm/mL； ZnSO4 100μm/mL。
黄嘌呤氧化酶说明书
黄嘌呤氧化酶说明书黄嘌呤氧化酶（Xanthine Oxidase）是一种重要的酶类物质，在生物体内具有多种重要的功能和作用。
它是嘌呤代谢过程中的一个关键酶，能够催化黄嘌呤和次黄嘌呤的氧化反应。
本文将对黄嘌呤氧化酶的结构、功能以及相关疾病和药物研究进行介绍。
黄嘌呤氧化酶的结构是一个复杂的蛋白质分子，由两个亚基组成，每个亚基中都包含一个嘧啶核苷酸盒结构和一个黄嘌呤结合位点。
这种特殊的结构使得黄嘌呤氧化酶能够与黄嘌呤和次黄嘌呤分子相互作用，并催化它们的氧化反应。
黄嘌呤氧化酶在嘌呤代谢中发挥着重要的作用，它能够将黄嘌呤和次黄嘌呤转化为尿酸，进一步参与尿酸的代谢和排泄过程。
黄嘌呤氧化酶的功能不仅限于嘌呤代谢，它还参与了一系列生物学过程。
首先，黄嘌呤氧化酶在抗氧化防御中起到关键作用。
它能够产生一种强氧化剂超氧自由基，用于清除体内的有害物质和细胞损伤产物。
其次，黄嘌呤氧化酶在炎症反应中发挥重要作用。
炎症过程中，细胞会释放出大量黄嘌呤氧化酶，它能够催化黄嘌呤的氧化反应，进一步产生一系列活性氧化物质，参与细胞信号传导和炎症介质的释放。
此外，黄嘌呤氧化酶还与心血管疾病、肥胖和代谢综合征等疾病的发生和发展密切相关。
研究人员在黄嘌呤氧化酶领域做出了许多重要的发现和突破。
首先，在药物研发领域，黄嘌呤氧化酶作为一个重要的靶点，吸引了众多科学家的关注。
研究人员通过针对黄嘌呤氧化酶的抑制剂的研发，可以有效地抑制黄嘌呤的氧化反应，从而降低尿酸的生成和积累，进而治疗痛风等相关疾病。
其次，在疾病研究领域，黄嘌呤氧化酶的异常活性与多种疾病的发生有关。
通过对黄嘌呤氧化酶的调控和干预，可以为相关疾病的治疗和预防提供新的思路和途径。
总之，黄嘌呤氧化酶作为一种重要的酶类物质，在生物体内发挥着多种重要的功能和作用。
它在嘌呤代谢、抗氧化防御、炎症反应等方面发挥着重要作用，并与多种疾病的发生和发展密切相关。
通过对黄嘌呤氧化酶的研究，可以为相关疾病的治疗和预防提供新的思路和途径。
XOD实验步骤
XOD实验步骤：缓冲液:取K2HPO414.87g,KH2PO41.99g,EDTA-2Na 0.1861g,溶于500ml水,配成0.2M缓冲溶液.底物溶液:取30.4mg黄嘌呤溶于1000ml水,得0.2mM底物溶液,室温保存,可使用一周。
1.500μl体系：240μl底物溶液(0.2mM黄嘌呤底物溶液)240μl缓冲溶液10μl（1U）黄嘌呤氧化化酶10μl抑制剂2.抑制剂浓度的配制：卷柏提取物：100mg/ml取原溶液100mg/ml：50μl稀释2倍50 mg/ml，对倍稀释，得25mg/ml和12.5 mg/ml,6.25 mg/ml,3.125 mg/ml,取10μl加到500μl体系后，抑制剂浓度分别为1,0.5,0.25,0.125,0.0625 mg/ml对照品:槲皮素浓度分别为0.1mM,0.05mM,0.025mM,0.0125 mM,0.00625 mM 槲皮素原浓度：50mM取原溶液：10μl稀释10倍5mM，对倍稀释，得2.5mM和1.25mM，0.625mM，0.3125mM取10μl加到500μl体系后，抑制剂浓度分别为0.1mM,0.05mM,0.025mM，0.0125 mM,0.00625 mM3.黄嘌呤氧化酶溶液的配制：原黄嘌呤25U25U黄嘌呤氧化酶加2.5ml缓冲溶液，10U/ml再稀释5倍，2U/ML，加到500μl（1U/ML）用于实验4.测定COX活力测定： UV 在290nm处测5min样品测定：UV 在290nm处测1min（实验的时候测150sec）备注：实验所用水为UP水，实验的缓冲溶液，枪头，装缓冲溶液和底物溶液的小蓝口瓶需灭菌。
测黄嘌呤氧化酶的试剂盒[实用新型专利]
![测黄嘌呤氧化酶的试剂盒[实用新型专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/29c18e25da38376bae1fae8f.png)
专利名称：测黄嘌呤氧化酶的试剂盒专利类型：实用新型专利
发明人：卢忠英,陈仕学,姚元勇,张孟琴申请号：CN201920840149.9
申请日：20190529
公开号：CN210465453U
公开日：
20200505
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本实用新型属于黄嘌呤氧化酶检测技术领域，公开了测黄嘌呤氧化酶的试剂盒，包括试剂盒，所述试剂盒的顶端通过铰链转动连接有盒盖，且盒盖顶端的中间位置处焊接有把手，所述试剂盒的内部设置有密封隔板，且试剂盒内部位于密封隔板两侧的位置处分别形成有试剂存放区和工具存放区，所述试剂存放区的内部安装有若干个固定装置，本实用新型设置了密封隔板和固定装置，利用密封隔板的设置使得试剂盒内部形成空间分隔，以便于实现试剂瓶和其他工具之间的分类放置，而试剂瓶则夹紧于固定装置的内部，从而保证试剂瓶存放的稳定，有效避免试剂盒在晃动时引起试剂瓶之间或者试剂瓶与其他工具之间的碰撞。
申请人：铜仁学院
地址：554300 贵州省铜仁市碧江区铜仁学院川硐校区
国籍：CN
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黄嘌呤氧化酶（XOD）活性检测试剂盒说明书微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1095
规格：100T/96S
产品内容：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存。
产品说明：
XOD（EC 1.17.3.2）催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子，是活性氧主要来源之一；同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。
XOD主要分布于哺乳动物的心，肺，肝脏等组织中，当肝功能受损时，XOD大量释放到血清中，对肝损害的诊断具有特异性的意义。
XOD催化黄嘌呤产生尿酸，尿酸在290nm下有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备
收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
或者直接用0.5mg/mL的酶液直接测定，为保证实验准确性建议用提取液梯度稀释后测定。
2、血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。
2、XOD检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二中加入15mL试剂一，充分混匀，待用；用不完的试剂4℃可
保存一周。
3、测定前按需取出一定量的XOD检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴30min以上。
4、空白管：在EP管中加入10μL水和250μL工作液，立即混匀并取200µL转移至微量石英比色皿或96
孔板中，记录290nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。
计算ΔA空白＝A2-A1。
5、测定管：在EP管中加入10μL样本和250μL工作液，立即混匀并取200µL转移至微量石英比色皿或96
孔板中，记录290nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。
计算ΔA测定＝A2-A1。
三、XOD活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）XOD计算：
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化产生1µmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（U/mL）＝[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×106]÷V样÷T=2.131×ΔA
2、组织、细菌或细胞中XOD计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1µmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（U/mg prot）＝[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×106]÷(Cpr×V样)÷T=2.131×ΔA÷Cpr （2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1µmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（U/g鲜重）＝[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×106]÷（V样÷V样总×W）÷T=2.131×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每万个细胞每分钟催化产生1µmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（U/104cell）[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×106]÷（V样÷V样总×500）÷T=4.262×
10-3×ΔA
V反总：反应体系总体积，2.6×10-4L；ε：尿酸摩尔消光系数，1.22×104L/mol/cm；
d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01mL；
V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1min；
W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
500：细胞或细菌总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）XOD计算：
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化产生1µmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（U/mL）＝[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×106]÷V样÷T=3.552×ΔA
2、组织、细菌或细胞中XOD计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1µmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（U/mg prot）＝[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×106]÷(Cpr×V样)÷T=3.552×ΔA÷Cpr （2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1µmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（U/g鲜重）＝[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×106]÷（V样÷V样总×W）÷T=3.552×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每万个细胞每分钟催化产生1µmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（U/104cell）[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×106]÷（V样÷V样总×500）÷T=7.103×10-3×ΔA
V反总：反应体系总体积，2.6×10-4L；ε：尿酸摩尔消光系数，1.22×104L/mol/cm；
d：96孔板光径，0.6cm；V样：加入样本体积，0.01mL；
V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1min；
W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
500：细胞或细菌总数，500万。
注意：
1、正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定，保证吸光值变化在0.01～0.9之间。
2、试剂二加入试剂一后会有部分小颗粒，可以直接使用或者离心后使用，对实验结果基本无影响。